Спосіб визначення життєздатності цист золотистої картопляної нематоди globodera rostochiensis (wollenweber)

Реферат: Спосіб визначення життєздатності цист картопляних цистоутворюючих нематод включає промивання проби ґрунту в апараті «РуТа» над ситами з діаметром 0,5 та 0,25 мм, фільтрування крізь біле полотно, підрахунок цист під бінокуляром. Визначення життєздатності патогену проводять шляхом фарбування 0,5 % розчином Кумасі голубим, який фарбує цисти картопляних нематод в голубий колір. UA 75257 U (12) UA 75257 U UA 75257 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, зокрема до виявлення структурних елементів мікроорганізмів з ґрунту. Відомі способи виявлення цист картопляних нематод з ґрунту, в яких запропоновано просіювати ґрунтову наважку через сита 0,5 мм та 0,25 мм, змішувати з водою на приладі Фенуїка. При цьому цисти нематод спливають на поверхню, де їх збирають і підраховують під бінокуляром [1, 2]. Для визначення життєздатності їх роздрібнюють між двома накривними стеклами і під бінокуляром визначають кількість яєць або личинок [3]. Відомий також спосіб відділення патогену за допомогою апарату «РуТа» [4]. В цьому випадку виявлення цист нематод над ситами з порами 0,5 та 0,25 мм та визначення їх життєздатності роздрібнюють між двома накривними стеклами і під бінокуляром визначають кількість яєць або личинок. Він є найбільш близьким технічним рішенням до способу, що заявляється, який використовується як прототип [5]. Спосіб по прототипу, полягає в тому, що він включає у себе нанесення ґрунтової проби (100 см) у бачок апарату «РуТа», а знизу підключають подачу води. Під «бурлінням» води цисти нематоди спливають на поверхню. Їх пропускають крізь сита з діаметром 0,5 мм та 0,25 мм, фільтрують крізь біле полотно і теж підраховують під бінокуляром. Для визначення життєздатності цист їх роздрібнюють між двома накривними стеклами і під бінокуляром визначають кількість яєць або личинок. Згадані способи та спосіб-прототип мають такі недоліки. 1. Відомі способи є надто трудомісткими і їх використання пов'язане з затратою часу. 2. Застосовуються сполуки, які шкідливі для здоров'я людини. 3. Визначення життєздатності цист картопляних нематод способом-прототипом можна лише роздрібнених цист. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити більш досконалий, екологічно безпечний, швидкий спосіб виділення цист картопляних нематод з ґрунтових зразків, визначити їх життєздатність, який може бути використаний карантинною службою при виявленні вогнищ збудника хвороби. Поставлена задача вирішується тим, що у запропонованому способі шляхом здійснення ряду прийомів у певній послідовності досягається результат, а саме: вдається виділяти цисти картопляних нематод з ґрунту шляхом промивання проби ґрунту в апараті «РуТа» над ситами з діаметром 0,5 та 0,25 мм, фільтруванням крізь біле полотно, визначення життєздатності патогену шляхом фарбування за допомогою 0,5 % розчину Кумасі голубого, який фарбує цисти картопляних нематод в голубий колір. Результат, що досягається внаслідок цього, перевищує результат, що досягається при здійсненні інших способів та способу-прототипу. 1. Запропонований спосіб займає набагато менше часу. 2. Застосовуються сполуки, які не шкідливі для здоров'я людини. 3. Можна визначити життєздатність цист нематод не подрібнюючи їх. Отже, спосіб, що заявляється, відповідає критерію корисної моделі "новизна" та "суттєві відміни". Приклади здійснення способів Приклад 1 (прототип). 3 Ґрунтовий зразок (100 см ) переносять в бачок апарату «РуТа». Промивають водою знизу, пропускають крізь сита з діаметром 0,5 мм та 0,25 мм. Фільтрують крізь біле полотно. Виявлення життєздатних цист картопляних нематод проводять роздрібнюючи між двома накривними стеклами і під бінокуляром підраховують кількість яєць або личинок [4, 5]. При виділенні цист золотистих картопляних нематод з с. Сурупи, Рахівського району було виявлено 3 до 178 життєздатних цист на 100 см ґрунту; в с. Ясіня, Рахівського району - 230; в с. Майдан, Міжгірського району, Закарпатської області - до 120 цист, у с. Поркулина, Путильського району Чернівецької області - до 28 життєздатних цист картопляних нематод (таблиця 1, фіг 1життєздатні цисти золотистої картопляної цисто утворюючої нематоди з яйцями). Приклад 2. 3 Ґрунтовий зразок (100 см ) переносять в бачок апарату «РуТа». Промивають водою знизу, пропускають крізь сита з діаметром 0,5 мм та 0,25 мм. Фільтрують крізь біле полотно. Виявлення життєздатних цист картопляних нематод проводять шляхом фарбування за допомогою 0,5 % розчину Кумасі голубого, який фарбує цисти картопляних нематод в голубий колір. При виявленні патогену у с. Сурупи визначено 192 життєздатних цист, у с. Ясіня - 242; у с. Майдан - 136; у с. Поркулина - 36 життєздатних цист. При цьому ефективність виявлених життєздатних складала з 6,3 до 18,1 % (таблиця, фіг. 1, фіг 2 - життєздатні цисти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди фарбовані 0,5% розчином Кумасі голубим ). 1 UA 75257 U 5 10 15 20 Отримані результати здійснення запропонованого способу визначення життєздатності цист картопляних нематод з ґрунту не поступається прототипу. Спосіб, що заявляється, має переваги перед прототипом, оскільки його ефективність вища. Позитивний ефект запропонованого способу визначення життєздатності цист картопляних нематод підтверджує експериментальна перевірка, яка здійснювалась при виявленні хвороби з різних регіонів України. Література 1. Варшалович А.А., Шамонін М.Г. Руководство по досмотру и экспертизе растительных и других подкарантинных материалов. - М.: Колос, 1972. - С. 340-379. 2. Воловик А.С., Глез В.М., Мордкович Я.Б., Сорочник И.Н. Новое в борьбе с картофельной нематодой. // Защита растений. - № 6. - 1998. - С. 41. 3. Ефременко Т.А., Боровикова А.Н., Дудик О.Р., Гуськова Л.А., Маковская С.А. Инструкция по выявлению золотистой и бледной картофельных нематод и мерам борьбы с ними. - М.: Агрохимиздат, 1988. - 44 с. 4. Сухарева Р.Д. Глободероз картоплі та заходи його обмеження в Західному Лісостепу України: автореф. дис. на здобуття наукового ступеня канд. б.-х. наук: спец. 06.01.11 "Фітопатологія " / Р.Д. Сухарева - Київ, 2009. - 28 с. 5. Патент України на корисну модель № 7248 від 15.06.2005 р. Спосіб виділення цист фітогельмінтів із ґрунтових проб. / Коржук Р.Д., Мацьків Т.І., Мельник П.О., Соломійчук М.П. Заявка № 20040504056 від 27.05.2004 р. Опубл. 16.05.2005 р. //Офіційний бюлетень. Промислова власність, Бюл. № 6. Таблиця Ефективність виявлення життєздатних цист картопляних нематод з ґрунтових зразків, що відібрані в різних регіонах України (по відношенню до способу-прототипу) Виявлено життєздатних цист нематод 0,5 % Кумасі голубий (спосіб, прототип що заявляється) Ефективність, Кількість (М±m) Кількість (М±m) % Патотипи, ізоляти с. Майдан, Міжгірського району, Закарпатської області с. Сурупи, Рухівського району, Закарпатської області с. Ясіня, Рахівського району, Закарпатської області с. Поркулина, Путильського району, Чернівецької області 120,6±1,3 136,6±1,9 6,3 178,6±2,6 192,3±2,6 18,1 230,6±1,6 242,3±2,3 11,9 28,6±,9 36,0±2,6 8,3 НІР05