Спосіб одержання екстракту з cyclamen europaeum l. та екстракт, одержаний в такий спосіб, для лікування синуситу

1. Спосіб одержання ізольованого екстракту дикої рослини Cyclamen europaeum L., який відрізняється тим, що при цьому застосовується водна екстракція, який включає: 1) вижимання бульб цикламену для одержання соку; 2) додання води до твердих залишків бульб у співвідношенні бульби : вода 1:0,5-1,8мас./об.; 3) витримування суміші, одержаної на етапі 2), при температурі між 20 С і 80 С; 4) вижимання суміші, одержаної на етапі 3), для одержання екстракту з залишків; C2 2 74811 1 3 74811 4 опірність патогенній мікрофлорі цих продуктів, коCyclamen europaeum L. тра в свою чергу є досить небезпечною. Другим завданням даного винаходу є застосуНа першому етапі гострого синуситу ці метовання ізольованого екстракту у відповідності до дики лікування передбачають внутрішнє застосувинаходу з метою виготовлення медикаментів для вання найсучасніших антибіотиків, таких як ампілікування синуситу. цилін та амоксициклін. Якщо це виявиться Відповідно до першого завдання винаходу, був неефективним, призначають амоксициклін та кларозроблений спосіб одержання ізольованого екствуланову кислоту або цефалоспоріни 2-го й 3-го ракту дикої рослини Cyclamen europaeum L., який поколінь [Ellen R. Wald, MD, Chronic sinusitis in відрізняється тим, що при цьому застосовується children. Journal of Pediatrics, 1995, 127 (3) 339; водна екстракція. Вона включає: Inexpensive Antibiotics are as Effective as Newer, a) перший етап - вижимання попередньо очиMore Expensive Ones in Treating Acute Bacterial щених й оброблених бульб; Sinusitis. Press Release, March 23, 1999. Agency for b) другий етап - очищення рідкої фракції, Health Care Policy and Research, Rockville, MD.; отриманої після вижимання, що включає: and Glenn Isaacson, MD, FAAP, FACS, Sinusitis in b-і) додання етилового спирту до вищезгадаChildhood, Ped. Clin. of N Am., 1996, 43(6) :1305]. ної рідкої фракції; Значення антибіотиків у лікуванні хронічного b-іі) її подальше зберігання у холодильній касинуситу в порівнянні з гострим сінуситом менше, мері за температури між 2°С і 25°С, переважно між оскільки головною задачею є відновлення норма4°С і 8°С протягом 10-48 годин, переважно 18-20 льного насичення повітрям пазух решітчастої кістгодин, і; ки, до якої застосовують протизастійні засоби місb-ііі) потім, фільтрування. цевої дії, котрі в поєднанні з антибіотикотерапією Бажано, щоб етап фільтрування b-ііі) проходив усувають набрякання слизової оболонки, покрау дві стадії: спочатку, через фільтр первинного щують відтік та відновлюють функціонування євсочищення і, потім, через дрібнопористий бактеритахієвої труби і пазух решітчастої кістки носу. Одцидний фільтр під тиском 0,25±0,005МПа. нак, застосування протизастійних засобів місцевої У переважній більшості випадків проводять дії протягом більш ніж 5 днів може викликати обудодатковий етап, тому що тверда фракція залишмовлений медикаментами риніт. [Zeiger, R.S., ку, одержана після першого вижимання, ще місProspects for ancillary treatment of sinusitis in the тить велику кількість біологічно активних речовин, 1990s. J. Allergy Clin. Immunol., 1992, 90:478]. У відновлення яких представляє собою підвищення випадку патологій у хронічній формі застосовують результату способу, на основі якого може бути хірургічне втручання, тобто очищення носових одержаний ізольований екстракт винаходу. пазух безпосередньо за допомогою проколювання. Вищезгаданий додатковий етап включає: Беручи до уваги все зазначене вище можна а-і) підготовку твердої фракції, що залишилася стверджувати, що лікування як гострого, так і хропісля вижимання, а саме - додання води у співвіднічного синуситу - це довгий і складний процес, ношенні 1:0,5-1,8, переважно 1:0,64-0,66. Перша який в залежності від ступеня тяжкості може зацифра - вага бульби в грамах до вижимання, а йняти кілька років. Крім того, проаналізовані перцифри 0,5-1,8 та 0,64-0,66 - об'єм води, доданої до шоджерела не змогли підтвердити загальну ефектвердої фракції, одержаної після першого вижитивність лікування, що застосовувалося у мання; звичайній практиці. а-іі) витримування температури приготованої Вирішення проблем, пов'язаних з синуситом, суміші між 20°С і 80°С, переважно між 60°С і 70°С, можливе за умов пошуку й вивчення нових метопротягом однієї години й здійснення другого вижидик лікування. мання; і На сучасному рівні техніки має місце викориса-ііі) потім, змішування у змішувальному реактання альтернативного лікування, що включає торі рідкої фракції, одержаної після другого вижизалучення біологічно активних речовин природномання (екстракт залишків), з рідкою частиною, го походження. Однак, бібліографічних даних щоодержаною після першого вижимання (сік). до переважної більшості речовин природного поЗ цього моменту починається етап b) - очиходження на рівні техніки не існує. щення рідкої фракції, який описаний вище (див. Дика рослина Cyclamen europaeum L., що у Фігуру 1). даному винаході називається цикламеном, відноТакож був розроблений спосіб одержання ізоситься до родини примулових, і хоча вона є попульованого екстракту дикої рослини Cyclamen лярною в багатьох країнах світу, її використання europaeum L., який відрізняється тим, що застосозводиться лише до декоративних цілей. Про її лівується спиртова екстракція. Вона включає: кувальні властивості відомо дуже мало, хоча згаa) перший етап - розтирання в порошок попедується про використання соку або порошку, одередньо очищених і оброблених бульб; ржаного з рослини, для лікування головного болю. b) другий етап - виділення біологічно активних Таким чином, в сучасному рівні розвитку техніречовин, що включає: ки альтернативного антибіотикам засобу для лікуb-і) додання спирту, бажано етанолу, до повання синуситу не існує. рошку, одержаного з бульб, у співвідношенні між Даний винахід усуває недоліки, про які зазна1:1 і 1:5, переважно 1:3, бульб та розчинника відчалося вище, й крім цього надає ряд переваг, що повідно; будуть висвітлені нижче. b-іі) доведення до кипіння у спирті приготоваПершим завданням даного винаходу є спосіб ної суміші та зберігання її там протягом години одержання ізольованого екстракту дикої рослини перед тим, як буде здійснена спиртова екстракція; 5 74811 6 c) третій етап - очищення спиртової витяжки, демонструють практичну сторону втілення винащо включає: ходу. с-і) додання сорбенту з метою видалення барФігура 1 показує графік послідовності техноловників із спиртової витяжки у співвідношенні між гічних операцій винаходу способу одержання ізо30:0,5 і 30:2, переважно 30:1, сировини та сорбенльованого екстракту за допомогою водної екстракту відповідно; ції. с-іі) очищення з охолодженням на зворотному Фігура 2 показує графік послідовності технолохолодильнику; і гічних операцій винаходу способу одержання ізос-ііі) потім, фільтрування. льованого екстракту за допомогою спиртової екстУ переважній більшості випадків за тих самих ракції. умов проводять другу екстракцію b-ііі), що дозвоДалі слідує більш детальний опис способу ляє одержати близько 20% загальної кількості саодержання ізольованого екстракту за допомогою понінів. В даному випадку спиртові витяжки першої водної та спиртової екстракцій. і другої екстракцій змішують до проведення етапу Далі слідує опис переважного варіанту втіленочищення (див. Фігуру 2). ня способу одержання ізольованого екстракту диСорбентом, який використовують для очищенкої рослини Cyclamen europaeum L. за допомогою ня спиртової витяжки, може бути активоване вуводної екстракції. гілля, гель кремнієвої кислоти, глина та оксид У першому втіленні винаходу бульбу цикламеалюмінію II. Найкращі результати були одержані ну очищують за допомогою проточної води доти, при застосуванні оксиду алюмінію II. доки земля, пісок й інші забруднення повністю не Вихідний вимір кількості виділених з рослини зникнуть з її поверхні. Після цього її чистять щітбіологічно активних речовин складений на основі кою задля видалення мікрочастинок землі, піску і гемолітичного індексу. Бульби виду цикламен міст.п. Потім бульби миють дистильованою водою і тять цикламен-сапонін, який гідролізується утвозалишають висихати на свіжому повітрі. Згодом рюючи цикламіретин сапогеніну та вуглеводи сухі бульби кладуть у ванну, повністю покривають (глюкози й арабінози). Крім сапоніну, були виявле95% етанолом і залишають на 1 годину. ні сахароза (глюкоза, фруктоза й інші полісахариОчищені бульби вміщують під прес, де з них ди), смолисті речовини, барвники та фенольні сумеханічно видавлюється сік. Процентне співвідміші. Вміст води у бульбах перевищує 70%. ношення одержаного соку або рідкої фракції колиГемолітичний індекс показує кількість одержавається в межах 55-65% відносно твердої фракції ного сапоніну. Якщо вона нижче гемолітичного після вижимання. індексу, який складає 300 одиниць, комерційної Завдяки високій гемолітичній активності одерпереваги у повторенні процесу вижимання або жаних залишків, виділення сапоніну відбувається одержання другої витяжки немає, адже протягом за допомогою знесоленої води. Необхідне співвіддвох етапів вижимання або екстракції з рослини ношення твердої фракції й рідини, потрібної за було одержано близько 96-98% біологічно активрезультатами досліджень для екстракції, станоних речовин. вить 1:0,64-0,66 відповідно. Після першого вижимання або екстракції перДане співвідношення було знайдене з метою шої витяжки значення гемолітичного індексу рідкої забезпечення найвищої гемолітичної активності фракції знаходиться між 8000 і 12000 одиниць, а зразків. Оптимальні температури для екстракції після другого вижимання або екстракції другої визнаходяться в межах 60-70°С, а час екстракції тяжки - між 300 і 500 одиниць. Таким чином, додастановить 60 хвилин. Дотримання вищезазначених ткові етапи вижимання або екстракції третьої витемператур і часу веде до максимізації обміну сатяжки є недоцільними з економічної точки зору, поніну у водній витяжці. Ті самі параметри є оптиадже значення гемолітичного індексу одержаної мальними й з технологічної точки зору, адже як рідкої фракції буде нижче норми. тільки температура досягає 80°С, екстракт стає Отже, значення гемолітичного індексу одерв'язким і непідходящим для фільтрування із-за жаного ізольованого екстракту знаходиться між часткового гідролізу полісахаридів, тоді як подов6000 і 12000, а рівень кислотності - між 5,0 і 6,8. ження часу веде до збільшення виходу сапоніну. Другим завданням даного винаходу є викорисБуло виявлене, що друга екстракція залишків тання одержаного ізольованого екстракту відповіза допомогою води забезпечує одержання гемолідно до одного з описаних способів з метою виготичного індексу на рівні 300-500 одиниць, що ознатовлення медикаментів для лікування синуситу. чає необхідність лише одної екстракції. Для реалізації зазначеного завдання винахід Як тільки була проведена екстракція, частину пропонує ізольований екстракт дикої рослини залишків вміщають під прес і піддають вижиманCyclamen europaeum L., який містить велику конню. Сік та екстракт залишків змішують в реакторі, центрацію сапоніну, а також сахарозу (глюкозу, проводячи звідти загальну екстракцію. фруктозу й інші полісахариди), смолисті речовини, Одержані водні витяжки (сік бульб+витяжка з барвники, фенольні суміші та інші поки не виявлезалишків) так само як і кінцеві продукти містять ні допоміжні речовини, котрі безперечно мають досить багато домішок й тому потребують додаттакі терапевтичні властивості, що цілком придатні кового очищення. для виготовлення медикаменту для лікування сиБільшість домішок можна усунути додаванням нуситу. до витяжок 15 відсотків 96% етилового спирту й Задля кращого розуміння того, про що йшлося їхнім подальшим зберіганням у холодильній камері вище, необхідно додати дві фігури, які схематично протягом 18-20 годин. Як тільки цей час закінчитьй виключно шляхом не обмежувального прикладу ся, витяжки фільтрують через фільтр первинного 7 74811 8 очищення, а потім - через дрібнопористий бактегістологічної інформації, оптимальний період для рицидний фільтр. Цю останню стерилізовану фідругого інтраназального введення становить 48 льтрацію кінцевих витяжок проводять під тиском годин. 0,25±0,005МПа. Концентрації препарату зберігають свою ефеЗа допомогою фільтрування розчин стає проктивність у розчинах зі співвідношенням між 1:100 і зорим і залишається незмінним протягом двох 1:500. місяців при зберіганні його в холодильній камері за Умови застосування препарату, так само як і температури 4-8°С. Даний розчин є базовою речохарактеристики реакцій його введень, практично виною для виготовлення медикаменту для лікувиключають будь-які можливості поглинання його вання синуситу. з поверхні слизової оболонки та здійснення небаУ другому втіленні винаходу розкривається жаного системного впливу. спосіб одержання ізольованого екстракту дикої Токсикологічне дослідження рослини Cyclamen europeaum L. за допомогою Системні токсичні властивості ізольованого спиртової екстракції. екстракту та медикаменту, що його містить, були Очищені й попередньо оброблені бульби рідосліджені на мишах-альбіносах та пацюках за жуть на маленькі шматочки, вміщають у ванну й допомогою внутрішньочеревного, внутрішньовенпокривають 96% етиловим спиртом у співвідноного та перорального застосування. Діючи так нешенні 1:3 твердої маси (сировини) та розчинника можливо помістити достатньо великі дози інтранавідповідно. Суміш підігрівають доти, доки розчин зально, тому спосіб є рекомендованим для не закипить і залишають на 60 хвилин. Другу екстклінічного дослідження. ракцію проводять за тих самих умов, що дозволяє Токсичні прояви в усіх способах застосування одержати близько 20% загальної кількості сапонібули в основному притаманні сапоніну: типове нів. пригнічення діяльності центральної нервової сисСпиртові витяжки, одержані з першої і другої теми й уповільнена (до 3-х днів) смертність у виекстракції змішують й очищують охолоджування із падку внутрішньочеревного та перорального зазворотним холодильником з метою видалення стосування; внутрішньосудинний гемоліз та барвників. миттєва смертність у випадку внутрішньовенного Очищення проводять за допомогою оксиду застосування; локалізована подразнююча дія на алюмінію II при температурі 40-50°С. Його повтослизову оболонку. рюють три рази протягом 15-20 хвилин кожний. Летальні однократні дози перорального ввеОптимальне співвідношення маси сировини та дення, застосовані у досліді з мишами, становмаси сорбенту становить 30:1 відповідно. лять: Очищена витяжка є базовою речовиною для (a) Спиртова витяжка: LD50 - 1337,7±23мг/кг; виготовлення медикаменту для лікування синусиLD84 - 1894мг/кг, LD16 - 781мг/кг; ту. Дана витяжка залишається незмінною протягом (b) Водна витяжка: LD50 - 1466,5±37мг/кг; двох місяців при зберіганні її в холодильній камері LD84 - 2107мг/кг, LD16 - 826мг/кг; за температури 4-8°С. (c) Медикамент: LD50 - 2386,84±85мг/кг; LD84 Вивчення фармакологічних властивостей ізо3852мг/кг, LD16 - 920мг/кг; льованого екстракту винаходу показало, що застоВідповідно до загальної токсикологічної класування його слабких концентратів спричиняє звосифікації LD50 індексів, ізольований екстракт і ротну секрецію з носової порожнини. Тобто, за медикамент, що його містить, належать до елемедопомогою вищезазначеного екстракту цілком нтів помірної або незначної токсичності з локалізоможливо одержати розчини з різною концентраціваною подразнюючою дією середнього ступеню. єю, іншими словами, розробити дозування. Однократна нетоксична неефективна доза Дослідження зворотної реакції, проведене при медикаменту, застосована у досліді з мишами, застосуванні 2-3 крапель медикаменту, приготовастановить 10 мг/кг, тобто 1/250 LD50, вона переного з ізольованого екстракту винаходу, в носову вищує максимальну однократну терапевтичну дозу порожнину кроликів і собак, не виявило ні інкуба(0,03мг/кг), рекомендовану для клінічних досліційного періоду реакції, ні будь-яких змін тривалоджень, приблизно в 350 разів. сті секреції й не залежало від того, застосовують Субтоксична токсичність нетоксичної дози мепрепарат щоденно (кожні 24 години) чи через дикаменту була досліджена на мишах у експеридень. менті, що стосувався терапевтичного інтраназальІнформація, отримана з гістологічних досліного введення, який тривав протягом двох тижнів. джень, показала, що застосування препарату не Цей експеримент виявив випадки небажаного проспричиняє такої побічної дії як подразнення, натоникнення препарату з носової порожнини у шлумість зменшує запалення слизової оболонки. нок. Друге введення рекомендованих доз препараДруге пероральне введення медикаменту проту ізольованого екстракту винаходу в носову потягом 14 днів у дозі 10мг/кг виявилося нешкідлирожнину не викликало негативних змін у звичайвим для мишей. ному стані та поведінці тварин. Безпечність ізольованого екстракту та медиТерапевтична дія препарату, складовою часкаменту, введеного п'ять разів, була виявлена за тиною якого є ізольований екстракт винаходу, що допомогою результатів вивчення специфічної фабазується на стимулюванні інтенсивності секреції рмакологічної активності цих препаратів у випадку епітелію слизової оболонки в цілому, разом з сизастосування максимальних "терапевтичних" конроваткою й підслизовими залозами сприяє інтенцентрацій. сивному дренуванню носових пазух. Відповідно до Локалізована подразнююча дія медикаменту 9 74811 10 проявляється в найвищій мірі у з'єднувальній ткаливо якщо взяти до уваги те, що неможливо погнині, але її не було виявлено в слизовій оболонці линути або проковтнути препарат з носової порошлунку, слизова ж оболонка носової порожнини за жнини. ступенем подразливості знаходиться між вищезгаНе дивлячись на той факт, що специфічне втіданими двома. лення цього винаходу було описане й охарактериКлінічні випробовування медикаменту в роззоване, цілком очевидно, що фахівці у даній облачинах зі співвідношенням від 1:100 до 1:500, що сті зможуть запропонувати варіанти й модифікації, приблизно рівноцінно 1/350-1/500 "нетоксичної" або замінити одні складові іншими - технічно рівпероральної дози, застосованої у досліді з мишаноцінними, без відходу від суті винаходу, визначеми, можуть вважатися повністю безпечними, особної у формулі винаходу, що додається. Комп’ютерна верстка О.Воробєй Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601