Спосіб діагностики невиношування вагітності

Реферат: UA 97446 U UA 97446 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі медицини, зокрема акушерства та гінекології, і стосується діагностики генетичних форм тромбофілії у вагітних з невиношуванням. Невиношування вагітності є актуальною проблемою сучасного акушерства та гінекології й спричиняє не тільки демографічні втрати, але й порушує репродуктивне, соціальне і психологічне благополуччя жінки. В даний час немає єдиного погляду на місце генетичної тромбофілії у розвитку невиношування, що може бути пов'язано з різною етнічною приналежністю, з тим різновидом генних поліморфізмів, дослідження яких проводилося. В акушерській практиці тести, які свідчать про наявність тромбофілії стали одночасно маркерами високого ризику невиношування, гестозу, відшарування нормально розташованої плаценти Відомий спосіб прогнозування перебігу вагітності у жінок з невиношуванням та тромбофілією [Патент РФ № 2429478, МПК G01N 33/49, опубл. 20.09.2011], при якому проводять визначення фібринолітичної активності, активованого часткового тромбопластинового часу, продуктів деградації фібрину та міжнародного нормалізованого відношення з подальшим обчисленням інтегрального показника коагуляції. Недоліком відомого способу є те, що він заснований тільки на визначенні показників, що динамічно змінюються, не враховує генетичної схильності до змін в системі гемостазу, не дозволяє оцінити індивідуальну схильність до розвитку акушерських ускладнень. Найбільш близьким з технічної суті і результата, що досягається, є спосіб діагностики невиношування вагітності [патент РФ № 2330071, МПК C12Q 1/68, заявка № 2006145533/13 від 21.12.2006, опубл. 27.07.2008], який включає одночасне тестування ДНК на наявність поліморфізму аналіз поліморфізму генів R353Q гена фактора VІІ згортання крові та поліморфізм С677Т гена MTHFR. Під генетичними поліморфізмами в даний час розуміють наявність в популяції кількох різних варіантів гена (алелей), які здатні надавати неоднаковий вплив на якісні чи кількісні характеристики кодованого білкового продукту. В даний час генетичний поліморфізм розглядається як "псевдонормального" явище, тому що більшість генів людини є поліморфними і окремі алельні варіанти широко розповсюджені в популяції. Однак недоліком відомого способу є те, що маркери, які визначаються, не повністю відображають причини невиношування та не характеризують найбільш значущі тромбофілічні зміни при вагітності. Відомий спосіб також не враховує наявності поліморфізму в гені активатора плазміногену, фібриногену та параоксанази, патологічні алелі яких ускладнюють перебіг вагітності. В основу способу поставлена задача удосконалення діагностики невиношування вагітності за рахунок комплексної оцінки генетичних факторів в системі гемостазу шляхом прогнозування ризику розвитку тромбозів, що приведе до підвищення точності діагностики та забезпечить зниження частоти невиношування вагітності знижені материнської і перинатальної захворюваності та смертності Спосіб діагностики невиношування вагітності, що включає одночасне тестування ДНК на наявність поліморфізму гена фолатного обміну - метилентетрагідрофолатредуктази (MTHFR) С677Т, згідно з корисною моделлю, додатково визначають маркери генетичної тромбофілії, а саме: мутації 1691 G→А в гені фактора V Leiden, мутації 20210 G→А в гені протромбіну, поліморфізм 455 G→А в гені фібриногену В. Спосіб діагностики невиношування вагітності у пацієнток з тромбофілією, заснований на комплексній оцінці генетичних поліморфізмів в системі гемостазу, дозволяє не тільки з високою точністю прогнозувати ризик розвитку тромбозів, але також планувати і контролювати лікувальні заходи, спрямовані на нормалізацію кровообігу в системі мати-плацента-плід. Враховуючи особливості фізіологічної адаптації системи гемостазу до вагітності, абсолютна більшість генетичних форм тромбофілії клінічно маніфестує саме протягом гестаційного процесу і, як виявилося, не тільки у формі тромбозів, але й у формі типових акушерських ускладнень. Мутація 1691 G→А в гені фактора V Leiden - є найбільш значущим генетичним дефектом гемостазу та являється частою причиною високого ризику тромбозу і, як наслідок, несприятливий результатом вагітності; Мутація 20210 G→А в гені протромбіну, так як ген протромбін кодує білок-протромбін, який є одним з головних факторів системи згортання крові, варіант мутації гена призводить до підвищеної експресії гена та підвищує ризик тромбозів; Поліморфізм 455 G→А в гені фібриногену В, внаслідок патологічної мутації порушується механізм зв'язування молекули фібриногену з тромбіном, що забезпечує високу концентрацію останнього та продовження процесу коагуляції і як наслідок високу частоту тромбозів. 1 UA 97446 U 5 10 15 20 25 30 35 Враховуючи, що ДНК-діагностика тромбофілій є єдиним способом профілактики більшості акушерських ускладнень, які пов'язані з цією патологією, економічна та соціальна ефективність цієї технології виявляється рекордно високою, забезпечуючи залучення значних коштів в розвинутих країнах. Спосіб діагностики невиношування вагітності виконується наступним чином. Дослідження генетичних поліморфізмів проводили за допомогою алель-специфічної полімеразної ланцюгової реакції, з наступною детекцією методом електрофорезу в 3 % агарозному гелі. Використовувався комплект реагентів "SNP-експрес" виробництва НПФ "Літех" (Росія) для визначення поліморфізмів в геномі людини. З примірником виділеної ДНК паралельно проводять дві реакції ампліфікації - з двома парами алель-специфічних праймерів. Дослідним матеріалом являється цільна венозна кров, 2000 мкл якої забирали в вакуумну пробірку з ЕДТА. Методика проведення включає три етапи. Перший - виділення ДНК з лейкоцитів цільної крові за допомогою реагента "ДНК-експрес-кровь" ("Літех" Росія). Виділенні на першому етапі ДНК зберігали в пробірках "Эппендорф" при температурі -200С не більше 6 місяців до проведення наступного етапу. Другий етап - проведення ПЛР з використанням комплекту реагентів для ампліфікації "SNP-экспресс". Третій - детекція продуктів ампліфікації методом горизонтального електрофорезу в 3 % агарозному гелі. Продукти ПЛР становляться видимими в 3 % агарозному гелі після прокрашування бромистим етидієм за допомогою їх флюоресценції в ультрафіолетовому світлі. На основі отриманих даних виявляють розподіл частот генотипів мутації 1691 G→А в гені фактора V Leiden, мутації 20210 G→А в гені протромбіну, поліморфізм 455 G→А в гені фібриногену В та поліморфізм гена фолатного обміну метилентетрагідрофолатредуктази (MTHFR) - 677С→Т. Результати аналізу дозволяють надати три виду висновків: нормальна гомозигота, гетерозигота, мутантна гомозигота. Методи ДНК-діагностики не є дешевими, але їх ціна, як правило, не вище решти високотехнологічних лабораторних досліджень. Для реалізації запропонованого способу діагностики невиношування вагітності було обстежено 104 вагітних в першому, другому та третьому триместрах вагітності. Дослідну групу склали 59 вагітних з невиношуванням вагітності. 53 жінки мали в анамнезі втраті вагітності в першому триместрі, 6 - в другому та третьому триместрах. Контрольну групу склали 45 соматично здорових жінок з фізіологічним перебігом вагітності та необтяжливим акушерським анамнезом. Розподіл частот мутацій в дослідній групі наведені в таблиці. Проведено аналіз генних поліморфізмів у вагітних з невиношуванням Встановлено, що зустрічальність мутацій у жінок з невиношуванням вагітності була вищою в порівнянні з групою контролю (42,4 % при 20 %; р