Спосіб отримання ліофілізованого екстракту з рослинної сировини з гепатопротекторною активністю

Реферат: Спосіб отримання ліофілізованого екстракту з рослинної сировини з гепатопротекторною активністю шляхом подрібнення повітряно-сухої рослинної сировини, екстракції та подальшого ліофілізування отриманого екстракту. При цьому як сировину використовують траву осоту польового (Cirsium arvense L.), перед екстрагуванням рослинну сировину залишають на 30 хвилин (t=20-25 °C) для повного набухання, екстракцію проводять п'ятикратним об'ємом води очищеної (1:5) при температурі 40 °C протягом 40 хв, далі отриманий водний витяг піддають сублімації до отримання ліофілізованого екстракту. UA 122230 U (12) UA 122230 U UA 122230 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до фармації та медицини, а саме гастроентерології, і стосується лікарських засобів рослинного походження. Спосіб може бути використаний при створенні відповідних фітопрепаратів у лікарських формах для лікування і профілактики захворювань печінки. Ріст захворювань печінки представляє одну з важливих медичних проблем. На наш час актуальним є створення гепатопротекторних препаратів. Це пов'язано з тим, що постійно погіршується екологічне середовище, збільшується надходження хімічних речовин до організму людини. Крім цього зростає вживання лікарських засобів синтетичного походження та алкоголю. Для лікування захворювань печінки в світовій практиці застосовують як синтетичні, так й фітотерапевтичні лікарські засоби. Попит на гепатопротекторні засоби рослинного походження обґрунтовується тим, що інші препарати в більшості випадків спричинюють побічну дію. Цінними компонентами рослинної сировини антиоксидантної та гепатопротекторної дії є флавоноїди, які здатні при більшості захворювань не тільки захистити ліполіз гепатоцитів від оксидативного стресу, але й нормалізувати метаболічні процеси в печінці. Найбільш близьким способом за технічною суттю та результатом, що досягається, є спосіб одержання екстракту трави парила звичайного з гепатопротекторною активністю [Пат. 108382, Україна, МПК А61К 36/738 U201301016, заявл. 28.01.2013, опубл. 27.04.2015], який включає використання трави парила звичайного; при цьому подрібнену сировину екстрагують 40 % етиловим спиртом протягом 30 хвилин у співвідношенні сировина: екстрагент 1:10-1:15, екстрагент відганяють і екстракт висушують методом ліофілізації. Даний спосіб вибрано прототипом. Прототип і корисна модель, що заявляється, мають наступні спільні ознаки: подрібнення повітряно-сухої рослинної сировини, екстракція та подальше ліофілізування отриманого екстракту. Але, відомий спосіб дуже трудомісткий, що включає громіздку екстракцію, не забезпечує збереження термолабільних БАР. Окрім цього, рослинну сировину екстрагують 40 % етиловим спиртом, що спричинює тільки вибіркову екстракцію БАР. При цьому не встановлений температурний режим екстрагування для збереження термолабільних БАР. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу отримання ліофілізованого екстракту з рослинної сировини із гепатопротекторною активністю, шляхом зменшення кількості етапів екстракції і встановлення оптимального температурного режиму та подальших умов сублімації, для отримання біологічно активного екстракту з високою фармакологічною активністю. Поставлена задача вирішується тим, що у способі, який полягає в подрібненні повітряносухої рослинної сировини, екстракції та подальшому ліофілізуванні отриманого екстракту, новим є те, що як сировину використовують траву осоту польового (Cirsium arvense L.), перед екстрагуванням рослинну сировину залишають на 30 хвилин (t=20-25 °C) для повного набухання, екстракцію проводять п'ятикратним об'ємом води очищеної (1:5) при температурі 40 °C протягом 40 хв, далі отриманий водний витяг піддають сублімації до отримання ліофілізованого екстракту. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає в такому. Заявлений спосіб дає можливість в стислий термін отримати ліофілізований екстракт з трави осоту польового, який проявляє гепатопротекторну активність, завдяки великий концентрації термолабільних БАР. Розвиток фармацевтичної промисловості призвів до необхідності розробки препаратів, які можуть при різних зовнішніх умовах зберігати свої лікувальні властивості. Сублімаційне сушіння є щадним методом отримання екстрактів з рослинної сировини. Суть способу полягає в зневодненні водного витягу шляхом заморожування з подальшим висушуванням вакуумним способом. Цей спосіб дає можливість максимально зберегти термолабільні БАР (поліфенольні сполуки, амінокислоти, вітаміни, ефірну олію, ферменти тощо). Ліофілізовані препарати можуть зберігатися тривалий час, вони мало чуттєві до коливань температури в процесі зберігання, легко переводяться в нативний стан після введення розчинника (вода очищена, фізіологічний розчин). Субстанції, отримані цим способом, зберігають біологічну активність та цілісну структуру. Ліофілізований екстракт з трави осоту польового має задану дисперсність, не грудкується у процесі довготривалого зберігання (до 3 років в умовах нерегульованого температурного режиму). Зберігає первинний колір та форму. Не менш важливим критерієм ліофілізованого екстракту є підвищене засвоєння його, а також можливість досягти найбільш точне дозування. Екстракт, отриманий заявленим способом, відповідає існуючим вимогам стандартів країн СС. 1 UA 122230 U 5 10 15 20 25 30 35 Всі ознаки заявленого способу були визначені дослідним шляхом з урахуванням біологічної активності одержаних комплексів, ефективності, доступності та нешкідливості реактивів, практичного відтворення способу у промислових умовах. Спосіб здійснюється таким чином. Точну наважку подрібненої повітряно-сухої рослинної сировини (верхівки пагонів довжиною 20 см з прилеглим суцвіттям та листям) осоту польового (Cirsium arvense L.) екстрагують водою очищеною в асептичних умовах у співвідношенні сировини до екстрагенту 1:5, залишають на 30 хв. для повного набухання сировини. Екстрагування проводять при постійному підтриманні температурного режиму +40 °C на протязі 40 хв. Отриманий витяг вміщують в епіндорфи об'ємом 1,5 мл, вносять до камери для заморожування (t=-50 °C) з повітряною системою охолодження. Технологічний процес статичного заморожування здійснювали при вертикальному положенні епіндорфів. Тривалість процесу складає 1 год. Процес ліофілізації екстрактів проводили на установці Christ Alpha 1-2 LD plus. Перед початком процесу сублімації, субліматор та касети обробляють спиртом етиловим (96 %). До субліматору вносять відкриті епіндорфи в гнізда касети, герметично закривають та вмикають вакуумний пристрій. У процесі сушіння при зниженні тиску в субліматорі на 4 Па спостерігають зниження температури витяжок до -50 °C. Загальний термін сублімації складає 9 год. Вихід ліофілізованого екстракту з 1 л витягу складає не менше ніж 30 г. Приклад 1. З метою вивчення гепатопротекторної активності ліофілізованого екстракту з трави осоту польового, одержаного за заявленим способом, вивчали його активність на моделі токсичного гепатиту. Експериментальні дослідження проводились на білих щурах лінії Вістар, масою тіла - 160180 г, отриманих з розплідника Інституту фармакології і токсикології АМН України. До проведення експерименту щодня протягом 14 днів всі тварини зважувалися і оглядалися. Огляд включав в себе оцінку загального стану та поведінки. Про ефективність експериментальної терапії судили за клінічною картиною, вмісту білірубіну, активності трансаміназ (АЛТ, ACT), фосфатаз (лужна (ЛФ) і кисла (КФ)), лактатдегідрогенази (ЛДГ), загального білка, ліпідів сироватки крові, навантажувальної тимоловій пробі. Клінічна картина в групі тварин без лікування характеризувалася гіподинамією, зниженням апетиту (зменшенням споживання корму і води), загальмованістю, куйовдженням хутра. Спостерігалася деяка жовтушність слизових оболонок і склер, збільшення розмірів печінки. При інтоксикації тварин дихлоретаном достовірно знижувалася маса тіла тварин. Лікування тварин рослинними екстрактами не впливало на масу тіла. Для вивчення гепатопротекторної дії препаратів були проведені біохімічні дослідження крові у тварин в контрольних і дослідних групах до лікування і після лікування на 16-й день. Біохімічні показники крові тварин свідчать про явні порушеннях функції печінки (табл.). 40 Таблиця Біохімічні показники крові тварин при дихлоретановому пошкодженні печінки на 16 добу експерименту та при лікуванні ліофілізованим екстрактом (ЛЕ) з трави осоту польового Інтактна група ЛЕ з трави осоту Контроль (n=7) (n=7) польового (n=7) Загальний білірубін, мкмоль/л 3,0±0,3 6,7±0,4 3,8±0,2* АлТ, од/л 0,2±0,03 1,62±0,11 0,94±0,07* АсТ, од/л 0,6±0,05 0,87±0,08 1,120,1 ЛФ, од/л 0,69±0,1 2,12±0,24 1,17±0,08* КФ, мкмоль/л 0,74±0,12 1,98±0,08 0,93±0,07* ЛДГ, моль/ч/л 4,92±0,32 12,7±1,32 7,1±0,50* Тимолова проба, од. 1,46±0,04 5,77±0,35 3,28±0,22* помутніння Показники Карсил (n=7) 3,9±0,3* 0,81±0,06* 0,67±0,05* 0,91±0,11* 0,87±0,07* 5,76±0,45* 1,76±0,12* * - тут і далі статистично достовірна відмінність від групи контрольних тварин (р