2-(3-бензил-8-пропілксантин-7-іл)-n’-[(1e,2e)-2-хлор-5-фторобензиліден]-ацетогідразид, який виявляє протигрибкову дію

Реферат: 2-(3-Бензил-8-пропілксантин-7-іл)-N'-[(1Е,2Е)-2-хлор-5-фторобензиліден]-ацетогідразид, UA 111652 U (12) UA 111652 U F N HN Cl O N HN O N O N який виявляє протигрибкову дію. UA 111652 U 5 10 15 20 25 Корисна модель належить до біологічно активних сполук і може бути використана у фармації та медицині. У всьому світі спостерігається розповсюдження грибкових інфекцій (мікозів). Головною причиною росту числа захворювань, викликаних мікроміцетами, є поширення резистентності у збудників до існуючих лікарських засобів - антимікотиків. Це обумовлюється як тривалим та частим застосуванням останніх, так і невиправданим використанням сильних антибіотиків, що мають побічну дію (кандидомікоз), особливо, при самолікуванні (Противогрибковая активность новых производных [(5-гидроксиметил-1Н-имидазол-4-ил) тио] уксусных кислот / Н.Д. Яковичук, С.Е. Дейнека, В.А. Чорноус, А.А. Паламар // Современный научный вестник. - 2013. - № 53 (192). - С. 99-103). Прискорює розвиток резистентності також те, що більшість протигрибкових препаратів представляють собою похідні одного класу сполук (в першу чергу полієнів та азолів, що впливають на головний компонент мембрани грибів - ергостерол). До того ж для більшості антимікотиків характерна висока токсичність (Исследование противогрибковой активности нових четвертичных солей и гидробромидов гетероциклических производных 2-хинолона / О.И. Гаврилюк, О.В. Скрипская, С.Е. Дейнека, П.И. Ягодинец // Современный научный вестник. 2014. - № 43 (239). - С. 28-32). Виходячи з вищесказаного, актуальним залишається синтез нових протигрибкових засобів, що проявляють специфічну активність по відношенню до патогенних грибів. Перспективним є скринінг сполук синтетичного ґенезу, які раніше в даному фармакологічному напрямі в клінічній практиці не застосовувались (Максимов Ю.М. Перспективи розробки антимікробних засобів на основі нових синтетичних сполук / Ю.М. Максимов, Н.О. Вринчану // Мікробіол. журн. - 2010. - Т. 72, № 1. - С. 52-57). Прототипом за структурою сполуки, що заявляється, може служити гідразид 8-Nбензиламінотеофілініл-7-ацетатної кислоти (Пат. 66127 Україна, МПК C07D 473/00. Гідразид 8М-бензиламінотеофілініл-7-ацетатної кислоти, що виявляє антиамнестичну та протигіпоксичну дії / Юрченко Д.М., Бєленічев І.Ф., Александрова К.В., Романенко М.І., Бухтіярова Н.В.; заявник та патентовласник Запорізький держ. мед. університет та автори. - № и201106739; заявл. 30.05.2011; опубл. 26.12.2011, Бюл. № 24). NH2 HN O N O 30 35 40 O N NH N N Сполука, що заявляється, відрізняється від прототипу відсутністю замісника в 1 положенні ксантинового біциклу, замісниками у 3 та 8 положеннях та наявністю заміщеного ацетогідразидного залишку в положенні 7. У прототипу протигрибкова активність не вивчалась. На відміну від ністатину (еталону порівняння за протигрибковою активністю) сполука, що заявляється, виявляє сильнішу дію на штам дріжджоподібних грибів роду кандида - Candida albicans (ATCC 885-653). В основу корисної моделі поставлена задача створення нових менш токсичних препаратів протигрибкової дії, які після поглиблених фармакологічних досліджень можуть бути використані в медичній практиці. Поставлена задача вирішується синтезом 2-(3-бензил-8-пропілксантин-7-іл)-N'-[(1Е, 2Е)-2хлор-5-фторобензиліден]-ацетогідразиду: 1 UA 111652 U Cl N HN O O O N HN F N N . Одержують сполуку, що заявляється, стадійним синтезом, який складається з наступних етапів (схема 1). Схема 1 O O O NH HN NaHCO3 , DMF 1 5 NH2 .NH2 N N O O N HN Cl O N N O O 2 F HN NH2 F O HN O N HN O O N N 15 N HN Cl O 3 10 N O O Cl N N 4 . Приклад 1. Етап 1. Синтез 3-бензил-8-пропілксантину (1). 0,1 моль 5,6-діаміно-1-бензил-2,4(1Н, 3Н)піримідиндіону розчиняють у 60 мл бутанової кислоти та кип'ятять протягом 3 год. Розчин охолоджують та виливають у воду. Осад, що утворився, відфільтровують, промивають водою та сушать при 80 °C. Потім додають 200 мл 1Н розчину NaOH та кип'ятять 2,5 год. Розчин фільтрують в гарячому вигляді. Показник рН доводять до 4,0 розчином H2SO4. Осад, що утворився, відфільтровують та сушать при 100 °C. Вихід 74 %. Т.пл. 267-269 °C. C15H16N4O2. Знайдено, %: С, 63,89; Н, 5,64; N, 19,54. Розраховано, %: С, 63,37; Н, 5,67; N, 19,71. ПМР-спектр (δ-шкала, м.ч., розчинник ДМСО-d6): 13,12 (1Н, с, 2 UA 111652 U 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 1 3 8 N H), 11,07 (1H, с, N H), 7,32-7,15 (5Н, м, СНаром), 5,07 (2Н, с, N -CH2), 2,58 (2Н, т, С -СН2), 1,65 8 (2Н, м, С -С-СН2), 0,84 (ЗН, т, СН3). Етап 2. Синтез н-пропілового естеру 3-бензил-8-пропілксантиніл-7-ацетатної кислоти (2). До 0,01 моль сполуки 1 додають 15мл ДМФА і 0,011 моль натрій гідрокарбонату, та нагрівають протягом 15 хв. Після цього додають 0,011 моль н-пропілового естеру хлороацетатної кислоти та кип'ятять розчин протягом 2 год. Фільтрують в гарячому вигляді, фільтрат охолоджують, виливають в 50 мл води. Осад, що утворився, відфільтровують, промивають водою, сушать при 70 °C та перекристалізовують із н-пропанолу. Вихід 71 %. Т.пл. 75-77 °C. C20H24N4O4. Знайдено, %: С, 62,09; Н, 6,26; N, 14,45. Розраховано, %: С, 62,49; Н, 6,29; 1 N, 14,57. ПМР спектр (δ-шкала, м.ч., розчинник ДМСО-d6): 11,02 (1H, с, N Н), 7,36-7,11 (5Н, м, 7 3 8 СНаром), 5,14 (2Н, с, N -CH2), 5,02 (2Н, с, N -CH2), 4,01 (2Н, т, О-СН2), 2,54 (2Н, т, С -СН2), 1,67 8 (2Н, м, О-С-СН2), 1,53 (2Н, м, С -С-СН2), 0,89 (6Н, т, СН3). Етап 3. Синтез гідразиду 3-бензил-8-пропілксантиніл-7-ацетатної кислоти (3). Суспензію 0,01 моль сполуки 2 в 30 мл н-пропанолу нагрівають 10 хв., додають 5 мл гідразиногідрату. Утворюється істинний розчин, який кип'ятять протягом 30 хв. Після охолодження в осад випадають кристали гідразиду 3, які відфільтровують, промивають водою, сушать при 80-85 °C та перекристалізовують із н-пропанолу. Вихід 89 %. Т.пл. 249-251 °C. C17H20N603. Знайдено, %: С, 57,29; Н, 5,64; N, 23,55. Розраховано, %: С, 57,29; Н, 5,66; N, 23,58. 1 ПМР спектр (δ-шкала, м.ч., розчинник ДМСО-d6): 11,13 (1Н, с, N H), 8,24 (1Н, с, NH), 7,32-7,17 7 3 8 (5Н, м, СНаром), 5,06 (2Н, с, N -СН2), 4,99 (2Н, с, N -CH2), 4,55 (2Н, д, NH2-N), 2,61 (2Н, т, С -СН2), 8 1,60 (2Н, м, С -С-СН2), 0,87 (3Н, т, СН3). Етап 4. Синтез 2-(3-бензил-8-пропілксантин-7-іл)-N'-[(1Е, 2Е)-2-хлор-5-фторобензиліден]ацетогідразиду (4). 0,01 моль сполуки 3 розчиняють при нагріванні в 70 мл водного діоксану (1:1). До істинного розчину додають 3 мл оцтової кислоти та 0,011 моль 2-хлор-5-фторобензальдегіду й нагрівають при 80 °C до початку утворення осаду. Після охолодження осад, що утворився, відфільтровують, промивають водою та сушать при 80-85 °C. Для аналізу отриману речовину перекристалізовують із етанолу. Вихід 79 %. Т.пл. 246-248 °C. C22H18ClFN6O3. Знайдено, %: С, 57,89; Н, 4,43; N, 16,88. Розраховано, %: С, 58,01; Н, 4,46; N, 16,91. ПМР спектр (δ-шкала, м.ч., 1 розчинник ДМСО-dб): 11,97 (1Н, с, NH), 11,08 (1Н, с, N H), 8,21 (1Н, д, N=CH), 7,48-7,36 (2Н, м, 7 3 8 CHаром), 7,34-7,14 (6Н, м, СНаром), 5,39 (2Н, с, N -CH2), 5,04 (2Н, с, N -CH2), 2,63 (2Н, т, С -СН2), 8 1,66 (2Н, м, С -С-СН2), 0,91 (3Н, т, СН3). Приклад 2. Етап 1. Чутливість до патогенного штаму дріжджоподібних грибів роду кандида сполуки, що заявляється, виконували відповідно до методичних рекомендацій "Вивчення специфічної активності протимікробних лікарських засобів" (Метод, реком. / Ю.Л. Волянський, І.С. Гриценко, В. П. Широбоков [та ін.]; ДФЦ МОЗ України. - К., 2004. - 38 с.). Під час досліджень готували ряд двократних серійних розведень препарату у бульйоні Мюлер-Хінтона в об'ємі 1 мл, після чого додавали у кожну пробірку по 0,1 мл мікробної зависі 6 (10 м.к./мл). Мінімальну інгібуючу концентрацію (МІК) визначали за відсутністю видимого росту в пробірці з мінімальною концентрацією препарату, мінімальну фунгіцидну концентрацію (МФ цК) - за відсутністю росту після висіву з прозорих пробірок. Як розчинник сполук в дослідженнях використовували диметилсульфоксид, вихідні розчини доводили до концентрації 1 мг/мл. Як стандартний тест-штам було взято Candida albicans (ATCC 885-653). Тест-штам отримано з баклабораторії ДУ "Запорізький ОЛЦДСЕСУ" (Запорізький обласний лабораторний Центр держсанепідслужби України"). Як еталон порівняння було використано препарат "Ністатин", визначення активності якого проводили за аналогічним методом (табл.). Таблиця Протигрибкова активність сполуки, що заявляється, in vitro Сполука Ністатин Сполука, заявляється 50 Назва штаму патогенної мікрофлори МІК in vitro, мг/л С. albicans ATCC 885-653 25 що С. albicans ATCC 885-653 12,5 МФцК in vitro, мг/л 50 25 Дослідження протигрибкової активності шляхом двократних серійних розведень препарату у бульйоні Мюлер-Хінтона показало, що синтезована сполука виявляє більш виражену фунгістатичну та фунгіцидну дію по відношенню до штаму дріжджоподібних грибів роду кандіда Candida albicans, аніж еталонний препарат - "Ністатин". 3 UA 111652 U Таким чином, наведені вище дані свідчать про те, що сполука, яка заявляється, має більш високу активність у порівнянні з еталоном та після поглиблених фармакологічних досліджень може бути використана як протигрибковий засіб в медичній практиці. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 2-(3-Бензил-8-пропілксантин-7-іл)-N'-[(1Е,2Е)-2-хлор-5-фторобензиліден]-ацетогідразид, F N HN Cl O N HN O N O N який виявляє протигрибкову дію. 10 Комп’ютерна верстка О. Рябко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4