Спосіб хроматографічного визначення верапамілу гідрохлориду в таблетках

Реферат: Спосіб хроматографічного визначення кількісного вмісту верапамілу гідрохлориду в таблетках включає приготування аналітичного та стандартного розчину з подальшим його хроматографуванням та розрахунком кількісного вмісту верапамілу гідрохлорид. При цьому приготування аналітичного розчину проводять шляхом розчинення таблеткової маси верапамілу гідрохлориду у метанолі Ρ та рухомій фазі (метанол Ρ - вода Ρ - кислота ацетатна Ρ - триетиламін Ρ (55:44:1:0,1)), з використанням хроматографічної колонки Nucleosil C18, розмірами 4,6×150 мм (L1), та детектування за довжини хвилі 280 нм. UA 116081 U (12) UA 116081 U UA 116081 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до фармації, зокрема до способів хімічного аналізу, а саме до контролю якості лікарських форм промислового виробництва, які містять верапаміл гідрохлорид. За даними літератури кількісне визначення верапамілу гідрохлориду можна визначати екстракційно-фотометричними методами та методами рідинної хроматографії, які характеризуються складністю пробопідготовки, високою вартістю реактивів та довготривалістю аналізу [1]. До аналогів заявленого способу хроматографічного визначення верапамілу гідрохлориду можна віднести наступний спосіб кількісного визначення верапамілу гідрохлориду [2]: Аналітичний розчин препарату: точну наважку таблетної маси, що відповідає 40 мг верапамілу гідрохлориду розчиняють у 25 мл рухомої фази. Фільтрують крізь мембранний фільтр, відкидаючи перші 5 мл фільтрату. Стандартний розчин: 1,6 мг/мл (точна наважка) фармакопейного стандартного зразку (ФСЗ) верапамілу гідрохлориду розчиняють у рухомій фазі. Згідно з даним аналогом заявленого засобу, використовуються наступні хроматографічні умови: хроматографічна колонка категорії L1 (з нерухомою фазою С18) розміром 4,6 мм x 125 або 150 мм; рухома фаза - ацетонітрил: 2-аміногептан: розчин А (0,015 Μ розчин натрію ацетату, що містить 33 мл/л кислоти ацетатної) у співвідношенні (30:0,5:70); довжина хвилі - 278 нм, швидкість потоку - 0,9 мл/хв. Основним недоліком даного методу можна вважати достатньо тривалий час від початку хроматографування до виходу активного фармацевтичного інгредієнта та специфічні розчинники, які використовуються як рухома фаза. Задача корисної моделі полягає у створенні простого способу кількісного визначення верапамілу гідрохлориду в таблетках, використовуючи умови ізократичного елюювання з рухомою фазою, що складалася з метанолу, води, кислоти ацетатної та триетиламіну в співвідношенні 55:44:1:0,1 для досягнення оптимальної симетрії піка активного фармацевтичного інгредієнта, та колонку Nucleosil С18, яка має ряд переваг серед колонок L1 і забезпечує високу швидкість і високу ефективність при більш низькому тиску системи. Це зменшує кількість використовуваної рухомої фази, що відповідно знижує аналіз витрат, та водночас забезпечує необхідну специфічність, точність і відтворюваність результатів аналізу під час проведення контролю якості. Поставлена задача вирішується таким чином, що спосіб хроматографічного визначення кількісного вмісту верапамілу гідрохлориду у таблетках включає приготування аналітичного та стандартного розчину з подальшим його хроматографуванням і розрахунком кількісного вмісту верапамілу гідрохлориду. Згідно з корисною моделлю, передбачено, що приготування аналітичного розчину проводять шляхом розчинення таблеткової маси верапамілу гідрохлориду у метанолі Ρ та рухомій фазі (метанол Ρ - вода Ρ - кислота ацетатна Ρ - триетиламін Ρ (55:44:1:0.1)), причому з використанням хроматографічної колонки Nucleosil C18, розмірами 4,6×150 мм (L1) та детектування за довжини хвилі 280 нм. За даних умов пік верапамілу елююється близько 2 хв. Крім цього скорочення часу аналізу досягається за рахунок спрощення умов пробопідготовки завдяки використанню як розчинника метанолу Ρ та рухомої фази. Всі параметри заявленого способу визначені дослідним методом. Придатність заявленої методики підтверджується валідаційними характеристиками, які визначаються, згідно з ДФУ [3]. Заявлений спосіб здійснюється наступним чином: Аналітичний розчин препарату: Точну наважку порошку розтертих таблеток, еквівалентну 62,5 мг верапамілу гідрохлориду, розчиняють у 10 мл метанолу Р, витримують на УЗ-бані протягом 10 хв та доводять метанолом Ρ до об'єму 20,0 мл. Фільтрують крізь мембранний фільтр з розміром пор 0,45 мкм, відкидаючи перші 5 мл фільтрату. 5,0 мл фільтрату доводять рухомою фазою до об'єму 25,0 мл. Стандартний розчин: 20,0 мг (точна наважка) фармакопейного стандартного зразку (ФСЗ) верапамілу гідрохлориду розчиняють у метанолі Ρ і доводять тим самим розчинником до об'єму 20,0 мл. 5,0 мл розчину доводять рухомою фазою до об'єму 25,0 мл. Хроматографування проводять на рідинному хроматографі зі спектрофотометричним детектором за таких умов: - колонка Nucleosil С18 розміром 4,6×150 мм, з розміром часток 5 мкм; - рухома фаза: метанол Ρ - вода Ρ - кислота ацетатна Ρ - триетиламін Ρ (55:44:1:0,1); - швидкість рухомої фази: 0,8 мл/хв; - температура колонки: 25 °C; - детектування за довжини хвилі: 280 нм; 1 UA 116081 U 5 10 15 20 25 30 35 - об'єм проби, що вводиться: 5 мкл. Хроматографують розчин порівняння. Хроматографічна система вважається придатною, якщо: - відносне стандартне відхилення, розраховане для площ піків верапамілу гідрохлориду, має бути не більше 1,0 %; - коефіцієнт симетрії, обчислений за піком верапамілу гідрохлориду, має бути не більше 2. Хроматографують випробовуваний розчин. У порівнянні з аналогічними способами, запропонований спосіб характеризується рядом переваг: підібрана більш проста пробопідготовка та розчинники, що дозволяють спростити проведення досліду та зменшити час і витрати аналізу. Рухома фаза та хроматографічна колонка Nucleosil C18 підібрані таким чином, що час утримування верапамілу гідрохлориду становить близько 2 хв. Для запропонованого способу кількісного визначення проведено вивчення наступних метрологічних характеристик: збіжність, прецизійність, правильність, лінійність. Отримані валідаційні характеристики узгоджені з критеріями відповідності, згідно з вимогами ДФУ. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1 Для дослідження заявленого способу було вивчено лінійність. Оцінка лінійності проводилася на всьому діапазоні застосування методу з використанням стандартної процедури [4, 5]. Дослідження залежності площі піку від концентрації проводили з використанням модельних розчинів зразків. Отримані результати були статистично оброблені методом найменших квадратів відповідно до вимог ДФУ. Для кожного з випробовуваних розчинів розраховували середнє значення площі піку. Отримані результати були оброблені за допомогою методу найменших квадратів для рівняння ν=m×x+b та метрологічні характеристики представлені на кресленні (Графік залежності площі піку від концентрації в умовах ВЕРХ визначення верапамілу гідрохлориду в таблетках і метрологічні характеристики лінійності.). Дані, отримані у результаті вивчення валідаційної характеристики лінійності, характеризуються їх відповідністю до критеріїв прийнятності заявленого способу. Приклад 2 Для дослідження заявленого способу було вивчено збіжність і прецизійність. Оцінка збіжності і прецизійності проводилася методом "введено-знайдено" на стандартних розчинах верапамілу гідрохлориду [4, 5]. Модельні розчини готували відповідно до методики, повністю повторюючи процедуру, описану для приготування випробуваного розчину. По двох розчинах порівняння для кожного аналіту будували калібрувальний графік (level 1-2, враховуючи всі паралельні інжекції і вказуючи відповідну концентрацію розчинів порівняння), що проходить через нуль. За калібрувальним графіком для кожного аналіту розраховували відповідну концентрацію модельного розчину. Дані розрахунків представлені у таблиці. Таблиця Результати кількісного визначення верапамілу гідрохлориду методом ВЕРХ Розчини Введено (концентрація розчину), мг/мл 0,203 0,196 0,146 0,196 0,259 Знайдено (концентрація розчин), мг/мл RS1 RS2 MS 70 % MS 100 % MS 130 % Середнє значення Відносне стандартне відхилення, Sz % Відносний довірчий інтервал, Δz % Критичне значення для результатів збіжності Δz%≤3,2 Критерій статистичної значущості систематичної ≤0,20 похибки %  Z  100  z / n Загальний висновок про методику Коректна 2 0,144 0,199 0,264 Співвідношення знайденого для введеного, Ζ, % 98,6 101,5 101,9 100,7 0,032 0,06 виконується виконується UA 116081 U 5 10 15 Дані, отримані у результаті вивчення валідаційних характеристик збіжності і прецизійності, характеризуються їх відповідністю до критеріїв прийнятності заявленого способу. Таким чином, заявлений спосіб хроматографічного визначення верапамілу гідрохлориду в таблетках відповідає вимогам ДФУ, є простим, швидким, економічним, доступним і може бути використаний для аналізу якості в лабораторіях з контролю якості лікарських засобів. Джерела інформації: 1. Logoyda L. Development and validation of new methods of analysis for the determination of different natural and synthetic original active pharmaceutical ingredients in medicines. - Duphat 2015; 48. 2. "United States Pharmacopoeia (USP). Medicare Prescription Drug Benefit Model Guidelines Source Information", www.nlm.nih.gov. 3. Державна Фармакопея України: в 3 т. / Державне підприємство "Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів". - 2-е вид. - Харків: Державне підприємство "Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів", 2014. - Т. 2. - 724 с. 4. Logoyda L. Validation of chromatographic methods of analysis for the determination of active pharmaceutical ingredients in different medicines. PharmaSchool association for pharmaceutical development and scientific research. - 2016; 34. 5. ICH Topic Q2 (R1) Validation of Analytical Procedures: Text and methodology. 20 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 Спосіб хроматографічного визначення кількісного вмісту верапамілу гідрохлориду в таблетках, що включає приготування аналітичного та стандартного розчину з подальшим його хроматографуванням та розрахунком кількісного вмісту верапамілу гідрохлориду, який відрізняється тим, що приготування аналітичного розчину проводять шляхом розчинення таблеткової маси верапамілу гідрохлориду у метанолі Ρ та рухомій фазі (метанол Ρ - вода Ρ кислота ацетатна Ρ - триетиламін Ρ (55:44:1:0,1)), з використанням хроматографічної колонки Nucleosil C18, розмірами 4,6×150 мм (L1), та детектування за довжини хвилі 280 нм. Комп’ютерна верстка Т. Вахричева Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3