Спосіб отримання збагаченої тромбоцитами плазми (platelet reach plasma, prр) з венозної крові

Реферат: Спосіб отримання збагаченої тромбоцитами плазми (platelet reach plasma, PRP) з венозної крові включає забір венозної крові із ліктьової вени вакуумним методом у пробірку з антикоагулянтами (цитрат Na або Na-гепарин), центрифугування. При цьому центрифугування здійснюють в режимі RCF - 150-200 g протягом 10 хвилин. UA 119951 U (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ ЗБАГАЧЕНОЇ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМИ (PLATELET REACH PLASMA, PRР) З ВЕНОЗНОЇ КРОВІ UA 119951 U UA 119951 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до регенеративних технологій в медицині і призначена для отримання препаратів плазми з високою концентрацією тромбоцитів. PRP-терапія - це безпечний та досить доступний лікувальний метод, направлений на стимуляцію репаративних процесів, що застосовується у різних галузях медицини. Збагаченою тромбоцитами плазму (PRP) вважають препарат, отриманий шляхом центрифугування власної (аутологічної) крові, концентрація тромбоцитів у якому більше, ніж у цільній (нативній) крові. Концентраційна здатність тромбоцитів залежить від способу отримання PRP-препаратів. В зв'язку з цим, вдосконалення методу отримання збагаченої тромбоцитами плазми, яка може бути використана в регенеративних технологіях, залишається актуальною задачею та є одним з пріоритетних напрямків розвитку сучасної медицини. На сьогоднішній день існує багато методик отримання плазми для проведення ін'єкційної PRP-терапії, але до теперішнього часу не визначена найбільш оптимальна. Відомі дані досить суперечливі, а умови виконання досліджень не стандартизовані й відрізняються параметрами центрифугування, серед яких: величина відносної відцентрової сили - RCF (g), швидкість обертання (оберти/хвилину), час центрифугування (хвилини). Крім цього має значення використання пробірок з різними антикоагулянтами (Na-гепарин, цитрат Na). Так відомий спосіб центрифугування венозної крові для отримання плазми, збагаченої факторами росту (PRGF EndoRet) у пробірках з антикоагулянтом цитрат Na (режим центрифугування: RCF-580 g, час - 8 хвилин) (Endoret Dentistry, BTI Biotechnology Institute, S.L., Мійапо, Alava, Spain) [1]. Окрім цього існує спосіб, рекомендований для отримання тромбоцитарної аутоплазми в пробірці Plasmolifting з антикоагулянтом Na-гепарином (режим центрифугування: RCF-900g, час - 5 хвилин) [2]. Ці способи є найбільш близькими до корисної моделі по технічній суті та ефекту, що досягається. Недоліком способів є те, що концентраційна здатність тромбоцитів в отриманій після центрифугування плазмі не досягає рівня, що забезпечує високий рівень стимуляції процесів регенерації. В основу корисної моделі поставлено задачу підвищення концентраційної здатності тормбоцитів в пробірках з різними антикоагулянтами (цитратом Na та Na-гепарином) за рахунок оптимізації режиму центрифугування венозної крові. Поставлену задачу вирішують у способі отримання збагаченої тромбоцитами плазми (platelet reach plasma, PRP) з венозної крові, що включає забір венозної крові із ліктьової вени вакуумним методом у пробірку з антикоагулянтами (цитрат Na або Na-гепарин), центрифугування, згідно з корисною моделлю, проведення центрифугування здійснюють в режимі RCF-150-200 g протягом 10 хвилин. Відмінною особливістю способу, що заявляється, є те, що величина відносної відцентрової сили - RCF суттєво знижена та знаходиться в діапазоні 150-200 g, а час центрифугування збільшується до 10 хвилин. Суть способу полягає в тому, що при зниженні відносної центробіжної сили - RCF до 150-200 g нестійка мембрана тромбоцитів переважно залишається не зруйнованою, що дає змогу підвищити концентраційну здатність тромбоцитів аутоплазми до 2-4 разів, що є важливим для отримання оптимального терапевтичного ефекту при її подальшому використанні. Збільшення часу центрифугування до 10 хвилин дає змогу отримати чітке розділення компонентів цільної крові, відповідно до їх специфічної ваги, що важливо для лікаря. Перевагою способу є те, що при центрифугуванні венозної крові з RCF, що дорівнює 150200 g, тромбоцити завчасно не руйнуються, добре концентрується і при ін'єкційному введенні хворому під час лікування ще здатні синтезувати фактори росту в середньому до 8-9 днів, що забезпечує отримання максимального терапевтичного ефекту, який направлений на стимуляцію процесів регенерації тканин. Спосіб здійснюється згідно з формулою і додаткового пояснення не потребує. Приклад конкретного застосування способу. У 14 пацієнтів (7 жінок, 7 чоловіків) віком від 27 до 54 років, які на момент забору крові не приймали per os медичних препаратів та яким планувалося проведення ін'єкційної PRP-терапії, були забрані зразки венозної крові у пробірки з різними антикоагулянтами (загальна кількість пробірок - 64): 14 пробірок з антикоагулянтом К2ЕДТА, об'єм 2,0 мл, одноразові стерильні вакуумні BD Vacutainer® (США); 30 сертифікованих в Україні пробірок Plasmolifting™ стерильні вакуумні, об'єм 9 мл, апірогенні з Na-гепарином; 20 пробірок з 3,2 % (0,109М) розчином цитрату натрію в співвідношенні 9:1 з об'єм 6,0 мл, одноразові стерильні вакуумні BD Vacutainer® (США). Для визначення оптимального режиму центрифугування, при якому концентраційна здатність тромбоцитів була б найбільшою, всі отримані зразки крові поділили по групах (10 1 UA 119951 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 пробірок на кожний режим центрифугування) і центрифугували за трьома різними режимами, підвищуючи RCF. При цьому І режим центрифугування (10 пробірок з цитратом-Na, 10 - з Naгепарином) відповідав способу центрифугування, що ми пропонуємо: RCF-150-200 g, швидкість обертів - 1000-1200 об./хв., час центрифугування - 10 хв.; II режим (10 пробірок з цитратом-Na, 10 - з Na-гепарином), при якому нами було встановлено підйом гелю-розділювачу у пробірках Plasmolifting: RCF – 500 g, швидкість обертів - 1800 об./хв., час центрифугування - 10 хв. Цей режим був наближений до іспанської методики отримання плазми, збагаченої факторами росту (PRGFEndoRet) в цитратних пробірках (580 g протягом 8 хвилин) [1]; III режим (10 пробірок з Naгепарином) - рекомендований для отримання тромбоцитарної аутоплазми в пробірці Plasmolifting™ [2] – RCF – 900 g, швидкість обертів - 2500 об./хв., час центрифугування - 5 хв. Рекомендацій до використання наведеного режиму центрифугування для цитратних пробірок в доступній літературі виявлено не було. Всім пацієнтам здійснювали забір крові із ліктьової вени вранці, натщесерце вакуумним R методом системою TERUMO (Бельгія), центрифугування проводили з використанням центрифуги лабораторної СМ-6М-Elmi (Латвія), з радіусом ротора – 130 мм. Загальний вміст тромбоцитів та їх концентраційну здатність після центрифугування визначали за допомогою гематологічного аналізатора ВС-3000 Mindray (Китай). Аналіз отриманих результатів показав, що за даними лабораторних досліджень середня кількість тромбоцитів у крові ЕДТА вірогідно не відрізнялася у всіх групах досліджуваних зразків 9 9 і коливалася від 169±11,48×10 /л до 175,1±13,45×10 /л. При застосуванні І режиму центрифугування і в гепариновій, і в цитратній плазмах було встановлено вірогідне (р