Спосіб визначення тривалості проведення імунокорекції залежно від ступеня стресованості тварини

Реферат: Спосіб визначення тривалості проведення імунокорекції залежно від ступеня стресованості тварини полягає в заборі периферичної крові собак, після чого виділяють лейкоцитарнолімфоцитарну суміш клітин, запроваджують постановку навантажувального тесту "активних" ЕРУЛ in vitro з додаванням адреналіну, встановлюють за рівнем адренорецепції Т-лімфоцитів ступінь стресованості тварини - % інверсії, і за його значенням визначають тривалість проведення імунокорекції. UA 81832 U (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ТРИВАЛОСТІ ПРОВЕДЕННЯ ІМУНОКОРЕКЦІЇ ЗАЛЕЖНО ВІД СТУПЕНЯ СТРЕСОВАНОСТІ ТВАРИНИ UA 81832 U UA 81832 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної медицини, зокрема до фізіології та імунології, і може використовуватися в різних галузях практичної ветеринарної медицини для прогнозування ефективності імунокорекції залежно від індивідуальної стресованості організму тварин та застосування засобів, що зменшують вплив стрес-фактора. Встановлено, що вплив стресових агентів на розвиток імунної відповіді залежить не тільки від виду стресу (його характеристик), але і від чутливості до нейромедіаторів та гормонів (зокрема до катехоламінів) тих клітин нервової та імунної систем, які безпосередньо приймають участь в реалізації імунної реакції організму на вплив стресового чинника (Корнева Е.А., Шхинек Е.К. Физиологические механізми влияние стресса на иммунную систему // Вестник Академии Медицинских наук СССР.-1985. - № 8. - C. 44-50: T.B. Дегтяренко, Р.Ф. Макулькин, Биогенные стимуляторы и иммунореактивность. - Одесса, 1997.) Загально прийнятою в теперішній час є нейро-імуно-ендокринна теорія виникнення, розвитку та регуляції стресової реакції організму на дію стресового подразника будь-якого ґенезу. Стресор через активацію функціонування нейроструктур емоційного мозку (гіпокамповогіпоталамічне збудження) сигналізує нейроструктурам кори великих півкуль мозку про небезпеку, яка виникла і це обумовлює мобілізацію норадреналіну у нейроструктурах неокортексу (асоціативних та проекційних зонах кори), елементах лімбіко-ретикулярної системи, підкоркових морфофункціональних утворень мозку, що призводить до збудження центрів симпатичної нервової системи, і внаслідок цього підсилюється діяльність симпато-адреналової системи і відбувається збагачення крові сумішшю норадреналіну та адреналіну з мозкового шару надниркових залоз. Кров збагачується на 80-90 % норадреналіном та адреналіном, що обумовлює подальший розвиток стресової реакції в організмі (Горго Ю.П. Психофизиология. К., 1999). Результати експериментальних досліджень, які були проведені в НДІ ім. Філатова на моделі стрес-індукованої імуносупресії, дозволили визначити, що в динаміці розвитку стресової реакції організму відбувається підвищення рівня адренорецепції тимус-залежних лімфоцитів (Т.В. Дегтяренко, Р.Ф. Макулькин Биогенные стимуляторы и иммунореактивность. - Одесса, 1997.). Ці дослідження показали, що розвиток адреналін-індукованої імуносупресії починається вже після трьох внутрішньовенних ін'єкцій адреналіну і її прояв позначається на знижені вмісту абсолютної кількості лімфоцитів, зниження кількості Т, і В-лімфоцитів і фагоцитарної активності нейтрофілів. Відомий спосіб визначення ступеня прояву стресорної реакції організму на опікову травму Дегтяренко Т.В., Чаланова Р.І., Богданова О.В. (Спосіб визначення ступеня опікового стресу Патент 62262 Україна А61F 9/00 № 2003021347 заявлено 15.12.2003). Для домашніх тварин візит до ветеринарної установи вже є емоційним навантаженням, і залежно від низки факторів, як зовнішнього так і внутрішнього середовища, прямо впливає на розвиток адренозалежної імуносупресії. Об'єктивна пропозиція, яка належить до корисної моделі, полягає в тому, що діагностика ступеня стресованості тварин здійснюється на підставі розробленого навантажувального тесту in vitro з нейромедіатором адреналіном завдяки реєстрації відсотку інверсії кількості "активних" Е-РУЛ ("активних" Т-лімфоцитів) по відношенню до контрольної проби без додавання адреналіну (Т.В. Дегтяренко, Р.Ф. Макулькин Биогенные стимуляторы и иммунореактивность. Одесса, 1997.) В основу корисної моделі поставлена задача розробки способу визначення тривалості проведення імунокорекції залежно від ступеня стресованості тварини шляхом визначення рівня алоенорецепції Т-лімфоцитів, за рахунок чого стає можливим виявлення ступеню стресованості тварини, що дозволить визначити тривалість проведення заходів імунокорекції. Поставлена задача вирішується тим, що у способі визначення тривалості і проведення імунокорекції залежно від ступеня стресованості тварини здійснюють забір периферичної крові собак, виділення лейкоцитарно-лімфоцитарної суміші клітин, запровадження постановки навантажувального тесту "активних" Е-РУЛ in vitro з додаванням нейромедіатора адреналіну, визначають показник інверсії відсоток "активних" Е-РУЛ в дослідній пробі у порівняні з контролем, і залежно від значення показника інверсії визначають тривалість проведення імунокорекції: якщо показник інверсії до 10 % - повторні курси проводять протягом місяця, при значенні більше 10 % - курси імунокорекції проводять протягом 6 місяців. Причинно-наслідкові зв'язки 1. запровадження постановки навантажувального тесту "активних" Е-РУЛ in vitro з додаванням нейромедіатора адреналіну дозволяє визначити за рівнем адренорецепції Тлімфоцитів ступінь стресованості тварини; 2. значення показника інверсії рецепції Т-лімфоцитів в дослідних пробах з додаванням нейромедіатора адреналіну дозволяє визначити тривалість проведення імунокорекції. 1 UA 81832 U 5 10 15 20 25 30 Спосіб проводять таким чином: Вранці на тщесерце у собаки беруть 0,3-0,5 мл периферичної крові і виділяють лейкоцитарно-лімфоцитарну суміш клітин. Розкапують лейкоцитарно-лімфоцитарну суміш клітин по 0,05 мл у лунки імунологічних планшет. Додають в дослідні лунки 0,05 мл адреналіну (1:1000), а в контрольні лунки 0,05 мл фізіологічного розчину. Проводять інкубацію суміші клітин в імунологічних планшетах у термостаті протягом 30 хвилин при t=37 °C. Додають у лунки імунологічних планшет до всіх проб 0,05 мл еритроцитів барана (КБ) в стандартній концентрації 0,02 %. Проводять інкубацію 5 хвилин при кімнатній температурі, відразу готують мазки та забарвлюють їх за Романовським-Гимзою. Рахують відносну кількість "активних" Е-РУЛ на 100 клітин лімфоїдного ряду в контрольних і дослідних зразках; різниця у відсотку "активних" Т-клітин в контрольних і дослідних зразках визначає ступінь індивідуальної стресованості організму собак. За рівнем адренорецепції "активних" Т-лімфоцитів прогнозують тривалість проведення імунокорекції: до 10 % - наявність повторних курсів протягом місяця, при збільшені інверсії відсотку "активних" Е-РУЛ в дослідних пробах більш 10 - необхідно повторення курсів імунокорекції протягом 6 місяців. Імунологічні дослідження проводили в лабораторії імунології інституту ім. В.П. Філатова АМН України та ветеринарної клініки "Долина" на 60 собаках. Цих тварин, залежно від рівня чутливості Т-лімфоцитів до адреналіну, розділили на три групи: перша група - це собаки, які мали відсоток інверсії Т-лімфоцитів до адреналіну до 10 %; друга - це тварини, які виявляли ступінь стресованості 10-17 %, третя - вище 17 %. Всім тваринaм проводили курси імунокорекції тривалістю 14 днів зі застосуванням імунотропних препаратів, вітамінів та активаторів фагоцитозу. За тваринами спостерігали протягом 6 місяців на предмет необхідності продовження та повторення курсів імунокорекції. З таблиці 1 видно, що в групі собак, які мали низьку ступінь спресованості (до 9 %) кількість тварин, яким був необхідний повторний курс імунокорекції складав лише 10 % проти 48 та 84 % в другий та третій групі відповідно. Крім цього тварини зі середньою та високочутливістю Тлімфоцитів до адреналіну потребували протягом 6 місяців повторення курсів імунокорекції і найбільше в третій групі. Таблиця 1 Тривалість імунокорекції залежно від ступеня стресованості тварини Групи тварин Кількість Повторення курсів Тривалість курсу (відсоток тварин у групі, протягом місяця, імунокорекції інверсії) гол. гол./% До 9 % 20 11,5±2,41 2/10 10-16 % 21 21,14±2,07 10/48 17 і вище 19 31,0±2,16 16/84 35 Повторення курсів імунокорекції протягом 6 місяців, гол./% 4/19 8/42 В таблиці 2 представлені показники клітинного імунітету та фагоцитарної активності нейтрофілів в групах тварин з різним рівнем адренорецепції "активних" Т-лімфоцитів. Таблиця 2 Стан клітинного імунітету, фагоцитарної активності нейтрофілів залежно від рівня адренорецепції "активних" Т-лімфоцитів Групи тварин залежно під рівня адренорецепції "активних" Тлімфоцитів До 9 % 10-16 % 17 % і вище Норма Показники клітинного імунітету Абсолютна Абсолютна Імунорегуляторний кількість кількість Тіндекс Тх\Тс 9 лімфоцитів 10 /л лімфоцитів кл\мкл 2,1±0,82* 1,84±1,18 1,64±0,52 1,78-4,2 1506,1±605,0 1265,4±1004,0 1157,8±379,9 810-3020 кл/мкл 2 3,03±1,76 2,76±1,37 3,16±1,6 2-4 Фагоцитарна активність нейтрофілів кл\мкл 4671,8±2401,4 4447,5±2732,3 3744,9±1452,9 1600-4000 UA 81832 U 5 10 Аналіз другої таблиці, де вказані показники клітинного імунітету та фагоцитарної активності нейтрофілів у дослідних тварин залежно від рівня адренорецепції "активних" Т-лімфоцитів, показав, що у тварин першої та другої групи абсолютна кількість лімфоцитів знаходиться в 9 межах норми, при цьому у першої групи їх кількість на 0,2610 /л більша. Тварини третьої групи мали кількість лімфоцитів нижче за норму. Кількість Т-лімфоцитів у всіх трьох групах знаходилась в межах норми, але при цьому в першій групі у собак в середньому на 348,3 кл/мкл було більше ніж в третій, це імовірно відображається на ефективності проведення імунокорекції. Середній показник фагоцитарної активності нейтрофілів у перших двох групах знаходився вище за норму, а в третій групі в межах норми. Дезінтоксикаційна здатність організму є одним з основних процесів, які визначає ефективність проведення імунокорекції за допомогою фармакологічних засобів. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 20 Спосіб визначення тривалості проведення імунокорекції залежно від ступеня стресованості тварини за рівнем адренорецепції "активних" Т-лімфоцитів, що полягає в заборі периферичної крові собак, після чого виділяють лейкоцитарно-лімфоцитарну суміш клітин, запроваджують постановку навантажувального тесту "активних" Е-РУЛ in vitro з додаванням адреналіну, встановлюють за рівнем адренорецепції Т-лімфоцитів ступінь стресованості тварини - % інверсії, і за його значенням визначають тривалість проведення імунокорекції: при інверсії % "активних" Е-РУЛ в дослідних пробах до 10 % - повторні курси проводять протягом місяця, при значенні інверсії % "активних" Е-РУЛ в дослідних пробах більш 10 % - курси імунокорекції проводять протягом 6 місяців. 25 Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3