Спосіб оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки

Реферат: Спосіб оцінки ефективності хіміопроменевої терапії раку включає вимірювання експресії білка Кі-67 в тканині пухлини. Для оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки експресію білка Кі-67 вимірюють до лікування та після нього після попереднього аналізу препаратів тканини, стандартно забарвлених гематоксиліном та еозином, шляхом постановки імуногістохімічної реакції з наступною оцінкою інтенсивності забарвлення і розподілу імунопозитивних клітин за шкалою: експресія відсутня, слабка експресія, помірна експресія, інтенсивне забарвлення. Затим за експресією Кі-67 визначають індекс проліферативної активності в 4-9 випадкових полях зору при збільшенні мікроскопа ×40, підраховують загальну кількість пухлинних клітин і кількість імунопозитивних клітин до Кі-67 з наступним визначенням їх процентного співвідношення. Якщо величина встановленого індексу після лікування зменшується у порівнянні до попереднього виміру з статистичною достовірністю, лікування оцінюють як ефективне. UA 117093 U (12) UA 117093 U UA 117093 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до онкології та гінекології, і може бути використана для оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки. Стандартне лікування місцевопоширеного раку шийки матки комбіноване і комплексне, із застосуванням хірургічного, променевого лікування і хіміотерапії. В останні роки більшість рандомізованих досліджень присвячена вивченню ефективності і пошуку варіантів хіміопроменевого лікування місцевопоширеного раку шийки матки [Чуруксаева О.Н. Неоадъювантная химиотерапия при лечении местно-распространенного рака шейки матки / О.Н. Чуруксаева, Л.А. Коломиец // Сибирский онкологический журнал. - 2013. - № 2 (56). - С. 1824; Efficacy in high burden locally advanced cervical cancer with concurrent gemcitabine and cisplatin chemoradiotherapy plus adjuvant gemcitabine and cisplatin: prognostic and predictive factors and the impact of disease stage on out comes from a prospective randomized phase III trial / A. DuenasGonzalez, M. Orlando, Y. Zhou [et al.] // Gynecol. Oncol. - 2012. - V. 126, № 3. - P. 334-340]. Однак зберігається спірне питання про доцільність застосування неоад'ювантної і ад'ювантної хіміотерапії раку шийки матки. Застосування хіміопрепаратів в будь-яких схемах, де вони використовуються як самостійний компонент, дозволяє підвищити ефективність лікування [Concurrent cisplatin-based radiotherapy and chemotherapy for locally advanced cervical cancer / P. G. Rose, B. N. Bundy, E. B. Watkins [et al.] // N. Engl. J. Med. - 1999. - V. 340, № 15. - P. 11441153]. Однак при цьому підвищується їх гематологічна і гастроінтестинальна токсичність, що супроводжується збільшенням частоти і ступеня тяжкості побічних ефектів від проведеного лікування. Променева терапія як самостійний метод не завжди забезпечує лікувальний патоморфоз. У зв'язку з цим використання хіміопрепаратів як радіомодифікаторів має значні перспективи в променевому лікуванні хворих на рак шийки матки. В таких схемах дози цитостатиків значно менше, ніж при проведенні повноцінної хіміотерапії, але вони підсилюють дію променевої терапії [Concurrent cisplatin-based radiotherapy and chemotherapy for locally advanced cervical cancer / PG Rose, BN Bundy, EB Watkins [et al.] // N. Engl. J. Med. - 1999. - V. 340, № 15. - P. 1144-1153]. Крім того, протипухлинні препарати мають також цитостатичний ефект не тільки на первинну пухлину, а й на її метастази. Все вищевикладене обумовлює необхідність постійного моніторингу результатів лікування місцевопоширенного раку шийки матки для удосконалення стандартів лікування, способів оцінки ефективності цього лікування, для прийняття рішення про можливість його продовження або внесення змін до раніше запланованих лікувальних заходів. Останнього часу для оцінки ефективності лікування хворих на рак використовують вимір експресії білків, наприклад білка Кі-67, в тканині пухлини [Прогностическое значение экспрессии белка Кі-67 в ткани опухоли больных раком яичников І-ІІ стадий / В.Л. Карапетян, Е.В. Степанова, А.Ю. Барышников и др. // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 3. - С. 31-35]. Даний спосіб оцінки ефективності хіміопроменевої терапії раку є найбільш близьким до того, що заявляється, за технічною суттю і результатом, який може бути досягнутим, тому його обрано за прототип. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі оцінки ефективності хіміопроменевої терапії раку, який включає вимірювання експресії білка Кі-67 в тканині пухлини, згідно з корисною моделлю, для оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки експресію білка Кі-67 вимірюють до лікування та після нього після попереднього аналізу препаратів тканини, стандартно забарвлених гематоксиліном та еозином, шляхом постановки імуногістохімічної реакції з наступною оцінкою інтенсивності забарвлення і розподілу імунопозитивних клітин за шкалою: експресія відсутня, слабка експресія, помірна експресія, інтенсивне забарвлення, потім за експресією Кі-67 визначають індекс проліферативної активності в 4-9 випадкових полях зору при збільшенні мікроскопа ×40, підраховують загальну кількість пухлинних клітин і кількість імунопозитивних клітин до Кі-67 з наступним визначенням їх процентного співвідношення і, якщо величина встановленого індексу після лікування зменшується у порівнянні до попереднього виміру з статистичною достовірністю, лікування оцінюють як ефективне. Технічний ефект способу, а саме розробка способу оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки, обумовлений синергізмом заходів, які заявляються. Спосіб виконують наступним чином: Для оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки експресію білка Кі-67 вимірюють до лікування та після 1 UA 117093 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нього після попереднього аналізу препаратів тканини, стандартно забарвлених гематоксиліном та еозином, шляхом постановки імуногістохімічної реакції з наступною оцінкою інтенсивності забарвлення і розподілу імунопозитивних клітин за шкалою: експресія відсутня, слабка експресія, помірна експресія, інтенсивне забарвлення, потім за експресією Кі-67 визначають індекс проліферативної активності в 4-9 випадкових полях зору при збільшенні мікроскопа ×40, підраховують загальну кількість пухлинних клітин і кількість імунопозитивних клітин до Кі-67 з наступним визначенням їх процентного співвідношення і, якщо величина встановленого індексу після лікування зменшується у порівнянні до попереднього виміру з статистичною достовірністю, лікування оцінюють як ефективне. Ефективність способу доведена клініко-морфологічними та гістохімічними дослідженнями. Матеріалом для дослідження послужила тканина шийки матки з гістологічно підтвердженим раком. У роботі використовували класифікації захворювання за стадіями (FIGO, 2009) і поширеністю пухлинного процесу (TNM, 2010), відповідно до яких відібрані випадки належали до IIа-IIb (FIGO), T2a-T2b (TNM). У кожному випадку тканина представлена в станах до початку лікування (біопсійний матеріал, діатермоелектроексцизія) і після нього (операційний матеріал, проведення розширеної екстирпації матки з придатками за Вертгеймом). У 1-у групу ввійшло 19 пацієнтів, які отримували до операції дистанційну променеву терапію 30 Гр; до 2-ї - 19 пацієнтів, які отримували до операції хіміопроменеву терапію (паклітаксел 260 мг і цисплатин 450 мг, дистанційну променеву терапію 30 Гр). Для діагностики уражень шийки матки використовували критерії гістологічної класифікації пухлин жіночої статевої системи [Международная гистологическая классификация опухолей. Гистологическая классификация опухолей женского полового тракта. - Женева, 1994]. Вік жінок обох груп склав від 26 до 62 років, в середньому 33,7 роки. У препаратах, оброблених імуногістохімічним (ІГХ) методом і додатково забарвлених гематоксиліном Майера [Петров С.В. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека /С.В. Петров, Н.Т. Райхлин. - Казань, 2004. - 288 с], вивчали інтенсивність експресії білка Кі-67. Позитивною вважали реакцію, яка проявлялася коричневим забарвленням ядер. При оцінці ІГХ-реакції ґрунтувалися на інтенсивності забарвлення і розподілі імунопозитивних клітин відповідно до рекомендацій інших авторів за шкалою: "-" - експресія відсутня, "+" - слабка експресія, "++" - помірна експресія, "+++" - інтенсивне забарвлення [Дорохова О.В. Діагностичне та прогностичне значення експресії маркерів при диспластичних і непластичних процесах шийки матки (імуноморфологічні аспекти): автореф. дис. на здобуття наук, ступеня канд. мед. наук: спец. 14.03.02 "Патологічна анатомія" / О.В. Дорохова. Дніпропетровськ, 2007. - 20 с.; Dabbs D.J. Diagnostic immunohistochemistry / DJ. Dabbs-Churchill Livingstone, 2006. - 828 p.]. За експресією Кі-67 визначали індекс проліферативної активності (ІПА). ІПА визначали в 4-9 випадкових полях зору з великим збільшенням мікроскопа (об. × 40), де підраховували загальне число пухлинних клітин (не менше 1000) і імунопозитивних клітин до Кі-67 з подальшим обчисленням їх процентного співвідношення. Перед початком терапії експресія Кі-67 виявлялася у всіх хворих, а ІПА коливався від 7,31 до 93,4 %, складаючи в середньому 47,4 %. В пластах навколопухлинної тканини виявлялися диспластично змінені клітини з ядрами, які позитивно реагували на Кі-67 у всіх, переважно зовнішніх, шарах епітелію, інтенсивність реакції була помірною і високою. У деяких випадках клітини базального шару були Кі-67-негативними. При цьому по мірі переходу епітелію в пухлину клітини з позитивною ядерною реакцією до Кі-67 переважно високої інтенсивності виявлялися у всіх шарах епітеліального пласта шийки матки. У зонах, де була підозра на наявність мікроінвазії, майже всі ядра клітин були Кі-67-позитивними, з високою інтенсивністю реакції. Зниження проліферативної активності в процесі опромінення (1-а група) статистично достовірно незалежно від гістологічного типу пухлини. Середній показник ІПА склав 40,31 %. При цьому зниження проліферативної активності за ходом лікування було статистично достовірним (р 0,05). Ще більш виражене зниження проліферативної активності пухлини виявлено в групі, що отримувала хіміопроменеву терапію. При цьому показник ІПА склав 24,72 % і статистично достовірно відрізнявся не тільки від початкового рівня, але і від рівня в групі променевої терапії (р 0,05). В обох групах індекс проліферації Кі-67 корелював з безпосереднім ефектом променевої або хіміопроменевої терапії. У хворих з первинним клінічним вилікуванням індекс проліферації 2 UA 117093 U 5 10 15 20 був достовірно нижче, ніж у пацієнток, де безпосередній ефект лікування оцінювався як поліпшення або його взагалі не було (р < 0,01). При вивченні показників проліферативного потенціалу за рівнем експресії Кі-67 було встановлено його зниження в ході проведеної терапії. В групі хворих, які отримували тільки променеву терапію, індекс проліферативної активності знизився з 47,4 до 40,31 %; в групі хворих, які отримували хіміопроменеву терапію, даний показник знизився до 24,72 %. Таким чином, було встановлено, що даний маркер (Кі-67) може служити показником ефективності проведеного лікування у хворих на місцевопоширений рак шийки матки. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб оцінки ефективності хіміопроменевої терапії раку, який включає вимірювання експресії білка Кі-67 в тканині пухлини, який відрізняється тим, що для оцінки ефективності хіміопроменевої терапії місцевопоширеного раку шийки матки експресію білка Кі-67 вимірюють до лікування та після нього після попереднього аналізу препаратів тканини, стандартно забарвлених гематоксиліном та еозином, шляхом постановки імуногістохімічної реакції з наступною оцінкою інтенсивності забарвлення і розподілу імунопозитивних клітин за шкалою: експресія відсутня, слабка експресія, помірна експресія, інтенсивне забарвлення, затим за експресією Кі-67 визначають індекс проліферативної активності в 4-9 випадкових полях зору при збільшенні мікроскопа ×40, підраховують загальну кількість пухлинних клітин і кількість імунопозитивних клітин до Кі-67 з наступним визначенням їх процентного співвідношення і, якщо величина встановленого індексу після лікування зменшується у порівнянні до попереднього виміру з статистичною достовірністю, лікування оцінюють як ефективне. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3