Спосіб визначення імунопротекторної дії препарату стимпо проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди globodera rostochiensis (woll.)

Реферат: Спосіб визначення імунопротекторної дії препарату СТИМПО проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.), що включає обробку бульб картоплі препаратом, зараження сортів картоплі глободерою в лабораторних умовах, причому реакцію рослин на зараження збудником хвороби після обробки препаратом визначають на 20 добу методом визначення активності окисно-відновних ферментів, що дозволяє визначити імунопротекторну дію препарату. UA 119825 U (12) UA 119825 U UA 119825 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі фітопатології, зокрема до визначення стійкості картоплі до картопляних нематод Globodera. У фітопатології відомі способи визначення дії препаратів проти картопляних нематод з метою отримання високих врожаїв. Останньою тенденцією сучасного насінництва картоплі є використання елітних сортів даної культури. Вони відпрацьовані відповідно їх призначення і відрізняються між собою [3, 6]. Найбільш близьким аналогом для даної корисної моделі є визначення ефективності дії препаратів проти хвороб (прототип) [5]. Спосіб, що вирішується у прототипі, полягає в тому, що включає в себе обробку бульб картоплі препаратом, зараження зразків картоплі золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою в лабораторних умовах на штучно створеному інфекційному фоні та визначення ефективності їх дії препарату проти глободери. Згадані способи та спосіб-прототип мають такі недоліки. 1. Вони є трудомісткими. 2. Довготривалими (вегетаційний період розвитку картоплі) 3. Отримані результати не розкривають механізм імунопротекторної дії препаратів. Дослідженнями науковців УкрНДСКР ІЗР НААН встановлена стимулювальна дія препарату СТИМПО, тому було поставлено задачу вивчити їх імунопротекторну дію за зараження рослин картоплі золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою Globodera rostochiensis (Woll.). Задача вирішується тим, що у запропонованому способі перед зараженням бульб картоплі глободерою їх обробляють 0,05 % розчином препарату СТИМПО та після 20 діб після обробки заражених сортів картоплі патогеном методом визначення активності окисно-відновного ферменту пероксидази визначають імунопротекторну дію препарату проти збудника хвороби. 1. Запропонований спосіб не трудомісткий. 2. Спосіб дозволяє визначити імунопротекторну дії препарату проти нематоди на 20 добу після зараження збудником хвороби. Отже, спосіб, що заявляється, відповідає критерію корисної моделі "новизна" та "суттєві відміни". Приклади здійснення способів Приклад 1 (прототип). Для визначення імунопротекторної дії препарату СТИМПО (вміщує продукти біотехнологічного культивування грибів-мікроміцетів з кореневої системи женьшеню і продуктів життєдіяльності бактерій Streptomyces Avermetilis - аверсектину) проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) бульби з паростками сортів картоплі Поліська рожева, Лорх та Лугівська обробляли 0,05 % розчином до зараження паростків бульб картоплі цистами глободер. Після обробки препаратом їх висаджували у лабораторних умовах у 3 контейнери з зараженим субстратом, який вміщував 120 цист/100 см . Як контроль використовували необроблені зразки картоплі. Протягом 60 діб оброблені та контрольні зразки картоплі поливали, розрихлювали і потім проводили облік їх ураження глободерою [2]. Визначення ефективності дії препаратів проводили за формулою: Ед=100×(Рк-Рд/Рк), де Рк - показник розвитку хвороби у контролі, відповідно, до обробки; Рд - показник розвитку хвороби у досліді після обробки. Розрахунки проводились згідно з "Методики випробування і застосування пестицидів" [5]. Статистичну обробку результатів досліджень проводили за Масловим Ю.І. [4]. На основі проведених досліджень встановлено ефективність біопрепарату СТИМПО для обробки бульб картоплі проти картопляної нематоди. Використання препарату СТИМПО в нормі витрати 20 мл/га на трьох сортах (Лорх, Поліська рожева та Лугівська) сприяло зниженню розвитку хвороби до 30 % (для сортів Лорх, Поліська рожева та Лугівська. При цьому ефективність використання імунопротектора склала 70 % для всіх досліджуваних сортів. (табл. 1-3, додатки 1-3). При збільшенні норми імунопротектора до 40 та 50 мл/га розвиток хвороби зменшився відповідно до 20 % у сортів Лорх, Поліська рожева та Лугівська, ефективність використання препарату склала 80 % (табл. 1-3, фіг.). Корінці сорту картоплі Лугівська, усіяні цистами золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди. Приклад 2 (спосіб, що заявляється). Після обробки бульб картоплі препаратом СТИМПО та їх зараження золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою, як за прикладом 1 (прототип), із заражених паростків картоплі сортів Лорх, Поліська рожева та Лугівська через 20 діб виділяли білковий 1 UA 119825 U 5 10 15 20 25 30 35 екстракт для визначення активності окисно-відновного ферменту пероксидази, який рахується "аварійним ферментом" [1], що миттєво реагує на будь-який стресовий чинник (температура, вологість, дія патогенів) за методом Починка Б.П. [7]. Для цього із 5 г паросткової частини заражених збудником глободери виділяли білковий екстракт шляхом розтирання з 5 мл трис-боратним буфером (рН 7,8) та центрифугуванням за 6000 об./хв.. на протязі 10 хвилин. Для визначення пероксидазної активності 1 мл екстракту інкубували з 1 мл 0,1 % розчином перекису водню та фарбували 0,01 % розчином бензидину на протязі 5-10 хвилин. Визначали величину екстинкції на спектрофотометрі "Ломо-46" за 600 нм. Активність пероксидази визначали за формулою: А=Е К/t (у мкмоль/1 г хв). У результаті проведених досліджень активність пероксидази на 20 добу після зараження глободерою у оброблених препаратом СТИМПО сортів картоплі Лорх, Поліська рожева та Лугівська склала 0,39-0,42 мкмоль/1 г хв. У контрольних сортів картоплі активність пероксидази коливалась у межах 0,59-0,71 мкмоль/1 г хв. (табл. 4, додаток 5). Таким чином, методом визначення активності пероксидази на протязі 20 діб можна визначити імунопротекторну дію препарату СТИМПО проти картопляної нематоди: чим вища активність пероксидази, тим більший відсоток ураження рослин картоплі патогеном, і, відповідно менша ефективність дії імунопротектора і навпаки. Запропонований спосіб визначення імунопротекторної дії препарату СТИМПО було підтверджено експериментальною перевіркою, яка здійснювалась при зараженні сортів картоплі, отриманих з Інституту картоплярства НААН. Джерела інформації: 1. Витол И.С. Использование пероксидазы и глютомат дегидрогеназы в качестве биохимических маркеров в биотехнологических исследованиях на картофеле / Витол И.С., Мелик-Саркисов B.C., Аветисов В.Н., Дубровский И.Г // Доклады ВАСХНИЛ. 1989. - № 10. - С. 14-15. 2. Виявлення та ідентифікація картопляних нематод Globodera. / Зеля А.Г., Гунчак В.М., Сухарева Р.Д., Пилипенко Л.А., Сігарьова Д.Д. 3. Сігарьова Д.Д. Золотиста картопляна нематода в Україні і боротьба з нею / Д.Д. Сігарьова, Т.Г. Мірошник // Вісник аграрної науки. - 1994. - № 5. - С. 25-31. 4. Маслов Ю.И. Статистическая обработка данных биохимических исследований // Методы биохимического анализа растений. / Ю.И. Маслов. Л., 1986. - С. 163-178. 5. Методики випробування і застосування пестицидів / С.О. Трибель, Д.Д. Сігарьова, М.П. Секун, О.О. Іващенко та ін. За ред. проф. С.О. Трибеля. - К. - Світ. - 2001. - 448 с. 6. Пилипенко Л.А. Нематодостійкі сорти картоплі в системі протинематодних заходів: перспективи та проблеми / Л.А. Пилипенко // Захист і карантин рослин: міжвід. темат. наук. зб. 2002. - № 48. - С. 104-111. 7. Починок Б.П. Методы биохимических исследований // Б.П. Починок, М. - 1986. - 364 с. Таблиця 1 Визначення ефективності препарату СТИМПО проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) (лабораторний дослід 2016 р., сорт картоплі Лорх) Варіанти досліду Контроль (без препарату) Стимпо Стимпо Стимпо HIP05 Норма витрати Уражених рослин, Розвиток хвороби, % % Ефективність препарату, % 100 100 20 мл/га 40 мл/га 50 мл/га 30 20 20 3,0 30 20 20 1,5 70 80 80 1,5 40 2 UA 119825 U Таблиця 2 Визначення ефективності препарату СТИМПО проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) (лабораторний дослід, сорт картоплі Поліська рожева) Варіанти досліду Контроль (без препарату) Стимпо Стимпо Стимпо НІР05 Норма витрати Ураження рослин, Розвиток хвороби, % % Ефективність препарату, % 100 100 20 мл/га 40 мл/га 50 мл/га 30 20 20 3,5 30 20 20 1,5 70,0 80,0 80,0 1,5 Таблиця 3 Визначення ефективності препарату СТИМПО проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) (лабораторний дослід, сорт картоплі Лугівська) Варіанти досліду Контроль (без препарату) Стимпо Стимпо Стимпо НІР05 Норма витрати Ураження рослин, Розвиток хвороби, % % Ефективність препарату, % 100 100 20 мл/га 40 мл/га 50 мл/га 30 20 20 3,5 30 20 20 1,5 70,0 80,0 80,0 1,5 Таблиця 4 Визначення ефективності препарату СТИМПО та активності пероксидази сортів картоплі у процесі зараження золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою Globodera rostochiensis (Woll.) Сорти картоплі Лорх Поліська рожева Лугівська HIP05 Активність Активність пероксидази у пероксидази у контрольних рослин оброблених рослин (мкмоль/1 г хв.) (мкмоль/1 г хв.) (спосіб, що (спосіб, що заявляється) заявляється) 0,59 0,39 Уражених рослин, % Ефективність препарату, % (прототип) 20 80 20 80 0,67 0,41 20 3,5 80 3,5 0,71 0,05 0,42 0,06 5 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 Спосіб визначення імунопротекторної дії препарату СТИМПО проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.), що включає обробку бульб картоплі препаратом, зараження сортів картоплі глободерою в лабораторних умовах, який відрізняється тим, що реакцію рослин на зараження збудником хвороби після обробки препаратом визначають на 20 добу методом визначення активності окисно-відновних ферментів, що дозволяє визначити імунопротекторну дію препарату. 3 UA 119825 U Комп’ютерна верстка А. Крулевський Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4