Спосіб діагностики окиснювальної модифікації білків в еритроцитах крові плаценти у вагітних, хворих на туберкульоз легень

Реферат: Спосіб діагностики окиснювальної модифікації білків еритроцитів крові плаценти вагітних, хворих на туберкульоз легень за умов анемії включає морфологічну оцінку еритроцитів плаценти у нативних мазках з визначенням ступеня окиснювальної модифікації білків в еритроцитах плаценти у вагітних. Додатково вимірюють коефіцієнт G/B (співвідношення між карбонільними та аміногрупами білків в еритроцитах), який характеризує процеси окиснювальної модифікації білків. UA 73087 U (12) UA 73087 U UA 73087 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до акушерства та гінекології і може бути використана для покращання діагностики анемії вагітних у хворих на туберкульоз легень. Частота залізодефіцитних анемій у вагітних, що проживають у високорозвинених країнах складає 10-20 %, у країнах з низьким соціально-економічним рівнем - 30-50 %. За даними ВООЗ анемія вагітних трапляється у 51 % жінок у світі. За останні роки частота залізодефіцитної анемії в Україні зросла до 57 %. Зростання захворюваності на туберкульоз серед вагітних призвело до підвищення частоти анемії вагітних у даного контингенту пацієнток. Анемія вагітних у хворих на туберкульоз легень трапляється у 74,8 % осіб, що в 3,5 раза частіше, ніж серед популяції. Клінічні наслідки її безпосередньо пов'язані із специфічним захворюванням, його формою, тривалістю хіміотерапії та поширенням залишкових змін після лікування. У вагітних, хворих на вперше виявлений туберкульоз легень, обов'язково супутній загальноанемічний синдром, який зумовлений тривалим застосуванням хіміотерапії, хронічною інтоксикацією, гіпоксемією та гіпоксією. Клінічні прояви залізодефіцитної анемії можуть проявлятися різноманіттям у кожному конкретному випадку і залежить від рівня гемоглобіну до вагітності, адаптаційних можливостей, функціонування серцево-судинної і дихальної систем. Вільне залізо - потенційно токсичне, оскільки може запускати ланцюгові вільнорадикальні реакції, які призводять до ушкоджень біологічних мембран еритроцитів, білків, нуклеїнових кислот тощо. З'ясувавши особливості патогенезу ЗДА у вагітних, хворих на туберкульоз легень, необхідно покращити ефективність діагностики останньої. Аналогами способу, що заявляється, можуть вважатися: 1. Патент № 56104. Спосіб діагностики анемії у вагітних; автори: Н.В. Коробчинська, Б.Ф. Мазорчук, від 27.12.2010, Бюл. № 24. 2. Патент № 41061 А України, МКВ G01N33/483, А61В5/00. Спосіб виготовлення препаратувідбитка плаценти: автор І.С. Давиденко, від 15.08.2001, Бюл. № 7. Відомий перший спосіб діагностики анемії у вагітних із визначенням рівня трансферину, феритину, розчинних рецепторів до трансферину в сироватці крові, за коефіцієнтом співвідношення рівня розчинних рецепторів до трансферину і феритину дозволяє діагностувати залізодефіцитну анемію і роль інфекції в розвитку анемії вагітних. Проте, недоліком даної діагностики є те, що остання не враховує ступінь окиснювальної модифікації білків в еритроцитах крові вагітної при супутній патології і тому є малоефективною. Недоліком другого способу є те, що діагностика анемії вагітних базується на морфологічних змінах розмірів і форми еритроцитів плаценти з визначенням зростання частки патологічних форм еритроцитів, проте не зазначена участь ступеня окиснювальної модифікації білків в еритроцитах за умов анемії вагітних, хворих на туберкульоз легень. Найбільш близьким до запропонованого технічного рішення є діагностика анемії вагітних шляхом визначення морфологічних (в т.ч. патологічних) форм еритроцитів плаценти вагітної № 22572 "Спосіб діагностики фетоплацентарної недостатності за функціональними і морфологічними змінами у вагітних, хворих на туберкульоз", автори: Польова С.П., Гошовська А.В., Магаляс В.М., UA 200612600, заяв. 30.11.2006, від 25.04.2007, бюлет. № 5. У даному патенті проведена оцінка характеру перебігу плацентарної дисфункції у вагітних, хворих на туберкульоз легень, визначальним чинником якої є наявність та ступінь тяжкості перебігу анемії вагітних. Встановлено, що за умов II та III ступеня тяжкості залізодефіцитної анемії вагітних, хворих на туберкульоз легень, найчастіше виникає дисфункція плаценти (21 %) та затримка розвитку плода (19 %). Спосіб прототип дозволяє діагностувати анемію вагітних, хворих на туберкульоз зі специфічністю 98 %, передбачуваною цінністю позитивного результату 99 % і негативного результату 1 %. Однак, вказаний метод діагностики анемії у вагітних, хворих на туберкульоз легень, є недостатнім. До суттєвих недоліків прототипу слід віднести наступні: неінформативні результати дослідження внаслідок недооцінки змін форми еритроцитів плаценти у межах фізіологічних форм, визначення яких не дозволяє встановити ушкодження білків еритроцитів плаценти за умов туберкульозу, атипового клінічного перебігу анемії та відсутності даних щодо пошкоджуючої дії нітропероксидів на еритроцити плаценти. Нами пропонуються рішення, що усувають вказані недоліки. В основі корисної моделі поставлена задача вдосконалити спосіб діагностики анемії у вагітних, хворих на туберкульоз легень, шляхом визначення ступеня ураження еритроцитів плаценти. Спільними ознаками прототипу та рішення, що заявляється є: визначення ступеня тяжкості анемії, особливості клінічного перебігу та вплив туберкульозної інтоксикації на перебіг анемії. 1 UA 73087 U 5 10 15 20 25 30 Поставлена задача вирішується тим, що згідно корисної моделі шляхом додаткового вимірювання коефіцієнта G/B, який характеризує процеси окиснювальної модифікації білків (співвідношення між карбонільними та аміногрупами білків в еритроцитах), відповідно до корисної моделі, визначали стан окиснювальної модифікації білків в еритроцитах крові препаратів плаценти. Корисна модель відрізняється від прототипу тим, що під час діагностики анемії морфологічно визначають не лише фізіологічно та патологічно змінені форми еритроцитів плаценти, але й ступінь ураження їх нітропероксидами. Дослідження патологічних форм еритроцитів плаценти дозволяють визначити ушкодження мембрани еритроцитів нітропероксидами, кількість яких зростає за активності туберкульозу та наявності туберкульозної інтоксикації організму вагітної. У порівнянні з прототипом запропонований спосіб діагностики дозволяє покращити діагностику анемії вагітних, хворих на туберкульоз легень, визначити ступінь ураження еритроцитів плаценти нітропероксидами та вибрати адекватну терапію щодо лікування анемії вагітних, хворих на туберкульоз легень. Спосіб здійснюють наступним чином: Досліджують мазки препаратів-відбитків плаценти, що отримані після відділення посліду, які без фіксації фарбують водним еозином, приготовленим на ізотонічному розчині та гематоксиліном Грота, що здатний фарбувати нефіксовані клітинні ядра. Інші препаративідбитки плаценти фарбували бромфеноловим синім за Мікель-Кальво для оцінки співвідношення між карбонільними та аміногрупами білків в еритроцитах плаценти за технологією спектрального аналізу. У кожному дослідженні препаратів-відбитків плаценти вивчали по 10000 еритроцитів для вірогідності результатів (р=0,05). Препарати-відбитки плаценти досліджували за допомогою мікроскопа ЛЮМАМ-8 з імерсійним об'єктивом х 100. Цифрові копії зображення аналізували за допомогою ліцензійної копії комп'ютерної програми "ВидеоТест - Размер 5.0" (ООО Видеотест, Санкт-Петербург, Россия, 2000). Дослідження окиснювальної модифікації білків (ОМБ) в еритроцитах препаратів плаценти вагітних показали, що за фізіологічної вагітності остання становила - 0,34±0,005, при ЗДА І ступеня - 1,19±0,008, II ступеня - 1,67±0,012, III ступеня - 2,13±0,014. Відповідно, при компенсованій плацентарній дисфункції на тлі туберкульозу - 1,23±0,009, субкомпенсованій 1,64±0,012, декомпенсованій - 2,18±0,015. Результати вимірювання коефіцієнту G/B, який характеризує процеси окиснювальної модифікації білків наведено у таблиці 1. Таблиця 1 Коефіцієнт G/B в еритроцитах крові в групах дослідження Групи дослідження Здорові вагітні, n=41 Коефіцієнт G/B 0,94±0,007 1,14±0,009 (Рк=0,003) 1,38±0,012 (Рк