Спосіб отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків in vitro

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків, що включає висаджування пиляків на агаризоване живильне середовище з макро-, мікроелементами, регуляторами росту та вітамінами, культивування пиляків в умовах культуральної кімнати, який відрізняється тим, що пиляки висаджують на модифіковане середовище Мурасіге-Скуга (макроелементів - ½ дози, мікроелементи у подвійні дозі), що містить додатково аскорбінову кислоту в дозі 1 мг/л, амінокислоти: глютамінову - 250-500мг/л, аспарагінову кислоти - 30-50 мг/л, тирозин - 1-10 мг/л, аргінін - 2-10 мг/л, гідроксипролін - 2-4 мг/л, регулятор росту полістимулін А-6-1-3 мг за діючою речовиною або 6-БАП - 0,1-0,6 мг/л або 2,4-Д - 1-2,5 мг/л, 6- БАП - 0,3-0,8 мг/л та АБК - 0,3-1,0 мг/л.

Текст

Реферат: UA 111631 U UA 111631 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології та селекції для отримання ембріоїдів та мікроклонів з пиляків цукрових буряків та створення гомозиготних ліній шляхом андрогенезу in vitro. Експериментальний андрогенез - це спосіб отримання гаплоїдних рослин на живильних середовищах in vitro з ізольованих пиляків або мікроспор. В умовах in vitro утворення ембріоїдів може відбуватися двома шляхами - прямим - в культурі пиляків і мікроспор та непрямим шляхом за рахунок утворення калусу й індукції утворення соматичних зародків. Найбільш привабливим для селекції є прямий андрогенез, оскільки калус може утворюватися як з мікроспор, так і з соматичних клітин пиляків, а отримані регенеранти можуть мати різну плоїдність. Для індукції андрогенезу в пиляках різних видів і навіть генотипів рослин застосовують живильні середовища різного складу. Найбільш близьким за сукупністю ознак до запропонованого способу є - спосіб отримання ембріоїдів моркви при інокуляції пиляків на живильне середовище В5 з додаванням 0,5 мг/л 2,4Д та 0,2 мг/л НОК (Zhuang, F.Y. Induction of microspores-derived embryos and call і from anther culture in carrot / F.Y. Zhuang, H.X. Pei, C.G. Ou, H. Hu, Z.W. Zhao, J.R. Li // Acta Hortic Sinica. 2010. - Vol. 37(10). - P. 1613-1620.). Відомий та пропонований способи мають спільні суттєві ознаки: - отримання ембріоїдів при інокуляції пиляків на живильне середовище; - пропис живильного середовище, до складу якого входять макро-, мікроелементи, вітаміни, регулятори росту та інші органічні домішки; - культивування пиляків певний період часу на живильному середовищі певного складу до утворення ембріоїдів і мікроклонів. Але відомий спосіб отримання ембріоїдів з використанням пропонованого живильного середовища не забезпечує отримання ембріоїдів та мікроклонів з пиляків цукрових буряків in vitro, тому що призначений для отримання ембріоїдів саме з пиляків моркви, для якої характерна генотипова реакція на певний склад та співвідношення регуляторів росту, вітамінів, макро-, мікроелементів у живильному середовищі; живильне середовище прототипу містять інші дози елементів мінерального живлення, не містять певних амінокислот, тоді як у запропонованих живильних середовищах, призначених для отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків in vitro саме збалансовані дози елементів мінерального живлення, співвідношення регуляторів росту, амінокислот, вітамінів забезпечують отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків in vitro. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі отримання ембріоїдів пиляки моркви висаджують на живильне середовище В5 (Гамборга) з додаванням 0,5 мг/л 2,4-Д та 0,2 мг/л НОК, згідно з корисною моделлю, пиляки цукрових буряків висаджують на середовище іншого складу - модифіковане за вмістом макроелементів - ½ дози - середовище МурасігеСкуга, що додатково містить аскорбінову кислоту - 1,0 мг/л, та інші вітаміни: нікотинову кислоту 1,0 мг/л, піридоксин - 1,0 мг/л, тіамін 10,0 мг/л - за Гамборгом та амінокислоти: глютамінову 250,0-500,0 мг/л, аспарагінову -30,0-50,0 мг/л, тирозин - 1,0-10,0 мг/л, аргінін - 2,0-10,0 мг/л, гідроксипролін - 2,0-4,0 мг/л, регуляторів росту: полістимулін А-6-1,0-3,0 мг за діючою речовиною; або 2,4-Д - 1,0-2,5 мг/л, 6-БАП - 0,3-0,8 мг/л, АБК - 0,3-1,0 мг/л; або 6-БАП - 0,1-0,6 мг/л. Новими суттєвими ознаками корисної моделі є: - склад живильного середовища за вмістом макро-, мікроелементів; - вміст та співвідношення амінокислот у живильному середовищі - додатково містить амінокислоти: глютамінову - 250,0-500,0 мг/л, аспарагінову - 30,0-50,0 мг/л, тирозин - 1,0-10,0 мг/л, аргінін - 2,0-10,0 мг/л, гідроксипролін - 2,0-4,0 мг/л; - вміст вітамінів - додатково містить аскорбінову кислоту - 1 мг/л; - склад та співвідношення регуляторів росту - містить полістимулін А-6-1,0-3,0 мг/л за діючою речовиною (середовище № 1 корисної моделі), не містить НОК; а вміст 2,4-Д - 1,0-2,5 мг/л в 2-5 разів вищий за прототип (середовище № 2 корисної моделі), з додаванням 6-БАП 0,3-0,8 мг/л, АБК - 0,3-1,0 мг/л, які відсутні у прототипі, у середовище № 3 корисної моделі ауксини, які присутні в прописі середовища прототипу, заміщені цитокінінами - 6-БАП - 0,1-0,6 мг/л. Таким чином, пропонований спосіб отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків in vitro у порівнянні з відомим дозволяє отримувати ембріоїди та мікроклони з пиляків цукрових буряків в умовах in vitro. 60 1 UA 111631 U Таблиця Вплив живильного середовища на ініціацію утворення ембріоїдів на пиляках цукрових буряків № 1. 2. 3. 4. Живильне середовище За прототипом № 1 корисної моделі № 2 корисної моделі № 3 корисної моделі Ініціація утворення ембріоїдів у різних генотипів цукрових буряків 1* 2* 3* 4 5 + + + + + + + 1. Живильне середовище за прототипом - В5 (Гамборга) з додаванням 0,5 мг/л 2,4-Д та 0,2 мг/л НОК. 2. -,, - № 1 корисної моделі - модифіковане за вмістом макроелементів - ½ дози - середовище Мурасіге-Скуга, що містить додатково аскорбінову кислоту в дозі 1,0 мг/л, та інші вітаміни: нікотинову кислоту - 1,0 мг/л, піридоксин - 1,0 мг/л, тіамін 10,0 мг/л - за Гамборгом та аскорбінову кислоту - 1,0 мг/л, з додаванням амінокислот: глютамінової -250,0-500,0мг/л, аспарагінової кислоти - 30,0-50,0 мг/л, тирозину - 1,0-10,0 мг/л, аргініну - 2,0-10,0 мг/л, гідроксипроліну - 2,0-4,0 мг/л, регулятору росту: полістимулін А-6-1,0-3,0 мг/л за діючою речовиною. 3. -,, - № 2 корисної моделі - на модифіковане за вмістом макроелементів - ½ дози середовище Мурасіге-Скуга, що містить додатково аскорбінову кислоту в дозі 1,0 мг/л, та інші вітаміни: нікотинову кислоту - 1,0 мг/л, піридоксин - 1,0 мг/л, тіамін 10,0 мг/л - за Гамборгом та аскорбінову кислоту - 1,0 мг/л, з додаванням амінокислот: глютамінової - 250.0-500,0 мг/л, аспарагінової кислоти - 30,0-50,0 мг/л, тирозину - 1,0-10,0 мг/л, аргініну - 2,0-10,0 мг/л, гідроксипроліну - 2,0-4,0 мг/л, регуляторів росту: 2,4-Д - 1,0-2,5 мг/л, БАП - 0,3-0,8 мг/л, АБК 0,3-1,0 мг/л. 4. -,, - № 3 на модифіковане за вмістом макроелементів - ½ дози - середовище МурасігеСкуга, що містить додатково аскорбінову кислоту в дозі 1,0 мг/л, та інші вітаміни: нікотинову кислоту - 1,0 мг/л, піридоксин - 1,0 мг/л, тіамін 10,0 мг/л - за Гамборгом, з додаванням амінокислот: глютамінової - 250,0-500,0 мг/л, аспарагінової кислоти - 30,0-50,0 мг/л, тирозину - 1,0-10,0 мг/л, аргініну - 2,0-10,0 мг/л, гідроксипроліну - 2,0-4,0 мг/л, регулятора росту - 6-БАП - 0,1-0,6 мг/л. 1*, 2*, 3* - генотипи тетраплоїдних запилювачів цукрових буряків. 4, 5 - генотипи диплоїдного сорту цукрових буряків. 5 10 15 20 Дані, які наведені в таблиці, свідчать, що застосування середовища, пропис якого наданий у прототипі, не сприяє морфогенетичним процесам - утворенню ембріоїдів та мікроклонів цукрових буряків. Утворення ембріоїдів з пиляків цукрових буряків в умовах in vitro відбувається тільки на запропонованих середовищах - середовищі № 1 корисної моделі - модифікованому за вмістом макроелементів - ½ дози - середовище Мурасіге-Скуга, що містить додатково аскорбінову кислоту в дозі 1,0 мг/л, та інші вітаміни: нікотинову кислоту - 1,0 мг/л, піридоксин 1,0 мг/л, тіамін 10,0 мг/л - за Гамборгом, з додаванням амінокислот: глютамінової - 250,0-500,0 мг/л, аспарагінової кислоти - 30,0-50,0 мг/л, тирозину - 1,0-10,0 мг/л, аргініну - 2,0-10,0 мг/л, гідроксипроліну -2,0-4,0 мг/л, регулятора росту полістимуліну А-6-1,0-3,0 мг/л за діючою речовиною; середовищі № 2 корисної моделі, яке відрізняється від попереднього вмістом регуляторів росту: 2,4-Д - 1,0-2,5 мг/л, 6-БАП - 0,3-0,8 мг/л, АБК - 0,3-1,0 мг/л; середовищі № 3 корисної моделі, регулятор росту - 6-БАП - 0,1-0,6 мг/л. Використання саме таких прописів живильних середовищ сприяє утворенню ембріоїдів цукрових буряків in vitro. Використання декількох прописів живильних середовищ, що різняться за вмістом та співвідношенням регуляторів росту, дозволяє отримувати ембріоїди та мікроклони у більш широкого діапазону генотипів цукрових буряків. Впровадження запропонованого способу отримання ембріоїдів та мікроклонів з пиляків цукрових буряків in vitro забезпечить створення гаплоїдних та дигаплоїдних мікроклонів цукрових буряків з диплоїдних та диплоїдних з тетраплоїдних і відповідних гомозиготних ліній, що значно прискорить селекційний процес. Спосіб здійснюється таким чином. Пиляки вилучають з бутонів охолоджених стебел насінників цукрових буряків і інокулюють на модифіковане за вмістом макроелементів - ½ дози - середовище Мурасіге-Скуга, що містить 2 UA 111631 U 5 10 15 додатково аскорбінову кислоту в дозі 1,0 мг/л, та інші вітаміни: нікотинову кислоту - 1,0 мг/л, піридоксин -1,0 мг/л, тіамін 10,0 мг/л - за Гамборгом, з додаванням амінокислот: глютамінової 250,0-500,0 мг/л, аспарагінової кислоти - 30,0-500,0 мг/л, тирозину - 1,0-10,0 мг/л, аргініну - 2,010,0 мг/л, гідроксипроліну - 2,0-4,0 мг/л, регулятор росту полістимулін А-6-1,0-3,0 мг/л за діючою речовиною; або на середовище № 2 корисної моделі, яке відрізняється від попереднього вмістом регуляторів росту: 2,4-Д - 1,0-2,5 мг/л, 6-БАП - 0,3-0,8 мг/л, АБК - 0,3-1,0 мг/л, або на середовище № 3 корисної моделі, що містить регулятор росту - 6-БАП - 0,1-0,6 мг/л. Культивують за типових умов культуральної кімнати. На 7-21 добу візуально відмічають розвиток ембріоїдів, які за зеленим кольором забарвлення відрізняються від іншої частини пиляка. Через 30-35 діб спостерігають формування мікроклонів. Пропонований спосіб отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків in vitro сприятиме створенню вихідного матеріалу - гаплоїдних та дигаплоїдних мікроклонів цукрових буряків з диплоїдних та диплоїдних з тетраплоїдних і відповідних гомозиготних та інцухт лінії для гетерозисної селекції, що дозволить значно прискорити селекційний процес за рахунок скорочення часу на створення константного, гомозиготного вихідного селекційного матеріалу цукрових буряків. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 25 Спосіб отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків, що включає висаджування пиляків на агаризоване живильне середовище з макро-, мікроелементами, регуляторами росту та вітамінами, культивування пиляків в умовах культуральної кімнати, який відрізняється тим, що пиляки висаджують на модифіковане середовище Мурасіге-Скуга (макроелементів - ½ дози, мікроелементи у подвійні дозі), що містить додатково аскорбінову кислоту в дозі 1 мг/л, амінокислоти: глютамінову - 250-500 мг/л, аспарагінову кислоти - 30-50 мг/л, тирозин - 1-10 мг/л, аргінін - 2-10 мг/л, гідроксипролін - 2-4 мг/л, регулятор росту полістимулін А-6-1-3 мг за діючою речовиною або 6-БАП - 0,1-0,6 мг/л або 2,4-Д - 1-2,5 мг/л, 6-БАП - 0,3-0,8 мг/л та АБК - 0,3-1,0 мг/л. 30 Комп’ютерна верстка Т. Вахричева Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3

Дивитися

Додаткова інформація

МПК / Мітки

МПК: A01H 1/04

Мітки: ембріоїдів, отримання, буряків, vitro, цукрових, спосіб, пиляків

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/5-111631-sposib-otrimannya-embriodiv-z-pilyakiv-cukrovikh-buryakiv-in-vitro.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб отримання ембріоїдів з пиляків цукрових буряків in vitro</a>

Подібні патенти