Спосіб визначення терміну придатності дезінфектантів-туберкулоцидів

Спосіб визначення терміну придатності дезінфектантів-туберкулоцидів, що включає визначення бактерицидної дії дезінфікуючого препарату щодо 3 або безпосередньо після їх виготовлення, та не проведення контролю бактерицидних властивостей досліджуваного деззасобу при тривалому терміні його зберігання. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб визначення терміну придатності дезінфектантів - туберкулоцидів, що включає визначення бактерицидної дії дезінфікуючого препарату щодо швидкоростучих атипових мікобактерій суспензійним методом, накопичення бактеріальної маси культури збудника туберкульозу, підготовку тест-об'єктів, контамінацію тест-об'єктів збудником туберкульозу та їх знезараження досліджуваним препаратом шляхом використання зразків препаратів різного терміну зберігання від -1 міс. до -12 міс. з дня виготовлення, щодо тест-культур швидкоростучих атипових мікобактерій виду Mycobacterium fortuitum та збудника туберкульозу Mycobacterium bovis культуральним методом при визначених режимах, щоб забезпечити ефективність способу. Порівняльний аналіз з прототипом показує, що спосіб, який заявляється, відрізняється від існуючого широким спектром досліджень щодо контролю бактерицидних властивостей дезінфікуючого препарату при визначенні терміну його придатності для інактивації збудника туберкульозу та атипових мікобактерій, дозволяє отримати конкретні дані щодо строків придатності дезінфектанту з дня його виготовлення при зберіганні терміном від 1 місяця до 1 року, що відповідає критерію "новизна." Спосіб виконується таким чином: Бактерицидну дію дезінфектанту спочатку випробовують щодо тест-культури швидкоростучих атипових мікобактерій виду Mycobacterium fortuitum, вирощеної на середовищі Павловського за температури 37 °С протягом 14-21 доби культуральним методом досліджень. Вирощену бактеріальну масу мікобактерій переносять бактеріологічною петлею у стерильні 3 флакони ємністю 200 см з бусами, та визначають її масу. Для отримання зависі в концентрації два мільярди мікробних клітин мікобактерій, у флакон додають необхідний об'єм стерильного фізіологіч3 ного розчину з розрахунку: у 1 см зависі повинно міститься 100 млн. мікробних клітин. Флакони струшують на шутель-апараті протягом 30 хвилин до утворення однорідної зависі мікобактерій. 3 Після цього 0,2 см отриманої зависі тесткультури мікобактерій окремо вносять у пеніцилі3 нові флакони ємністю 20 см . Потім у кожний флакон додають по 10 см розчинів досліджуваного дезінфектанту різної концентрації, виготовлених на дистильованій воді. В контрольні флакони за3 мість розчинів дезінфектанту вносять по 10 см стерильного фізіологічного розчину. Вміст флаконів ретельно перемішують і витримують заданий час експозиції за кімнатної температури. Після цього вміст флаконів переносять у центрифужні пробірки і центрифугують при 1500об/хв. протягом 30 хвилин. Для припинення дії дезінфектанту, осад, що утворився після центрифугування дослідних та контрольних проб двічі відмивають стерильним фізіологічним розчи 60420 4 ном методом центрифугування за вказаним режимом. Після останнього центрифугування осад дос3 лідних і контрольних проб ресуспендують в 5 см 3 стерильного фізіологічного розчину і по 0,5 см зависі стерильною піпеткою методом зрошення висівають на живильне середовище для культивування мікобактерій. Пробірки з посівами парафінують, витримують у термостаті за температури 37 °С протягом трьох місяців. Кожні 3-5 діб проводять облік росту культур мікобактерій. Відсутність росту колоній мікобактерій у пробірках з дослідними посівами, за наявності росту колоній мікобактерій у пробірках з контрольними посівами, є ознакою прояву бактерицидних властивостей дезінфікуючого препарату. Заключне визначення бактерицидної дії дезінфектантів щодо збудника туберкульозу Mycobacterium bovis проводять на контамінованих мікобактеріями стерильних тест-об'єктах: смужки батистової тканини, дерев'яні бруски та керамічні плитки. У флаконах ємністю 200 см готують суміш зависі тест-культури збудника туберкульозу та сте3 рильної гноївки з розрахунку на 1 см зависі міко3 бактерій 0,5 см гноївки, яку наносять окремо на 3 дослідні та контрольні тест-об'єкти в об'ємі 1,5 см . Суміш рівномірно розподіляють на поверхні кожного тест-об'єкту. Висушування тест-культури на тест-об'єктах здійснюють за кімнатної температури у горизонтальному положенні протягом 24 годин. Дослідні тест-об'єкти рівномірно зрошують розчином випробуваного дезінфектанту. Норма витрати 3 розчину дезінфектанту - 4 -5 см на 1 тест-об'єкт. На контрольні тест-об'єкти в тому ж об'ємі наносять окремо стерильний фізіологічний розчин і 3 % лужний розчин формальдегіду з метою порівняльного контролю бактерицидної дії випробуваного препарату. Після закінчення визначеної експозиції дії розчину дезінфікуючого засобу з кожного дослідного та контрольного тест-об'єкту фізіологічним розчином роблять змиви у стерильні чашки Петрі. Змиви з чашок Петрі переносять у центрифужні пробірки і центрифугують при 1500 об/хв. протягом 30 хвилин. Для припинення дії дезінфікуючого засобу осад у пробірці двічі відмивають стерильним фізіологічним розчином шляхом центрифугування. Одержаний після останнього центрифугування осад дослідних і контрольних проб ресуспендують 3 3 в 5 см стерильного фізіологічного розчину. 0,5 см зависі стерильною піпеткою висівають на живильне середовище для культивування мікобактерій. Пробірки з посівами парафінують, інкубують у термостаті за температури 37 °С протягом трьох місяців, облік росту культур проводять кожні 5-7 діб. Після остаточно визначення бактерицидних властивостей дезінфікуючого препарату зазначають концентрацію та експозицію, за яких він викликає девіталізацію мікобактерій а також термін його виготовлення. Після цього, з інтервалом 1 місяць, проводять контроль його бактерицидних властивостей щодо тест-культур швидкоростучих атипових мікобактерій виду Mycobacterium fortuitum та 5 60420 збудника туберкульозу Mycobacterium bovis культуральним методом досліджень при визначених режимах застосування. Контроль бактерицидних властивостей щодо атипових мікобактерій та збудника туберкульозу дезінфікуючого препарату проводять кожен місяць до появи росту колоній мікобактерій в дослідних пробірках, що і засвідчує зниження бактерицидних властивостей деззасобу щодо мікобактерій, а звідси і визначає термін придатності даного препарату для інактивації збудника туберкульозу. Приклад 1. За вищезазначеним способом визначали бактерицидні властивості та термін придатності дезінфікуючого препарату «ДЗПТ-1». Приклад 2. За вищезазначеним способом визначали бактерицидні властивості та термін придатності дезінфікуючого препарату «ДЗПТ-2». Результати проведених досліджень наведені в таблицях 1, 2 і 3. Із матеріалів, наведених у таблиці 1 видно, що препарат «ДЗПТ-1» має бактерицидні властивості щодо тест-культури Mycobacterium fortuitum у концентрації 3 % при експозиції 3-5 годин, а дезінфектант «ДЗПТ-2» у концентрації 2 % при експозиції 35 годин. Аналіз даних, наведених в таблиці 2 показує, що препарат «ДЗПТ-1» знищує збудника туберку 6 льозу у концентрації 3 % при експозиції 5 годин,* а деззісіб «ДЗПТ-2» - у концентрації 2 % при експозиції 5 годин. З матеріалів таблиці 3 видно, що дезінфектант «ДЗПТ-1» проявляє бактерицидні властивості щодо атипових бактерій і збудника туберкульозу в концентрації 3 % при експозиції 5 годин, і як туберкулоцид, має термін придатності в межах 6 місяців з дня виготовлення, а препарат «ДЗПТ-2» інактивує тест-культури мікобактерій в концентрації 2 % при експозиції 5 годин мінімум 1 рік з дня виготовлення, що вказує на можливість його застосування протягом цього терміну (мінімум) для проведення профілактичної та вимушеної дезінфекції при туберкульозі сільськогосподарських тварин Результати проведених досліджень свідчать про те, що запропонований спосіб визначення терміну придатності дезінфектантів - туберкулоцидів володіє конкретною спрямованістю, ефективністю, високою точністю та зручністю проведення досліду, дає можливість швидко отримувати результати визначення бактерицидних властивостей дезінфектантів в залежності від терміну їх зберігання і використовувати в якості тест-культури не тільки атипові мікобактерії, але і збудника туберкульозу, що робить отримані результати більш достовірними. Таблиця 1 Препарат ДЗПТ-1 ДЗПТ-2 Лужний формальдегід Режим застосування концентрація експозиція 1 год. Згод. 2% 5 год. 1 год. 3 год. 3% 5 год. 1 год. Згод. 1% 5 год. 1 год. 3 год. 2% 5 год. 1 год. Згод. 3% 5 год. Результат дослід ++ ++ + + – – +++ +++ ++ + – – – – – контроль ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ Примітка: «-» - ріст колоній мікобактерій відсутній; «+» - ріст до 10 колоній мікобактерій на поверхні поживного середовища; «++» - ріст від 10 до 20 колоній мікобактерій на поверхні поживного середовища; «+++» - ріст від 20 до 50 колоній мікобактерій на поверхні поживного середовища; «-Н-++» - ріст більше ніж 50 колоній мікобактерій на поверхні поживного середовища. 7 60420 8 Таблиця 2 Препарат Концентрація 3% Експозиція 3 год. ДЗПТ-1 3% 5 год. 2% 3 год. 2% 5 год. 3% 3 год. ДЗПТ-2 Лужний формальдегід Тест-об'єкт Дерево Плитка Батист Дерево Плитка Батист Дерево Плитка Батист Дерево Плитка Батист Дерево Плитка Батист Дослід + + + Контроль + + + + + + + + + + + + + + + Примітка: «-» - відсутність росту тест-культури, «+»- наявність росту тест-культури. Таблиця 3 Препарат Культура Термін зберігання препарату Результат + + + 4 місяці + 5 місяців + 6 місяців + 7 місяців + + 1 місяць + 2 місяці + 3 місяці Mycobacterium bovis 3 місяці Mycobacterium fortuitum Контроль 1 місяць 2 місяці ДЗПТ-1 3% 5 год. Дослід + 4 місяці + 5 місяців + 6 місяців + 7 місяців + + 9 60420 10 Продовження таб. 3 Препарат Культура Термін зберігання препарату Результат Контроль 1 місяць + 2 місяці + 3 місяці ДЗПТ-2 2% 5 год. Дослід + 4 місяці + + 7 місяців + 8 місяців 9 місяців + 10 місяців + 11 місяців + 12 місяців + 1 місяць + 2 місяці + 3 місяці + 4 місяці + 5 місяців + 6 місяців + 7 місяців + 8 місяців + 9 місяців + 10 місяців + 11 місяців + 12 місяців Mycobacterium bovis + 6 місяців Mycobacterium fortuitum 5 місяців + Примітка: «-» - відсутність росту тест-культури, «+»- наявність росту тест-культури. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601