Препарат “ліп-аекол” для підвищення репродуктивної функції у корів

Препарат для підвищення репродуктивної функції у корів, що містить Аекол - вітаміни А, Е, К і бета-каротин, який відрізняється тим, що додатково вводять 20 % спиртовий розчин фосфоліпідів лецитину, твін 60 (80) і деіонізовану воду при наступних співвідношеннях компонентів в розрахунку на голову: 2 (19) 1 3 дів лецетину та бета-каротину і не використовують способів найбільш ефективної їх доставки в органи-мішені – ліпосоми для підвищення інтенсивності обмінних процесів в репродуктивних органах у корів, і як наслідок, не забезпечують продуктивного та економічного ефекту. Відомий, авторське свідоцтво СССР № 1081850, «Препарат для лечения и профилактики авитаминозов сельскохозяйственных животных «Инсолвит»// Паенок СМ., Гусак Я.С., Ракша А.С. Лопотько Н.В., зарегистрированного в Государственном реестре изобротений Союза ССР 22. 11. 1983, який підвищує ефективність засвоєння вітамінів А. Д3,Е шляхом додаткового введення в склад препарату етоксихіну та твіну 80. Недоліком препарату є застосування високої дози емульгатора твіну 80 – 10-20 мл на корову. Відомо, що при трансплантації і відборі потенційних реципієнтів істотне значення має величина і функціональна якість жовтого тіла тварини, і якщо розмір його є 1,0-1,5см то рівень приживлення зародків складає 53-57 %. Функціональна активність жовтого тіла залежить від ряду факторів, одним з яких є співвідношення рівнів в ньому ретинолу, ретиноєвої кислоти та бета-каротину, від чого залежить продукція прогестерону лютеальними клітинами [Куртяк Б.М. Жиророзчинні вітаміни у ветеринарній медицині і тваринництві // Куртяк Б.М., Янович В.Г. - Львів: Тріада плюс, 2004.426]. Найбільш близьким до суті рішенням до заявленого способу є Патент № 2104003 РФ А61К31/355 Способ лечения нарушений менструального цикла, обусловленных недостаточностью лютеїновой фазы цикла.// Орлов В.И.; Кожин А.А.; Крохмаль Г.Ю.; Макляков Ю.С, Заявка №93044773/14 Опубл. 10.02.1998 mail.ru 2789244 і стосується розробки методу лікування порушень менструального циклу, що супроводжується недостатністю лютєїнової фази, простішого і дешевшого, який дозволяє досягти терапевтичного ефекту без навантаження організму гормональними препаратами. Жінкам з вказаною патологією на 5-6-й день після закінчення менструації призначають препарат "Аекол" по 5 мл (по 1 чайній ложці) 2 рази в день після їди протягом 10 днів. Препарат дозволяє зменшити медикаментозне навантаження за рахунок зниження кількості вживаних препаратів та скоротити термін лікування. Препарат "Аекол" складається з комплексу вітамінів А, Е, К та бета-каротину, забезпечує терапевтичну дію, що проявляється в підвищенні гонадотропної активності, стимуляції регенерації епітеліальної тканини (у тому числі порожнини матки), зменшення втрати крові внаслідок підвищення її згортання. Недоліками препарату є низька всмоктуваність через шлунково-кишковий тракт і тому високі дози та довготривалий термін застосування, а також відсутність аналогів для парантерального застосування у тваринництві, і зокрема при порушеннях репродуктивних функцій у корів. Заявлений нами препарат усуває недоліки забезпечує депонування в репродуктивних органах корів біологічно-активних речовин та підвищення в них та в цілому організмі інтенсивності обмінних 59096 4 процесів, синтезу гормонів та нуклеїнових кислот, якості яйцеклітин та ембріонів і стимуляції ембріонально-маткового сигналу. 3. Суть корисної моделі і суттєві ознаки В основі корисної моделі поставлено завдання - підвищення рівня запліднюваності корів за рахунок зниження ембріональної смертності у ранній період тільності шляхом забезпечення організму тварин, і зокрема, їх репродуктивних органів біологічно-активними речовинами при активації гонадотропінсинтезуючої активності гіпофізу гонодотропін-рілізинг гормоном – «Сурфагоном». Технічний результат досягається шляхом застосування інєкцій ліпосомально-вітамінного препарату у формі нанокапсул – ліпосом, в склад яких входять вітаміни А,Е,К, бета-каротин і фосфоліпіди лецетину, твін, деіонізована вода та способу введення коровам трьохкратно через три дні гли3 боко в область хвостової складки в дозі 10-20 см при активації гонадотропінсинтезуючої активності гіпофізу гонодотропін-рілізинг гормоном – «Сурфа3 гоном» в дозі 10 см на 10 день у корів, які не прийшли в охоту, що забезпечує депонування в репродуктивних органах корів біологічно-активних речовин та підвищення в них та в цілому організмі інтенсивності обмінних процесів, синтезу гормонів та нуклеїнових кислот, якості яйцеклітин та ембріонів і стимуляції ембріонально-маткового сигналу. В якості комплексного ліпосомальновітамінного препарату використовується тонка емульсія у водяній фазі якої міститься деіонізована вода, в масляній фазі - вітаміни А, Е, К і бетакаротин та фосфоліпіди лецитину. Препаратом, який сприяє емульгації є твін. Запропонований препарат містить наступне співідношення компонентів в розрахунку на голову: 3 1. Аекол 2,0-4,0 см (вітамін А 2,8 - 5,6 тис. М.О, вітамін Е 1,8 - 3,6мг, вітамін К 1,0 - 2,0 мг, бета - каротин 1,8 3,6мг) 2. Фосфоліпіди леци3 тину (20 % спиртовий 0,6-1,2- см (20 % –120 розчин) 240 мг) 3 3. Твін 60 (80) 0,04-0,08 см , 3 4. Деіонізована вода до 10,0-20,0 см . Компоненти, препарату такого складу, які вводяться у вигляді ліпосом розміром 50-250 нм забезпечують більш інтенсивний рівень обмінних процесів в репродуктивних органах, і як наслідок в цілому організмі, що досягається завдяки їх депонуванню з послідуючою дією на органи-мішені (яєчники) і забезпечує взаємопідсилюючу і синхронізуючу дію компонентів на формування функціонального жовтого тіла в лютеїнову фазу статеваго циклу. Мембрана ліпосом складається з природних фосфоліпідів, що визначає їх багато цінних якостей. Вони нетоксичні, біодергадуються, за певних умов можуть поглинатися клітинами, їх мембрана може зливатися з клітинною мембраною, що приводить до внутрішньоклітинної доставки їх вмісту. Ще одна важлива перевага наночасток як лікарської форми - поступове вивільнення 5 лікарської речовини, інкорпорованої в них, що збільшує час його дії. Оскільки розмір наночасток більше діаметру пор капілярів, їх зона розподілу та дії обмежується місцем введення препарату[Каплун A.П Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ.// Каплун А.П., Ле Бант Шон, Краснопольский Ю.М.*, Швец В.И.– medi.ru « Периодика » « Вопросы медицинской химии » № 1 '99]. Фосфоліпіди ліпосом включаються в ядерний матрикс клітин і через зв'язок з негістоновими білками відіграють важливу роль у структурних зв'язках нуклеїнових кислот з матриксом та при активації синтезу ДНК [Геворкян Э.С. Изменение состава фосфолипидов хроматина печени крыс при воздействии гидрокортизона. // Геворкян Э.С, Явроян Ж.Б., Паносян ГА. –Укр. биохим. журн., – 1985, –Т. 57, –№ 4 – С.78-80]. Спосіб приготування препарату. Всі згадані компоненти згідно їх доз на 1 ін'єк3 3 цію (10-20 см /гол) або 50 ін'єкцій (500-1000см ) вносяться в стерильний скляний посуд, диспергуються на ультразвуковому диспергаторі УЗДН-1 при частоті 35 кГц протягом 2-3 хв до зникнення жирової фракції на поверхні і утворення тонкої емульсії інтенсивно оранжового кольору. Ліпосомальна емульсія фасується у чисті флакони об'є3 мом 20-500 см прикривається корками з алюміневими кришечками та стерилізується на водяній бані при темпиратурі 95-98 °С впродовж 15 хв, тоді закорковується та завальцовується. Комплексний ліпосомально-вітамінний препарат вводиться за допомогою шприца з голкою глибоко в область хвостової складки три рази через 3 три дні в дозі 10-20 см /гол при зниженні репродуктивної функції корів. Через три дні після введення препарату на 10 день внутрішньом'язово введять гонадотропін-рілізінг гормон – «Сурфагон» у корів, 3 які не прийшли в охоту в дозі 10 см /гол. Позитивний причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю суттєвих ознак корисної моделі який заявляється і технічним результатом є наступним: - бата-каротин прискорює формування функціонально активного жовтого тіла; - біологічно активні речовини (А, Е, К та фосфоліпіди лецетину) депоновані в ліпосомах і локалізовані в органах-мішенях стимулюють обмінні та синтетичні процеси, як в органах відтворення (яєчники, матка), так і в цілому організмі. Препарат забезпечує зростання показників рівня запліднюваності корів та телиць також завдяки зростаючій функціональній ролі жовтого тіла в динаміці формування ембріонально-маткового сигналу та імплантації бластоцист, і в результаті зниження ембріональної смертності. Відомості, що розкривають суть корисної моделі Проведенням патентно-інформаційного пошуку виявлено технічне рішення, в якому є ряд суттєвих ознак спільних із заявленим рішенням де використовують вітаміни А, Е, К та бета-каротин . Однак, наявність зазначених, спільних з прототипом ознак недостатня для отримання технічного результату, який забезпечує заявлений спосіб. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак співпа 59096 6 дали із заявленим способом в достатній патентній і науково-технічній інформації не виявлено. Це дозволяє зробити висновок про відповідальність заявленого технічного рішення критерію корисної моделі «Новизна». У джерелах патентної та науково-технічної інформації не знайдено технічних рішень, в яких були б описані відомості про ознаки, що відрізняють заявлений препарат від прототипу і забезпечують досягнення технічного результату: шляхом застосування інєкцій ліпосомально-вітамінного препарату у формі нанокапсул – ліпосом, в склад яких входять вітаміни А, Е, К, бета-каротин, фосфоліпіди лецетину і твін та спосіб введення його коровам: трьохкратно через три дні глибоко в область хвостової складки при активації гонадотропінсинтезуючої активності гіпофізу гонодотропінрілізинг гормоном – «Сурфагоном» забезпечує депонування в репродуктивних органах корів біологічно-активних речовин та підвищення в них та в цілому організмі інтенсивності обмінних процесів, синтезу гормонів та нуклеїнових кислот, якості яйцеклітин та ембріонів і стимуляції ембріональноматкового сигналу. Отже, заявлене технічне рішення не випливає явним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити висновок про його відповідність критерію «винахідницький рівень». Даний препарат може бути використаний у господарствах з різними формами власності для підвищення рівня запліднюваності корів за рахунок зниження рівня ембріональної смертності, стимуляції ембріонально-маткового сигналу та одержання більшої кількості приплоду на 100 голів, а тому відповідає критерію «промислова придатність». Отже, заявлене технічне рішення є новим, промислово придатним, має винахідницький рівень, тобто відповідає усім умовам патентоспроможності корисної моделі відповідно до статті 7 розділу II Закону України «Про охорону прав на винаходи і корисні моделі» №1771 - Ш, 2000 р. РОЗДІЛ 4. 4.0 Відомості, що підтверджують можливість здійснення корисної моделі. 4.1 Порядок здійснення корисної моделі. В господарствах різних напрямків виробництва, що утримують велику рогату худобу, для підвищення рівня запліднюваності корів за рахунок зниження рівня ембріональної смертності, стимуляції ембріонально-маткового сигналу та одержання більшої кількості приплоду на 100 голів. 4.2 Ефективність заявленого засобу, його переваги перед прототипом ілюструються прикладами конкретного використання. Приклад 1. Дослід проведений з метою підвищення інтенсивності обмінних процесів у корів з порушеними функціями статевого циклу, стимуляції ембріонально-маткового сигналу та підвищення рівня запліднюваності корів шляхом застосування комплексного препарату у формі ліпосомальної емульсії «Ліп-Аекол». Для досліджень, після ректальної діагностики, було відібрано 10 корів голштинської породи 3-5 7 року лактації, живою масою 400-450 кг зі зниженою функцією яєчників, які за зоотехнічними даними не приходили в охоту впродовж 1,5-2 місяців. З відібраних корів було сформовано дві групи - контро 59096 8 льна і дослідна. Контрольній групі тварин вводити фізрозчин, дослідній групі ліпосомальний препарат – «Ліп-Аекол», за схемою (табл. 1). Таблиця 1 3 Схема досліджень з вивчення дії препарату "Ліп-Аекол" при введенні в дозі 10см /гол коровам в післяродовий період Схема введення Взяття крові Групи тварин 3 Фізрозчин 10см /гол 3 рази з інтервалом 3 ДНІ До введення препаратів, на 1 -й, 4-й, Контрольна на 10 день гонадотропін-рилізінг гормон 3 Препарат «Ліп-Аекол» 10см /гол3разиз інтер- 7-й день після введення препаратів Дослідна валом 3 дні на 10 день гонадотропін-рилізінг гормон. Препарати вводили коровам у хвостову складку трьохкратно, один раз на добу через кожних три 3 доби в кількості 10 см /гол. На 10 день від початку досліду коровам, які не прийшли в охоту в обох дослідних групах було застосовано внутрішньом'язові ін'єкції гонадотропін-рилізінг гормону - сурфа3 гону (10см /гол). Для проведення біохімічних досліджень з вмісту загального білка та відсоткового співвідношення окремих його фракцій, активності ферментів крові - аспартатамінотрасферази, аланінамінотрансферази, лужної фосфатази, холестерину, кальцію та фосфору відбирали зразки крові до введення препаратів на 4-й, 7-й, 10-й та 12-й день після введення препаратів. Ефективність препарату визначали за кількістю тварин, які прийшли в охоту та запліднились. Контроль запліднення здійснювався через 2 та 4 місяці ректальною діагностикою. Встановлено, що в дослідній групі з 5 голів тільними виявились 4 корови, проти 3 голів в контролі. Аналіз біохімічних показників сироватки крові корів в динаміці показав, що у дослідній групі тварин у порівнянні з контрольною спостерігається тенденція до підвищення вмісту загального білка на всіх етапах проведених досліджень. Так, на 7-й день застосування препарату "Ліп-Аекол", в сироватці крові корів дослідної групи виявлено підвищення вмісту загального білка приблизно на 3-4 %. Також, виявляється перерозподіл відсоткового вмісту окремих фракцій білка сироватки крові: зокрема, у дослідній групі спостерігається підвищення вмісту фракції альбумінів з одночасним зниженням вмісту гама-глобулінів тоді, як у контрольної групи тварин вміст альбумінів знаходиться на одному рівні впродовж проведення досліджень. Найбільш виразне підвищення вмісту альбумінів у сироватці крові виявлено у корів дослідної групи на 7-ий день з початку досліду. Збільшення кількості альбумінів у крові корів дослідної групи пояснюється підвищенням вмісту естрогенів у крові при активації статевого циклу, оскільки їх вміст в організмі є взаємопов'язаний [Шеремета B.I. Білковий обмін залежно від стану яєчників // Шеремета В.І., Тараненко Г.С..–Вісник аграрної науки. - 2002. -№11..– С 34-36]. Зниження рівня  - глобулінів у сироватці крові під час нідації ембріонів можна розцінювати, як позитивний вплив препарату «Ліп-Аекол» на зниження активності імунної системи материнського організму та можливості відторгнення ембріонів ендометрієм матки. На 7-й день після початку застосування препарату «Ліп-Аекол» у сироватці крові корів дослідної групи виявлено підвищення активності- аланін- і аспартатамінотрансфераз, лужної фосфатази. Отже, застосування препарату «Ліп-Аекол» трьохкратно через три доби в область хвостової 3 складки в дозі 10см викликає комплекс фізіологобіохімічних змін у організмі корів з гіпофункцією яєчників, які проявляються відновленням статевої циклічності та підвищенням їх репродуктивної здатності та рівня заплідненості на 20 %. Приклад 2. Дослідження проводились з вивчення ефективності застосування експериментальної партії комплексного препарату «Ліп-Аекол» дозі 20 3 см /гол розробленого в умовах лабораторії ембріональної біотехнології з метою підвищення інтенсивності обмінних процесів, посилення ембріонально-маткового сигналу та стимуляції процесів формування функціонально активного жовтого тіла у корів. Після застосування методу ректальної діагностики було відібрано 10 корів голштинської породи живою масою 400-450 кг, віком 5-7 років, 35 лактації з порушеними функціями органів репродуктивної системи після родів, які за зоотехнічними даними не приходили в охоту більше 2 місяців. Тварин було розділено на 2 групи по 5 голів у кожній. Тварини обох груп знаходились на основному раціоні (табл. 2.). Всім задіяним у досліді коровам вводили препарати в хвостову складку один раз на добу через кожних три доби в кількості трьох ін'єкцій. Контрольній групі тварин вводили фізрозчин в 3 дозі 20см /гол, в дослідній групі ліпосомальний 3 препарат з Аеколу – «Ліп-Аекол» в дозі 20см /гол на 10 день від початку досліду коровам, які не прийшли в охоту у всіх дослідних групах застосовували внутрішньом'язові ін'єкції препарату «Сурфагон». Осіменіння корів проводити двохразово з інтервалом 12 годин. 9 59096 10 Таблиця 2 3 Схема досліджень з визначення дії препарату «Ліп-Аекол» при введенні в дозі 20 см /гол коровам в післяродовий період Групи тварин Схема введення Взяття крові 3 20 см /гол фізрозчину 3 рази з інтервалом 3 До введення препаратів 5-й, та 11-й Контрольна дні на 10 день гонадотропін-рилізінг гормон день після введення препаратів Препарат «Ліп-Аекол» 20 см /гол 3 рази з інтервалом 3 дні на 10 день гонадотропінДослідна 1 рилізінг гормон. З метою встановлення динаміки обмінних процесів, імунологічного статусу корів за умов відновлення функції органів репродуктивної системи та посиленні формування ембріонально-маткових взаємодій в крові корів було проведено біохімічні дослідження сироватки крові, зразки якої було відібрано з яремної вени до введення, на 5-й, та 11й день після введення препаратів. Встановлені біохімічні показники мали аналогічу тенденцію до Прикладу І, зокрема виявлялось зростання рівня загального білка, перерозподіл відсоткового співідношення білкових фракцій та підвищення активності окремих ферментів крові. Ефективність препарату визначали за кількістю тварин, які прийшли в охоту та запліднились. Контроль запліднення здійснювався через 2 місяці ректальною діагностикою на тільність. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун В результаті проведених досліджень виявлено статеву охоту, осіменено та встановлено тільність у контрольній групі 1, в дослідній групі 4 відповідно. Отже, застосування препарату «Ліп-Аекол» забезпечує депонування в репродуктивних органах корів біологічно-активних речовин та підвищення в них та в цілому організмі інтенсивності обмінних процесів, зростання рівня загального білка, перерозподіл відсоткового співвідношення білкових фракцій та підвищення активності окремих ферментів крові, синтезу гормонів та нуклеїнових кислот, якості яйцеклітин та ембріонів і стимуляції ембріональноматкового сигналу, що проявляється підвищенням їх репродуктиної здатності та рівня заплідненності на 60 %. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601