Спосіб хроматографічного визначення бар трави золототисячнику

Реферат: Спосіб визначення складу секоіридоїдних глікозидів золототисячнику трави методом тонкошарової хроматографії шляхом нанесення смугами метанольного витягу лікарської рослинної сировини (ЛРС) та розчину порівняння на аналітичну пластинку, дослідження в ультрафіолетовому світлі за довжини хвилі 254 нм та після обробки розчином анісового альдегіду при денному світлі. Як розчин порівняння використовують фармакопейний стандартний зразок Державної фармакопеї України (ФСЗ ДФУ) золототисячнику екстракт, а компонентом рухомої фази є етилацетат. UA 116459 U (12) UA 116459 U UA 116459 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до галузі фармації, зокрема до фізико-хімічного аналізу, а саме до контролю якості лікарської рослинної сировини (ЛРС). Золототисячнику трава та фітопрепарати, до складу яких входить дана сировина, широко застосовують на фармацевтичному ринку при захворюваннях шлунково-кишкового тракту та сечовивідних шляхів. За літературними джерелами золототисячнику трава містить цінний склад біологічно активних речовин (БАР), але саме представники секоіридоїдних глікозидів (свертіамарин, генціопікрозид, центапікрин, ерітаурин, генціофлавозид, сверозид і амарогентин) обумовлюють її фармакологічний ефект [1]. Найближчим аналогом способу визначення складу БАР золототисячнику трави вибрано методику ідентифікації С методом тонкошарової хроматографії (ТШХ) за вимогами Європейської Фармакопеї (PhEur 8.4) монографії "Centaury" [2]. Даний спосіб призначений для проведення контролю якості ЛРС золототисячнику трави та фітопрепаратів із неї. Спосіб визначення секоіридоїдних глікозидів золототисячнику трави за допомогою методу ТШХ [2] включає нанесення смугами спиртового витягу ЛРС та розчину порівняння на аналітичну пластинку, дослідження в ультрафіолетовому світлі за довжини хвилі 254 нм та після обробки розчином анісового альдегіду при денному світлі. Як розчин порівняння використовують спиртовий розчин рутину та свертіамарину. Недоліком даного способу є застосування достатньо коштовних стандартних зразків та реактивів для приготування рухомої фази, що ускладнює проведення фармакопейного контролю якості ЛРС. В основу корисної моделі поставлено задачу знизити собівартість методики ідентифікації золототисячнику трави, яка дозволяє швидко та точно контролювати наявність БАР у сировині та якість фітопрепаратів із неї [3,4]. Поставлена задача вирішується таким чином, що спосіб визначення якісного складу секоіридоїдних глікозидів золототисячнику трави методом ТШХ проводять шляхом нанесення смугами метанольного витягу ЛРС та розчину порівняння на аналітичну пластинку та подальшого дослідження в ультрафіолетовому світлі за довжини хвилі 254 нм та після проявлення розчином анісового альдегіду при денному світлі. Корисною моделлю передбачено розробку стандартизованого золототисячнику трави екстракту - фармакопейного стандартного зразка Державної фармакопеї України (ФСЗ ДФУ) замість стандартних зразків (СЗ) свертіамарину та рутину та заміну одного із високовартісних компонентів рухомої фази етилформіату на більш доступний розчинник етилацетат. У порівнянні з вихідною методикою, застосування як розчину порівняння ФСЗ ДФУ золототисячнику екстракту дозволить підвищити точність та достовірність способу визначення, а також знизити собівартість дослідження. А застосування етилацетату, як компонента рухомої фази, забезпечить скорочення часу хроматографування, а також зниження собівартості дослідження. Усі параметри заявленого способу визначено дослідним шляхом. Корисна модель ілюструється прикладом. Приклад 1. Випробовуваний розчин. До 1,0 г подрібненої в порошок сировини (355) додають 25 мл метанолу Р, струшують протягом 15 хв. і фільтрують. Фільтрат випарюють до сухого стану під зниженим тиском і при температурі, яка не перевищує 50 °C. Одержаний залишок переносять малими кількостями метанолу Р до одержання 5 мл розчину, який може містити осад. Розчин порівняння. До вмісту ампули ФСЗ ДФУ золототисячнику екстракту додають 0,2 мл метанолу Р, ретельно перемішують та оброблюють ультразвуком протягом 3 хв. Рухома фаза: суміш вода Р - мурашина кислота безводна Р - етилацетат Р, у співвідношенні (4:8:88, об/об/об). На хроматографічну пластинку смугами наносять по 10 мкл (або по 5 мкл) кожного розчину і поміщають у ненасичену камеру. Відстань, що має пройти рухома фаза: 12 см (або 6 см) від лінії старту. Пластинку виймають і сушать на повітрі. Виявлення А: пластинку досліджують в УФ-світлі за довжини хвилі 254 нм. Результати А: послідовність зон на хроматограмах випробовуваного розчину і розчину порівняння наведені у таблиці 1. 55 1 UA 116459 U Таблиця 1 Хроматограма випробовуваного розчину і розчину порівняння при УФ-світлі за довжини хвилі 254 нм Верхня частина пластинки Свертіамарин: зона поглинання Розчин порівняння 5 10 Яскрава зона поглинання (свертіамарин) Випробовуваний розчин Крім цього на хроматограмі випробовуваного розчину можуть бути також присутні інші менш інтенсивні зони. Вид хроматограми в УФ-світлі за довжини хвилі 254 нм на пластинці із алюмінієвою та скляною підкладками зображені на фіг. 1. Виявлення В: пластинку обприскують розчином анісового альдегіду Р і нагрівають при температурі від 100 °C до 105 °C протягом 5-10 хв. Досліджують при денному світлі. Результати В: послідовність зон на хроматограмах розчину порівняння та випробовуваного розчину наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Хроматограма випробовуваного розчину і розчину порівняння при денному світлі Верхня частина пластинки Коричневато-сіра зона Свертіамарин: інтенсивна коричнева зона Рутин: жовта зона Вузька сіра зона Розчин порівняння 15 20 25 30 Коричневато-сіра зона Інтенсивна коричнева зона (свертіамарин) Жовта зона Вузька сіра зона Випробовуваний розчин На хроматограмі випробовуваного розчину та розчину порівняння можуть виявлятися також інші, менш інтенсивно забарвлені зони. Вид хроматограми при перегляді в денному світлі після обробки розчином анісового альдегіду (пластинки із алюмінієвою та скляною підкладками (зліва направо) зображено на фіг.і 2. Таким чином, заявлений спосіб визначення складу секоіридоїдних глікозидів золототисячнику трави характеризується високою чутливістю, відтворюваністю, а також скорочує час аналізу та його собівартість. Спосіб може бути використаний для фармакопейного контролю якості ЛРС золототисячнику трави та фітопрепаратів з неї в умовах лабораторій з контролю якості лікарських засобів. Джерела інформації: 1. Кортиков, В.Н. Полная энциклопедия лекарственных растений: 214. Золототысячник зонтичный / В. Н. Кортиков, А. В. Кортиков. - Ростов н/Д.: Изд-во "Эврика", 2009. - С. 230-231. th 2. European Pharmacopoeia.-8.4 ed. - Strasbourg: European Department for the Quality of Medicines, 2015. 3. Котов, А. Г. Підходи до атестації рослинних екстрактів у якості ФСЗ ДФУ для ідентифікації методом ТШХ / А. Г. Котов, Е. Е. Котова, Д. А. Леонтьев та ін // Фармаком.-2014. - № 3 - С. 5-14. 4. Ідентифікація золототисячника трави методом тонкошарової хроматографії з використанням стандартизованого рослинного екстракту: матеріали підсумкової LIX науковопрактичної конференції "Здобутки клінічної та експериментальної медицини" / Я. О. Проскурова, С. М. Губарь, Е. Е. Котова та ін. - ДВНЗ "Тернопільський державний медичний університет імені І. Я. Горбачевського МОЗ України", Тернопіль, 15 червня 2016р. - Т.,2016.-С. 167-168. 35 2 UA 116459 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Спосіб визначення складу секоіридоїдних глікозидів золототисячнику трави методом тонкошарової хроматографії шляхом нанесення смугами метанольного витягу лікарської рослинної сировини (ЛРС) та розчину порівняння на аналітичну пластинку, дослідження в ультрафіолетовому світлі за довжини хвилі 254 нм та після обробки розчином анісового альдегіду при денному світлі, який відрізняється тим, що як розчин порівняння використовують фармакопейний стандартний зразок Державної фармакопеї України (ФСЗ ДФУ) золототисячнику екстракт, а компонентом рухомої фази є етилацетат. Комп’ютерна верстка В. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3