Спосіб одержання екстракту кореневищ гірчака зміїного, що має протимікробну активність відносно поліантибіотикорезистентних штамів умовно-патогенних мікроорганізмів

Реферат: Спосіб одержання екстракту кореневищ гірчака зміїного з протимікробними властивостями відносно поліантибіотикорезистентних штамів умовно-патогенних мікроорганізмів. Попередньо висушені та подрібнені на порошок кореневища гірчака зміїного поміщають у апарат Соксклета і екстрагують чистим ацетоном. Одержаний екстракт концентрують шляхом випарювання розчинника на водяній бані, далі висушують при кімнатній температурі під витяжкою, стандартизують за вмістом танінів, зберігають у герметично закритій посудині із темного скла. UA 83509 U (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ЕКСТРАКТУ КОРЕНЕВИЩ ГІРЧАКА ЗМІЇНОГО, ЩО МАЄ ПРОТИМІКРОБНУ АКТИВНІСТЬ ВІДНОСНО ПОЛІАНТИБІОТИКОРЕЗИСТЕНТНИХ ШТАМІВ УМОВНО-ПАТОГЕННИХ МІКРООРГАНІЗМІВ UA 83509 U UA 83509 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини та фармацевтичної промисловості і може бути використана для отримання нових препаратів з протимікробною активністю. Існує спосіб застосування настоїв і відварів гірчака зміїного як в'яжучого засобу при лікуванні ран, кровотеч, при захворюванні сечового міхура, при проносах, дизентерії, жовчнокам'яній і сечокам'яній хворобах, запальних процесах у ротовій порожнині і глотці [Чопик В.И., Дудченко Л.Г., Краснова А.Н. Дикорастущие полезные растения Украины. Справочник. - К.: Наукова думка, 1983.-400 с.; Лікарські рослини: Енциклопедичний довідник / Відп. ред. A.M. Гродзінський. - К.: Голов. ред. УРЕ, 1990.-544 с.]. Однак вказані галенові препарати вимагають приготування ex tempore, не придатні до тривалого зберігання, не підлягають стандартизації за вмістом біологічно-активних речовин. Вказаний спосіб не дозволяє одержати із кореневищ гірчака зміїного ефективний протимікробний засіб для лікування ранових інфекцій, спричинених госпітальними поліантибіотикорезистентними штамами мікроорганізмів та захворювань ШКТ. Найближчим аналогом за суттю до корисної моделі, що заявляється, є спосіб одержання екстрактів із кореневищ гірчака зміїного на 70 % і 90 % етанолі, які мають протимікробну активність у відношенні грамнегативних умовно-патогенних бактерій (Мізюк P.M., Куцик Р.В., Зузук Б.М., Борщ С.К., Фрич Н.І. Скринінгове дослідження протимікробної активності спиртових екстрактів лікарських рослин // Галицький лікарський вісник.-2005. - №4. - С. 66-71). Одержані наведеними способами 70 % і 90 %-водно-етанольні екстракти характеризуються недостатнім рівнем протимікробної активності відносно госпітальних штамів стафілококів, резистентних до сучасних β-лактамних антибіотиків, фторхінолонів, макролідів, лінкозамідів, тетрациклінів, а також відносно умовно-патогенних ентеробактерій, псевдомонад, дріжджоподібних грибів роду Candida - етіологічних чинників дисбактеріозу кишечнику. В основу корисної моделі поставлена задача створити спосіб одержання засобу із кореневищ гірчака зміїного, у якому за рахунок введення нових дій значно збільшується вихід біологічно активних речовин із вказаної сировини, що підвищує протимікробну активність одержаного екстракту. Поставлена задача вирішується тим, що попередньо висушені кореневища гірчака зміїного подрібнюють на порошок (величина частинок не більше 0,5 см) і піддають вичерпній екстракції чистим ацетоном в апараті Соксклета впродовж 2 годин, одержаний екстракт концентрують шляхом випарювання розчинника на водяній бані до 1/10 об'єму і висушують при кімнатній температурі під витяжкою. Спосіб здійснюється наступним чином. Попередньо висушені та подрібнені на порошок (величина частинок не більше 0,5 см) кореневища гірчака зміїного поміщають у апарат Соксклета і впродовж 2 год. екстрагують чистим ацетоном. Готовий екстракт концентруються шляхом випарювання розчинника на водяній бані до 1/10 об'єму і далі висушують при кімнатній температурі під витяжкою. Стандартизацію екстракту здійснювали за вмістом танінів шляхом їх осадження із розчину желатином (не менше 25 %). Тестування протимікробної активності одержаних рослинних екстрактів і препаратів порівняння виконано з використанням 3 панелей тест-штамів. Перша панель включала колекційний штам S. aureus 209-Р (АТСС 653 8-Р) і 34 клінічних штами стафілококів, друга колекційний штам P. aeruginosa „Тераков" (ДІСК ім. Л. О. Тарасевича, м. Москва) і 35 клінічних штамів Грамнегативних бактерій, які належать до родин Enterobacteriaceae і Pseudomonadaceae. Використані тест-штами виділені з клінічного матеріалу в бактеріологічній лабораторії кафедри мікробіології Івано-Франківського національного медичного університету, а також одержані з бактеріологічних лабораторій Обласної клінічноїлікарні, Обласного перинатального центру і Центральної міської бактеріологічної лабораторії. Культури ідентифікували за комплексом морфологічних і біохімічних ознак з використанням ідентифікаційних систем "STAPHYtest 16" "Entero test 1", "Entero test 2" та "Neferment test" ("Lachema", Чехія) із врахуванням рекомендацій "Визначника бактерій Берджі" (Bergey's Mannual th of Determinative Bacteriology, 12 ed.). Третя панель включала 3 клінічні штами дріжджоподібних грибів роду Candida, виділених від пацієнтів з вагінальним (штами "Сенич" і "Цюкевич") і генералізованим (штам "Ган") кандідозом. За комплексом морфологічних і біохімічних властивостей усі 3 штами було ідентифіковано як Candida albicans. Для оцінки ферментативної активності культур було використано набори біохімічних мікротестів Auxacolor® ("Sanofi Diagnostics Pasteur"). Для вивчення протимікробних властивостей суху наважку екстракту (10 мг/мл) перерозчиняють у суміші етанол-ДМСО (1:1). Протимікробна активність отриманих екстрактів вивчали методом дифузії в агар (табл. 1). Для порівняння представлено результати дослідження екстрактів, одержаних методом 1 UA 83509 U мацерації (холодного настоювання) в 70 % і 90 % водному етанолі. Для визначення ефективних діючих концентрацій екстрактів застосовано метод серійних розведень в агарі, (табл. 2). Таблиця 1 Порівняльна характеристика протимікробної активності водно-етанольних і ацетонових екстрактів з коренів P. bistorta. Діаметри зон затримки росту, мм 70 % водно-етанольний 90 % водно-етанольний S. aureus 209-P (ATCC 6538-P) 5,38±0,23* 6,91±0,70* S. aureus (MR) 5,88±0,29* 5,49±0,25* S. haemolyticus (MR) 4,53±0,33 6,83±0,50* S. epidermidis (MR) 5,50±0,24* 6,25±0,43* S. epidermidis (MS) 6,67±0,34* 5,87±0,15* S. hominis (MS) 4,67±0,18 5,67±0,17* S. cohnii ssp. cohnii (MR) 5,25±0,27* 6,77±0,27* P. aeruginosa "Тераков" (AS) 4,17±0,11 5,92±0,15* K. pneumoniae "5-03" (AS) 4,63±0,24 5,88±0,43* E. aerogenes "Костишин" (AS) 5,63±0,24* 5,63±0,24* E. coli "Максимів" (AS) 5,50±0,20* 5,25±0,14* P. aeruginosa "Вольман" (AR) 4,88±0,13* 5,38±0,24* K. pneumoniae "ІІ" (AR) 4,38±0,24 5,75±0,25 E. aerogenes "3410-03" (AR) 5,38±0,24* 5,50±0,35* E. coli "Малиновська" (AR) 5,00±0,20* 5,63±0,24* С albicans "Ган" 4,75±0,50 5,38±0,35 С. albicans "Сенич" 4,25±0,17 4,13±0,09 С. albicans "Цюкевич" 4,25±0,17 4,65±0,07 Мікроорганізм ацетоновий 7,93±0,53* 5,67±0,17* 6,33±0,22* 6,13±0,13* 5,63±0,24* 5,17±0,25 4,75±0,20 5,17±0,33* 4,08±0,07 8,50±0,29* 5,13±0,24* 7,50±0,20* 5,50±0,58 4,25±0,14 6,00±0,29* 7,50±1,03* 6,13±0,57* 4,25±0,17 Примітки: 1. * - p < 0,05 у порівнянні з контролем; 2. MS - метициліночутливий штам; 3. MR метицилінорезистентний штам; 4. AS антибіотикочутливий штам; 5. AR антибіотикорезистентний штам. Таблиця 2 Середні геометричні значення мінімальних пригнічуючих концентрацій (мкг/мл) екстрактів з кореневищ P. bistorta відносно клінічних штамів умовно-патогенних мікроорганізмів. Тест-штами 1 Pseudomonas spp. AR Pseudomonas spp. AS Enterobacteriaceae spp. AR Enterobacteriaceae spp. AS S. aureus MR S. aureus MS CNS MR CNS MS Candida spp. Екстракт 90 % водноетанольний 2 1471,8 683,3 812,5 933,3 538,6 460,4 528,5 437,5 694,5 Ацетоновий 3 371,5 500,0 659,7 659,7 535,9 371,5 500,0 410,2 630,0 Примітки: 1. AS - антибіотикочутливі штами; 2. AR - антибіотикорезистентні штами; 3. MS метициліночутливі штами; 4. MR - метицилінорезистентні штами; 5. CNS - коагулазо-негативні стафілококи. 5 Наведені результати свідчать про підвищення протимікробної активності одержаного ацетонового екстракту в порівнянні з водно-етанольними екстрактами, виготовленими методом мацерації, що відбувається за рахунок збільшення виходу біологічно активних речовин із рослинної сировини. 2 UA 83509 U 5 Застосування способу дає можливість досягнути технічного результату корисної моделі: одержати екстракт кореневищ гірчака зміїного з більш вираженими протимікробними властивостями, в тому числі відносно поліантибіотикорезистентних штамів умовно-патогенних мікроорганізмів. Запропонований спосіб може бути використаний для виготовлення із кореневищ гірчака зміїного нових лікувальних засобів з протимікробними властивостями на підприємствах фармацевтичної промисловості. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 15 Спосіб одержання екстракту кореневищ гірчака зміїного з протимікробними властивостями відносно поліантибіотикорезистентних штамів умовно-патогенних мікроорганізмів, який відрізняється тим, що попередньо висушені та подрібнені на порошок (величина частинок не більше 0,5 см) кореневища гірчака зміїного поміщають у апарат Соксклета і впродовж 2 год. екстрагують чистим ацетоном, одержаний екстракт концентрують шляхом випарювання розчинника на водяній бані до 1/10 об'єму і далі висушують при кімнатній температурі під витяжкою, стандартизують за вмістом танінів, зберігають у герметично закритій посудині із темного скла. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3