Моноклональне антитіло людини, що специфічно зв’язується з фактором некрозу пухлин альфа (фнпa), фармацевтична композиція, що його містить, та спосіб лікування ревматоїдного артриту

1. Моноклональне антитіло людини, що специфічно зв’язується з фактором некрозу пухлин альфа (ФНПα) та містить варіабельний регіон, який включає варіабельний регіон важкого ланцюга з амінокислотною послідовністю SEQ ID NO: 7 та варіабельний регіон легкого ланцюга з амінокислотною послідовністю SEQ ID NO: 8. 2. Антитіло за пунктом 1, визначене як TNV148. 3. Ізольована нуклеїнова кислота, що кодує антитіло за пунктом 1. 4. Вектор ізольованої нуклеїнової кислоти, що містить ізольовану нуклеїнову кислоту за пунктом 3. 5. Прокаріотична або еукаріотична клітина хазяїна, що містить ізольовану нуклеїнову кислоту за пунктом 3. 6. Спосіб продукування антитіла за п. 1, який включає трансляцію нуклеїнової кислоти за пунктом 3 в умовах, що дозволяють експресію вказаного антитіла. 7. Фармацевтична композиція, яка містить антитіло за пунктом 1 та принаймні один фармацевтично прийнятний носій чи розчинник. 8. Спосіб лікування ревматоїдного артриту у людини чи тварини, що включає призначення композиції за пунктом 7 у кількості, ефективній для інгібування ФНПα у людин чи тварин. 9. Спосіб за пунктом 8, у якому вказана ефективна кількість становить 0,001-500 мг/кілограм. 10. Спосіб за пунктом 8, у якому вказане призначення є принаймні одним із способів призначення, вибраним з парентерального, підшкірного, внутрішньом'язового або внутрівенного. UA (21) 2003021152 (22) 07.08.2001 (24) 11.02.2008 (86) PCT/US01/24785, 07.08.2001 (31) 09/920,137 (32) 01.08.2001 (33) US (31) 60/223,360 (32) 07.08.2000 (33) US (31) 60/236,826 (32) 29.09.2000 (33) US (72) ГІЛЕС-КОМАР ДЖІЛЛ, НАЙТ ДЕВІД М., ХЕВНЕР ДЖОРДЖ, СКЕЛЛОН БЕРНАРД, ШИЛІ ДЕВІД (73) ЦЕНТОКОР, ІНК. (56) WO A1 9729131, 14.08.1997. US A 5654407, 05.08.1997. Michael J. Mendez et al.:"Functional transplant of megabase human immunoglobulin loci recapitulates human antibody response in mice"/ NATURE GENETICS, vol. 15, no. 2, February 1997 (1997-02), pages 146-156, XP002067603. WO A 9633735, 31.10.1996. S. Stephens et al.:"Comprehensive pharmacokinetics of a humanized antibody and analysis of residual antiidiotypic responses". IMMUNOLOGY, vol. 85, no. 4, August 1995 (1995-08), pages 668-674, XP000881488. S. Siegel et al.:"The mouse/human chimeric monoclonal antibody cA2 neutralizes TNF in vitro and protects transgenic mice from cachexia and TNF lethality in vivo". CYTOKINE, vol. 7, no. 1, January 1995 (1995-01), pages 15-25, XP000990566. E. Rankin et al.:"The therapeutic effects of an engineered human anti-tumour necrosis factor alpha antibody (CDP571) in rheumatoid arthritis". BRITISH JOURNAL OF RHEUMATOLOGY, vol. 34, no. 4, 2 (19) 1 3 Ця заявка частково ґрунтується, і має пріоритет за попередніми [заявками US 60/223,360 від 7 серпня 2000 року та US 60/236,826 від 29 вересня 2000 року], що включені тут за посиланнями. Даний винахід відноситься до антитіл, включаючи специфічні частини та варіанти, які є специфічними, принаймні, за одним білком фактора некрозу пухлин альфа (ФНП) або його фрагментом, а також відноситься до нуклеїнових кислот, що кодують такі анти-ФНП антитіла, додаткових нуклеїнових кислот, векторів, клітин господаря та до способів виробництва і їхнього використання, включаючи терапевтичні препарати, призначення та пристрої. ФНП альфа є розчинним гомотримером білкової субодиниці 17кДа [Smith et al., J. Biol. Chem. 262: 6951-6954 (1987)]. Також існує мембранно-зв'язуюча форма-попередник ФНП вагою 26кДа [Kriegler et al., Cell 53: 45-53 (1988)]. Для огляду по ФНП, [див. Beutler et al., Nature 320: 584 (1986); Old, Science 230:630 (1986); та Le et al., Lab. Invest. 56:234 (1987)]. Клітини, що не є моноцитами або макрофагами, також продукують ФНП альфа. Наприклад, людські немоноцитні пухлинні клітинні лінії продукують ФНП альфа [Rubin et al., J. Exp. Med. 164: 1350 (1986); Spriggs et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 6563 (1987)]. T-лімфоцити CD4+ і CD8+ периферичної крові та деякі культуровані Т- і В-клітинні лінії [Cuturi et al., J. Exp. Med. 165: 1581 (1987); Sung et al., J. Exp. Med. 168: 1539 (1988); Turner et al., Eur. J. Immunol. 17: 1807-1814 (1987)] також продукують ФНП альфа. ФНП альфа спричиняє прозапальні дії, які призводять до тканинних пошкоджень, таких як дегенерація хрящів та кісток [Saklatvala, Nature 322: 547-549 (1986); Bertolini, Nature 319: 516-518 (1986)), індукція молекул адгезії, включаючи прокоагулянтний вплив на судинні ендотеліальні клітини [Pober et al., J. Immunol. 136: 1680 (1986)], збільшення агрегації нейтрофілів та лімфоцитів [Pober et al., J. Immunol. 138: 3319 (1987)] та стимуляція вивільнення тромбоцитарного активуючого фактору з макрофагів, нейтрофілів та судинних ендотеліальних клітин [Camussi et al., J. Exp. Med. 166: 1390 (1987)]. Останні дані пов'язують ФНП альфа з інфекціями [Cerami et al., Immunol. Today 9: 28 (1988)], імунними розладами, неопластичними патологіями [Oliff et al., Cell 50:555 (1987)], аутоімунними патологіями та патологічними реакціями відторгнення трансплантанту [Piguet et al., J. Exp. Med. 166: 1280 (1987)]. Взаємозв'язок ФНП альфа з раком та інфекційними патологіями є часто залежним від катаболічного стану господаря. Пацієнти з раком страждають на втрату ваги, що зазвичай поєднується з анорексією. Екстенсивне виснаження, яке поєднується з раком та іншими захворюваннями відоме як "кахексія" [Kern et al., J. Parent. Enter. Nutr. 12: 286298 (1988)]. Кахексія включає прогресуюче зменшення ваги, анорексію та стійке зменшення безжирової маси тіла у відповідь на ріст злоякісної пухлини. Кахектичний стан призводить до більшої 81743 4 ракової смертності та захворюванності. Існують дані, що ФНП альфа залучений у розвиток кахексії при раку, інфекційній патології та інших катаболічних станах [див., напр., Beutler and Cerami, Ann. Rev. Immunol. 7: 625-655 (1989)]. Вважається, що ФНП альфа відіграє центральну роль при грам-негативному сепсисі та ендотоксичному шоці [Michie et al., Br. J. Surg. 76: 670-671 (1989); Debets et al., Second Vienna Shock Forum, p. 463-466 (1989); Simpson et al., Crit. Care Clin. 5: 27-47 (1989)], включаючи лихоманку, слабкість, анорексію та кахексію. Ендотоксин потужно активує моноцитарну/макрофагальну продукцію та секрецію ФНП альфа та інших цитокінів [Kornbluth et al., J. Immunol. 137: 25852591 (1986)]. ФНП альфа та інші цитокіни моноцитарного походження опосередковують метаболічні та нейрогуморальні відповідці на ендотоксин [Michie et al., New Engl. J. Med. 318: 1481-1486 (1988)]. Введення ендотоксину людямдобровольцям призводить до гострого захворювання з грипо-подібними симптомами, включаючи лихоманку, тахікардію, підвищенний рівень метаболізму та вивільнення стресових гормонів [Revhaug et al., Arch. Surg. 123: 162-170 (1988)]. Циркулюючий ФНП альфа підвищений у пацієнтів з грам-негативним сепсисом [Waage et al., Lancet 1: 355-357 (1987); Hammerle et al., Second Vienna Shock Forum, p.715-718 (1989); Debets et al., Crit. Care Med. 17: 489-497 (1989); Calandra et al., J. Infect. Dis. 161: 982-987 (1990)]. Отже, ФНП альфа має значення при запальних захворюваннях, аутоімунних захворюваннях, вірусних, бактеріальних та паразитарних інфекціях, злоякісних та/або нейродегенеративних захворюваннях та є важливою мішенню для специфічної біологічної терапії при таких захворюваннях, як ревматоїдний артрит та хвороба Крона. Повідомлялося про позитивні впливи у відкритих дослідженнях з химеричними моноклональними антитілами до ФНП альфа (сА2) з пригніченням запалення та з вдалим повторним лікуванням після рецидиву ревматоїдного артриту [Elliott et al., Arthritis Rheum. 36: 1681-1690 (1993); та Elliott et al., Lancet 344: 1125-1127 (1994)] та при хворобі Крона [Van Dullemen et al., Gastroenterology 109: 129-135 (1995)]. Також повідомлялося про позитивні результати в рандомізованому, подвійномусліпому, плацебо-контрольованому дослідженні з використанням сА2 при ревматоїдному артриті при пригніченні запалення [Elliott et al., Lancet 344: 1105-1110 (1994)]. Антитіла до "модуляторної" речовини, яка називається кахексии (пізніше була визначена як ідентична до ФНП) були запатентовані [Cerami et al. (ЕРО патента публікація 0212489, 4 березня, 1987)]. Такі антитіла були визначені як корисні при діагностичних імуноаналізах та при лікуванні шоку при бактеріальній інфекції. [Rubin et al. (ЕРО патентна публікація 0218868, 22 квітня, 1987)] виявили моноклональні антитіла до людського ФНП, гібридоми, що секретують такі антитіла, способи виробництва таких антитіл та використання таких антитіл при імунноаналізах 5 81743 6 ФНП. [Yone et al. (ЕРО патентна публікація Нелюдські, від ссавців, химеричні, 0288088, 26 жовтня, 1988)] виявили анти-ФНП поліклональні (напр., антисивороткові) та/або антитіла, включаючи мАт, та їхнє використання у моноклональні антитіла (мАт) та фрагменти імунноаналізах захворювань, зокрема хвороби (напр., їхні продукти протеолітичного розщеплення Кавасакі та бактеріальної інфекції. Було або злиття білків) є потенційними терапевтичними встановлено, що рідини організму пацієнтів з агентами, що досліджувалися в деяких випадках хворобою Кавасакі (гострий фебрильний для лікування певних захворювань. Однак, такі слизовошкірний лімфатичновузловий синдром антитіла або фрагменти можуть викликати імунну немовлят; [Kawasaki, Т., Allergy 16: 178 (1967); відповідь при призначенні людям. Така імунна Kawasaki, Т., Shonica (Pediatrics) 26: 935 (1985)]) відповідь може призвести до імуннокомплексногомістять підвищені рівні ФНП, які пов'язані з опосередокованого кліренса антитіл або прогресуванням захворювання. фрагментів з кровообігу, та робить повторне Інші дослідники описали мАт специфічні для введення неприйнятним при лікуванні, таким рекомбінантного людського ФНП, які мають чином зменшуючи лікувальний позитивний вплив у нейтралізуючу дію in vitro [Liang, C-M. Et al. пацієнта та обмежуючи повторне призначення (Biochem. Biophys. Res. Comm. 137: 847-854 антитіл або фрагментів. Наприклад, повторне (1986); Meager, A. et al., Hybridoma 6: 305-311 призначення антитіл або фрагментів, що містять (1987); Fendly et al., Hybridoma 6: 359-369 (1987); нелюдські частини, може призвести до Bringman, T.S. et al., Hybridoma 6: 489-507 (1987); сивороткової хвороби та/або анафілаксії. Для того, Hirai, M. et al., J. Immunol. Meth. 96: 57-62 (1987); щоб уникнути цих та інших проблем, було Moller, A. et al. (Cytokine 2:162-169 (1990))]. Деякі ці застосовано декілька підходів для зменшення мАт використовувалися для картування епітопів імунногеності таких антитіл та їхніх частин, людського ФНП та розробки іммуноферментих включаючи химеризацію та гуманізацію, як це аналізів [Friendly et al., supra; Hirai et al., supra; добре відомо у даній галузі. Ці та інші підходи, Moller et al., supra] та для допомоги в очищенні однак, все ще призводять до певної імунногеності рекомбінантного ФНП [Bringman et al., supra]. антитіл або фрагментів, низької афіності, низької Однак, ці дослідження не надають підгрунття для спорідненості або до проблем з клітинною продукування антитіл, що нейтралізують ФНП, які культурою, зростанням, продукцією та/або низьким можуть бути використані для діагностики in vivo виходом. Отже, такі антитіла або фрагменти або для терапевтичного використання у людей, можуть бути менш, ніж ідеальними для внаслідок імунногеності, браку специфічності виробництва чи використання в якості лікувальних та/або фармацевтичної прийнятності. протеїнів. Було показано, що у ссавців нейтралізуюча Відповідно, є потреба у розробці анти-ФНП антисиворотка або мАт до ФНП є відмінними від антитіл або фрагментів, що можуть подолати одну таких у людей, що не дає можливість запобігти з цих проблем, а також у покращенні щодо відомих фізіологічним змінам та смерті після введення антитіл або їхніх фрагментів. летальної дози при експериментальній Даний винахід описує ізольовані отримані у ендотоксемії та бактеремії. Цей ефект було людей, приматів, гризунів, ссавців химеричні, показано, напр., у в аналізах смертності гризунів гуманізовані та/або ДВР-трансплантовані антита у системах моделі патологій приматів [Mathison, ФНП антитіла, імунноглобуліни, продукти J.C. et al., J. Clin. Invest. 81: 1925-1937 (1988); розщеплення та інші їхні специфічні частини і Beutler, B. et al., Science 229: 869-871 (1985); варіанти, а також препарати анти-ФНП антитіл, Tracey, K.J. et al., Nature 330: 662-664 (1987); кодуючі або додаткові нуклеїнові кислоти, вектори, Shimamoto, Y. et al., Immunol. Lett. 17: 311-318 клітини господаря, препарати, формулювання, (1988); Silva, A.T. et al., J. Infect. Dis. 162: 421-427 пристрої, трансгенні тварини, трансгенні рослини (1990); Opal, S.M. et al., J. Infect. Dis. 161: 1148та способи їхнього виробництва і використання, як 1152 (1990); Hinshaw, L.B. et al., Circ. Shock 30: це описано і уможливлено тут, в комбінації з тим, 279-292 (1990)]. що відомо в даній галузі. Можливі місця рецепторного зв'язування В даному винаході також представлено лФНП було виявлено [Еск та Sprang J. Biol. Chem. принаймні одне ізольоване анти-ФНП антитіло, як 264(29), 17595-17605 (1989)], які індентифікували тут описано. До антитіл, згідно даного винаходу, місця рецепторного зв'язування ФНП-а, в якості належать будь-які білки або пептид-вміщуючі таких, що містять амінокислоти 11-13, 37-42, 49-57 молекули, що складаються принаймні з частини та 155-157. [Заявка РСТ WO91/02078 (дата імунноглобулінової молекули, такої як, але не пріоритету 7 серпня, 1989)] описує ліганд ФНП, обмежуючись, принаймні один допоміжний який може зв'язувати моноклональні антитіла, що визначальний регіон (ДВР) важких або легких мають такі епітопи: принаймні один з 1-20, 56-77 та ланцюгів або їхня ліганд-зв'язуюча частина, важко108-127; принаймні два з 1-20, 56-77, 108-127 та або легколанцюговий варіабельний регіон, важко138-149; всі з 1-18 та 108-128; всі з 56-79, 110-127 або легколанцюговий постійний регіон, каркасний та 135- або 136-155; всі з 1-30, 117-128 та 141-153; регіон, або будь-яка їхня частина, що можуть бути всі з 1-26, 117-128 та 141-153; всі з 22-40, 49-96 включені до складу антитіла в даному винаході. або -97, 110-127 та 136-153; всі з 12-22, 36-45, 96Антитіло винаходу може включати або походити 105 та 132-157; всі з 1-20 та 76-90; всі з 22-40, 69від будь-якого ссавця, такого як, але не 97, 105-128 та 135-155; всі з 22-31 та 146-157; всі з обмежуючись, людина, миша, кріль, щур, гризун, 22-40 та 49-98; принаймні один з 22-40,49-98 та примат або будь-яка їхня комбінація, і таке 69-97, обидва з 22-40 та 70-87. подібне. 7 81743 8 Даний винахід описує в одному аспекті Антитіло винаходу може включати або походити молекули ізольованих нуклеїнових кислот, що від ссавців таких як, але не обмежуючись, людина, складають шляхом сполучення або гібридизування миша, кріль, щури, гризуни, примати та інші. полінуклеотіди, котрі кодують специфічні антиДаний винахід описує в одному аспекті ФНП антитіла, які складаються принаймні з однієї молекули ізольованих нуклеїнових кислот, що специфічної їхньої послідовності, домена, частини складають шляхом сполучення або гібридизування або варіанта. Даний винахід окрім того описує полінуклеотіди, котрі кодують принаймні одне рекомбінантні вектори, що містять вищезгадані анти-ФНП анти-ідіотипне антитіло, які складаються молекули нуклеїнових кислот анти-ФНП антитіл, принаймні з однієї специфічної їхньої клітини господаря, що містять такі нуклеїнові послідовності, домена, частини або варіанта. кислоти та/або рекомбінантні вектори, а також Даний винахід окрім того описує рекомбінантні способи виробництва та/або використання таких вектори, що містять вищезгадані молекули нуклеїнових кислот антитіл, векторів та/або клітин нуклеїнових кислот анти-ідіотипного антитіла до господаря. ФНП, клітини господаря, що містять такі нуклеїнові Принаймні одне антитіло винаходу зв'язується кислоти та/або рекомбінантні вектори, а також з принаймні одним визначеним епітопом способи виробництва та/або використання таких специфічним до принаймні одного ФНП білка, нуклеїнових кислот антитіл, векторів та/або клітин субодиниці, фрагмента, частини або будь-якої господаря. їхньої комбінації. Принаймні один епітоп може Даний винахід також описує принаймні один містити принаймні один регіон , що зв'язує спосіб експресії принаймні одного анти-ФНП антитіло, котрий складається з принаймні однієї антитіла або анти-ідіотопного антитіла до ФНП в частини вищезгаданого білка, епітоп якого клітині господаря, що складається з культивування переважно складається з принаймні 1-5 клітин господаря, як описано тут, за умов коли амінокислот принамні однієї такої частини, такої принаймні одне анти-ФНП антитіло виділяється у як, але не обмежуючись, принаймні один кількостях, що можна визначити та/або відновити. функціональний, позаклітинний, розчинний, Даний винахід також описує принаймні одну гідрофільний, зовнішній або цитоплазматичний композицію, що складається з (а) нуклеїнових домен вищезгаданого білка або будь-якої їхня кислот, що кодують ізольоване анти-ФНП антитіло, частина. та/або антитіла, що описується тут; та (b) Принаймні одне антитіло може додатково належного носія або розчинника. Носій або складатися з принаймні однієї певної частини розчинник може додатково бути фармацевтично принаймні одного допоміжного визначального прийнятним згідно з відомими носіями або регіону (ДВР) (напр., ДВР1, ДВР2 або ДВРЗ важкорозчинниками. Композиція може окрім того або легколанцюгового варіабельного регіону) складатися з принаймні одного додаткового та/або принаймні одного постійного або компонента, білка або суміші. варіабельного каркасного регіону або будь-якої Даний винахід окрім того описує принаймні їхньої частини. Принаймні одна амінокислотна методику або склад одного анти-ФНП антитіла для послідовність антитіла може окрім того містити введення терапевтично ефективної кількості для додатково принаймні одну певну заміну, вставку модуляції або лікування принаймні одного стану, або вилучення, як це описано тут або як це відомо залежного принаймні від ФНП, у клітинах, в даній галузі. тканинах, органах, тваринах або пацієнтах та/або Даний винахід також описує принаймні одне до, після або під час відповідного стану, як це ізольоване анти-ФНП антитіло, як це описано, де відомо в даній галузі та/або описано тут. антитіло має принаймні одну дію, таку як, але не Даний винахід також описує принаймні одну обмежуючись, пригнічення ФНП-індукованої композицію, пристрій та/або спосіб доставки молекул клітинної адгезії, пригнічення зв'язування терапевтично або профілактично ефективної ФНП з рецептором, покращення артритичного кількості принаймні одного анти-ФНП антитіла, балу у мишинній моделі (див., напр., Приклади 3згідно з даним винаходом. 7). Анти-ФНП антитіло може таким чином бути Даний винахід окрім того описує спосіб або перевірене на відповідну дію згідно з відомими склад принаймні одного анти-ФНП антитіла для методиками такими як, але не обмежуючись, діагностики принаймні одного стану в клітині, принаймні одна біологічна дія щодо білка ФНП. тканині, органі, тварині або пацієнтів, залежного Даний винахід окрім того описує принаймні від ФНП, та/або до, після або під час залежного одне ФНП анти-ідіотипне антитіло до принаймні стану, що відомі в даній галузі та/або описується одного ФНП антитіла даного винаходу. Антитут. ідіотипне антитіло включає будь-які білки або Даний винахід окрім того описує принаймні пептид-вміщуючі молекули, що складаються з одну композицію, пристрій та/або спосіб введення принаймні частини імунноглобулінової молекули, для діагностики принаймні одного анти-ФНП такої як, але не обмежуючись, принамні один антитіла, згідно з даним винаходом. допоміжний визначальний регіон (ДВР) важкого Опис креслень або легкого ланцюга або їхньої ліганд-зв'язуючої На Фіг.1 показано графічне зображення, де частини, важколанцюгового або легколанцюгового продемонстровано аналіз здатності мАт ФНП у варіабельного регіону, важколанцюгового або верхньому шарі центрифугата клітин гібридоми лепсоланцюгового постійного регіону, каркасного щодо пригнічення зв'язування ΦΗΠΥ з регіону або будь-якої їхньої частини, що можуть рекомбінантним рецептором до ФНП. Різноманітні бути включені до антитіла даного винаходу. кількості верхнього шару центрифугату клітин 9 81743 10 гібридоми, що містять відомі кількості мАт TNV На Фіг.4 показано виведені амінокислотні були преінкубовані з фіксованими концентраціями послідовності важколанцюгових варіабельних 125 (5нг/мл) І-міченого ФНПУ. Суміш було регіонів мАт до TNV. Показані амінокислотні перенесено до 96-лункових пластин Optiplates, які послідовності (однобуквенні скорочення) були були попередньо покриті p55-sf2, рекомбінантний виведені з послідовності ДНК, що визначена як з рецептор до ФНП/зливний протеїн IgG. Кількість неклонованих продуктів PCR, так і клонованих ФНПУ, що зв'язується з рецептором р55 за продуктів PCR. Показані амінокислотні присутності мАт, визначалася після відмивання послідовності розділені на домени секреторної незв'язаного матеріала та підрахунку з сигнальної послідовності (сигнал), каркасного (К) використанням гамма-лічильника. Хоча в цих та допоміжного визначального регіону (ДВР). експериментах було перевірено вісім зразків мАт Амінокислотна послідовність для бактеріального до TNV, для спрощення три мАт, які як було гена DP-46 показана зверху лінії для кожного показано за допомогою аналізу послідовності ДНК, домена. Точки показують, що амінокислоти мАт до є ідентичними до одного з інших мАт до TNV (див. TNV є ідентичними для бактеріального гена. Розділ 5.2.2), не показані тут. Кожний зразок TNV148(B) указує, що показана послідовність досліджувався двічі. Представлені результати є належить як до TNV148, так і до TNV148B. "TNVs" відображенням двох незалежних експериментів. указує, що показана послідовність належить до На Фіг.2 показано послідовності ДНК всіх мАт до TNV, якщо тільки не показано іншу важколанцюгових варіабельних регіонів мАт до послідовність. Переривчаста лінія бактеріальної TNV. Бактеріальний ген показаний тут є геном DPпослідовності (ДВРЗ) вказує, що послідовності 46. "TNVs" вказує, що показана послідовність є невідомі або не існують у бактеріальному гені. послідовністю TNV14, TNV15, TNV148 та TNV196. На Фіг.5 показано виведені амінокислотні Перші три нуклеотиди послідовності TNV послідовності легколанцюгового варіабельного визначають ініціацію трансляції кодона Met. регіону мАт TNV. Показані амінокислотні Крапки на послідовності гена мАт до TNV послідовності (однобуквенні скорочення) були вказують, що нуклеотид є таким самим, як і в виведені з послідовності ДНК, що визначена як з бактеріальній послідовності. Перші 19 нуклеотидів неклонованих продуктів PCR, так і клонованих (підкреслено) послідовності TNV відповідають продуктів PCR. Показані амінокислотні олігонуклеотиду, що використовується для PCRпослідовності розділені на домени секреторної послиення варіабельного регіона. Амінокислотна сигнальної послідовності (сигнал), каркасного (К) трансляція (однобуквенні скорочення) та допоміжного визначального регіону (ДВР). розпочинається з материнського мАт, що показано Амінокислотна послідовність для бактеріального тільки для бактеріального гена. Три домени ДВР у гена DP-46 показана зверху лінії для кожного бактеріальній амінокислотній трансляції помічені домена. Точки показують, що амінокислоти мАт до жирним шрифтом та підкресленням. Лінії TNV є ідентичними для бактеріального гена. позначені TNV148(B) вказують, що показана TNV148(B) указує, що показана послідовність послідовність належить як до TNV148, так і до належить як до TNV148, так і до TNV148B. "All" TNV148B. Проміжки у послідовності бактеріальної означає, що показана послідовність належить до ДНК (ДВРЗ) є наслідком відсутності даних або TNV14, TNV15, TNV148, TNV148B та TNV186. відсутності наявності у бактеріальному гені. Важкі На Фіг.6 показано схематичні ілюстрації ланцюги мАт до TNV використовують плазмід експресії важких та легких ланцюгів, що об'єднувальний регіон 16. використовуються для виробництва rTNV148BНа Фіг.3 показано послідовності ДНК експресуючих клітин С466. р1783 є легколанцюгового варіабельного регіону мАт до важколанцюговою плазмідою, а р1776 TNV. Представлений бактеріальний ген є легколанцюговою плазмідою. Кодуючі домени репрезентативним представником родини Vg/38K варіабельного та постійного регіону rTNV148B людських каппа генів бактеріального показані у вигляді чорних квадратів. варіабельного регіона. Крапки на послідовності Імунноглобулінові полпшувачі в інтронах J-C гена мАт до TNV вказують, що нуклеотид є таким показані сірими квадратами. Показані значущі самим як і в бактеріальній послідовності. Перші 16 обмежувальні сайти. Плазміди показані у такій нуклеотидів (підкреслено) послідовності TNV орієнтації, що транскрипція генів Ат відбувається відповідають олігонуклеотиду, що за годинниковою стрілкою. Плазмїда р1783 є використовується для PCR-посилення довжиною 19,53 kb, а плазміда р1776 є довжиною варіабельного регіона. Амінокислотна трансляція 15,06 kb. Відомі повні нуклеотидні послідовності материнського мАт (однобуквенне скорочення) обох плазмід. Кодуюча послідовність показана тільки для бактеріального гена. Три варіабельного регіона р1783 може бути легко домени ДВР у бактеріальній амінокислотній замінена іншою послідовністю важколанцюгового трансляції помічені жирним шрифтом та варіабельного регіону за допомогою заміни підкресленням. Лінії позначені TNV148(B) обмежуючого фрагменту BsiWI/BstWI. Кодуюча вказують, що показана послідовність належить як послідовність варіабельного регіона у р1776 може до TNV148, так і до TNV148B. Проміжки у бути замінена іншою послідовністю варіабельного послідовності бактеріальної ДНК (ДВРЗ) є регіона за допомогою заміни обмежуючого наслідком відсутності даних або відсутності фрагменту Sall/Aflll. наявності у бактеріальному гені. Легкі ланцюги мАт На Фіг.7 показано графічне зображення до TNV використовують об'єднувальний регіон 13. аналізу кривих росту п'яти клітинних ліній, що продукують rTNV148B. Культури 11 81743 12 започатковувалися на день 0 за допомогою D-PBS-пролікованих тварин протягом висівання клітин у колби Т75 в середовище дослідження. Цей набір ваги був значним на тижні I5Q+MHX для створення густини життєздатних 3-7. Тварини проліковані 10мг/кг TNV148 також клітин 1,0Χ105клітин/мл у об'ємі 30мл. Клітинні досягли значного набору ваги на 7-му тижні культури, що використовувалися в цих дослідження. дослідженнях пербували у безперервній культурі з На Фіг.11А-С показано прогресування важкості моменту виконання трансфекції та субклонування. захворювання ґрунтуючись на артритичному У подальші дні, клітини з колб Τ були ретельно індексі, як представлено у Прикладі 4. ресуспендовані та було відібрано кількість Артритичний індекс (АІ) групи, де вводилося культури, що кратна 0,3мл. Дослідження кривих 10мг/кг сА2, був меншим, аніж у контрольній групі росту були припинені, коли кількість клітин D-PBS починаючи з тижня 3 та продовжував зменшилася менше 1,5Χ105клітин/мл. Кількість залишатися таким протягом решти часу живих клітин у зразку визначалася за допомогою дослідження (тиждень 7). Тварини проліковані виключення типаном синім, а решта зберігалася 1мг/кг TNV14 та тварини проліковані 1мг/кг сА2 не для пізнішого визначення концентрації мАт. Для показали значущого зменшення АІ після тижня 3 людського IgG було виконано аналіз ELISA у всіх при порівнянні з групою лікування D-PBS. Не було взірцях у одномоментно. значущих відмінностей між групами лікування На Фіг.8 показано графічне зображення 10мг/кг, при порівнянні один з одним у однакових порівняння швидкостей росту клітин за наявності дозах (10мг/кг сА2 у порівнянні з 10мг/кг різноманітних концентрацій МНХ селекції. Клітинні TNV14,148 та 196). Коли порівнювалися групи субклони С466А та С466В було розморожено у лікування 1мг/кг, в групі 1мг/кг TNV148 середовищі без МНХ (IMDM. 5% FBS, 2мМ спостерігалося значно менший АІ, ніж при 1мг/кг глютаміна) та культуровані протягом двох сА2 на тижнях 3, 4 та 7. У групі 1мг/кг TNV148 було додаткових днів. Обидві клітинні культури були також достовірно менший АІ, ніж у групі, що розподілені на три культури, що не містять МНХ, лікувалася 1мг/кг TNV14 на тижнях 3 і 4. Хоча або містять 0,2Х МНХ або 1Х МНХ. Через один TNV196 показав значне зменшення АІ аж до тижня день, у свіжі колби Т75 було посіяно культури з 6 дослідження (при порівнянні з групою лікування початковою густиною 1Χ105клітин/мл і клітини D-PBS), TNV148 було єдиним лікуванням у дозі підраховувалися з 24 годинним інтервалом 1мг/кг, що залишалося значущим при завершенні протягом одного тижня. Подвоєний час протягом дослідження. перших 5 діб підраховувався з використанням На Фіг.12 показано зміни ваги мишинної формули у SOP PD32.025 і це показано над моделі артрита миші Tg 197 у відповідь на антистовпчиками. ФНП антитіла даного винаходу при порівнянні з На Фіг.9 показано графічне відображення контролем у Прикладі 5. Приблизно на 4-му тижні стабільност іпродукції мАт протягом часу від двох життя досліджуванні миші Tg 197 були клітинних ліній, що продукують rTNV148B. Клітинні розподілені, базуючись на: статті та вазі тіла, в субклони, які перебували у безперервній культурі з одну з 8 груп лікування та їм вводився моменту виконання трансфекції та субклонування, інтраперитеонеальний болюс контрольної використовувалися для початку довготривалих речовини (D-PBS) або антитіла (TNV14, TNV148) у серійних культур у 24-лункових культуральних дозі 3мг/кг (тиждень 0). Ін'єкції було повторено у чашах. Клітини культирувалися у середовищі I5Q з всіх тварин на тижнях 1, 2, 3 та 4. Групи 1-6 та без МНХ селекції. Клітини були поступово оцінювалися щодо ефективності досліджуваного пересаджені за допомогою розділення культур препарату. Сивороткові взірці, отримані від тварин кожні 4-6 днів для підтримання нових у групах 7 та 8 оцінювалися щодо індукції імунної життєздатних культур, тоді як попереднім відповіді та фармакокінетичного кліренса TNV14 културам було дозволено послаблюватися. Взірці або TNV148 на тижнях 2, 3 та 4. поверхневого шару центрифугату послаблених Графіки на Фіг.13А-С відображають клітин були отримані відразу по послабленні прогресування тяжкості захворювання в Прикладі культур та збережені до моменту визначення 5 з артритичного індекса. Артритичний індекс концентрації мАт. Для людського IgG було групи, що лікувалася 10мг/кг сА2, був достовірно виконано аналіз ELISA у всіх взірцях у меншим, ніж у контрольній групі D-PBS, починаючи одномоментно. з тижня 2 та залишаючись таким протягом решти На Фіг.10 показані зміни ваги у мишинній періода дослідження (тиждень 5). Тварини, яким моделі артриту миші Tg 197 у відповідь на антивводилося 1мг/кг або 3мг/кг сА2, та тварини, яким ФНП антитіла даного винаходу у порівнянні з вводилося 3мг/кг TNV14 не досягли якого-небудь контролем у Прикладі 4. Приблизно на 4-му тижні значущого зменшення АІ у будь-який період часу життя досліджувані миші Tg197 були розподілені, протягом дослідження у порівнянні з контрольною залежно від статті та ваги тіла, в одну з 9 груп групою d-PBS. У тварин, яким вводилося 3мг/кг лікування та їм було введено за допомогою TNV148, спостерігалося значне зменшення у одноразового інтраперитонеального болюса порівнянні з групою, що лікувалася d-PBS, Dulbecco's PBS (D-PBS) або анти-ФНП антитіло починаючи з тижня 3 і триваючи до тижня 5. У даного винаходу (TNV14, TNV148 або TNV196) у тварин, яким вводилося 10мг/кг сА2, дозі 1мг/кг або 10мг/кг. Коли вага була спостерігалося значне зменшення АІ при проаналізована як зміна від моменту до введення порівнянні з меншими дозами (1мг/кг та 3мг/кг) сА2 дози, у тварин, яким було введено 10мг/кг сА2, на тижнях 4 і 5 дослідження і він також був спостерігали достовірно більший набір ваги, ніж у достовірно меншим, аніж у тих тварин, що 13 81743 14 лікувалися TNV14 на тижнях 3-5. Хоча між будьдещо більшим. Хоча (за винятком тижня 6) в групі якими групами лікування дозою 3мг/кг не лікування 1мг/кг сА2 не було достовірного спостерігалося достовірних відмінностей, АІ для підвищення при порівнянні з групою 10мг/кг сА2 та тварин, яким вводилося 3мг/кг TNV14, був групою лікування TNV148 були достовірно вищими достовірно вищим у деякі часові проміжки, ніж при на тижнях 7 та 8, не спостерігалося суттєвих 10мг/кг, тоді як у тварин, яким вводилося TNV148, відмінностей у АІ між групами 1мг/кг сА2, 1мг/кг не було суттєвих відмінностей від тварин, яким TNV148 та 1мг/кг TNV148B у будь-який часовий вводилося 10мг/кг сА2. проміжок дослідження. На Фіг.14 показано зміни ваги у мишиній Даний винахід описує ізольовані, моделі артриту мишей Tg 197 у відповідь на антирекомбінантні та/або синтетичні отримані у людей, ФНП антитіла даного винаходу у порівнянні з приматів, гризунів, ссавців химеричні, гуманізовані контролем у Прикладі 6. Приблизно на 4-му тижні та/або ДВР-трансплантовані анти-ФНП антитіла та життя досліджуванні миші Tg 197 були їхні ФНП анти-ідіотипні антитіла, а також розподілені, базуючись на статті та вазі тіла, в препарати та молекули кодуючих нуклеїнових одну з 6 груп лікування та їм вводився кислот, що складаються з принаймні одного інтраперитеонеальний болюс антитіла (сА2 або полінуклеотида, який кодує принаймні одне антиTNV148) в дозах 3мг/кг або 5мг/кг. В цьому ФНП антитіло або анти-ідіотипне антитіло. Даний дослідженні використовувалися D-PBS та 10мг/кг винахід окрім того включає, але не обмежується, сА2 у контрольних групах. способи виробництва та використання таких На Фіг.15 відображено прогресування важкості нуклеїнових кислот та антитіл і анти-ідіотипних захворювання, ґрунтуючись на артритичному антитіл, включаючи діагностичні та терапевтичні індексі, як це представлено у Прикладі 6. У всіх композиції, способи та пристрої. групах лікування спостерігався певний рівень Терміни "анти-фактор некрозу пухлини альфа захисту у ранні строки при застосуванні 5мг/кг сА2 антитіло", "анти-ФНП антитіло"^"частина анти-ФНП та 5мг/кг TNV148, що було продемонстровано антитіла" або "фрагмент анти-ФНП антитіла" достовірним зменшенням АІ на тижнях 1-3 та та/або "варіант анти-ФНП антитіла" тощо, які тут достовірним зменшенням на тижні 2 у всіх групах використовуються, включають будь-який протеїн лікування. Пізніше у дослідженні у тварин, які чи пептид, що містять молекулу, яка складається з вводили 5мг/кг сА2, спостерігався певний рівень принаймні частини імунноглобулінової молекули, захисту, з достовірним зменшенням на тижнях 4, 6 такої як, але не обмежуючись, принаймні та 7. Низькі дози (3мг/кг) як сА2, так і TNV148, складається принаймні з частини показали достовірне зменшення на 6-му і у всіх імунноглобулінової молекули, таких як, але не групах лікування на 7-му тижні. У жодній з груп тільки, принаймні один допоміжний визначальний лікування не підтримувалося достовірне регіон (ДВР) важкого або легкого ланцюга або їх зменшення наприкінці дослідження (тиждень 8). ліганд-зв'язуючу частину, варіабельний регіон Не було достовірних відмінностей між будь-якими важкого ланцюга або легкого ланцюга, постійний групами лікування (за винятком контрольної групи регіон важкого ланцюга або легкого ланцюга, з введенням сольовоо розчину) у будь-який каркасний регіон або будь-яку їх частину, або часовий проміжок. принаймні одну частину рецептора ФНП або На Фіг.16 показано зміни ваги у мишиній зв'язуючого протеїна, які можуть бути включені в моделі артриту мишей Tg 197 у відповідь на антиантитіло даного винаходу. Такі антитіла можуть ФНП антитіла даного винаходу у порівнянні з також окрім того додатково впливати на контролем у Прикладі 7. Для порівняння специфічні ліганди, такі які, але не обмежуючись, ефективності одноразового інтраперитонеального де антитіла модулюють, зменшують, збільшують, введення TNV148 (отриманого з клітин гібридоми) антагонізують, агонізують, послаблюють, та rTNV148B (отриманого з трансфікованих блокують, пригнічують та/або взаємодіють клітин). Приблизно на 4-му тижні життя принаймні з однією дією чи зв'язуванням ФНП або досліджувані миші Tg197 були розподілені, з дією чи зв'язуванням рецептора ФНП, in vitro, in базуючись на статті та вазі тіла, в одну з 9 груп situ та/або in vivo. В якості необмежуючого лікування та їм вводився одноразовий болюс прикладу, відповідне анти-ФНП антитіло, певна Dulbecco's PBS (D-PBS) або антитіла (TNV148, частина або варіант даного винаходу можуть rTNV148B) у дозі 1мг/кг. зв'язувати принаймні один ФНП або його певну На Фіг.17 відображено прогресування важкості частину, варіант або домен. Відповідне анти-ФНП, захворювання базуючись на артритичному індексі, певна частина або варіант можуть також як це представлено у Прикладі 7. У групі лікування додатково впливати принаймні на одну дію або 10мг/кг сА2 артритичний індекс був меншим, ніж у функцію ФНП, такі як, але не обмежуючись, синтез контрольній групі D-PBS, починаючи з тижня 4 та РНК, ДНК або протеїнів, вивільнення ФНП, утримуючись протягом решти періоду дослідження передача інформації рецептором ФНП, (тиждень 8). В обох групах лікування TNV148 і розщеплення мембранного ФНП, дія ФНП, 1мг/кг сА2 було показано достовірне зменшення АІ продукція та/або синтез ФНП. Термін "антитіло" на тижні 4. Хоча попереднє дослідження (Р-099окрім того вживається щодо антитіл, їх фрагментів 017) продемонструвало, що TNV148 був дещо травлення, певних частин та варіантів, включаючи ефективнішим при зменшенні Артритичного міметики антитіл або складові частини антитіл, що Індексу після одноразового інтраперитонеального нагадують структуру та/або функцію антитіла або болюса 1мг/кг, це дослідження показало, що АІ в його певного фрагмента чи частини, включаючи обох групах лікування різними версіями TNV був одно-ланцюгові антитіла та їх фрагменти. 15 81743 16 Функціональні фрагменти включають антигенБіспецифічні, гетероспецифічні, зв'язуючі фрагменти, що зв'язують ФНП ссавців. гетерокон'югантні або однакові антитіла також Наприклад, фрагменти антитіл, що спроможні можуть використовуватися, якщо вони є зв'язуватись з ФНП або його частиною, моноклональними, переважно людськими або включаючи, але не обмежуючись, Fab (напр., при гуманізованими антитілами, що мають зв'язуючі папаїновому травленні), Fab' (напр., при характеристики для принаймні двох різних пепсиновому травленні та частковій редукції) і антигенів. В даному випадку, одна зі зв'язувальних F(ab')2 (напр., при пепсиновому травленні), facb особливостей стосується принаймні одного (напр., при плазміновому травленні), pFc' (напр., протеїна ФНП, а інша - будь-якого іншого при пепсиновому або плазміновому травленні), Fd антигена. Способи виробництва біспецифічних (напр., при пепсиновому травленні, частковій антитіл відомі в даній галузі. Традиційно, редукції та реагрегації), Fv або scFv (напр., рекомбінантна продукція біспецифічних антитіл методики молекулярної біології) фрагменти, ґрунтувалася на ко-експресії двох описуються винаходом (див. напр., Colligan, імунноглобулінових важколанцюговихImmunology, вище). легколанцюгових пар, де два важкі ланцюги мають Такі фрагменти можуть бути вироблені при різні особливості [Milstein and Cuello, Nature 305: ензиматичному розщепленні або за допомогою 537 (1983)]. Через випадковий розподіл рекомбінантних методик, що відомі в даній галузі імунноглобулінових важких і легких ланцюгів, ці та/або описуються тут. Антитіла також можуть гібирдоми (квадроми) продукували потенційну бути вироблені в різноманітних обмежених суміш 10 різних молекул антитіл, серед яких тільки формах, з використанням генів антитіл, у котрих одна мала правильну біспецифічну структуру. один або більше зупиняючих кодонів були Очищення правильної молекули, яке зазвичай вставлені до природнього зупиняючого локуса. проводиться за допомогою хроматографічних Наприклад, комбінація гена кодуючого частину етапів афіності, є досить складним, і рівень виходу важкого ланцюга F(ab')2 може бути розроблена з продукту низький. Такі процедури описані, [напр., в включенням ДНК послідовності, що кодує домен WO 93/08829, Патенти США №№6210668, СН1 та/або поворотний регіон важкого ланцюга. 6193967, 6106833, 6060285, 6037453, 6010902, Різноманітні частини антитіл можуть сполучатися 5989530, 5959084, 5959083, 5932448, 5833985, хімічно за допомогою традиційних методик або 5821333, 5807706, 5643759, 5601819, 5582996, можуть готуватися в якості прилеглого протеїна з 5496549, 4676980, WO 91/00360, WO 92/00373, ЕР використанням методик генетичної інженерії. 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991), Термін "людське антитіло", що Suresh et al., Methods in Enzymology 121: 210 використовується тут, відноситься до антитіла, в (1986)], кожний з них тут повністю включено у якому в значному ступені кожна частина протеїна посиланнях. (напр., ДВР, каркасний, CL, СH домени (напр., СH1, Анти-ФНП антитіла (також називаються ФНП СH2, СH3), поворот (VL, VH)) є переважно антитілами) використані в методиках та неімунногенними у людей, з тільки незначними препаратах даного винаходу можуть також змінами або варіаціями послідовності. Так само, додатково характеризуватися високою афіністю антитіла визначені як такі, що отримані від зв'язування з ФНП та додатково чи переважно приматів (мавпи, бабуїни, шимпанзе тощо), мати низьку токсичність. Зокрема, антитіло, гризунів (миші, щури, кролі, гвінейські свинки, певний фрагмент або варіант винаходу, де хом'ячки тощо) та від інших ссавців означають індивідуальні компоненти, такі як варіабельний антитіла, що специфічні для таких видів, підвидів, регіон, постійний регіон та каркас, індивідуально підродин, родин. Окрім того, химеричні антитіла та/або у поєднанні, додатково та переважно мають включають будь-яку комбінацію вищеописаного. низьку імунногеність, використовуються в даному Такі зміни або варіації додатково і переважно винаході. Антитіла, що можуть бути використані у зберігають або зменшують імунногенність щодо винаході додатково характеризуються їхньою немодифікованих антитіл у людей або інших видів. здатністю виліковувати пацієнтів на тривалий Отже, людські антитіла відрізняються від період з вимірюваним полегшенням симптоматики химеричних або гуманізованих антитіл. і низькою та/або прийнятною токсичністю. Низька Наголошується, що людські антитіла можуть або прийнятна імунногеність та/або висока продукуватися тваринами або прокаріотичними чи афіність, а також інші відповідні властивості, еукаріотичними клітинами, що спроможні можуть робити свій внесок у досягнення експресувати функціонально змінений ген терапевтичного результату. "Низька імунногеність" людського імунноглобулін (напр., важкий ланцюг тут визначається як зростаючі достовірні НАНА, та/або легкий ланцюг). Окрім того, коли людське НАСА або НАМА відповіді у менш, ніж 75%, або антитіло є одно-ланцюговим антитілом, воно може бажано менше, ніж 50% пацієнтів, що лікуються, включати зв'язуючий пептид, що не виявляється у та/або зростаючі низькі титри у лікованих пацієнтів нативних людських антитілах. Наприклад, Fv може (менше, ніж приблизно 300, бажано менше, ніж включати зв'язуючий пептид, такий як від 2 до приблизно 100, що вимірюється за допомогою приблизно 8 гліцинових або інших амінокислотних імуноферментного аналізу на подвійний антиген) залишків, який з'єднує варіабельний регіон ([Elliott et al, Lancet 344: 1125-1127 (1994)], цілком важкого ланцюга і варіабельний регіон легкого включено тут у посиланні). ланцюга. Такий зв'язуючий пептид вважається Використання людського походження. Ізольовані нуклеїнові кислоти даного винаходу можуть використовуватися для виробництва 17 81743 18 принаймні одного анти-ФНП антитіла або його кожне джерело повністю вказується тут у певних варіантів, які можуть використовуватися посиланнях. для вимірювання або впливу у клітинах, тканинах, Людські антитіла, що є специфічними для органах або тваринах (включаючи ссавців і людей) людських ФНП протеїнів або їхніх фрагментів, для діагностики, моніторування, модулювання, можуть реагувати з певними імунногеними лікування, полегшення, для допомоги у антигенами, такими як ізольований та/або ФНП попередженні виникнення або зменшення протеїн або його частина (включаючи синтетичні симптоматики принаймні одного стану, залежного молекули, такі як синтетичні пептиди). Інші від ФНП, обраного з, але не обмежуючись, специфічні або загальні антитіла ссавців також принаймні одного імунного порушення або можуть так само реагувати. Підготовка захворювання, серцево-судинного розладу або імунногених антигенів та виробництво захворювання, інфекційного, злоякісного та/або моноклональних антитіл може бути проведена з неврологічного розладу або захворювання. використанням будь-яких належних методик. Такий спосіб може включати введення В одному підході гібридома виробляється за ефективної кількості композиції або допомогою поєднання відповідної лінії фармацевтичного препарату, що включає безсмертних клітин (напр., лінія мієломних клітин принаймні одне анти-ФНП антитіло, в клітину, такихjik, але не тільки, Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, тканину, орган, тварину або пацієнта для потреб NS1, NS2, AE-1, L.5, >243, P3X63Ag8.653, Sp2 модуляції, лікування, полегшення, профілактики SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144, або зменшення симптоматики, впливів чи ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, механізмів. Ефективна кількість може включати RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMAIWA, NEURO приблизно від 0,001 до 500мг/кг на шприца (напр.,. 2A тощо, або гетеромієломи, їхні продукти болюс), багаторазова або постійне введення чи поєднання, або будь-які клітини або поєднальні досягнення сивороткової концентрації 0,01клітини, що від них походять, або будь-які відповідні клітинні лінії, як це відомо в даній галузі. 5000mг/мл на шприц, багаторазове або постійне [Див., напр., www.atcc.org, www.lifetech.com] тощо, введення, або будь-яке ефективний діапазон чи з клітинами, що продукують антитіла, такі як, але значення, як це зроблено і описано з не тільки, ізольовані або клоновані клітини використанням відомих способів, як це описано селезінки, клітини периферичної крові, лімфи, тут або відомо з відповідних джерел. мигдаликів або інші клітини, що містять імунні чи Цитування В-клітини, або інші клітини, що експресують Всі публікації або патенти, що цитуються тут, важкий або легкий ланцюг постійної або повністю включені тут у посилання наскільки вони варіабельної або каркасної або ДВР послідовності, відображають стан проблеми на час або такі як ендогенні чи гетерогенні нуклеїнові представлення винаходу та/або надають опис та кислоти, або такі як рекомбінантні чи ендогенні, уможливлюють даний винахід. Публікації вірусні, бактеріальні, водоростеві, прокаріотичні, стосуються будь-яких наукових або патентних амфібіальні, комашині, рептилієві, рибні, отримані публікацій або будь-якої іншої доступної від ссавців, гризунів, кінські, овечі, козлині, інформації у будь-якому медіа-форматі, баранячі, приматові, еукаріотичні, геномні ДНК, включаючи всі записані, електронні чи друковані цДНК, рДНК, мітохондріальні ДНК або РНК, формати. Наступні посилання є цілком хлоропластна ДНК або РНК, hnPHK, мРНК, тРНК, включеними тут у посиланнях: [Ausubel, et al., ed., одинарного, подвійного або потрійного скручення, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & гібридизовані тощо або будь-яка їхня комбінація. Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al., [Див., напр., Ausubel, вище, та Colligan, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2 nd Edition, Immunology, вище, розділ 2], повністю включено Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, тут у посиланнях. antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Клітини, що продукують антитіла, можуть NY (1989); Colligan, et al., eds., Current Protocols in також бути отримані з периферичної крові або, Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994бажано, з селезінки чи лімфатичних вузлів, людей 2001); Colligan et al., Current Protocols in Protein або інших відповідних тварин, що були Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001)]. імуннізовані зацікавленими антигенами. Будь-які Антитіла даного винаходу інші відповідні клітини господаря також можуть Принаймні одне анти-ФНП антитіло даного використовуватися для експресії гетерологічних винаходу може бути додатково вироблене за або ендогенних нуклеїнових кислот, що кодують допомогою клітинної лінії, змішаної клітинної лінії, антитіла, певні їхні фрагменти або частини даного безсмертних клітин або клональної популяції винаходу. Зливні клітини (гібридоми) або безсмертних клітин, як це відомо науці. [Див., рекомбінантні клітини можуть бути ізольовані з напр., Ausubel, et al., ed., Current Protocols in використанням певних станів культури або інших Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY відповідних відомих способів та клонуватися при (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A обмеженому розведенні або сортуванні клітин, або Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor, іншими відомими способами. Клітини, які NY (1989); Harlow and Lane, antibodies, a продукують антитіла с бажаною специфічністю Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); можуть бути відібрані при відповідному аналізі Colligan, et al., eds., Current Protocols in (напр., ELISA). Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994Можуть використовуватися інші відповідні 2001); Colligan et al., Current Protocols in Protein способи продукування або ізоляції антитіл Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001)], 19 81743 20 необхідної специфічності, включаючи, але не доменів відомої людської послідовності. Відомі обмежуючись, способами, що відбирають послідовності Ig людини описано, [напр., рекомбінантні антитіла з пептидної або www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi; протеїнової бібліотеки (напр., але не www.atcc.org/phage/hdb.html, www.sciquest.com/; обмежуючись, бібліотеки бактеріофагів, рибосом, www.abcam.com/; олігонуклеотидів, РНК, цДНК тощо; напр., доступні www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; у Cambridge antibody Technologies, Cambridgeshire, www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html; UK; MorphoSys, Martinsreid/Planegg, DE; Biovation, www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html; Aberdeen, Scotland, UK; Biolnvent, Lund, Sweden; www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm; Dyax Corp., Enzon, Afrymax/Biosite; Xoma, Berkeley, www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.h CA; Ixsys. [Див., напр., ЕР 368,684, tml; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab; PCT/GB91/01134; PCT/GB92/01755; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html; PCT/GB92/002240; PCT/GB92/00883; www.antibodyresourse.com/; PCT/GB93/00605; US 08/350260(5/12/94); mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html; PCT/GB94/01422; PCT/GB94/02662; www.immunologylink.com/; PCT/GB97/01835; (CAT/MRC); WO 90/14443; WO pathbox.wustl.edu/~hcenter/index.html; 90/14424; WO 90/14430; PCT/US94/1234; WO www.biotech.ufl.edu/~hcl/; 92/18619], WO 96/07754; (Scripps); EP 614 989 www.pebio.com/pa/340913/340913.html; (MorphoSys); WO 95/16027 (Biolnvent); WO www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/; 88/06630; WO 90/3809 (Dyax); US 4,704,692 www.m.ehime-u.ac.jp/~yasuhito/Elisa.html; (Enzon); PCT/US91/02989 (Afrymax); WO 89/06283; www.biodesign.com/table.asp; EP 371 998; EP 550 400; (Хота); ЕР 229 046; www.icnet.uk/axp/facs/davies/links.html; PCT/US91/07149 (Ixsys)]; або стохастично www.biotech.ufl.edu/~fccl/protocol.html; www.isacзгенеровані пептиди чи протеїни - [US 5723323, net.org/sites_geo.html; aximtl.imt.uni5763192, 5814476, 5817483, 584514, 5976862, WO marburg.de/~rek/AEPStart.html; 86/05803, ЕР 590 689] (Ixsys, тепер Applied baserv.uci.kun.nl/~jraats/linksl.html; www.recab.uniMolecular Evolution (ΑΜΕ), кожний повністю hd.de/immuno.bme.nwu.edu/; www.mrcвключений тут в якості посилання) або, що cpe.carn.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.html; залежать від імуннізації трансгенних тварин (напр., www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; миші SCID, [Nguyen et al., Microbiol. Immunol. 41: imgt.cnusc.fr:8104/; 901-907 (1997); Sandhu et al., Crit. Rev. Biotechnol. www.biochem.ucl.ac.uk/~martin/abs/index.html; 16: 95-118 (1996); Eren et al., Immunol. 93: 154-161 antibody.bath.ac.uk/; (1998)], кожна повністю включена тут у abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html; посиланнях, а також у відповідних патентах і www.unizh.ch/~honegger/AHOseminar/Slide01.html; застосуваннях), що спроможні продукувати www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s/; асортимент людських антитіл, як це відомо науці www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg.htm; та/або описано тут. Такі методики включають, але www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.ht не обмежуються, виявлення рибосом [Hanes et al., ml; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stataim.html; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 4937-4942 (May www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; 1997); Hanes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: www.cryst.bioc.cam.ac.uk/~frnolina/Web14130-14135 (Nov. 1998)]; методики однієї клітини, pages/Pept/spottech.html; що продукує антитіла (напр., метод антитіл www.jerini.de/fr_products.htm; відібраних лімфоцитів ("SLAM") [патент США www.patents.ibm.com/ibm.html.Kabat et al., №5,627,052, Wen et al., J. Immunol. 17: 887-892 Sequences of Proteins of Immunological Interest, (1987); Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: U.S. Dept. Health (1983)], все повністю включено 7843-7848 (1996)]); гелева мікрокраплинна і тут у посиланнях. потокова цитометрія [Powell et al., Biotechnol. 8: Такі імпортовані послідовності можуть 333-337 (1990); One Cell Systems, Cambridge, MA; використовуватися для зменшення імунногеності Gray et al., J. Imm. Meth. 182: 155-163 (1995); або зменшення, покращення чи модифікування Kenny et al., Bio/Technol. 13: 787-790 (1995)]; вибір зв'язування, афіності, швидкості зв'язування, В-клітин [Steenbakkers et al., Molec. Biol. Reports швидкості звільнення, специфічності, часу 19: 125-134 (1994); Jonak et al., Progress Biotech, напівжиття або будь-яких інших відповідних Vol.5, In Vitro Immunization in Hybridoma характеристик, що відомі науці. Загалом частина Technology, Borrebaeck, ed., Elsevier Science або всі нелюдські чи людські ДВР послідовності Publishers B.V., Amsterdam, Netherlands (1988)]. зберігаються, тоді як нелюдські послідовності Методи інженирингу та гуманізації нелюдських варіабельних та постійних регіонів заміняються та людських антитіл також можуть людськими або іншими амінокислотами. Антитіла використовуватися і вони є добре відомими науці. також можуть бути додатково гуманізовані зі Загалом, гуманізовані або модифіковані антитіла збереженням високой афіності до антигенів та мають один або більше амінокислотний залишок, інших сприятливих біологічних властивостей. Для що походить з джерела, яке є нелюдським, напр., досягнення цієї мети, гуманізовані антитіла можуть але не обмежуючись, від мишей, щурів, кролів, додатково приготовлені за допомогою процесу приматів або інших ссавців. Ці людські аналізу батьківської послідовності та амінокислотні залишки часто називаються як різноманітних концептуальних гуманізованих "імпортовані" залишки, які зазвичай отримуються з продуктів з використанням тривимірних моделей "імпортованих" варіабельних, постійних або інших батьківських та гуманізованих послідовностей. 21 81743 22 Тривимірні імунноглобулінові моделі є (1997), Taylor et al, Nucleinic Acids Research 20(23): широкодоступними і добре знайомі тим, хто 6287-6295 (1992), Tuaillon et al, Proc Natl Acad Sci володіє цією проблемою. Доступні комп'ютерні USA 90(8) 3720-3724 (1993), Lonberg et al, Int Rev програми, які ілюструють і демонструють можливі Immunol 13(1): 65-93 (1995) та Fishwald et al, Nat тривимірні конформаційні структури обраних Biotechnol 14(7): 845-851 (1996)], кожен з яких можливих імуноглобулінових послідовностей. повністю включений тут у посиланнях). Загалом, ці Вивчення цих зображень дозволяє аналізувати миші мають принаймні один трансген, що містить ймовірну роль залишків у функціонуванні ДНК від принаймні одного людського можливих імуноглобулінових послідовностей, імунноглобулінового локуса, що функціонально тобто, проводити аналіз залишків, що впливають переналаштований або який може проходити на здатність можливих імуноглобулінів функціональне переналаштування. Ендогенні зв'язуватися з їхніми антигенами. За такого імунноглобулінові локуси у таких мишей можуть методу, можуть бути відібрані FR залишки і бути порушені або видалені для того, щоб скомбіновані з узгодженими та імпортованими прибрати здатність тварин продукувати антитіла, послідовностями, таким чином, щоб досягти що кодуються ендогенними генами. бажаних характеристик антитіла, таких як Скринінг антитіл для специфічного зв'язування підвищена афіність до цільового антигена(ів). з однаковими протеїнами або фрагментами Загалом, ДВР залишки є безпосередньої найбільш можуть бути переконливо виконаним з істотньо залученими до впливу на антигенне використанням бібліотек зображень пептидів. Цей зв'язування. Гуманізація або інжинеринг антитіл метод включає перегляд великих колекцій даного винаходу може бути виконана з пептидів з метою виявленнялих, що мають бажану використанням будь-якого відомого методу, таких функцію або структуру. Скринінг антитіл в як, але не тільки, що описані у [Winter (Jones et al, бібліотеках зображень пептидів добре відомий Nature 321:522 (1986); Riechmann et al., Nature науці. Зображені пептидін послідовності можуть 332:323 (1988); Verhoyen et al., Science 239:1534 бути завдовжки від 3 до 5000 або більше (1988)), Simset al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); амінокислот, часто завдовжки 5-100 амінокислот, і Chotnia and Lesk, J. Моl. Biol. 196:901 (1987), Carter досить часто від приблизно 8 до 25 амінокислот et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89: 4285 (1992); завдовжки. До того ж було описано методи Presta et al., JJmmunol. 151: 2623 (1993), патент безпосереднього хімічного синтезу для створення США №№:5723323, 5976862, 5824514, 5817483, бібліотек пептидів, декілька методів 5814476, 5763192, 5723323, 5,766886, 5714352, рекомбінантної ДНК. Один з них включає 6204023, 6180370, 5693762, 5530101, 5585089, зображення пептидної послідовності на поверхні 5225539, 4816567, PCT/; US98/16280, US96/18978, бактеріофага або клітини. Кожний бактеріофаг або US91/09630, US91/05939, US94/01234, клітина містять нуклеотидну послідовність, що GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; WO кодує окрему зображену пептидну послідовність. 90/14443, WO 90/14424, WO 90/14430, ЕР 229246], Такі методи описані [в патентних публікаціях РСТ всі включені тут у посиланнях, включаючи цитовані №№91/17271, 91/18980, 91/19818 та 93/08278]. там посилання. Інші системи для генерації бібліотек пептидів Анти-ФНП антитіло також може бути мають властивості як хімічного синтезу, так і згенеровано за допомогою імунізації трансгенних рекомбінантних методик. [Див., патентні публікації тварин (напр., мишей, щурів, хом'ячків, РСТ №№92/05258, 92/14843 та 96/19256. Див. нелюдських приматів тощо) спроможних також, патенти США №№5,658,754; та 5,643,768]. продукувати набір людських антитіл, як це Бібліотеки пептидних зображень, вектори та описано тут та/або відомо науці. Клітини, що скринінгові набори є комерційно доступними від продукують людські анти-ФНП атитіла можуть бути таких постачальників, як Invitrogen (Carlsbad, CA) ізольовані з таких тварин і приведені до стану та Cambridge antibody Technologies безсмертя з використанням відповідних методів, (Cambridgeshire, UK). [Див., напр., патенти США такі як описані тут методи. №№4704692, 4939666, 4946778, 5260203, Трансгенні миші, що можуть виробляти набір 5455030, 5518889, 5534621, 5656730, 5763733, людських антитіл, які зв'язуються з людськими 5767260, 5856456, що належать Enzon; 5223409, антигенами, можуть продукуватися за допомогою 5403484, 5571698, 5837500, що належать Dyax, відомих методів (напр, але не обмежуючись, 5427908, 5580717, що належать Afrymax; 5885793, [патенти США №№:5,770,428, 5,569,825, що належать Cambridge antibody Technologies; 5,545,806, 5,625,126, 5,625,825, 5,633,425, 5750373, що належать Genentech, 5618920, 5,661,016 та 5,789,650 опубліковані Lonberg et al; 5595898, 5576195, 5698435, 5693493, 5698417, що Jakobovits et al. WO 98/50433, Jakobovits et al. WO належать Xoma, Colligan, вище; Ausubel, вище; 98/24893, Lonberg et al. WO 98/24884, Lonberg et або Sambrook], вище, кожен з патентів та al. WO 97/13852, Lonberg et al. WO 94/25585, публікацій повністю включені тут у посиланнях. Kucherlapate et al. WO 96/34096, Kucherlapate et al. Антитіла даного винаходу можуть також бути EP 0463 151 Bl, Kucherlapate et al. EP 0710 719 Al, виготовлені з використанням нуклеїнових кислот, Surani et al. Патент США №5,545,807, Bruggemann що кодують принаймні одне анти-подвійне et al. EP 0438 474 Bl, Lonberg et al. EP 0814 259 A2, антитіло, у трансгенних тварин або ссавців, таких Lonberg et al. GB 2 272 440 A, Lonberg et al. Nature як кози, корови, коні, вівці тощо, що продукують 368: 856-859 (1994), Taylor et al, Immunol. 6(4) 579такі антитіла в їхньому молоці. Такі тварини 591 (1994), Green et al, Nature Genetics 7: 13-21 можуть бути отримані з використанням відомих (1994), Mendez et al, Nature Genetics 15: 146-156 методик. Див., напр., але не обмежуючись, 23 81743 24 [патенти США №№5,827,690; 5,849,992; 4,873,316; (напр., KD, Ka, Kd) переважно виконується 5,849,992; 5,994,616; 5,565,362; 5,304,489] тощо, стандартизованим розведеннями антитіла та кожний з котрих повність включений тут у антигена і стандартизованим буфером, таким як посиланнях. описаний тут буфер. Антитіла даного винаходу можуть бути Молекули нуклеїнових кислот додатково вироблені з використанням нуклеїнових При використанні наданої тут інформації, такої кислот, що кодують принаймні одне анти-ФНП як кодуюча послідовність нуклеотидів з принаймні антитіло, у трансгенних рослинах та 70-100% прилеглими амінокислотами принаймні культурованих клітинах рослин (напр., але не одного з SEQ ID NOS:1,2,3,4,5,6,7,8, певних обмежуючись, тютюн і кукурудза), що продукують фрагментів, варіантів або їхніх консенсусних такі антитіла, певні частини або варіанти в послідовностей або депозитних векторів, що частинах рослин або їхніх культурованих клітинах. містять принаймні одну з цих послідовностей, В якості одного з прикладів, листки трансгенного молекула нуклеїнової кислоти даного винаходу, тютюна виробляють рекомбінантні протеїни що кодує принаймні одне анти-ФНП антитіло, успішно використовувалися для отримання може бути отримана при використанні описаних великих кількостей рекомбінантних протеїнів, тут методик або так, як це відомо в даній галузі. напр., при використанні індукованих промотерів. Молекули нуклеїнових кислот даного винаходу [Див., напр., Cramer et al., Curr. Top. Microbiol. можуть бути у формі РНК, такій як мРНК, hnPHK, Immunol. 240: 95-118 (1999)] і цитовані там тРНК або у будь-якій іншій формі, або у формі посилання. Також, трансгенна кукурудза ДНК, включаючи, але не обмежуючись, цДНК та використовувалася для вироблення протеїнів геномну ДНК, що отримані клонуванням або ссавців в комерційних кількостях продукції, з вироблені синтетично, або будь-які їхні комбінації. біологічними діями, що еквівалентні тим, що ДНК може бути три-ниткова, подвійно-ниткова або продукуються в інших рекомбінантних системах одно-ниткова або будь-які їхні комбінації. Будь-яка або очищені з природних джерел. [Див., напр., частина принаймні однієї нитки ДНК або РНК може Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464: 127-147 бути кодуючою ниткою, що також відома як (1999)] та цитовані там посилання. Антитіла також чутлива нитка, або може бути некодуючою ниткою, виготовлялися у великих кількостях з насіння що також називається античутливою ниткою. трансгенних рослин, включаючи фрагменти Ізольовані нуклеїновокислотні молекули антитіл, такі як одноланцюгові антитіла (scFv's), даного винаходу можуть включати включаючи насіння тютюна та клубні картоплі. нуклеїновокислотні молекули, що складаються з Отже, антитіла даного винаходу можуть також каркасу відкритого читання (КВЧ), додатково з продукуватися з використанням трансгенних одним або більше інтроном, напр., але не рослин, згідно з відомими методиками. [Див. обмежуючись, принаймні з однією певною також, напр., Fischer et al., Biotechnol. Appl. частиною ДВР, в якості ДВР1, ДВР2 та/або ДВР3 Biochem. 30: 99-108 (Oct., 1999), Ma et al., Trends принаймні одного важкого ланцюга (напр., SEQ ID Biotechnol. 13: 522-7 (1995); Ma et al., Plant Physiol. NOS:13) або легкого ланцюга (напр., SEQ ID 109: 341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. NOS:4-6); нуклеїновокислотні молекули, що Trans. 22: 940-944 (1994)]; і цитовані тут містять кодуючу послідовність для анти-ФНП поєднання. Див., також загалом експресію антитіл антитіла або варіабельного регіона (напр., SEQ ID рослинами, але не тільки. Кожне з вищенаведених NOS:7,8); і нуклеїновокислотні молекули, які посилань повністю включене тут у посиланнях. містять нуклеотидну послідовність, що істотно Антитіла винаходу можуть зв'язувати відрізняється від тих, що описані вище, але які, людський ФНП з широким спектром афіності (KD). внаслідок дегенерації генетичного коду, все ще При бажаному поєднанні принаймні одне людське кодують принаймні одне анти-ФНП антитіло, як це мАт даного винаходу може додатково зв'язувати описано тут та/або відомо в даній галузі. Звісно, людський ФНП з високою афіністю. Наприклад, генетичний код є добревідомим в даній галузі. людське мАт може зв'язувати людський ФНП з KD, Отже, для того, хто має достатні знання в даній що дорівнює або менше, ніж приблизно 10-7М, ділянці, буде рутинним отримати такі таким як, але не тільки, 0,1-9,9 (або будь-який дегенеративні нуклеїновокислотні варіанти, що кодують специфічні анти-ФНП антитіла даного спектр чи значення там) ´10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, винаходу. Див., напр., Ausubel, et al., вище, і такі 10-12, 10-13, або з будь-яким спектром або нуклеїновокислотні варіанти включені в даний значенням. винахід. Один з прикладів ізольованих Афіність антитіла або спорідненість антитіла нуклеїновокислотних молекул даного винаходу до антигену може бути визначена включає SEQ ID NOS:10,11,12,13,14,15, що експериментально з використанням будь-якого відповідають деяким прикладам відповідного методу. [Див., наприклад, Berzofsky, нуклеїновокислотного кодування, відповідно, НС et al., "Antibody-Antigen Interactions", в Fundamental ДВР1, НС ДВР2, НС ДВР3, LC ДВР1, LC ДВР2, LC Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New ДВР3, варіабельний регіон НС та варіабельний York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. регіон LC. Freeman and Company: New York, NY (1992)]; та В іншому аспекті, винахід описує ізольовані методи описані тут). Вимірювана афіність окремої нуклеїновокислотні молекули, що кодують антивзаємодії антитіло-антиген може змінюватися, ФНП антитіло, і які мають амінокислотну якщо вимірювання проводиться в різних умовах послідовність, що кодується нуклеїновою (напр., концентрація солі, рН). Отже, вимірювання афіності та інших антиген-зв'язуючих параметрів 25 кислотою, яка міститься в плазмідах, відкладені в якості визначених назв клонів 81743 26 ідентичності. Умови низької строгості дозволяють селективно гібридизувати послідовності, що мають приблизно 70% ідентичності послідовності, і можуть застосовуватися для визначення ортологічних або паралогічних послідовностей. Додатково, полінуклеотиди даного винаходу кодуватимуть принаймні частину антитіла, що Як тут вказується, нуклеїнові кислотні кодується полінуклеотидами, які описані тут. молекули даного винаходу, які містять Полінуклеотиди даного винаходу включають нуклеїновокислотне кодування анти-ФНП антитіла, послідовності нуклеїнових кислот, що можуть можуть включати, але не обмежуватись, ті, що застосовуватися для селективної гібридизації до самі по собі кодують амінокислотну послідовність полінуклеотидів кодуючих антитіло даного фрагменту антитіла; кодуючу послідовність для винаходу. Див., напр., Ausubel, вище; Colligan, всього антитіла або його частини; кодуючу вище, кожний повністю включений тут у послідовність для антитіла, фрагмента або посиланнях. частини, а також додаткові послідовності, такі як Конструкція нуклеїнових кислот кодуюча послідовність принаймні одного Ізольовані нуклеїнові кислоти даного винаходу сигнального лідера або зливного пептида, з або можуть бути вироблені з використанням (а) без вищезгаданих додаткових кодуючих рекомбінантних методів, (b) синтетичних методик, послідовностей, таких як принаймні один інтрон, (с) методик очищення або їхньої комбінації, що разом з додатковими, некодуючими добре відомі науці. послідовностями, включаючи, але не Нуклеїнові кислоти можуть включати обмежуючись, некодуючі 5' та 3' послідовності, такі послідовності на додаток до полінуклеотида як транскрибовані, нєрозширофані послідовності, даного винаходу. Наприклад, мульти-клонуючий що відіграють роль у транскрипції, обробці мРНК, сайт, що містить один або більше ендонуклеазний включаючи сигнали склеювання та поліаденіляції обмежувальний сайт, може бути вставлений в (наприклад -рибосомне зв'язування та стабілізація нуклеїнову кислоту для допомоги в ізоляції мРНК); додаткова кодуюча послідовність, що полінуклеотида. Також, трансльовані кодує додаткові амінокислоти, такі як ті, що послідовності можуть бути вставлені для допомоги забезпечують додаткові властивості. Отже, в ізоляції трансльованого полінуклеотида даного послідовність, кодуюча антитіло може бути винаходу. Наприклад, гекса-гістидинова маркерна поєднана з маркером послідовності, таким як послідовність надає зручний спосіб очищення послідовність, кодуюча пептид, що покращує протеїнів даного винаходу. Нуклеїнова кислота очищення зливного антитіла, яка містить фрагмент даного винаходу - за винятком кодуючої або частину антитіла. послідовності - додатково є вектором, адаптером Полінуклеотиди, що селективно гібридизовані або поєднувачем для клонування та/або експресії до полінуклеотида як це описано тут полінуклеотида даного винаходу. Даний винахід описує ізольовані нуклеїнові Додаткові послідовності можуть бути додані до кислоти, що гібридизовані за допомогою таких послідовностей клонування та/або експресії селективної гібридизації до полінуклеотидів, для оптимізації їхньої функції в клонуванні та/або описаних тут. Отже, полінуклеотиди даного експресії, для допомоги в ізоляції полінуклеотида впровадження можуть бути використані для або для покращення введення полінуклеотида в ізоляції, визначення та/або квантифікації клітину. Використання клонованих векторів, нуклеїнових кислот, що містять такі експресованих векторів та поєднувачів добре полінуклеотиди. Наприклад, полінуклеотиди відомо науці. (Див., напр., Ausubel, вище; або даного винаходу можуть бути використані для Sambrook, вище). ідентифікації, ізолювання або посилення Рекомбінантні методики конструювання часткових чи повномасштабних клонів у нуклеїнових кислот депонованій бібліотеці. В деяких впровадженнях, Склад ізольованих нуклеїнових кислот даного полінуклеотиди є геномними або цДНК винаходу, таких як РНК, цДНК, геномна ДНК або послідовностями ізольованими або якимось іншим будь-які їхні комбінації, можуть бути отримані з чином допоміжними щодо цДНК з бібліотеки біологічних джерел з використанням будь-якої нуклеїнових кислот людей або ссавців. кількості методик клонування відомих тим, хто є Бажано, щоб бібліотека цДНК містила фахівцем в цій галузі. В деяких впровадженнях, принаймні 80% послідовностей повної довжини, олігонуклеотидні зразки, що селективно краще принаймні 85% або 90% послідовностей гібридизуються, за строгих умов, до повної довжини, і ще краще - 95% послідовностей полінуклеотидів даного винаходу повної довжини. Бібліотеки цДНК можуть бути використовуються для ідентифікації бажаної нормалізовані для підвищення репрезентативності послідовності в цДНК та геномних бібліотеках, що рідкісних випадків. Низька або помірна строгість добре відомо тим, хто є фахівцем в цій галузі умов гібридизації типово, але не ексклюзивно, (Див., напр., Ausubel, вище; або Sambrook, вище). застосовується з послідовностями, що мають Методи скринінгу та ізоляції нуклеїнових знижену ідентичність послідовності відносно кислот допоміжних послідовностей. Умови помірної або Бібліотеки цДНК або геномні бібліотеки високої строгості можуть додатково можуть бути переглянуті з використанням зразків, застосовуватися для послідовностей більшої що грунтуються на послідовності полінуклеотида що 27 81743 28 даного винаходу, таких як описані тут. Зразки Press Inc., San Diego, CA (1990)]. Комерційно можуть використовуватися для гібридизації з доступні набори для геномного PCR посилення є послідовностями геномної ДНК або цДНК для відомими науці. Див., напр., Advantage-GC ізоляції гомологічних генів в тому ж чи різних Genomic PCR Kit (Clontech). Додатково, напр., організмах. Ті, хто є фахівцями в даній галузі, протеїн T4 гену 32 (Boehringer Mannheim) може усвідомлюють, що в аналізах можуть використовуватися для покращення виходу застосовуватися різноманітні ступені жорсткості продуктів довгої ПЛР. гібридизації. Якщо умови гібридизації стають Синтетичні методи конструювання нуклеїнових більш жорсткими, то мусить бути більший ступінь кислот доповнюваності між зразком та ціллю для Ізольовані нуклеїнові кислоти даного винаходу виникнення дуплексного утворення. Ступінь також можуть бути підготолвеними безпосереднім жорсткості може контролюватися одним або хімічним синтезом за допомогою відомих методів декільками факторами температури, іонної сили, (див., напр., Ausubel, et al., вище). Хімічний синтез рН та наявності частково денатуруючого загалом продукує одно-нитковий олігонуклеотид, розчинника, такого як формамід. Наприклад, який може бути конвертований в дво-ниткову ДНК жорсткість гібиридазації зручно змінювати за допомогою гібридизації з допоміжною змінюючи полярність розчину реактанта, послідовністю або за допомогою полімеризації з наприклад, за допомогою маніпулювання ДНК полімеразою з використанням однієї нитки в концентрацією формаміда у межах від 0% до 50%. якості шаблону. Ті, хто мають відповідну Ступінь доповнюваності (ідентичність кваліфікацію в цій галузі, розуміють, що в той час послідовності), що потрібна для визначеного як хімічний синтез ДНК може бути обмеженим до зв'язування, буде варіювати згідно з жорсткістю послідовностей з приблизно 100 або більше основ, гібридизаційних засобів та/або засобів відмивання. довші послідовності можуть бути отримані за Методи посилення РНК або ДНК добре відомі допомогою зв'язування коротших послідовностей. в науці і можуть використовуватися згідно з даним Касети рекомбінантної експресії винаходом без неналежного експериментування, Даний винахід у подальшому описує касети ґрунтуючись на керівництвах, що представлені тут. рекомбінантної експресії, що містять нуклеїнову Відомі методи посилення ДНК або РНК кислоту даного винаходу. Послідовність включають, але не обмежуються, полімеразну нуклеїнової кислоти даного винаходу, наприклад ланцюгову реакцію (PCR) та відповідні процеси цДНК або геномна послідовність, що кодує посилення [див., напр., патент США №№4,683,195, антитіло даного винаходу, може 4,683,202, 4,800,159, 4,965,188, що належать використовуватися для конструювання касети Mullis et ah; 4,795,699 та 4,921,794], що належать рекомбінантної експресії, що може Tabor, et al; 5,142,033, що належить Innis; впроваджуватися безпосередньо в принаймні одну 5,122,464, що належить Wilson, et al.; 5,091,310, бажану клітину господаря. Касета рекомбінантної що належить Innis; 5,066,584, що належить експресії зазвичай містить полінуклеотид даного Gyllensten, et al; 4,889,818, що належить Gelfand, винаходу, що реально зв'язаний з et al; 4,994,370, що належить Silver, et al; транскрипційними ініціюючими регуляторними 4,766,067, що належить Biswas; 4,656,136, що послідовностями, що спрямовують транскрипцію належить Ringold) та РНК-медійоване посилення, полінуклеотида в заплановану клітину господаря. що використовує анти-чутливу РНК для цільової Обидва гетерологічні та негетерологічні (тобто, послідовності, в якості шаблона для синтеза ендогенні) промотери можуть застосовуватися для подвійно-ланцюгової ДНК [патент США безпосередньої експресії нуклеїнових кислот №5,130,238], що належить Malek, et al, під даного винаходу. торговою назвою NASBA), повний зміст посилань В деяких впровадженнях, ізольовані нуклеїнові яких включений тут у посиланнях (Див., напр., кислоти, що слугують як промотери, покращувачі Ausubel, вище; або Sambrook, вище). або інші елементи можуть впроваджуватися у Наприклад, технологія полімеразної відповідну позицію (вище, нижче або в інтрон) ланцюгової реакції (ПЛР) може використовуватися негетерологічної форми полінуклеотида даного для посилення послідовності полінуклеотидів винаходу, для того щоб зменшувати або даного винаходу та залежних генів безпосередньо збільшувати експресію полінуклеотида даного з бібліотек геномної ДНК або цДНК. ПЛР та інші винаходу. Наприклад, ендогенні промотери методи посилення in vitro також можуть бути можуть бути змінені in vivo або in vitro за корисними, наприклад, для клонування допомогою мутації, видалення та/або заміни. послідовностей нуклеїнових кислот, що кодують Вектори та клітини господаря протеши, які будуть експресовані, для Даний винахід також стосується векторів, що виробництва нуклеїнових кислот для використання включають ізольовані нуклеїновокислотні в якості зразків для визначення наявності бажаних молекули даного винаходу, клітин господаря, що є мРНК у зразках, для послідовності нуклеїнових модифіковані з рекомбінантними векторами кислот або для інших цілей. Приклади методик, методами генетичної інженерії, та методи яких достатньо, щоб скерувати осіб, котрі мають продукції принаймні одного анти-ФНП антитіла за відповідні навички, у методиках посилення in vitro допомогою рекомбінантних методик, що відомі знаходяться у Berger, вище, [Sambrook, вище та науці. Див., напр., Sambrook, et al., вище; Ausubel, Ausubel, вище, а також Mullis, et al., патент США et al., вище, кожні з них внесена тут у посиланнях. №4,683,202 (1987); та Innis, et al., PCR Protocols A Полінуклеотиди можуть бути додатково Guide to Methods and Applications, Eds., Academic поєднаними з вектором, що містить відібраний 29 81743 30 маркер для проникнення в господаря. Загалом, Ті, хто мають належні навички в цій галузі, плазмідний вектор вводиться в преципітат, такий знають численні системи експресії, що доступні як кальцієвий фосфатний преципітат, або в для експресії нуклеїнової кислоти, яка кодує комплекс із зарядженим ліпідом. Якщо вектор є протеїн даного винаходу. вірусом, то він може бути спакованим in vitro з Альтернативно, нуклеїнові кислоти даного використанням відповідних ліній пакувальних винаходу можуть експресуватися в клітині клітин і потім можуть бути перетворені в клітини господаря за допомогою вмикання (маніпуляційно) господаря. і клітині господаря, що містить ендогенну ДНК, яка ДНК вставка має бути реально поєднана з кодує антитіло даного винаходу. Такі методи належним промотером. Конструкція експресії в добре відомі науці, напр., як це описано [в патенті подальшому міститиме обмежувальні сайти для США №№5,580,734, 5,641,670, 5,733,746 та ініціації транскрипції, припинення та, в 5,733,761], що повністю включені тут у вигляді транскрибованому регіоні, рибосом-зв'язуюче посилань. місце для трансляції. Кодуюча частина зрілих Ілюстрацією клітиних культур, що є корисними транскриптів експресується за допомогою для продукування антитіл, певних їхніх частин або конструкцій, що бажано має включати кодон, який варіантів, є клітини ссавців. Системи клітин ініціює трансляцію, на початку і припиняючий ссавців часто бувають в формі моношарових кодон (напр., UAA, UGA або UAG), який належно клітин, хоча суспензії або біореактори клітин розташований в кінці мРНК, яка має бути ссавців також можуть використовуватися. Наукою трансльована, при перевазі UAA та UAG для розроблено багато належних ліній клітин клітинної експресії у ссавців чи еукаріот. господаря спроможних експресувати інтактні Вектори експресії бажано, але не обов'язково, глікозильовані протеїни, і вони включають клітинні мають включати принаймні один обраний маркер. лінії COS-1 (напр., АТСС CRL 1650), COS-7 (напр., Такі маркери включають, напр., але не АТСС CRL-1651), НЕK293, ВНK21 (напр., АТСС обмежуються, метотрексат (МТХ), дигідрофолат CRL-10), СНО (напр., АТСС CRL 1610) та BSC-1 редуктазу [DHFR, патент США №№4,399,216; (напр., АТСС CRL-26), клітини Cos-7, клітини СНО, 4,634,665; 4,656,134; 4,956,288; 5,149,636; клітини hep G2, клітини P3X63Ag8.653, SP2/05,179,017], резистентність по ампіциліну, Ag14, 293, клітини HeLa тощо, які доступні від, неоміцину (G418), мікофеноловій кислоті або наприклад, American Type Culture Collection, глютамін синтетазі [GS, патент США Manassas, Va (www.atcc.org). Бажані клітини №№5,122,464; 5,770,359; 5,827,739] для господаря включають клітини лімфоїдного еукаріотичних клітинних культур та тетрациклінпоходження, такі як клітини мієломи і лімфоми. або ампіцилін-резистентні гени для культивування Зокрема бажаними клітинами господаря є клітини в Е.соlі та інших бактеріях або прокаріотах P3X63Ag8.653 (АТСС Accession Number CRL-1851) (вищенаведені патенти повністю включено тут у та клітини SP2/0-Ag14 (АТСС Accession Number посиланнях). Відповідні культурні середовища і CRL-1851). В окремих бажаних впровадженнях умови для вищеописаних клітин господаря відомі рекомбінантною клітинами є клітини P3X63Ag8.653 науці. Відповідні вектори є знайомими для або SP2/0-Ag14. кваліфікованих фахівців. Введення векторної Вектори експресії для цих клітин можуть конструкції у клітину господаря може бути включати одну або більше з наступних здійснено за допомогою трансфекції фосфатом послідовностей контролю експресії, таких як, але кальцію, DEAE-декстран-медійованою не обмежуючись походженням реплікації; трансфекцією, катіонною ліпідно-медійованною промоутер (напр., пізній або ранній промоутер трансфекцією, електропорацією, трансдукцією, SV40, промоутер CMV [патент США №№5,168,062; інфікуванням або іншими відомими методами. Такі 5,385,839], промоутер HSV tk, промоутер pgk методи описані в роботах, таких як [Sambrook, (фосфогліцерат кіназа), промоутер EF-1 альфа вище, розділи 1-4 та 16-18; Ausubel, вище, розділи [патент США №5,266,491], принаймні один 1, 9,13,15,16]. людський імінноглобуліновий промоутер; сайта Принаймні одне антитіло даного винаходу покращувача та/або інформаційної обробки, такі може бути експресоване у модифікованій формі, як рибосомо-зв'язуючі сайта, поліаденилаційні такій як зливний протеїн, і може включати не сайти (напр., додатковий сайт SV40 великого Τ Ag тільки сигнали секреції, але також додаткові полі А) та транскрипційні припиняючі гетерологічні функціональні регіони. Наприклад, послідовності. Див., напр., Ausubel et al., вище; регіон додаткових амінокислот, зокрема заряджені Sambrook, et al., вище. Інші клітини корисні для амінокислоти, може додаватися до N-закінчення продукування нуклеїнових кислот або протеїнів антитіла для покращення стабільності та даного винаходу відомі та/або доступні, персистенції в клітині господаря, під час очищення наприклад, від American Type Culture Collection або під час подальшого захоплення і зберігання. Catalogue of Cell Lines and Hybridomas Також, пептидні молекули можуть додаватися до (www.atcc.org) або інших відомих чи комерційних антитіла даного винаходу для поліпшення джерел. очищення. Такі регіони можуть прибиратися до Коли використовуються еукаріотичні клітини остаточного приготування антитіла або принаймні господаря, то поліаденліаційні або припиняючі одного його фрагмента. Такі методи описані у послідовності зазвичай включені до вектора. багатьох стандартних лабораторних кервництвах, Прикладом припиняючої послідовності є таких як [Sambrook, вище, розділи 17.29-17.42 та поліаденліаційна послідовність з гена коров'ячого 18.1-18.74; Ausubel, вище, розділи 16,17 та 18]. гормону роста. Послідовності для акуратного 31 81743 32 зклеювання транскриптів також можуть бути принаймні одного відповідного ФНП протеїна або включеними. Прикладом зклеєної послідовності є рецептора, як це описано тут та/або як це відомо в інтрон VP1 з SV40 [Sprague, et al., J.Virol. 45: 773даній галузі. Людське антитіло винаходу може 781 (1983)]. Додатково, генні послідовності для бути будь-якого класу (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD тощо) контролю реплікації в клітинах господаря можуть або ізотипу і може-містити каппа або ламбда легкі бути включеними до вектора, як це відомо в даній ланцюги. В одному впровадженні, людське галузі. антитіло містить важкий ланцюг або певний Очищення антитіла фрагмент IgG, наприклад, принаймні один ізотип Анти-ФНП антитіло може бути відновлене і IgGl, IgG2, IgG3 або IgG4. Антитіла цього типу очищене з культур рекомбінантних клітин можуть бути приготовлені за допомогою добревідомими методами включаючи, але не застосування трансгенних мишей або інших обмежуючись, очищення протеїном А, трансгенних нелюдських ссавців, що містять преципітація амонію сульфатом або етанолом, трансгени принаймні одного людського легкого кислотна екстракція, аніонна або катіонна обміна ланцюга (напр., IgG, IgA та IgM (напр., g1, g2, g3, хроматографія, фосфоцелюлозна хроматографія, g4), як це описано тут та/або як це відомо науці. В хроматорграфія гідрофобічної взаємодії, афінна іншому впровадженні, анти-людське ФНП людське хроматорграфія, гідроксилапатитна хроматографія антитіло містить важкий ланцюг IgGl та легкий та лектинова хроматографія. Високовиробницька ланцюг IgGl. рідинна хроматографія ("HPLC") також може Принаймні одне антитіло винаходу зв'язує використовуватися для очищення. [Див., напр., принаймні один певний епітоп специфічний до Colligan, Current Protocols in Immunology, або принаймні одного ФНП протеїна, субодиниці, Current Protocols in Protein Science, John Wiley & фрагмента, частини або будь-якої комбінації. Sons, NY, NY, (1997-2001), напр., розділи 1, 4, 6, 8, Принаймні один епітоп може містити принаймні 9, 10], кожний з яких включений тут у посиланнях. один антитіло-зв'язуючий регіон, що містить Антитіла даного винаходу включають природні принаймні одну частину вищезгаданого протеїну, очищенні продукти, продукти хімічного синтезу та епітоп котрого переважно складається з принаймні продукти, що вироблені за допомогою однієї позаклітинної, розчинної, гідрофільної, рекомбінантних методик, з еукаріотичних зовнішньої або цитоплазматичної частини господарів, включаючи, наприклад, клітини вищезгаданого протеїна. Принаймні один певний дріжджів, вищих рослин, комах та ссавців. епітоп може містити будь-яку комбінацію Залежно від використаного господаря в принаймні однієї амінокислотної послідовності з процедурах рекомбінантної продукції, антитіло принаймні 1-3 амінокислот до повної певної даного винаходу може бути глікозильоване або частини прилеглих амінокислот SEQ ID NOS:9,16 може бути неглікозильоване, надається перевага або 17. глікозильованому. Такі методи описані в багатьох Загалом, людське антитіло або антитілостандартних лабораторних керівництвах, таких як зв'язуючий фрагмент даного винаходу міститиме Sambrook, вище, розділи 17.37-17.42; Ausubel, антиген-зв'язуючий регіон, що має принаймні один вище, розділи 10,12, 13, 16,18 та 20, Colligan, людський допоміжний визначальний регіон (ДВР1, Protein Science, вище, розділи 12-14, всі вони ДВР2 та ДВР3) або варіант принаймні одного повністю включені тут у посиланнях. важко ланцюгового варіабельного регіона та Апти-ФНП антитіла принаймні один людський допоміжний Ізольовані антитіла даного винаходу визначальний регіон (ДВР1, ДВР2 та ДВР3) або складаються з описаних тут аміноксилотних варіант принаймні одного легколанцюгового послідовностей антитіла, що кодуються будь-яким варіабельного регіона. В якості одного з прикладів, відповідним полінуклеотидом, або будь-яке антитіло або антиген-зв'язуюча частина або ізольоване і приготовлене антитіло. Бажано, щоб варіант може містити принаймні один людське антитіло або антиген-зв'язуючий важколанцюговий ДВР3, що має амінокислотну фрагмент зв'язував людський ФНП та, таким послідовність SEQ ID NO:3 та/або чином частково або суттєво нейтралізував легколанцюговий ДВР3, що має амінокислотну принаймні одну біологічну дію протеїна. Антитіло послідовність SEQ ID NO:6. В окремому або певна його частина чи варіант, що частково і впровадженні, антитіло або антиген-зв'язуючий переважно істотно нейтралізує принаймні одну фрагмент можуть мати антиген-зв'язуючий регіон, біологічну дію принаймні одного ФНП протеїна або що містить принаймні частину принаймні одного фрагмента може зв'язувати протеїн або фрагмент важколанцюгового ДВР (тобто, ДВР1, ДВР2 та/або і таким чином пригнічувати дію, що медіюється ДВР3), що мають амінокислотну послідовність, яка через зв'язування ФНП з рецептором ФНП або відповідає ДВР 1, 2 та/або 3 (напр., SEQ ID NOS: через інші ФНП-залежні або медійовані механізми. 1, 2 та/або 3). В іншому окремому впровадженні, Термін "нейтралізуюче антитіло", що антитіло або антиген-зв'язуюча частина або використовується тут, відноситься до антитіла, яке варіант можуть мати антиген-зв'язуючий регіон, може пригнічувати ФНП-залежну активність на що містить принаймні частину принаймні одного приблизно 10-120%, бажано на принаймні легколанцюгового ДВР (тобто, ДВР1, ДВР2 та/або приблизно 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, ДВР3), який має амінокислотну послідовність, що 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% або відповідає ДВР 1, 2 та/або 3 (напр., SEQ ID NOS: більше залежно від аналізу. Спроможність анти4, 5 та/або 6). У виділеному впровадженні три ФНП антитіл пригнічувати ФНП-залежну активність важкоголанцюгових ДВР та три легколанцюгових переважно оцінюється за допомогою аналізу ДВР антитіла або антиген-зв'язуючого фрагмента 33 81743 34 мають амінокислотну послідовність відповідних включають заміну однієї амінокислоти іншою в ДВР принаймні одного з Мат Gen095, Gen0101, таких групах: лізин (K), аргінин (R) та гістидин (Н); CNTO95, С372А, як це описано тут. Такі антитіла аспартат (D) і глютамат (Е); аспаригін (N), можуть бути виготовлені за допомогою хімічного глютамін (Q), серии (S), треонін (Т), тирозин (Y), K, з'єднання з різноманітними частинами (напр., ДВР, R, Н, D та Е; аланін (А), валін (V), лейцин (L), каркас) антитіла з використанням традиційних ізолейцин (І), пролін (Р), фенілаланин (F), методик, за допомогою приготування і триптофан (W), метіонин (М), цистеїн (С) та гліцин експресування (тобто, однієї або більше) (G); F, W та Y; C, S та Т. нуклеїновокислотної молекули, що кодує антитіло Коди амінокислот з використанням традиційних методик технології Амінокислоти, що складають анти-ФНП рекомбінантної ДНК або за допомогою антитіла даного винаходу, часто скорочуються у використання будь-яких інших належних методів. вигляді абревіатури. Амінокислотні позначення Анти-ФНП антитіло може містити принаймні можуть бути сформовані з позначень амінокислот один важко- або легколанцюговий варіабельний у вигляді однобуквенного коду, їх трибуквеного регіон, що має визначену амінокислотну коду, імені або тринуклеотидного кодону, так як це послідовність. Наприклад, у виділенному часто робиться в наукових роботах [див. Alberts, впровадженні, анти-ФНП антитіло містить В., et al., Molecular Biology of The Cell, Third Ed., принаймні один з принаймні одного Garland Publishing, Inc., New York, 1994]: важколанцюгового варіабельного регіону, що додатково може мати амінокислотну послідовність SEQ ID №7 та/або принаймні один легколанцюговий варіабельний регіон, що може додатково мати амінокислотну послідовність SEQ ID №8. Антитіла, що зв'язують людський ФНП та, що містять певний важко- або легколанцюговий варіабельний регіон, можуть бути приготовлені з використанням належних методів, таких як бактеріофагова проява [Katsube, Y., et al., Int J Моl Med, 1(5): 863-868 (1998)] або методів, що використовують трансгенниз тварин, які відомі в науці та/або описані тут. Наприклад, трансгенні миші, що містять функціонально переналаштований людський імунноглобуліновий важколанцюговий трансген та трансген, який містить ДНК з людського імунноглобулінового легколанцюгового локуса, що може проходити Анти-ФНП антитіло даного винаходу можу функціональне переналаштування, можуть бути включати одну або більше амінокислотну заміну, імуннізовані людським ФНП або його фрагментом видалення або додавання, або внаслідок для запуска продукції антитіл. При бажанні, природної мутації або людських маніпуляцій, як це клітини продукуючі антитіла можуть бути визначено тут. ізольовані та можуть бути приготовлені гібридоми Звісно, кількість амінокислотних замін або інші безсмертні клітини, що продукують залежатиме від багатьох факторів, включаючи ті, антитіла, як це описано тут та/або відомо в науці. що описані вище. Взагалі кажучи, кількість Альтернативно, антитіло, певна частина або амінокислотних замін, вставок або видалень для варіант можуть експресуватися з використанням будь-якого даного ФНП антитіла буде не більше, кодуючих нуклеїнових кислот або їх частин в ніж 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, належній клітині господаря. 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, такою як 1-30 або будь-який Винахід також відноситься до антитіл, антигендіапазон чи значення, як вказано тут. зв'язуючих фрагментів, імунноглобулінових Амінокислоти в анти-ФНП антитілі даного ланцюгів та ДВР, що містять амінокислоти в винаходу, що є обов'язковими для функції, можна послідовності, яка є практично такою ж, як і ідентифікувати за допомогою методів, що відомі в амінокислотна послідовність, описана тут. Бажано, даній галузі, таких як спрямований мутагенез чи щоб антитіла або антиген-зв'язуючі фрагменти та аланін-скануючий мутагенез [напр., Ausubel, вище, антитіла, які містять такі ланцюги або ДВР, могли розділ 8, 15; Cunningham and Wells, Science 244: зв'язувати людський ФНП з високою афіністю 1081-1085 (1989)]. Остання процедура включає -9 (напр., KD менше або дорівнює приблизно 10 М). тільки аланінову мутацію кожного залишку Амінокислотна послідовність, що є практично молекули. Результуючі мутантна молекули потім такою ж, як і послідовінсть описана тут, містить перевіряються на біологічну дію, таку як, але не консервативні амінокислотні заміни, а також обмежуючись, принаймні одна нейтралізуюча дія амінокислотні видалення та/або вставки. щодо ФНП. Місця, що є критичними для Консервативною амінокислотною заміною зв'язування антитіла, можуть також бути називається заміна першої амінокислоти другою ідентифіковані за допомогою структурного аналізу, амінокислотою, що має хімічні та/або фізичні такого як кристалізація, ядерно-магнітний властивості (напр., заряд, структуру, полярність, резонанс або фотоафінне мічення [Smith, et al., J. гідрофобність/гідрофільність), які є такими ж, як і у Моl. Biol. 224: 899-904 (1992) та de Vos, et al., першій амінокислоті. Консервативні заміни Science 255:306-312(1992)]. 35 81743 36 Анти-ФНП антитіла даного винаходу можуть гідрофільна полімерна група може мати включати, але не обмежуючись, принаймні одну молекулярну вагу приблизно від 800 до приблизно частину, послідовність або комбінацію, обрану з 5 120000 Дальтон і може бути поліалкангліколем до всіх прилеглих амінокислот принаймні одного (напр., поліетиленгліколь (PEG), SEQ ID №:1, 2, 3, 4, 5, 6. поліпропіленгліколь (PPG)), карбогідратним Анти-ФНП антитіло може також додатково полімером, амінокислотним полімером або містити поліпептид з принаймні однієї з 70-100% полівіниловим піролідоном, а жирнокислотні або прилеглих амінокислот принаймні однієї SEQ ID жирнокислотні ефірні групи можуть містити від №:7, 8. приблизно 8 до приблизно 40 атомів вуглецю. В одному впровадженні, амінокислотна Модифіковані антитіла та антиген-зв'язуючі послідовність імунноглобулінового ланцюга або фрагменти винаходу можуть містити одну або його частини (напр., варіабельний регіон, ДВР) більше органічних молекул, що є ковалентно має приблизно 70-100% ідентитчність (напр., 70, зв'язаними, прямо або непрямо, з антитілом. 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, Кожна органічна молекула, що зв'язана з 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, антитілом або антиген-зв'язуючим фрагментом 99, 100 або будь-який діапазон або значення) до винаходу може незалежно бути гідрофільною амінокислотної послідовності відповідного полімерною групою, жирнокислотною групою або ланцюга принаймні одного з SEQ ID №№7, 8. жирнокислотною ефірною групою. Термін, що тут Наприклад, амінокислотна послідовність використовується, "жирна кислота" охоплює важколанцюгового ДВР може порівнюватися з монокарбоксильні кислоти і дикарбоксильні SEQ ID №7. Бажано, щоб 70-100% амінокислотна кислоти. "Гідрофільна полімерна група", в якості ідентичність (тобто, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, терміну, що використовується тут, відноситься до 98, 99, 100 або будь-який діапазон чи значення) органічного полімера, що є більш розчинним у визначалися за допомогою належного воді, ніж в октані. Отже, антитіло модифіковане комп'ютерного алгоритма, як це відомо науці. ковалентним приєднанням полілізина охоплюється Показові послідовності важколанцюгових та винаходом. Гідрофільні полімери, що підходять легколанцюгових варіабельних регіонів для модифікації антитіл винаходу, можуть бути забезпечені в SEQ ID №№7, 8. Антитіла даного лінійними або розгалудженими і включати, винаходу або його певні варіанти можуть містити наприклад, поліалкалінгліколі (напр., PEG, будь-яку кількість прилеглих амінокислотних монометокси-поліетіленгліколь (mPEG), PPG залишків з антитіла даного винаходу, де кількість тощо), карбогідрати (напр., декстран, целюлоза, вибирається з групи цілих чисел, що складаються олігосахариди, полісахариди тощо), полімери з 10-100% кількості прилеглих залишків в антигідрофільних амінокислот (напр., полілізин, ФНП антитілі. Додатково, ця послідовність поліаргінин, поліаспартат тощо), поліакаліноксиди прилеглих амінокислот є завдовжки в принаймні (напр., поліетиленоксид, поліпропіленоксид тощо) приблизно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, та полівініл піролідон. Бажано, щоб гідрофільний 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, полімер, який модифіекує антитіло винаходу, мав 210, 220, 230, 240, 250 або більше амінокислот, молекулярну масу від приблизно 800 до 150000 або будь-який діапазон чи значення. Далі, кількість Дальтон, в якості окремої молекули. Наприклад таких послідовностей може бути будь-яким цілим може використовуватися PEG5000 і PEG20000, де числом обраним з групи чисел від 1 до 20, таких як нижній індекс є середньою молекулярною вагою принаймні 2, 3, 4 або 5. полімера в Дальтонах. Гідрофільна полімерна Як зрозуміло фахівцям в даній галузі, даний група може бути замінена від 1 до 6 алкильними, винахід включає принаймні одне біологічно жирнокислотними та жирнокислотно ефірними активне антитіло даного винаходу. Біологічно групами. Гідрофільні полімери, що замінені активні антитіла мають певну активність на рівні жирнокислотною або жирнокислотно ефірною 20%, 30% або 40%, та бажано принаймні 50%, групою, можуть бути приготовлені за допомогою 60% або 70% та ще бажаніше принаймні 80%, 90% застосування належних методів. Наприклад, або 95-100% від активності природного полімер, що містить амінну групу може бути (несинтетичного), ендогенного і відомого антитіла. зпареним з карбоксилатом жирної кислоти або Методи аналізу та заходи визначення ферментної жирнокислотного ефіру та активованим активності та субстратної специфічності добре карбоксилатом (напр., активований за допомогою відомі тим, хто має відповідну кваліфікацію в даній N,N-карбоніл диімідазола) на жирній кислоті або галузі науки. ефірі жирної кислоти може бути зпареним з В іншому аспекті, винахід стосується людських гідроксильною групою на полімері. антитіл та антиген-зв'язуючих фрагментів, як це Жирні кислоти та ефіри жирної кислоти, які описано тут, які модифікуються за допомогою підходять для модифікації антитіл винаходу, ковалентного приєднання органічних молекул. можуть бути сатуровані або можуть містити одну Така модифікація може продукувати антитіло або або більше одиницю несатурації. Жирні кислоти, антиген-зв'язуючий фрагмент з поліпшенними що підходять для модифікації антитіл винаходу, фармакокінетичними властивостями (напр., включають, наприклад, n-додекаонат (С12, лаурат), збільшений сиворотковий час півжиття in vivo). п-тетрадекаонат (С14, мирістат), п-октадекаонат Органічна молекула може бути лінійною або (С18, стеарат), n-ейкозаноат (С20, арахідат), nрозгалудженою гідрофільною полімерною групою, докозаноат (С22, бегенат), n-триаконтаноат (С30), жирнокислотною групою або жирнокислотною n-тетраконтаноат (С40), цис-D9-октадеканоат (C18, ефірною групою. В окремому впровадженні, олеат), всі цис-D5,8,11,14-ейкозатетраеноат (С20, 37 81743 38 арахідонат), октанедиоієва кислота, Thompson, et al, WO 92/16221], повний виклад тетрадеканедиоїєва кислота, октадеканедиоїєва якого вміщено тут у посиланнях. кислот тощо. Відповідні ефіри жирних кислот Модифіковані антитіла винаходу можуть бути включають моноефіри дикарбоксильних кислот, виготовлені за допомогою реакції людського що містять лінійну або розгалуджену нижню антитіла або антиген-зв'язуючого фрагмента з алкілову групу. Нижня алкілова група може містити модифікуючим агентом. Наприклад, органічні від 1 до приблизно 12, бажано від 1 до 6, атомі молекули можуть бути зв'язані з антитілом у вуглецю. несайтоспецифічним спосіб за допомогою Модифіковані людські антитіла та антигензастосування амін-реактивного модифікуючого зв'язуючі фрагменти можуть бути приготовлені з агента, наприклад, NHS ефіру PEG. Модифіковані використанням належних методів, таких як реакція людські антитіла або антиген-зв'язуючі фрагменти з одним або більше модифікованим агентом. можуть також бути виготовлені за допомогою "Модифікований агент", в якості зменшення дисульфідних зв'язків (напр., використовуваного тут терміну, стосується міжланцюгові дисульфідні зв'язки) антитіла або належної органічної групи (напр., гідрофільний антиген-зв'язуючого фрагмента. Редуковане полімер, жирна кислота, ефір жирної кислоти), що антитіло або антиген-зв'язуючий фрагмент може містить активуючу групу. "Активуюча група" є потім реагувати з тіол-реактивним модифікуючим хімічною молекулою або функціональною групою, агентом для вироблення модифікованого антитіла що може, за певних умов, реагувати з другою винаходу. Модифіковані людські антитіла та хімічною групою, таким чином формуючи антиген-зв'язуючі фрагменти, що містять органічну ковалентний зв'язок між модифікуючим агентом та молекулу, яка може бути зв'язана зі специфічними другою хімічною групою. Наприклад, аміномісцями антитіла даного винаходу, може бути реактивні активуючі групи включають приготовлене з використанням належних методів, електрофільні групи, такі як тозилат, мезилат, гало таких як реверсивний протеоліз [Fisch et al, (хлоро, бромо, фторо, йодо), NBioconjugate Chem., 3: 147-153 (1992); Werlen et al, гідроксисукцинимідилові ефіри (NHS) тощо. Bioconjugate Chem., 5: 411-417 (1994); Kumaran et Активуючі групи, що можуть реагувати з тіолами, al, Protein Sci. 6(10): 2233-2241 (1997); Itoh et al, включають, наприклад, малеїмид, йодоацетил, Bioorg. Chem., 24(1): 59-68 (1996); Capellas et al, акрилолил, піридил дисульфіди, тіол 5-тіол-2Biotechnol. Bioeng., 56(4): 456-463 (1997)) та нітробензоєвої кислоти (TNB-тіол) тощо. методи описані в Hermanson, G. Т., Bioconjugate Альдегидна функціональна група може бути Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)]. зв'язана з аміно- або гідразид-вміщуючими Анти-ідіотипних антитіла до препаратів антимолекулами, а азидна група може реагувати з ФНП антитіл тривалентною фосфорною групою для На додаток до моноклональних та химеричних формування фосфорамідатних або анти-ФНП антитіл, даний винахід також стосується фосфорімидинових зв'язків. Належні методи для анти-ідіотипічного (анти-Ід) антитіла специфічних введення активуючих груп в молекулу відомі науці до антитіл винаходу. Анти-Id антитіло є антитілом, [див. наприклад, Hermanson, G.T., Bioconjugate яке розпізнає унікальні детермінанти, що загалом Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)]. пов'язані з антиген-зв'язуючим регуоном іншого Активуюча група може бути зв'язана антитіла. Анти-Ід можуть бути вироблені за безпосередньо з органічною групою (напр., допомогою імуннізації тварин такого ж виду та гідрофільний полімер, жирна кислота, ефір жирної генетичного типу (напр., миші), як і ті, що є кислоти) або через зв'язуючу молекулу, наприклад джерелом Ід антитіла, антитілом або його ДВРдивалентну групу C1-C12, де один або більше вміщуючим регіоном. Імуннізована тварина атомів вуглецю можуть бути замінені гетеро розпізнає та відповідає на ідіотипічні детермінанти атомом, таким як кисень, азот, або сірка. Належні імуннізуючого антитіла і продукує анти-Ід антитіло. зв'язуючі молекули включають, наприклад, Анти-Ід антитіло може також використовуватися в тетраетиленгліколь, -(СН2)3-, -NH-(CH2)6-NH-, якості "імуногена" для індукції імунної відповіді у (CH2)2-NH та -CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-. ще однієї тварини, продукуючи так зване антиМодифікуючі агенти, що містять зв'язуючу анти-Ід антитіло. молекулу, можуть бути виготовлені, наприклад, за Препарати анти-ФНП антитіла допомогою реакції моно-Вос-алкілдиаміна (напр., Даний винахід також описує препарат моно-Вос-етиленедиаміна, моно-Воспринаймні одного анти-ФНП антитіла, що містить диаміногексана) з жирною кислотою за присутності принаймні одне, принаймні два, принаймні три, 1-етил-3-(3-диетиламінопропіл) карбодиїміда принаймні чотири, принаймні п'ять, принаймні (EDC) для формування амідного зв'язку між шість або більше анти-ФНП антитіл, як це описано жирним аміном та карбоксилатом жирної кислоти. тут та/або відомо в галузях науки, що описують Захисна група Вос може бути видалена з продукут неприродно виниклі склади, суміші або форми. за допомогою обробки трифтороацетовою Такі препарати містять неприродно виниклі кислотою (TFA), що впливає на первинний амін, склади, що містять принаймні 1 або 2 повної який може бути зв'язаний з іншим карбоксилатом, довжини, С- та/або N-термінально видалені як це описано, або може реагувати з малеїковим варіанти, домени, фрагменти або певні варіанти ангідридом, а результутючий продукт циклізується амінокислотної послідовності анти-ФНП антитіла, для продукування активованого малеїмідового що обрана з групи, яка містить 70-100% прилеглих похідного жирної кислоти. [Див. наприклад, амінокислот SEQ ID №№:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або певні їхні фрагменти, домени чи антитіла. Бажано, 39 81743 40 щоб препарат анти-ФНП антитіла включав добре відомі в науці. [Див., напр., Wells et al., eds., принаймні 1 або 2 повної довжини фрагменти, Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton домени або варіанти принаймні однієї ДВР- або and Lange, Stamford, CT (2000); PDR LDR-вміщуючої частини послідовності анти-ФНП Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia антитіла з 70-100% SEQ ID №№:1, 2, 3, 4, 5, 6 або 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma їхні певні фрагменти, домени чи варіанти. Linda, CA (2000)], посилання з кожної з цих робіт Подальші бажані композиції вміщують 40-99% повністю включені тут у посиланнях. принаймні одного з 70-100% SEQ ID №№:1,2, 3,4, Такі анти-пухлинні та анти-інфекційні 5, 6 або певних їхніх фрагментів, доменів чи препарати можуть також включати токсинові варіантів. Такі відсотки складу є за вагою, об'ємом, молекули, що поєднані, пов'язанні, сполучені або концентрацією, молярністю або моляльністю призначаються разом з принаймні одним такими ж як рідкі або сухі розчини, суміші, антитілом даного винаходу. Токсин може суспензії, емульсії або колоїди, як це відомо науці додатково селективно знищувати патологічні або описано тут. клітини або тканини. Патологічна клітина може Препарат анти-ФНП антитіла даного винаходу бути раковою або іншою клітиною. Такі токсини може містити принаймні одне з будь-якої можуть бути, але не тільки, очищеними або відповідної та ефективної кількості складу або рекомбінантними токсинами або фрагментами фармацевтичного препарату, що містить токсинів, що містять принаймні один принаймні одне анти-ФНП антитіло до клітини, функціональний цитотоксичний домен або токсин, тканини, органу, тварини або пацієнта при потребі напр., обраний принаймні з одного з наступного такої модуляції, лікування або терапії, що далі рицин, дифтерійний токсин, зміїний токсин або додатково містить принаймні одне обране з бактеріальний токсин. Термін токсин також принаймні одного антагоніста ФНП (напр., але не включає як ендотоксини, так і екзотоксини, що тільки, антитіло або фрагмент антитіла до ФНП, виробляються будь-якими природно виниклими, розчинний рецептор або його фрагмент до ФНП, мутантними або рекомбінантними бактеріями чи їхні зливні протеїни або малу молекулу антагоніста вірусами, які можуть спричинити будь-який ФНП), антиревматичного препарату (напр., патологічний стан у людей та інших ссавців, метотрексат, ауранофін, ауротіоглюкоза, включаючи токсиновий шок, що може призвести до азатіоприн, етанерсепт, натрієвий тіомалат смерті. Такі токсини можуть включати, але не золота, сульфат гідроксихлорохіна, лефлуномід, обмежуючись, ентеротоксиногенний теплосульфасалазин), м'язового релаксанта, наркотика, лабільний ентеротоксин Е.соlі (LT), тепло-стійкий нестероїдного протизапального препарату (НПЗП), енетротоксин (ST), цитотоксин Shigella, анальгетика, анестетика, седативного, місцевого ентеротоксини Aeromonas, токсин токсичного анестетика, нервово-м'язового блокатора, шокового синдрому - 1 (TSST-1), ентеротоксин антимікробного препарату (напр., аміноглікозид, стафілококовий типу A (SEA), В (SEB) або С антигрибковий препарат, антипаразитарний (SEC), стрептококові ентеротоксини тощо. Такі препарат, антивірусний препарат, карбапенем, бактерії включають, але не обмежуються, штами цефалоспорин, фторхінолон, макролід, пеніцилін, родів ентеротоксиногенних Е.соlі (ЕТЕС), сульфонамід, тетрациклін, інші антимікробні ентерогеморрагічних Е.соlі (напр., штами серотипу препарати), антипсоріатичного препарата, 0157:Н7), стафілококові штами (напр., кортикостероїда, анаболічного стероїда, Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), діабетичних препаратів, мінералів, харчових штами Shigella (напр., Shigella dysenteriae, додатків, тиреоїдних препаратів, вітамінів, Shygella flexneri, Shigella boydii ma Shigella sonnei), гормонів, що регулюють обмін кальцію, штами Salmonella (напр., Salmonella typhi, антидіарейних, пратикашльових, антиеметиків, Salmonella cholera-suis, Salmonella enteritidis), противиразкових препаратів, послаблюючих, штами Clostridium (напр.., Clostridium perfringes, антикоагулянтів, еритропоетину (напр., епоетин Clostridium dificile, Clostridium botulinum), штами альфа), філграстима (напр., G-CSF, Нейподжен), Camphlobacter (напр., Camphlobacter jejuni, сарграмостиму (напр., GM-CSF, Лейкін), імунізації, Camphlobacter fetus), штами Helicobacter (напр., імуносупресивного засобу (напр., базиліксимаб, Helicobacter pylori), штами Aeromonas (напр., циклоспорин, даклізумаб), гормону роста, Aeromonas sobria, Aeromonas hydrophila, гормоно-замісної терапії, модулятора Aeromonas caviae), pleisomonas shigelloides, естрогенових рецепторів, мудріатичних, Yersina enterocolitica, штами Vibrios (напр., Vibrios циклоплегічних, алкілуючих засобів, cholerae, Vibrios parahemolyticus), штами Klebsietta, антиметаболітиків, інгібіторів мітозу, Pseudomonas aeruginosa та Streptococci. [Див., радіоізотопних засобів, антидепресантів, напр., Stein, ed., INTERNAL MEDICINE, 3rd ed., антиманічних препаратів, антипсихотиків, pp.1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans анксиолітиків, снодійних, симпатоміметиків, et al., eds., Bacterial Infections of Humans: стимуляторів, донезепілу, такрину, астматичних Epidemiology and Control, 2d. Ed., pp.239-254, препаратів, бета-агоністів, інгаляційних стероїдів, Plenum Medical Book Co., New York (1991); Mandell інгібіторів лейкториєну, метилксантину, кромоліну, et al., Principles and Practice of Infectious Diseases, адреналіну або аналогу, дорнази альфа 3d. Ed., Churchill Livingstone, New York (1990); (Пульмозим), цитокіна або цитокінового Berkow et al., eds., The Merck Manual, 16th edition, антагоніста або антитіла. Необмежуючі приклади Merck and Co., Rahway, N.J., 1992; Wood et al., таких цитокінів включають, але не обмежуються, FEMS Microbiology Immunology, 76: 121-134 (1991); будь-які антитіла до IL-1 - IL-23. Відповідні дози Marrack et al., Science, 248 :705-711 (1990)], список 41 81743 42 посилань котрих повністю відображено тут у Додатково, препарати анти-ФНП антитіла посиланнях. винаходу можуть включати полімерні додатки, такі Компоненти, препарати або комбінації антияк полівінілпіролідони, фіколи (полімерний цукор), ФНП антитіла даного винаходу можуть окрім того декстрати (напр., циклодекстрини, такі як 2містити принаймні один з будь-якої відповідної гідроксипропіл-β-циклодекстрин), поліетилен допоміжної речовини, такої як, але не тільки, гліколі, ароматичні засоби, антимікробні засоби, розчинник, зв'язувач, стабілізатор, буфери, солі, посолоджувачі, антиоксиданти, антистатичні ліпофільні розчинники, консерванти, ад'юванти засоби, сурфактанти (напр., полісорбати, такі як тощо. Надається перевага фармацевтично "TWEEN 20" та "TWEEN 80"), ліпіди (напр., прийнятним допоміжним речовинам. Деякі з фосфоліпіди, жирні кислоти), стероїди (напр., прикладів та методів приготування таких холестерин) та хелатні засоби (напр., ЕДТА). стерильних розчинів добре відомі науці, такі як, Ці та інші фармацевтичні додатки, що але не обмежуючись, у [Gennaro, Ed., Remington's підходять до використання в складах анти-ФНП Pharmaceutical Sciences, 18 th Edition, Mack антитіла, частинах або варіантах, згідно з Publishing Co. (Easton, PA) 1990]. Фармацевтично винаходом є відомими в науці, напр., як це прийнятні носії можуть бути рутинно обиратися наводиться у ["Remington: The Science & Practice серед тих, що відповідають способу введення, of Pharmacy", 19th ed., Williams & Williams, (1995) та розчинності та/або стабільності анти-ФНП у "Phisician's Desk Reference", 52 nd ed., Medical антитіла, фрагмента або варіанта складу, як це Economics, Montvale, NJ (1998)], що повністю добре відомо в науці або описано тут. вміщені туту у посиланнях. Бажаними носіями є Фармацевтичні додатки корисні у даному карбогідрати (напр., сахариди та альдитоли) та препараті включають, але не обмежуються, буфери (напр., цитрат) або полімерні засоби. протеїни, пептиди, амінокислоти, ліпіди та Склад карбогідрати (напр., цукри, включаючи Як зазначалося вище, винахід описує стабільні моносахариди, ді-, три-, тетра та олігосахариди; склади, які переважно містять фосфатний буфер з похідні цукрів такі як алдитоли, алдонієві кислоти, фізіологічним розчином або обраною сіллю, а естерифіковані цукри тощо; і полісахариди або також консервуючі розчини та склади, що містять полімери цукрів), які можуть бути присутніми консервант, а також консервуючі склади самостійно чи в комбінації, що містить одне або в багаторазового використання для комбінації 1-99,99% за вагою або об'ємом. Типові фармацевтичного чи ветеринарного використання, протеїни включають сивортковий альбумін, такі як що містять принаймні одне анти-ФНП антитіло або людський сиворотковий альбумін (HSA), додатково обрані речовини з групи, що рекомбінантний людський альбумін (rНА), складається з одного фенола, m-крезола, ржелатин, казеїн тощо. Репрезентативні крезола, о-крезола, хлорокрезола, бензил компоненти амінокислот/антитіла, які також алкоголя, нітріта фенілртуті, феноксиетанола, функціонують в буферних станах, включають формальдегіда, хлоробутанола, магнія хлорида аланін, гліцин, аргинін, бетаїн, гістидин, глютамову (напр., гексагідрат), алкілпарабена (метил, етил, кислоту, аспартову кислоту, цистеїн, лізин, пропіл, бутил тощо), бензалконія хлорида, лейцин, ізолейцин, валін, метіонин, фенілаланін, бензетоніума хлорида, натрія дегідроацетата та аспартам тощо. Однією з бажаних амінокислот є тримеросала або їх суміші у водному розчиннику. гліцин. Може використовуватися будь-яка відповідна Карбогідрати, що підходять до використання в концентрація або суміш, як це відомо в науці, такі даному винаході включають, наприклад, як 0,001-5%, або будь-який діапазон чи значення у моносахариди, такі як фруктоза, мальтоза, вказаних межах, такі які, але не обмежуючись, галактоза, глюкоза, D-маноза, сорбоза тощо; 0,001, 0,003, 0,005, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,05, дисахариди, такі як лактоза, сахароза, трегалоза, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, целобіоза тощо; полісахариди, такі як рафіноза, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0 2,1, 2,2, 2,3, мелезитоза, мальтодекстрини, декстрани, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, крохмалі тощо; та альдитоли, такі як маннітол, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,3, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, або ксилітол, мальтитол, лактитол, ксилітол сорбітол будь-які діапазони або значення у вказаних межах. (глюцитол), міоінозитол тощо. Бажаними Деякі приклади включають, без консервантів, 0,1карбогідратами для використання в даному 2% m-крезол (напр., 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0%), винаході є манітол, трегалоза та рафіноза. 0,1-3% бензил алкоголь (напр., 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, Препарати анти-ФНП антитіла також можуть 1,9, 2,0, 2,5%), 0,001-0,5% тимеросал (напр., 0,005, включати буфер або рН-коригуючий агент; 0,01), 0,001-2,0% фенол (напр., 0,05, 0,25, 0,28, зазвичай, буфером є сіль, що виготовлена з 0,5, 0,9, 1,0%), 0,0005-1,0% алкілпарабен(и) (напр., органічної кислоти або луга. Репрезентативні 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075,0,009, буфери включають органічні кислотні солі, такі як 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,75, солі лимонної кислоти, аскорбінової кислоти, 0,9, 1,0%) тощо. глюконієвої кислоти, карбонієвої кислоти, Як вказувалося вище, винахід описує тартарової кислоти, сукцинової кислоти, ацетової предмети виробництва, що містять пакувальні кислоти або фталієвої кислоти; Tris, трометаміна матеріали та принаймні одну ампулу, що містить гідрохлорид або фосфатні буфери. Бажаними розчин принаймні одного анти-ФНП антитіла з буферами для використання в даному винаході в відповідним буфером та/або консервантами, даних складах є солі органічних кислот, такі як додатково у водному розчиннику, де вказаний цитрат. пакувальний матеріал містить позначку, що вказує, 43 81743 44 що такий розчин може зберігатися протягом або полоксамер 184 чи 188, поліли Pluronic®, інші періоду 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, блоковані ко-полімери та хелатори, такі як EDTA 48, 54, 60, 66, 72 і більше годин. Даний винахід та EGTA можуть додатково додаватися до складів окрім того містить предмети виробництва, що для зменшення агрегації. Ці додатки зокрема містять пакувальні матеріали, першу ампулу, яка корисні, якщо для введення засобу містить принаймні одне ліофілізоване анти-ФНП використовується помпа або пластиковий антитіло та другу ампулу, що містить водний контейнер. Наявність фармацевтично прийнятного розчинник відповідного буфера або консерванта, сурфактанта зменшує схильність протеїнів до де вказаний пакуальний матеріал містить агрегації. позначку, яка інструктує пацієнта розчинити Препарати даного винаходу можуть бути принаймні одне анти-ФНП антитіло у водному приготовлені за допомогою процесу, який містить розчиннику для утворення розчину, що може принаймні одне анти-ФНП антитіло та консервант зберігатися протягом періоду 24 годин або більше. обраний з групи, яка складається з фенола, mПринаймні одне анти-ФНП антитіло крезола, р-крезола, о-крезола, хлорокрезола, використовуване згідно з даним винаходом може бензил алкоголя, алкілпарабена (метил, етил, вироблятися за допомогою рекомбінантних пропіл, бутил тощо), бензалконіума хлорида, заходів, включаючи клітини ссавців та трансгенні бензетоніума хлорида, натрію дегідроацетата і препарати, або можуть бути очищенні з інших тимезорала або їхніх сумішей у водному біологічних джерел, як це описано тут або відомо в розчиннику. Змішування принаймні одного антинауці. ФНП антитіла та консерванта у водному Діапазон принаймні одного анти-ФНП антитіла розчиннику виконується з використанням в продукті даного винаходу включає кількості, що стандартних процедур розчинення та змішування. утворюються при розведенні, якщо в вологій/сухій Для приготування відповідного препарату, системі, концентрації від приблизно 1,0μΓ/мл до наприклад, відміряна кількість принаймні одного приблизно 1000мг/мл, хоча нижчі чи вищі анти-ФНП антитіла в буферному розчині концентрації також використовуються і залежать комбінується з бажаним консервантом в кількості, від способу планованого введення, напр., склади що достатня для забезпечення бажаних розчинів відрізнятимуться від трансдермальних концентрацій протеїна та консерванту. Варіації пластирів, легеневих, трансслизових або цього процесу можуть визначатися тим, хто є осмотичних чи мікропомпових методів. фахівцем у цій галузі. Наприклад, порядок Бажано, щоб водні розчинники додатково додавання компонентів, чи додаються додаткові містили фармацевтично прийнятні консерванти. засоби, температура та рН при яких готується Бажані консерванти включають ті, що обираються препарат, всі ці фактори можуть бути оптимізовані з групи, яка складається з фенола, m-крезола, рпо використовуваним концентрації та засобам крезола, о-крезола, хлорокрезола, бензил введення. алкоголя, алкілпарабена (метил, етил, пропіл, Заявлені препарати можуть надаватися бутил тощо), бензалконіума хлорида, пацієнтам у вигляді чистих розчинів або в якості бензетоніума хлорида, натрію дегідроацетата і двох ампул, що містять ампулу ліофілізованого тимезорала або їхніх сумішей. Концентрація принаймні одного анти-ФНП антитіла, яке консерванта, що використовується в даному розчиняється в другій ампулі, що містить воду, складі є такою, яка достатня для антимікробного консервант та/або додатки, бажано фосфатний ефекту. Такі концентрації залежать від обраного буфер та/або фізіологічний розчин і обрану сіль, у консерванта та добре визначаються водному розчиннику. Як одна ампула з розчином, підготовленими фахівцями. так і дві ампули, що потребують розчинення, Інші додатки, напр., ізотонічні засоби, буфери, можуть використовуватися багато разів та можуть антиоксиданти, покращуючі консерванти, можуть бути достатнім для одноразового чи додатково і бажано додаватися у розчинник. багаторазового циклів лікування пацієнта та, отже, Ізотонічний засіб, такий як гліцерин, часто можуть забезпечити зручніший режим лікування, використовуються у відомих концентраціях. ніж натепер доступні. Бажано додавати фізіологічно толерований буфер Дані заявлені предмети виробництва є для забезпечення поліпшеного контролю рН. корисними для призначення протягом періоду від Склади можуть покривати широкий спектр рН, негайного до 24-годинного або більше. Відповідно, такий як від рН4 до приблизно рН10, а бажаний дані заявлені предмети виробництва надають діапазон становить від приблизно рН5 до значні переваги пацієнтові. Препарати винаходу приблизно рН9, а найбільш бажаний діапазон можуть додатково безпечно зберігатися при становить від приблизно рН6,8 до приблизно 7,8. температурах від приблизно 2 до приблизно 40°С Бажані буфери включають фосфатні буфери, та утримувати біологічну дію протеїну на тривалі найбажаніше натрія фосфат, зокрема фосфатний періоди часу, отже, дозволяють вказувати на буферний фізіологічний розчин (PBS). пакуальних показчиках, що розчин може Інші додатки, такі як фармацевтично прийнятні зберігатися та/або використовуватися протягом розчинники по типу Tween 20 (поліоксиетилен (20) періоду 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 або 96 годин чи сорбітан монолаурат), Tween 40 (поліоксиетилен більше. Якщо використано консервуючий (20) сорбітан монопальмітат), Tweeen 80 розчинник, такі позначки можуть включати (поліоксиетилен поліоксипропілен блоковані використання до 1-12 місяців, половини, півтора кополімери) та PEG (поліетилен гліколь) або та/або двох років. неіонні сурфактанти, такі як полісорбат 20 або 80 45 81743 46 Розчини принаймні одного анти-ФНП антитіла Продукти, що заявляються, включають в винаході можуть бути приготовані за допомогою пакувальний матеріал. Пакувальний матеріал процесу, що містить змішування принаймні одного надає, на додаток до інформації, яка вимагається антитіла у водному розчиннику. Змішування регуляторними органами, умови за яких продукт здійснюється з використанням традиційних має використовуватися. Пакувальний матеріал процедур розчинення та змішування. Для даного винаходу надає інструкції пацієнту по приготування належного розчинника, наприклад, розведенню принаймні одного анти-ФНП антитіла вимірювана кількість принаймні одного антитіла у у водному розчиннику для утворення розчину та воді або буфері комбінується в кількостях, що використання розчину протягом періоду 2-24 годин достатні для забезпечення бажаних концентрацій та більше для двох ампул, волога/суха, продукта. протеїну та додатково консерванту або буфера. Для однієї ампули, розчинений продукт, покажчик Варіації цього процесу можуть визначатися тим, вказує, що такий розчин може використовуватися хто є фахівцем у цій галузі. Наприклад, порядок протягом періоду 2-24 години або більше. Даний додавання компонентів, чи додаються додаткові продукт, що заявляється, є корисним для засоби, температура та рН при яких готується використання в якості людського препарат, всі ці фактори можуть бути оптимізовані фармацевтичного продукта. по використовуваним концентрації та засобам Препарати даного винаходу можуть бути введення. приготовлені за допомогою процесу, що містить Заявлені препарати можуть надаватися принаймні одне анти-ФНП антитіло та обраний пацієнтам у вигляді чистих розчинів або в якості буфер, бажано фосфатний буфер, який містить двох ампул, що містять ампулу ліофілізованого фізіологічний розчин або обрану сіль. Змішування принаймні одного анти-ФНП антитіла, яке принаймні одного антитіла та буфера у водному розчиняється в другій ампулі, що містить воду, розчиннику здійснюється з використанням консервант та/або додатки, бажано фосфатний традиційних процедур розчинення та змішування. буфер та/або фізіологічний розчин і обрану сіль, у Для приготування належного розчинника, водному розчиннику. Як одна ампула з розчином, наприклад, вимірювана кількість принаймні одного так і дві ампули, що потребують розчинення, антитіла у воді або буфері комбінується в можуть використовуватися багато разів та можуть кількостях, що достатні для забезпечення бажаних бути достатнім для одноразового чи концентрацій протеїну та додатково консерванту багаторазового циклів лікування пацієнта та, отже, або буфера. Варіації цього процесу можуть можуть забезпечити зручніший режим лікування, визначатися тим, хто є фахівцем у цій галузі. ніж натепер доступні. Наприклад, порядок додавання компонентів, чи Заявлені продукти можуть бути надані додаються додаткові засоби, температура та рН пацієнтам небезпосередньо через забезпечення при яких готується препарат, всі ці фактори аптек, клінік або інших таких інституцій та закладів можуть бути оптимізовані по використовуваним чистими розчинами або подвійними ампулами, що концентрації та засобам введення. складаються з ампули з ліофілізованого принаймні Заявлені стабільні або законсервовані одного анти-ФНП антитіла, яке розчиняється за препарати можуть надаватися пацієнтам в якості допомогою другої ампули, що містить водний чистих розчинів або в якості подвійних ампул, що розчин. Чистий розчин у даному випадку може містять ампулу ліофілізованого принаймні одного бути розміром до одного літра або навіть більше, анти-ФНП антитіла, яке розводиться другою що забезпечує великий резервуар з якого можуть ампулою, що містить консервант або буфер та одноразово чи багаторазово відбиратися менші додатки у водному розчиннику. Як одна ампула з частини розчину принаймні одного антитіла для розчином, так і дві ампули, що потребують перенесення у менші ампули та забезпечення розчинення, можуть використовуватися багато аптек чи клінік для їхніх покупців та/або пацієнтів. разів та можуть бути достатнім для одноразового Визнані пристрої, що містять ці одноампульні чи багаторазового циклів лікування пацієнта та, системи включають такі ручко-інжектерні пристрої отже, можуть забезпечити зручніший режим для введення розчину, як BD Pens, BD Autojector®, лікування, ніж натепер доступні. Humaject®, NovoPen®, B-D®Pen, AutoPen® та Принаймні одне анти-ФНП антитіло як в OptiPen®, GenotropinPen®, Genotronorm Pen®, стабільних, так і у законсервованих препаратах Humatro Pen®, Reco-Pen®, Roferon Pen®, Biojector®, або розчинах, що описані тут, можуть бути iject®, J-tip Needle-Free Injector®, Intraject®, Mediпризначені пацієнтові згідно з даними винаходом Ject®, напр. такі як розроблені або створені Becton за допомогою різноманітних методів введення Dickensen (Franklin Lakes, NJ, таких як підшкірні або внутрішньом'язові ін'єкції; www.bectondickenson.com). Disetronic (Burgdorf, транмдермальні, легеневі, трансмукозальні, Швейцарія, www.disetronic.com: Bioject, Портленд, імплантовані, осмотичні помпи, картриджи, Орегон rwww.bioiect.com): National Medical мікропомпи або інші засоби, що оцінені Products, Weston Medical (Пітерборо, UK, кваліфікованими фахівцями, як це добре відомо в www.weston-medical.com). Medic-Ject Corp даній галузі. (Міннеаполіс, MN, www.mediiect.com). Визнані Терапевтичне застосування пристрої, що містять подвійно-ампульну систему Даний винахід також надає метод модуляції включають такі ручко-інжекторні системи для або лікування принаймні одного захворювання розведення ліофілізованого препарату в картриджі залежного від ФНП в клітинах, тканинах, органах, для введення розведеного розчину, як тваринах або пацієнтах, як це відомо в науці або HumatroPen®. 47 81743 48 описано тут, з використанням одного ФНП Грейвса, хвороба Рейно, інсуліно-резистентний антитіла даного винаходу. діабет типу В, астма, myastenia gravis, антитілоДаний винахід також надає метод модуляції опосередкована цитотоксичність, реакції або лікування принаймні одного захворювання гіперчутливості типу III, системний червоний залежного від ФНП в клітинах, тканинах, органах, вовчак, синдром POEMS (полінейропатія, тваринах або пацієнтах включаючи, але не органомегалія, ендокринопатія, моноклональна обмежуючись, принаймні одне з такого - ожиріння, гамопатія та синдром змін шкіри), полінейропатія, імунно-залежні захворювання, серцево-судинні органомегалія, ендокринопатія, моноклональна захворювання, інфекційні захворювання або гамопатія, змішане захворювання сполучної неврологічні захворювання. тканини, ідіопатична хвороба Аддісона, цукровий Даний винахід також надає метод модуляції діабет, хронічний активний гепатит, первинний або лікування принаймні одного захворювання біліарний цирроз, вітіліго, васкуліт, синдром залежного від ФНП в клітинах, тканинах, органах, постінфарктной кардіотомії, гіперчутливість типу тваринах або пацієнтах включаючи, але не IV, контактний дерматит, пневмоніт обмежуючись, принаймні одне з такого гіперчутливості, відторгнення алотрансплантанту, ревматоїдний артрит, ювенільний ревматоїдний гранульома внаслідок внутріклітинних організмів, артрит, ювенільний ревматоїдний артрит з медикаментозна чутливість, системним початком, псоріатичний артрит, метаболічна/ідіопатична, хвороба Вільсона, анкілозуючий спондиліт, виразка шлунка, гемохроматоз, дефіцит альфа-1-антитрипсина, серонегативні артропатії, остеоартрит, запальні діабетична ретинопатія, тиреоїдит Гашимото, захворювання кишковика, виразковий коліт, остеопороз, дослідження гіпоталамо-гіпофізосистемний червоний вовчак, антифосфоліпідний аренальної осі, первиний біліарний цирроз, синдром, іридоцикліт/увеїт/неврит зорового нерву, тиреоїдит, енцефаломієліт, кахексія, кістозний ідіопатичний легеневий фіброз, системний фіброз, хронічні легеневі захворювання васкуліт/гранульоматоз Вегенера, саркоїдоз, новонароджених, хронічні обструктивні орхіт/процедури зворотної вазектомії, захворювання легень (ХОЗЛ), сімейний алергічні/атопічні захворювання, астма, алергічні гепатофагоцитарний лімфогістиоцитоз, риніти, екзема, алергічний контактний дерматит, дерматологічні стани, псоріаз, алопеція, алергічний кон'юктивіт, гіперчутливий пневмоніт, нефротичний синдром, нефрит, гломерулярний трансплантанти, відторгнення трансплантованого нефрит, гостра ниркова недостатність, гемодіаліз, органу, захворювання по типу шунт-протиуремія, токсичність, преекампсія, okt3 терапія, господаря, синдром системної запальної відповіді, анти-саЗ терапія, лікування цитокінами, септичний синдром, грам-позитивний сепсис, хіміотерапія, радіаційна терапія (напр., грам-негативний сепсис, культуро-негативний включаючи, але не обмежуючись, тоастенія, сепсис, грибковий сепсис, нейтропенічна анемія, кахексія тощо), хронічна інтоксикація лихоманка, уросепсис, менінгококемія, саліцилатами тощо. [Див., напр., Merck Manual, травма/кровотеча, опіки, опромінення іонізуючою 12th-17th Editions, Merck & Company, Rahway, NJ радіацією, гострий панкреатит, гострий (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), респіраторний дистрес-синдром у дорослих, Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., eds., ревматоїдний артрит, алкоголь-індукований Second Edition, Appleton and Lange, Stamford, гепатит, хронічні запальні процеси, саркоїдоз, Conn. (1998, 2000)], кожний з яких повністю хвороба Крона, серповидно-клітинна анемія, включений тут у посиланнях. діабет, нефрох, атопічні захворювання, реакції Даний винахід також надає метод модуляції гіперчутливості, алергічний риніт, сінна лихоманка, або лікування принаймні одного серцевопереніальний риніт, кон'юктивіт, ендометріоз, судинного захворювання в клітинах, тканинах, астма, кропивниця, системна анафілаксія, органах, тваринах або пацієнтах включаючи, але дерматит, пернициозна анемія, гемолітичні не обмежуючись, принаймні одне з такого захворювання, тромбоцитопенія, відторгнення синдром кардіального оглушення, інфаркт трансплантанта або будь-якого органа чи тканини, міокарда, застійна серцева недостатність, інсульт, реакції відторгнення трансплантованих нирок, ішемічний інсульт, кровотеча, артеріосклероз, реакція відторгнення трансплантованого серця, атеросклероз, рестеноз, діабетичне реакція відторгнення трансплантованої печінки, атеросклеротичне захворювання, гіпертензія, реакція відторгнення трансплантованої артеріальна гіпертензія, реноваскулярна підшлункової залози, реакція відторгнення гіпертензія, синкопе, шок, сифіліс серцевотрансплантованих легенів, реакція відторгнення судинної системи, серцева недостатність, трансплантованого кісткового мозку (ТКМ), легеневе серце, первинна легенева гіпертензія, відторгнення шкірного трансплантанта, аритмії серця, передсердні ектопічні скорочення, відторгнення хрящевого трансплантанта, тріпотіння передсердь, фібриляція передсердь відторгнення кісткового трансплантанта, (стійка або пароксизмальна), постперфузійний відторгнення трансплантованого тонкого синдром, запальна відповідь на серцево-легеневе кишковика, відторгнення імплантованого тимуса шунтування, хаотична або мультифокальна плода, відторгнення паратиреоїдного передсердна тахікардія, звичайна тахікардія з трансплантанта, відторгнення вузькими комплексами QRS, певні аритмії, ксенотрансплантанта будь-якого органа або фібриляція шлуночків, аритмії з пучка Пса, тканини, відторгнення алотрансплантата, реакції атріовентрикулярна блокада, блокада ніжок пучка антирецепторної гіперчутливості, хвороба Пса, ішемічні міокардіальні порушення, ішемічна 49 81743 50 хвороба серця, стабільна стенокардія, інфаркт злоякісна меланома, гемангіома, метастатична міокарда, кардіоміопатія, дилатаційна застійна хвороба, рако-залежна резорпція кісток, ракокардіоміопатія, рестриктивна кардіоміопатія, залежний біль у кістках тощо. клапанні захворювання серця, ендокардит, Даний винахід також надає метод модуляції захворювання перикарда, пухлини серця, або лікування принаймні одного злоякісного аортальні та периферичні аневризми, захворювання в клітинах, тканинах, органах, розшарування аорти, запалення аорти, оклюзія тваринах або пацієнтах включаючи, але не абдомінальної аорти та її гілок, периферичні обмежуючись, принаймні одне з такого судинні розлади, оклюзивні артеріальні розлади, нейродегенеративні захворювання, множинний атеросклеротичне захворювання периферичних склероз, мігренозний головний біль, комплекс судин, облітеруючий тромбоангіїт, функціональні СНІД деменція, демінієлізуючі захворювання, такі розлади периферичних артерій, феномен і як множинний склероз та гострий поперечний захворювання Рейно, акроціаноз, еритромегалія, мієліт; екстрапірамідні та мозочкові захворювання, венозні захворювання, венозний тромбоз, такі як пошкодження кортикоспінальної системи; варикозні вени, артеріовенозна фістула, розлади базальних гангліїв або мозочкові лімфодерма, ліподема, нестабільна стенокардія, порушення; гіперкінетичні рухові порушення, такі реперфузійне пошкодження, пост-насосний як хорея Гантінгтона та сенільна хорея; синдром, ішемічно-реперфузійне пошкодження медикаментозно-індуковані рухові порушення, такі тощо. Такий метод може додатково містити як ті, що індуковані препаратами, котрі блокують введення ефективної кількості складу або допамінові рецептори ЦНС; гіпокінетичні рухові фармацевтичного препарату, що містить розлади, такі як хвороба Паркінсона; принаймні одне анти-ФНП антитіло, в клітину, прогресуючий супраядерний параліч; структурні тканину, орган, тварину або пацієнта при потребі розлади мозочка; спіномозочкові дегенерації, такі такої модуляції або лікування. як спінальна атаксія, атаксія Фрідрайха, мозочкова Даний винахід також надає метод модуляції кортикальна дегенерація, множинні системні або лікування принаймні одного інфекційного дегенерації (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager захворювання в клітинах, тканинах, органах, та Machado-Joseph); системні розлади (хвороба тваринах або пацієнтах включаючи, але не Рефсама, абеталіпопротеїнемія, атаксія, обмежуючись, принаймні одне з такого - гостра телангіектазія та мітохондріальний або хронічна бактеріальна інфекція, гострі та багатосистемний розлад); демієлінізуючі ядерні хронічні паразитарні або інфекційні процеси, розлади, такі як множинний склероз, гострий включаючи бактеріальні, вірусні та грибкові поперечний мієліт; та розлади моторних інфекції, ВІЛ інфекція/ВІЛ нейропатія, менінгіт, складових, такі як нейрогенна м'язова атрофія гепатит (А, В або С тощо), септичний артрит, (дегенерація клітин переднього рогу, така як перитоніт, пневмонія, епіглотит, E. соlі 0157:h7, аміотрофічний боковий склероз, спінальна м'язова гемолітичний уремічний синдром/тромболітична атрофія немовлят та ювенільна спінальна м'язова тромбоцитопенічна пурпура, малярія, геморагічна атрофія); хвороба Альцгемера; синдром Дауна у тропічна лихоманка, лейшманіаз, лепра, токсичний середньому віці; дифузне захворювання Леві; шоковий синдром, стрептококовий міозит, газова сенільна деменція типу Леві; синдром Вернікегангрена, мікобактеріальний туберкульоз, Корсакоффа; хронічний алкоголізм; хвороба внутрішньоклітинна mycobacteriun avium, Кройтцфельда-Якоба; підгострий склерозуючий пневмонія pneumocystis carinii, запальне паненцефаліт, хвороба Hallerrorden-Spatz; і захворювання тазових органів, орхіт/епідидиміт, dementia pugilistica тощо. Такий метод може легіонела, хвороба Лайма, грип типу А, вірус додатково включати введення ефективної Епштейна-Барр, гемафагоцитарний синдром кількості складу або фармацевтичного препарату, сумісний з життям, енцефаліт/асептичний менінгіт що містить принаймні одне антитіло до ФНП або тощо. певної його частини чи варіанта, в клітину, Даний винахід також надає метод модуляції тканину, орган, тварину або пацієнта при потребі або лікування принаймні одного злоякісного такої модуляції або лікування. [Див., напр., Merck захворювання в клітинах, тканинах, органах, Manual, 16th Edition, Merck & Company, Rahway, NJ тваринах або пацієнтах включаючи, але не (1992)]. обмежуючись, принаймні одне з такого - лейкемія, Будь-який метод даного винаходу може гостра лейкемія, гостра лімфобластна лейкемія включати введення ефективної кількості (ГЛЛ), В-клітинна, Т-клітинна або FAB ALL, гостра композиції або фармацевтичного препарату, що мієлоїдна лейкемія (ГМЛ), хронічна мієлоцитарна містить принаймні одне анти-ФНП антитіло, в лейкемія (ХМЛ), хронічна лімфоцитарна лейкемія клітину, тканину, орган, тварину або пацієнта при (ХЛЛ), волосато-клітинна лейкемія, потребі такої модуляції або лікування. Такий мієлодиспластичний синдром (МДС), лімфома, метод може додатково включати супутнє хвороба Годжкіна, злоякісна лімфома, непризначення або комбіновану терапію для годжкінська лімфома, лімфома Боркіта, множинна лікування таких імунних захворювань, де мієлома, саркома Калоші, колоректальна призначення вищеназваного принаймні одного карцинома, панкреатична карцинома, анти-ФНП антитіла, певної його частини чи назофарингеальна карцинома, злоякісний варіанта, окрім того містить введення до, гістиоцитоз, паранеопластичний одночасно та/або після принаймні одного засобу з синдром/гіперкальцемія злоякісності, принаймні одного антагоніста ФНП (напр., але не безпорожнині пухлини, аденокарциноми, саркоми, обмежуючись, антитіло або фрагмент до ФНП, 51 81743 52 розчинний рецептор або фрагмент до ФНП, їхні компоненти, що блокують та/або пригнічують зливні протеїни або мала молекула антагоніста активність ФНП, такі як інгібітори ангіотензинФНП), антиревматичного засобу (напр., перетворюючого ферменту (АПФ) (напр., метотрексат, ауранофін, ауротіоглюкоза, каптоприл); та компоненти, що блокують та/або азатіоприн, етанерсепт, тіомалат натрія золота, пригнічують продукцію та/або синтез ФНП, такі як гідроксихлорохіна сульфат, лефлуномід, інгібітори МАР кінази. сульфасалазин), м'язового релаксанта, "Антитіло до фактору некрозу пухлини", наркотичного препарату, нестероїдного "антитіло до ФНП", "антитіло до ФНПα" або протизапального препарату (НПЗП), фрагменти тощо, як тут використовується, анальгетичного препарату, анестетичного зменшують, блокують, пригнічують, припиняють препарату, седативного препарату, місцевого або перешкоджають діяльності ФНПα in vitro, in анестетика, нервово-м'язового блокатора, situ та/або бажано in vivo. Наприклад, відповідне антимікробного засобу (напр., аміноглікозид, людське антитіло до ФНП даного винаходу може антигрибковий препарат, антипаразитарний зв'язувати ФНПα та включає анти-ФНП антитіла, препарат, антивірусний препарат, карбапенем, їхні антиген-зв'язуючі фрагменти та певні їхні цефалоспорин, фторхінолон, макролід, пеніцилін, мутанти або домени, що специфічно зв'язуються з сульфонамід, тетрациклін, інший антимікробний ФНПα. Належне антитіло або фрагмент до ФНП препарат), антипсоріатичного засобу, може також зменшити, блокувати, припиняти, кортикостероїда, анаболічного стероїду, перешкоджати та/або пригнічувати синтез РНК, діабетологічного препарату, мінералу, харчового ДНК або протеїну ФНП, вивільнення ФНП, додатку, тиреоїдного препарату, вітаміну, кальційсигнальну систему рецептора до ФНП, мембранне залежного гормону, антидіарейного засобу, розщеплення ФНП, діяльність ФНП, продукцію протикашльового препарату, антиеметика, та/або синтез ФНП. противиразкового препарату, послаблюючого, Химеричне антитіло сА2 містить антигенантикоагулянта, еритропоетина (напр., епоетин зв'язуючий варіабельний регіон високо-афінного альфа), філграстима (напр., G-CSF, Нейподжен), нейтралізуючого мишиного антилюдського сарграмостиму (напр., GM-CSF, Лейкін), імунізації, антитіла IgG1 до ФНПα, позначений А2, та постійні імуносупресивного засобу (напр., базиліксимаб, регіони людського IgGl, каппа імунноглобулін. Fc циклоспорин, даклізумаб), гормону росту, гормонорегіон людського IgG1 покращує аллогенну замісної терапії, модулятора естрогенових ефекторну функцію антитіла, підвищує час піврецепторів, мудріатичних, циклоплегічних, життя циркуляції у сиворотці та зменшує алкілуючих засобів, антиметаболітиків, інгібіторів імунногеність антитіла. Спорідненість та епітопна мітозу, радіоізотопних засобів, антидепресантів, специфічність химеричного антитіла сА2 походить антиманічних препаратів, антипсихотиків, з варіабельного регіону мишине антитіло А2. В анксиолітиків, снодійних, симпатоміметиків, окремому впровадженні, бажаним джерелом стимуляторів, донезепілу, такрину, астматичних нуклеїнових кислот, що кодують варіабельний препаратів, бета-агоністів, інгаляційних стероїдів, регіон мишиного антитіла А2, є клітинна лінія інгібіторів лейкториєну, метилксантину, кромоліну, гібридоми А2. адреналіну або аналогу, дорнази альфа Химеричне А2 (сА2) нейтралізує (Пульмозим), цитокіна або цитокінового цитотоксичний ефект як природного, так і антагоніста або антитіла. Відповідні дози добре рекомбінантного людського ФНПα у дозовідомі в науці. [Див., напр., Wells et al., eds., залежний спосіб. З аналізу зв'язування Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton химеричного антитіла сА2 та рекомбінантного and Lange, Stamford, CT (2000); PDR людського ФНПα, константа афіності химеричного Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia антитіла сА2 була визначена як 1,04´1010М-1. 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Бажані методи для визначення специфічності та Linda, СА (2000), посилання з кожної з цих робіт афіності моноклонального антитіла за допомогою повністю включені тут у посиланнях. конкурентного пригнічення можуть бути знайдені в Антагоністи ФНП, що підходять для [Harlow, et al., antibodies: A Laboratory Manual, Cold препаратів, комбінованого лікування, супутнього Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, призначення, пристроїв та/або методів даного New York, 1988; Colligan et al., eds., Current винаходу (що містять принаймні одне антитіло Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. даного винаходу, певну його частину або варіант), And Wiley Interscience, New York, (1992-2000); включають, але не обмежуються, анти-ФНП Kozbor et al., Immunol. Today, 4: 12-19 (1983); антитіла, їхні антиген-зв'язуючі фрагменти и Ausubel et al., eds. Current Protocols in Molecular рецепторні молекули, які специфічно зв'язуються з Biology, Wiley Interscience, New York (1987-2000); ФНП; компоненти, які перешкоджають та/або та Мuller, Meth. Enzymol, 92: 589-601 (1983)], пригнічують синтез ФНП, вивільнення ФНП або посилання котрих повністю включені туту у його дію на цільові клітини, такі як талідомід, посиланнях. тенідап, інгібітори фосфодіестерази (напр., В окремому впровадженні, мишине пентоксифілін та роліпрам), агоністи моноклональне антитіло А2 виробляється аденозинового рецептора А2b та посилювачі клітинною лінією, що позначається с134А. аденизового рецептора А2b; компоненти, які Химеричне антитіло сА2 виробляється клітинною попереджають та/або пригнічують сигнальну лінією, що позначається с 168А. систему рецептора до ФНП, такі як інгібітори Додаткові приклади моноклональних антикінази мітоген активованого протеїна (МАР); ФНП антитіл, що можуть бути використані в 53 81743 54 даному винаході, описані в науці [див., напр., винаходу, містять принаймні одну частину однієї патент США №5,231,024; МбИег, A. Et al, Cytokine або більше імунноглобулінових молекул та всіх 2(3): 162-169 (1990); заявка США №07/943,852 або функціональної частини одного або більше (зареєстровано 11 вересня 1992); Rathjen et al., рецептора до ФНП. Ці зливні молекули міжнародна публікація №WO 91/02078 імуннорецепторів можуть бути мономерами або (опубліковано 21 лютого 1991); Rubin et al, гетеро- чи гомомультимерами. Зливні молекули патентна публікація ЕРО №0 218 868 імуннорецепторів можуть також бути (опубліковано 22 квітня 1987); Yone et al., патентна моновалентними або мультивалентними. публікація ЕРО №0 288 088 (26 жовтня 1988); Прикладом такої зливної молекули Liang, et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 757: імуннорецептора до ФНП є рецептор до 847-854 (1986); Meager, et al., Hybridoma 6: 305ФНП/зливний протеїн IgG. Зливні молекули 311 (1987); Fendly et al., Hybridoma 6: 359-369 імуннорецептора до ФНП та методи їхнього (1987); Bringman, et al., Hybridoma (5: 489-507 виробництва були описані в науці [Lesslauer et al., (1987); та Hirai, et al., J. Immunol. Meth. 96: 51-62 Eur. J. Immunol. 27: 2883-2886 (1991); Askenazi et (1987)], посилання на котрі повністю включені тут у al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA &S:10535-10539 посиланнях. (1991); Peppel et al., J. Exp. Med. 174: 1483-1489 Молекули рецептора до ФНП (1991); Kolls et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: Бажані молекули рецептора до ФНП корисні в 215-219 (1994); Butler et al, Cytokine 6(6): 616-623 даному винаході є тими, що зв'язують ФНПα з (1994); Baker et al, Eur. J. Immunol 24: 2040-2048 високою афіністю [див., напр., Feldmann et al., (1994); Beutler et al, патент США №5,447,851; та міжнародна публікація №WO 92/07076 Заявка США №08/442,133 (зареєстровано 16 (опубліковано 30 квітня 1992); Schall et al., Cell 61: травня 1995)], посилання на кожне з яких повністю 361-310 (1990); та Loetscher et al., Cell 67: 351-359 включено тут у посиланнях). Методи виробництва (1990), посилання на котрі повністю включені тут у зливних молекул імуннорецептора можуть бути посиланнях] та додатково мають низьку також знайдені у [Capon et al., Nature 337: 525-531 імунногеність. Зокрема, 55кДа (р55 ΦΗΠ-R) та (1989)], посилання на котре повністю включено тут 75кДа (р75 ΦΗΠ-R) рецептори до ФНП на поверхні у посиланнях. клітин є корисними в даному винаході. Обмежені Функціональний еквівалент, похідне, фрагмент форми цих рецепторів, що містять або регіон молекули рецептора до ФНП екстрацелюлярні домени (ЕЦД) рецепторів або відноситься до частини молекули рецептора до їхніх функціональних частин [див., напр., Corcoran ФНП або частини молекулярної послідовності et al., Eur. J. Biochem. 225: 831-840 (1994)] є також рецептора до ФНП, що кодує молекулу рецептора корисними в даному винаході. Обмежені форми до ФНП, що є достатньої величини та рецепторів до ФНП, що містять ЕЦД, були послідовності для відтворення молекул рецептора виявлені у сечі та сиворотці, в якості 30кДа та до ФНП, які можуть бути використані в даному 40кДа інгібіторно-зв'язуючих протеїнів до ФНПα винаході (напр., зв'язують ФНПα з високою [Engelmann, Η. et al., J. Biol Chem. 265: 1531-1536 афіністю та при низькій імунногеності). (1990)]. Мультимеричні молекули рецептора до Функціональний еквівалент молекули рецептора ФНП та зливні молекули імуннорецептора до ФНП до ФНП також включає модифіковані молекули та їхні похідні і частини є додатковими прикладами рецептора до ФНП, що функціонально схожі на молекул рецептора до ФНП, які є корисними в молекули рецептора до ФНП, які можуть бути методах та препаратах даного винаходу. використані в даному винаході (напр., зв'язують Молекули рецептора до ФНП, які можуть бути ФНПα з високою афіністю та при низькій використані у винаході характеризовані по їхній імунногеності). Напр., функціональний еквівалент здатності лікувати пацієнтів протягом подовженого молекули рецептора до ФНП може містити кодон періоду часу з добрим або прекрасним "SILENT" ("ТИША") або одну чи більше послабленням симптоматики і низькою амінокислотних замін; або заміну одного кодону, токсичністю. Низька імунногеність та/або висока що кодує однакові або різні гідрофобні афіність, а також інші невизначені властивості, амінокислоти для іншого кодону, який кодує можуть робити внесок до досягнутих гідрофобні амінокислоти). [Див. Ausubel et al., терапевтичних результатів. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Мультимеричні молекули рецептора до ФНП Publishing Assoc. and Wiley-Interscience, New York корисні в даному винаході містять весь або (1987-2000)]. функціональну частину ECD двох або більше Цитокіни включають будь-який відомий рецепторів до ФНП пов'язані через один або цитокін. [Див., напр., CopewithCytokines.com.] більше поліпептидний поєднувач або інші Антагоністи цитокінів включають, але не непептидні поєднувачі, такі як поліетилен гліколь обмежуються, будь-яке антитіло, фрагмент або (PEG). Мультимеричні молекули можуть окрім того міметик, будь-який розчинний рецептор, фрагмент містити сиганльний пептид секретованого протеїна або мїметик, будь-яку малу молекулу антагоніста для спрямування експресії мультимеричної або будь-яку їхню комбінацію. молекули. Ці мультимеричні молекули та методи Терапевтичне лікування. Будь-який метод їхнього виготовлення були описані у [Заявці США даного винаходу може містити метод лікування №08/437,533 (зареєстровано 9 травня 1995)], зміст розладів опосередкованих ФНП, що включає якої повністю включений тут у посиланнях. введення ефективної кількості складу або Зливні молекули імуннорецептора до ФНП, що фармацевтичного препарату, який містить є корисними в методах та складах даного принаймні одне анти-ФНП антитіло в клітину, 55 81743 56 тканину, орган, тварину або пацієнта, при потребі багаторазове введення. Належні дози відомі такої модуляції або лікування. Такий метод може практичуючим медпрацівникам та, звісно, додатково окрім того включати супутнє залежатимуть від окремого хворобливого стану, призначення або комбіновану терапію для певної активності препарату, що вводиться, та лікування таких імунних захворювань, де окремого пацієнта, якому проводиться лікування. призначення вищевказаного принаймні одного В деяких випадках, для досягення бажаної анти-ФНП антитіла, певної його частини чи терапевтичної кількості може бути необхідним варіанта, окрім того включає призначення до, під повторне введення, тобто, повторні індивідуальні час та/або після принаймні одного, що обране з введення окремо дози, що моніторується чи принаймні з одного антагоніста ФНП (напр., але не вимірюється, де індивідуальні введення обмежуючись, антитілом до ФНП або фрагментом, повторюються доки не буде досягнуто бажана розчинний рецептор до ФНП або фрагмент, їхні добова доза або ефект. зливні протеїни або малу молекулу антагоніста Бажані дози можуть додатково включати 0,1, ФНП), антиревматичного засобу (напр., 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, метотрексат, ауранофін, ауроглюкоза, азатіоприн, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, етанерсепт, натрія тіомалат золота, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, гідроксихлорохіна сульфат, лефлуномід, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, сульфасалазин), м'язового релаксанта, наркотиків, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, нестероїдних протизапальних препаратів (НПЗП), 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, анальгетиків, анестетиків, седативного препарату, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, місцевого анестетика, нервово-м'язового 94, 95, 96, 97, 98, 99 та/або 100-500мг/кг/введення блокатора, антимікробного засобу (напр., або будь-який їхній діапазон, значення або аміноглікозид, антигрибковий препарат, фракція, або до досягнення сивороткової антипаразитарний препарат, антивірусний концентрації 0,1, 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,5, 1,9, 2,0, препарат, карбапенем, цефалоспорин, 2,5, 2,9, 3,0, 3,5, 3,9, 4,0, 4,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, фторхінолон, макролід, пеніцилін, сульфонамід, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, тетрациклін, інший антимікробний препарат), 10,5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 20, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, антипсоріатичного засобу, кортикостероїда, 13,9, 14,0, 14,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, анаболічного стероїда, діабетологічного 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11, препарата, мінерала, харчового додатку, 11,5, 11,9, 12, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14, 14,5, тиреоідного препарату, вітаміна, кальцій15, 15,5, 15,9, 16, 16,5, 16,9, 17, 17,5, 17,9, 18, 18,5, залежного гормону, антидіарейного засобу, 18,9, 19, 19,5, 19,9, 20, 20,5, 20,9, 21, 22, 23, 24, 25, протикашльового препарату, антиеметика, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, противиразкового препарату, послаблюючого, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, антикоагулянта, еритропоетина (напр., епоетин 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, альфа), філграстима (напр., G-CSF, Нейподжен), 4500 та/або 5000μΓ/мл сивороткової концентрації сарграмостиму (напр., GM-CSF, Лейкін), імунізації, на одноразове або багаторазове введення, або імуносупресивного засобу (напр., базиліксимаб, будь-який їхній діапазон, значення або фракцію. циклоспорин, даклізумаб), гормону роста, Альтернативно, доза, що призначається, може гормоно-замісної терапії, модулятора змінюватися залежно від відомих факторів, таких естрогенових рецепторів, мудріатичних, як фармакодинамічні характеристики окремих циклоплегічних, алкілуючих засобів, препаратів та їх способі і шлях введення; вік, антиметаболітиків, інгібіторів мітозу, здоров'я та вага реципієнт; природа та радіоізотопних засобів, антидепресантів, вираженість симптомів, тип супутнього лікування, антиманічних препаратів, антипсихотиків, частота лікування та бажаний ефект. Зазвичай анксиолітиків, снодійних, симпатоміметиків, доза активного інгредієнта може бути від стимуляторів, донезепілу, такрину, астматичних приблизно 0,1 до 100 міліграм на кілограм ваги препаратів, бета-агоністів, інгаляційних стероїдів, тіла. Як правило 0,1-50, та бажано 0,1-10 міліграм інгібіторів лейкториєну, метилксантину, кромоліну, на кілограм на введення або у формах з адреналіну або аналогу, дорнази альфа уповільненим вивільненням є ефективною для (Пульмозим), цитокіна або цитокінового досягнення бажаних результатів. антагоніста або антитіла. Як один із прикладів, лікування людей та Зазвичай, лікування патологічних станів тварин може бути забезпечено в якості здійснюється за допомогою введення ефективної одноразового або періодичного введення кількості або дози препарату принаймні одного принаймні одного антитіла даного винаходу у дозі анти-ФНП антитіла, що всього, в середньому, в від 0,1 до 100мг/кг, такій як 0,5, 0,9, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, діапазоні від принаймні приблизно 0,01 до 500 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, міліграм принаймні одного анти-ФНП антитіла на 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, кілограм ваги пацієнта на дозу, та бажано від 70, 80, 90 або 100мг/кг, на добу в принаймні один принаймні приблизно 0,1 до 100 міліграм із днів 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, антитіло/кілограм ваги пацієнта на одноразове або 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, багаторазове введення, залежно від певної 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 або 40, або активності, що міститься в даному препараті. альтернативно чи додатково у принаймні один із Альтернативно, ефективна сивороткова тижнів 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, концентрація може містити 0,1-5000mг/мл 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, сивороткової концентрації на одноразове чи 57 81743 58 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 або 52, або розчин Рінгера, фізіологічний розчин тощо; в альтернативно чи додатково, у принаймні один із якості звичайного розчинника, або суспендуючого 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, розчинника, може бути використане стерильне 18, 19 або 20 років, або будь-яка їхня комбінація, з масло, що швидко невипаровується. З цією метою, використанням одноразового, інфузійного або може використовуватися будь-який тип повторного введення. нелетючого масла та жирної кислоти, включаючи Форми дозування (препарату), що підходять природні або синтетичні або напівсинтетичні жирні для внутрішнього введення, загалом містять від масла чи жирні кислоти; природні або синтетичні приблизно 0,1 міліграма до приблизно 500 або напівсинтетичні моно- чи ди- чи тригліцериди. міліграм активної речовини на одиницю або Парентеральне введення відомо в науці і включає, контейнер. В цих фармацевтичних препаратах але не обмежується, стандартні засоби активний інгредієнт зазвичай буде присутнім у ін'єкційного введення, газопресові безголокові кількості від приблизно 0,5-99,999% ваги ін'єкційні пристрої, як це описано в [Патенті США ґрунтуючись на загальній вазі препарату. №5,851,198], та лазерний перфораторний Для парентерального введення антитіло може пристрій, як це описано в [Патенті США бути виготовлене в якості розчину, суспензії, №5,839,446], що повністю включені тут у емульсії або ліофілізованого порошка у поєднанні, посиланнях. або окремо, з фармацевтично прийнятним Альтернативний пристрій парентеральним розчинником. Прикладами таких Винахід окрім того відноситься до введення розчинників є вода, фізіологічний розчин, розчин принаймні одного анти-ФНП антитіла за Рінгера, розчин декстрози та 1-10% людський допомогою парентерального, підшкірного, сиворотковий альбумін. Можуть також внутрішньом'язового, внутрівенного, використовуватися ліпосоми та неводні внутрісуглобового, інтарбронхіального, розчинники, такі як фіксовані масла. Розчинник інтраабдомінального, інтракапсулярного, або ліофілізованний порошок може містити інтрахрящевого, інтракавітарного, додатки, що підтримують ізотонічність (напр., інтрацеліального, інтрамозочкового, натрію хлорид, маннітол) та хімічну стабільність інтрацеребровентрикулярного, в товстий (напр., буфери та консерванти). Препарат кишковик, інтрацервікального, інтрагастрального, стерилізується за допомогою відомих або внутріпечінкового, внутріміокардіального, належних методик. інтраостеального, внутрітазового, Належні фармацевтичні носії [описані у інтраплеврального, інтрапростатового, більшості останніх видань Remington's внутрілегеневого, інтраректального, Pharmaceutical Sciences, A. Osol], стандартному внутріниркового, інтраспінального, базовому підручнику в цій галузі. інтрасиновіального, інтраторакального, Альтернативне введення внутріматкового, інтравезикального, болюсного, Згідно з даними винаходом можуть вагінального, ректального, букального, використовуватися багато відомих та розроблених сублінгвального, інтраназального або способів для введення фармацевтично трансдермального шляхів. Препарат принаймні ефективних кількостей принаймні одного антиодного анти-ФНП антитіла може бути ФНП антитіла. В той час як в даному винаході приготовлений для використання для використано легеневе введення, інші способи парентерального (підшкірного, внутрім'язового або введення можуть використовуватися згідно з внутрівенного) чи будь-якого іншого введення, даним винаходом з належними результатами. зокрема у формі рідинних розчинів або суспензії; ФНП антитіла даного винаходу можуть бути для використання при вагінальному або доставленії за допомогою носія, в якості розчину, ректальному введенні, зокрема у напівтвердих емульсії, колоїда або суспензії, або в якості сухого формах, таких як, але не обмежуючись, форма порошку, з використанням будь-якого з порошку, назальних крапель чи аерозолю або різноманіття пристроїв та методів, що підходять певних препаратів; або трансдермально, таких як, для введення за допомогою інгаляції або інших але не обмежуючись, гель, мазь, лосьйон, способів, описаних тут або відомих науці. суспензія або система пластырного введення с Парентеральні препарати та введення хімічними поліпшувачами, такими як диметил Препарати для парентерального введення сульфоксид, для того щоб модифікувати структуру можуть містити в якості звичайних додатків воду шкіри, чи збільшити концентрацію препарата у або фізіологічний розчин, поліалкілен гліколь, трансдермальному пластирі [Junginger, et al. В такий як поліетилен гліколь, масла рослинного "Drug Permeation Enhancement"; Hsieh, D. S., Eds., походження, гідрогеновані нафталіни тощо. Водні pp.59-90 (Marcel Dekker, Inc. New York 1994], або масляні суспензії для ін'єкцій можуть бути повністю включений тут у посиланнях), або з приготовлені при використанні відповідних оксидуючими препаратами, що дають змогу емульгаторів або зволожувачів та суспендуючих нанесення препарату, який містить протеши та засобів, згідно з відомими методами. Препарати пептиди, на шкіру [WO 98/53847], або нанесення для ін'єкцій можуть бути нетоксичними, такими, що електричних полів для створення тимчасового не призначаються перорально, розчиненими шляху транспортування, таких як електропорація, засобами, такими як водний розчин або або для підвищення проникнення заряджених стерильний розчин для ін'єкцій або суспензія у препаратів через шкіру, таких як іонтофорез, або розчиннику. В якості придатного для вжитку нанесення ультразвука, такий як сонофорез розчинника дозволено використовувати воду, [Патенти США №№4,309,989 та 4,767,402] 59 81743 60 (вищенаведені публікації та патенти повністю допомогою прогонки під тиком суспензії чи розчину включені тут у посиланнях). принаймні одного анти-ФНП антитіла через сопло. Пульмональне/назальне введення Розмір та конфігурація сопла, тиск та швидкість Для пульмонального введення, бажано, щоб поставки рідини можуть підбиратися для препарат принаймні одного анти-ФНП антитіла, досягнення бажаного виходу та розмірів часток. подавався з розміром частинок, який ефективний Електроспрей може бути виготовлений, для досягнення нижніх дихальних шляхів легенів наприклад, за допомогою електричного поля у або синусів. Згідно з даними винаходом, поєднанні з прогонкою через капіляр або сопло. принаймні одне анти-ФНП антитіло може бути Частинки препарату протеїну принаймні одного доставлене за допомогою різноманіття анти-ФНП антитіла, що доставляються спреєром, інгаляційних або назальних пристроїв, що відомі в переважно мають розмір менше, ніж приблизно науці для введення терапевтичних препаратів за 10μΜ, бажано у діапазоні від приблизно 1μΜ до допомогою інгаляції. Ці пристрої, що спроможні приблизно 5μΜ, і найбажаніше від приблизно 2μΜ відкладати аерозольні препарати у порожнині до приблизно 3μΜ. синуса або альвеолах пацієнта, включаючи Препарати протеїну принаймні одного антиінгалятори, які відмірюють дозу, небулайзери, ФНП антитіла, що підходить для використання зі сухопорошкові генератори, спреєри тощо. Інші спреєром, зазвичай включають протеїновий склад пристрої, що підходять для проведення антитіла у водному розчині в концентрації від пульмонального або назального введення антитіл, приблизно 0,1мг до приблизно 100мг протеїнового також відомі в науці. Всі такі пристрої можуть складу принаймні одного анти-ФНП антитіла на мл використовувати препарати, які підходять для розчину або мг/г, або будь-який їхній діапазон чи введення диспенсованого антитіла в аерозолі. Такі значення, напр., але не обмежуючись, 0,1, 0,2, 0,3, аерозолі можуть складатися як з розчинів (як 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, водних, так і неводних), таких із твердих частинок. 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, Інгалятори, що відмірюють дозу, по типу 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 або дозуючого інгалятора Ventolin®, зазвичай 100мг/мл чи мг/г. Препарат може включати такі використовують пропелентний газ а потребують компоненти, як додатки, буфер, ізотонічний запуску під час вдиху [Див., напр., WO 94/16970, компонент, консервант, сурфактант та, бажано, WO 98/35888]). Сухопорошкові інгалятори по типу цинк. Препарат також може включати додаток або Turbuhaler™ (Astra), Rotahaler® (Glaxo), Diskus ® компонент для стабілізації протеїнового складу (Glaxo), інгалятор Spiros™ (Dura), пристрої, що антитіла, такий як буфер, пом'якшуючий продаються Inhale Therapeutics, та порошковий компонент, основний протеїн або карбогідрат. інгалятор Spinhaler® (Fisons), використовують Основний протеїн, що корисний при підготовці дихальний запуск змішанного порошка [US протеїнового складу антитіла, включає альбумін, 4668218 Astra, ЕР 237507 Astra, WO 97/25086 протамін тощо. Типові карбогідрати, які корисні Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5458135 Inhale, WO при приготуванні протеїнового складу антитіла, 94/06498 Fisons, повністю включені тут у включають сахарозу, манітол, лактозу, трегалозу, посиланнях]. Небулайзери (розпилювачі) по типу глюкозу тощо. Протеїновий склад антитіла AERx™ Aradigm, небулайзер Ultravent® препарату також може включати сурфактант, який (Mallinckrodt) та небулайзер Acorn II® (Marquest може зменшувати або попереджати поверхнеMedical Products) [US 5404871 Aradigm, WO індуковану агрегацію протеїнового складу 97/22376], вищенаведені посилання повністю антитіла, що спричинена атомізацією розчину при включені тут у посиланнях, продукують аерозолі з утворенні аерозолю. Можуть застосовуватися розчинів, тоді як дозуючі інгалятори, різноманітні традиційні сурфактанти, такі як ефіри сухопорошкові інгалятори тoщо генерують та алкоголі поліексиетиленових жирних кислот і аерозолі з малих частинок. Ці специфічні приклади ефіри поліоксиетилен сорбітолових жирних комерційно доступних пристроїв призначені бути кислот. Кількості загалом перебувають у діапазоні представниками специфічних пристроїв, що від 0,001 до 14% від ваги препарата. Особливо підходять для застосування даного винаходу, та бажаними сурфактантами для мети даного не є обмеженням рамок даного винаходу. Бажано, винаходу є поліоксиетилен сорбітан моноолеат, щоб препарат, який містить принаймні одне антиполісорбат 80, полісорбат 20 тощо. Додаткові ФНП антитіло поставлявся у вигляді компоненти відомі науці для утворення протеїну, сухопорошкового інгалятора або спреєра. Існують такого як антитіла до ФНП, або певні їхні частини декілька бажаних характеристик інгаляційного чи варіанти, можуть також включатися в препарат. пристрою для введення принаймні одного антитіла Введення препарату антитіла до ФНП за даного винаходу. Наприклад, введення за допомогою небулайзера допомогою інгаляційного пристрою має переваги в Протеїновий склад антитіла може бути плані надійності, відтворюваності та акуратності. введено за допомогою небулайзера, такого як Інгаляційний пристрій може додатково доставляти потоковий небулайзер або ультразвковий малі сухі частинки, напр. менші, ніж приблизно небулайзер. Зазвичай, в потоковому небулайзері, 10μΜ, бажано приблизно 1-5μΜ, для хорошого використовується джерело скомпресованого проникнення через дихальні шляхи. Введення повітря для створення високошвидкісного потоку антитіла до ФНП. повітря через отвір. По тому як газ поширюється Препарати у вигляді спрею за сопло, створюється ділянка низького тиску, який Спрей, що включає препарат протеїну витягує розчин протеїнового складу антитіла через антитіла до ФНП, може бути виготовлений за капілярну трубку, що під'єднана до резервуара з