Спосіб підвищення ефективності протипухлинної вакцини

1. Спосіб підвищення ефективності протипухлинної вакцини шляхом введення лектину, який відрізняється тим, що бактеріальний лектин з культуральної рідини штаму мікроорганізму Bacillus subtilis B-7025 вводять мишам підшкірно через день 2-4 рази в дозі 1,0-10,0 мг на кг ваги до прищеплення пухлинних клітин різного гістогенезу. 2. Спосіб підвищення ефективності протипухлинної вакцини шляхом введення лектину, який відрізняється тим, що бактеріальний лектин з культуральної рідини штаму мікроорганізму Bacillus subtilis B-7025 вводять мишам підшкірно щоденно 2-4 рази в дозі 1,0-10,0 мг на кг ваги до оперативного видалення пухлини. Винахід відноситься до медицини, а саме, до онкології і стосується способу підвищення ефективності протипухлинних засобів. Протягом останніх років інтенсивно розробляються методи і засоби імунотерапії пухлин (вакцинотерапія, використання імуноад'ювантів, цитокінів, тощо), які базуються на специфічній індукції протипухлинної резистентності організму. Одна з причин інтересу до імунотерапії є те, що основні методи боротьби із злоякісними пухлинами - хірургічний, хіміотерапевтичний, радіологічний - в значній мірі досягли максимуму ефективності. В той же час можливості підвищення результатів імунотерапії за рахунок визначення фундаментальних основ регуляції протипухлинного імунітету і оптимізації біотехнологічних процесів в онкології ще далеко не вичерпані. Тому розробка універсальних технологій виготовлення з пухлин різного походження протипухлинних вакцин для специфічної імунотерапії є особливо актуальною. Однією з таких технологій є виготовлення протипухлинних вакцин шляхом інактивації пухлинних клітин за допомогою цитотоксичних лектинів, виділених з культуральної рідини сапрофітного мікроорганізму Bacillus subtilis В-7025, які специфічно зв'язуючись з рецепторами пухлинних клітин, підвищують їх імуногенність [1, 2]. Ефективність такої вакцини була доведена на ряді солідних та асцитних експериментальних пухлин різного гістогенезу [3-4]. В клініці імунотерапія цими вакцинами застосовується для профілактики рецидивів та метастазів після хірургічного видалення пухлини у хворих на рак шлунку, нирок, легенів, колоректальним раком та інших локалізацій [5-6]. Показано, що ефективність вакцинації як в експерименті, так і в клініці досягається за рахунок стимулюючого впливу на активність клітинного та гуморального імунітету [7, 8]. Проте, як показують сучасні дані [9, 10], практично всі специфічні протипухлинні вакцини більш ефективні при використанні з ад'ювантами різного походження (БЦЖ, цитокіни, пробіотики), які здатні чинити стимулюючий вплив на ключові ланки імунної відповіді. Так, відомий імуномодулюючий препарат бластолен, виготовлений на основі плазматичних мембран молочнокислих бактерій Lactobacillus Delbrueckii [11] при комбінованому застосуванні з протипухлинною вакциною призводить до більш вираженого гальмування пухлинного росту та зро (19) UA (11) 93431 (13) C2 (21) a200905661 (22) 03.06.2009 (24) 10.02.2011 (46) 10.02.2011, Бюл.№ 3, 2011 р. (72) ПОТЕБНЯ ГРИГОРІЙ ПЛАТОНОВИЧ, ТАНАСІЄНКО ОЛЬГА АНДРІЇВНА, ТІТОВА ГАЛИНА ПАНТЕЛІЇВНА, РУДИК МАРІЯ ПЕТРІВНА, ЧЕХУН ВАСИЛЬ ФЕДОРОВИЧ (73) ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ ПАТОЛОГІЇ, ОНКОЛОГІЇ ТА РАДІОБІОЛОГІЇ ІМ. Р.Є. КАВЕЦЬКОГО НАН УКРАЇНИ (56) UA 59483 C2 17.02.2003 Потебня Г.П., Танасієнко О.А., Лісовенко Г.С., Савцова З.Д. Використання цитотоксичних лектинів бактеріального походження в імунотерапії експериментальних пухлин. В монографії "Структура і 3 93431 стання СТЖ, ніж при ізольованому використанні самої вакцини. Найближчим аналогом до способу, що заявляється, є підвищення ефективності протипухлинної вакцини за допомогою субаліну - пробіотика нового покоління на основі рекомбінантного штаму бактерій B.subtilis 2335/105, який містить ген синтезу α-інтерферону людини [12]. Включення субаліну в схему імунізації мишей протипухлинною вакциною дозволяє підвищити терапевтичну ефективність останньої, що виражалося в зменшенні об'єму пухлини, гальмуванні метастазування та збільшенні середньої тривалості життя тварин [13-14]. В основу винаходу, що заявляється, поставлено задачу розробити спосіб підвищення ефективності протипухлинної вакцини шляхом комбінованого послідовного застосування в схемі лікування цитотоксичного лектину, виділеного з культуральної рідини бактеріальної культури В.subtilis B-7025 і протипухлинної вакцини, виготовленої на його основі з метою збільшення середньої тривалості життя і покращення її якості. Перевагою винаходу є застосування бактеріального лектину не тільки для виготовлення протипухлинної вакцини, а і в якості імуномодулюючого препарату, який вводять інтактним мишам або тваринам з пухлиною перед її хірургічним видаленням лише декілька раз. За рахунок швидкої антигенної презентації та стимуляції активності основних імунологічних реакцій забезпечується підвищення протипухлинної резистентності. Це дозволяє не тільки досягти вищої лікувальної ефективності протипухлинної вакцини та покращення якості життя, але й зменшити вартість лікування. Суть способу підвищення ефективності протипухлинної вакцини полягає в тому, що бактеріальний лектин включають в схему лікування вакциною таким чином: в профілактичній схемі дослідів його вводять інтактним тваринам, а при терапевтичній схемі - перед хірургічним видаленням пухлини підшкірно 2-4-кратно в дозі 0,5-10 мг/кг ваги. Це дозволяє підвищити протипухлинну резистентність організму в режимі швидкої допомоги, уникнути або суттєво зменшити дисемінацію пухлинних клітин при операційному видаленні пухлини і знизити таким чином ризик метастазування . Спосіб підвищення ефективності протипухлинної вакцини здійснювали за наступних умов. Протипухлинну активність комбінованого застосу 4 вання вакцини та бактеріального лектину досліджували на експериментальних моделях солідної саркоми 37 та метастазуючої карциноми легені Льюіс мишей. У кожній експериментальній групі було по 7-14 мишей ліній Balb/c або С57В1 2,0-2,5місячного віку масою 18-20г. Тваринам внутрішньом'язово прищеплювали по 0,35-0,50×106 живих клітин саркоми 37 або карциноми легені Льюіс. Миші І дослідної групи одержували БЛ і вакцину, II - лише вакцину, III - лише БЛ, а мишам IV контрольної групи вводили фізіологічний розчин. Протипухлинну вакцину, одержану за способом патенту №57869 [15], вводили 5-6-кратно, підшкірно в однакових дозах (0,2-0,3 мл) двічі на тиждень, починаючи з першої доби після прищеплення пухлинних клітин або операційного видалення пухлини. БЛ, одержаний за способом патенту №59483 [16], вводили: інтактним мишам - через 1-2 доби, мишам з прищепленою пухлиною - кожного дня або через день перед операцією підшкірно 2-4 рази в дозах 0,5-10,0 мг/кг ваги. Ефективність лікування саркоми 37 оцінювали по динаміці росту пухлин, кількості тварин без пухлини та середній тривалості життя. Ефективність лікування метастазуючої карциноми легені Льюіс оцінювали по кількості мишей без метастазів, середній кількості та об'єму метастазів на одну мишу, і вираховували індекс гальмування метастазування (ІГМ) за формулою: ІГМ=[1-К/Д]×100%. Суть способу, що заявляється, пояснюють приклади конкретного виконання. Приклад 1 Дослід проводили на сингенних мишах лінії Balb/c вагою 18-20г. Інтактним мишам І і III груп підшкірно 3 рази через кожні 2 доби у дозі 10 мг/кг ваги вводили лектин, одержаний з культуральної рідини В.subtilis B-7025. Через добу після останнього введення лектину мишам прищеплювали по 0,35x106 пухлинних клітин (ПК) саркоми 37. Лікування вакциною мишей І та II груп починали через добу після прищеплення пухлини: вводили вакцину підшкірно в дозі 0,3 мл два рази на тиждень. Всього миші отримували 6 ін'єкцій вакцини. Мишам III групи після прищеплення ПК продовжували вводити БЛ. Мишам IV контрольної групи вводили фізіологічний розчин. Проведені дослідження представлено в таблиці 1. Таблиця 1 Вплив вакцини, бактеріального лектину та їх комбінації на показники перебігу пухлинного процесу в порівнянні з контролем прищеплення Група Лікування І II III IV БЛ→ПК→В-на Вакцина БЛ→ПК→БЛ Контроль К-ть мишей в групі 10 9 7 10 ІГП, % на 35 добу 59 50 СТЖ, діб М±m 94,6±5,5* 81,4±2,4** 62,8±2,8 58,8±1,7 t Ρ 6,2 7,6 1,2 0,05 t - критерій Ст'юдента; Р - вірогідність події; * - Ρ