Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин, що має гепатопротекторну дію, і засіб для лікування захворювань печінки “піфламін”

1. Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин, що має гепатопротекторну дію, шляхом екстракції подрібненої трави гороху посівного етанолом, упарювання, очищення хлористим метанолом з подальшим сушінням, відмінний тим, що екстракцію здійснюють 10-кратною кількістю 49-51% етанолу протягом 11-12 годин, екстракт упарюють до водного залишку, який очищують A (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ КОМПЛЕКСУ БІОЛОГІЧНО АКТИВНИХ РЕЧОВИН, ЩО МАЄ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНУ ДІЮ, І ЗАСІБ ДЛЯ ЛІКУВАННЯ З АХВОРЮВАНЬ ПЕЧІНКИ, ЯКИЙ ВМІЩУЄ ДАНИЙ КОМПЛЕКС "ПІФЛАМІН" 30879 човин, який має гепатопротекторну дію, шляхом екстракції сировини етанолом при певній сукупності операцій і технологічних параметрів, що дозволяє одержати сухий екстракт трави гороху посівного з вираженою гепатопротекторною дією, який може бути використаний при створенні нового засобу для лікування токсичних уражень печінки. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин, який має гепатопротекторну дію, шляхом екстракції подрібненої трави гороху посівного етанолом, упарюванням, очищенням хлористим метанолом з подальшим сушінням, додатково передбачено, що екстракцію здійснюють 10-кратною кількістю 49-51% етанолу протягом 11-12 годин. Екстракт упарюють до водного залишку, який очищають хлористим метанолом при співвідношенні водний залишок:хлористий метанол 3:4. Параметри пропонованого способу визначені дослідним шляхом. Даний спосіб дозволяє за допомогою відомих операцій, але здійснених у заданій послідовності при заданих параметрах, одержати з тієї же сировини, як і у випадку прототипу, комплекс біологічно активних речовин, який має нову виражену гепатопротекторну дію. Спосіб здійснюється таким чином. Подрібнену до розміру часток 2,5-3,0 мм суху траву гороху посівного екстрагують методом перколяції 10-кратною кількістю 49-51% етанолу протягом 11-12 годин. Одержаний екстракт упарюють під вакуумом при температурі 60-70°С до водного залишку, який очищають від речовин ліпофільної природи (знежирюють) при співвідношенні водний залишок:хлористий метанол 3:4 з подальшим сушінням до сухого залишку. Вихід готового продукту 10-12%. Одержаний сухий екстракт трави гороху посівного гігроскопічний порошок від світло-коричневого до коричневого кольору. Колір препарату залежить від ступеня зрілості сировини. Приклад 1. 50 кг подрібненої шляхом вальцювання до розміру часток 2,5-3,0 мм сухої трави гороху посівного екстрагують 500 л 50% етанолу у перколяторі протягом 12 годин зі швидкістю збору екстракту 20 л/год. Одержаний екстракт упарюють при t°=65°С під вакуумом у вакуум-циркуляційному апараті при розрідженні 550 мм.рт.ст. до обсягу водного залишку 30 л. Обробку водного залишку 40 л хлористого метилену проводять в реакторі з мішалкою в 3 етапи, додаючи послідовно до очищеної водної фази відповідно 15 л, 15 л, 10 л хлористого метилену з подальшим перемішуванням протягом 10 хвилин і відстоюванням протягом 4 годин на кожному етапі. Одержаний водний концернтрат сушать у розпилювальній су-шильці з температурою теплоносія на вході 160°С і на виході 80°С до сухого екстракту трави гороху посівного. Приклад 2. Гепатозахісні властивості сухого екстракту трави гороху посівного вивчалися на моделі гострого ураження печінки щурів, викликаного парацетамолом. Ураження печінки у щурів викликали введенням парацетамолу перорально у дозі 2,5 г/кг протягом 2 днів. Сухий екстракт трави гороху посівного як лікувальну субстанцію вводили внутрішньошлунково через 1 годину після введення парацетамолу. В сироватці крові, тканині печінки і в жовчі визначали біохімічні та функціональні показники. Результати досліджень гепатопротекторної дії сухого екстракту трави гороху посівного представлені у таблиці 1. Аналіз даних свідчить, що в умовах патології достовірно підвищується активність аспартатамінотрансферази (АсАТ), рівень малонового диальдегіду (МДА) в печінці, достовірно знижується інтенсивність жовчоутворення і вмісту жовчних кислот у жовчі щурів. Результати досліджень показують, що сухий екстракт трави гороху посівного чинить гепатозахисний ефект в умовах токсичного ураження печінки щурів парацетамолом. Одержані дані можуть служити обґрунтуванням рекомендації використання сухого екстракту трави гороху посівного як засобу для лікування захворювань печінки. Коло засобів з гепатозахисними властивостями досить велике, але у відповідності з сучасною класифікацією лікарських засобів з їх числа виділяють відносно невелику групу гепатопротекторів, які здійснюють вибіркову терапевтичну дію на печінку. Відомі лікарські засоби рослинного походження, які впливають на функцію печінки: фламін, конвафлавін, карсил, сілібор (Н.П. Елинов, Э.Г.Громова, Д.Н.Синев. Справочник по лекарственньм препаратам с рецептурой. - С.-Петербург, Гиппократ, 1994. - С. 358, 361). Фламін в якості активної речовини містить суму флавонів сухого концентрату безсмертника пісчаного. Використовується при хронічних холециститах і гепатохолецеститах. Конвафлавін містить суму флавоноїдів трави конвалії далекосхідної. Обидва ці відомі препарати мають переважно жовчогінну, а конвафлавін додатково спазмолітичну дію. До недоліків цих препаратів можна віднести обмеженість їх фармакологічної дії, зокрема, відсутність впливу на процеси перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) в печінці. Лікарський засіб карсил містить високоочищену суміш флавонолігнанів, виділену з розторопші плямистої, в якій активною речовиною є флавоноїдна субстанція сілімарин. Засіб має гепатопротекторну дію, впливає на процеси ПОЛ в печінці, нормалізує показники її функціонального стану. В якості препарату порівняння вибрано силібор, аналогом якого є карсил, як стандартний рослинний гепатопротекторний засіб вітчизняного виробництва. В таблетках силібору активною речовиною є сума флавоноїдів з плодів розторопші плямистої. Засіб має гепатопротекторну дію і застосовується при лікуванні гепатитів і цирозу печінки, має виражену антиоксидантну активність. Проте дефіцит номенклатури гепатопротекторів, а також збільшення кількості захворювань печінки різної етиології, потребують пошуку нових вітчизняних ефективних гепатопротекторів рослинного походження з рослин, які мають достатню вітчизняну сировинну базу. Задача передбачуваного винаходу полягає в створенні нового засобу для лікування захворювань печінки "Піфламін", що досягається шляхом використання сухого екстракту трави гороху посівного як активної речовини і певної сукупності до 2 30879 поміжних речовин, які складають ядро таблетки і обумовлюють ефективну гепатопротекторну дію засобу. В результаті пропонується новий вітчизняний лікарський препарат рослинного походження у формі таблеток, вкритих оболонкою, з дешевої доступної вітчизняної сировини, який матиме низьку вартість і може бути використаний як гепатопротектор. Вирішення поставленої задачі досягається тим, що в засобі для лікування захворювань печінки "Піфламін", що складається з ядра, яке містить активну речовину рослинного походження, та оболонки, передбачено, що як активну речовину ядро містить сухий екстракт трави гороху посівного, як допоміжні речовини - лактозу, карбоксиметилцелюлозу, кальцію стеарат, магнію стеарат, а оболонка складається з метилцелюлози, титану двоокису, тропеоліну О при співвідношенні компонентів (г): в ядрі: сухий екстракт трави гороху посівного 0,124-0,126 лактоза 0,230-0,240 карбоксиметилцелюлоза 0,031-0,033 кальція стеарат 0,0039-0,0041 магнія стеарат 0,0039-0,0041 в оболонці: метилцелюлоза 0,0119-0,0121 титану двоокис 0,0029-0,0031 тропеолін О 0,00049-0,00051. Гепатопротекторна фармакологічна дія сухого екстракту трави гороху посівного як активної речовини (субстанції) таблетованого препарату "Піфламін" обумовлена вмістом в першу чергу комолексу флавоноїдів, а також амінокислот, пептидів, цукрів. Сумарний вміст цих речовин у препараті становить не менше 16%. Фізичні властивості сухого екстракту трави гороху посівного не дають змоги одержати таблетку пресуванням самої лише активної речовини внаслідок її сипучості. До того ж дослідним шляхом встановлено, що біологічно активна доза сухого екстракту трави гороху посівного становить 0,125 г на таблетку. Тому при створенні таблетованої лікарської форми засобу "Піфламін" використані наповнювачі і допоміжні речовини, які поліпшують технологічні властивості маси для таблетування. Проте допоміжні компоненти, які входять до складу лікарської форми і постійно контактують з активною речовиною не є індиферентними формотворювачами, а чинять складний багатогранний вплив на лікарський засіб і його терапевтичний ефект. Оптимальний склад допоміжних речовин засобу "Піфламін" визначено дослідним шляхом, виходячи з умов одержання таблетованого препарату з максимальною терапевтичною активністю, мінімальною побічною дією та високими технологічними властивостями. Вибір лактози, карбометилцелюлози, кальцію та магнію стеарату як допоміжних речовин у даних межах було здійснено дослідним шляхом. Маса для таблетування/ що містить вибрані допоміжні речовини, є технологічною. В процесі таблетування вона не прилипає до прес-інструменту, рівномірно надходить до матриці пресу, утворює ядратаблетки з рівною поверхнею та цільними краями без пощерблених місць. Для визначення впливу допоміжних речовин на фармакологічну активність таблеток "Піфламін" була досліджена гепатопротекторна дія сухого екстракту трави гороху посівного (субстанції) і таблеток "Піфламін". В якості критерію гепатозахисного ефекту вибрана активність окислювального гідроксилювання амідопірину мікросом в умовах ураження печінки щурів ССl4 (гострий гепатит). Дані наведені в таблиці 2. Аналіз даних таблиці 2 свідчить, що, як субстанція, так і таблетки "Піфламін" вірогідно підвищують активність мікросом, тобто сприяють відновленню функціональної активності мікросом ураженої печінки, причому активність таблетки дещо перевищує активність субстанції. Таким чином, сукупність допоміжних речовин підсилює фармакологічну дію субстанції у складі таблетки. З метою зберігання в таблетованій лікарській формі засобу "Піфламін" високої біологічної активності і забезпечення розпадання таблетки у певному відділі шлунково-кишкового тракту для досягнення оптимальної терапевтичної дії, таблетки "Піфламін" вкриті кислоторозчинною оболонкою, склад якої вибрано дослідним шляхом. За винятком сухого екстракту трави гороху посівного гепатопротекторної дії, інгредієнти, що входять до складу ядра та оболонки таблеток нового засобу, відомі, але саме їх сукупність і кількісне співвідношення забезпечують одержання таблеток "Піфламін" з високими заданими фармакологічними та технологічними властивостями і не є відомими з доступних джерел інформації. Очевидним є ефект підсилення дії активної речовини (сухого екстракту трави гороху посівного) допоміжними речовинами, коли останні не лише зберігають активність субстанції, а й посилюють її, про що свідчать дані таблиці 2. Таблетки одержують таким чином. Сухий екстракт трави гороху посівного та допоміжні речовини - лактозу, карбоксицелюлозу, кальцію стеарат, магнію стеарат -подрібнюють, просівають, змішують у заданому співвідношенні. Таблетування одержаної маси проводять на таблеточному пресі шляхом прямого пресування. В результаті одержують таблетки-ядра, з гладенькою поверхнею без пощербленого краю. Для покриття ядер оболонкою готують спиртоводну суспензію інгредієнтів оболонки. В процесі покриття спирто-водна фаза випарюється. Оболонка таблетки має оранжевий колір. Винахід ілюструється прикладами. Приклад 3. Оптимальний склад засобу "Піфламін" на одну таблетку: Склад ядра (г): сухий екстракт трави гороху посівного 0,125 лактоза 0,235 карбоксиметилцелюпоза 0,032 кальцію стеарат 0,004 магнію стеарат 0,004 маса ядра 0,400. Склад оболонки (г): метилцелюлоза 0,012 титану двоокис 0,003 тропеолін О 0,0005 маса оболонки 0,0155. 3 30879 Маса таблетки без оболонки 0,4 г, маса талетки, вкритої оболонкою, 0,4155 г. Таблетки з зазначеним складом технологічні у виготовленні, максимально зберігають біологічну активність субстанції, розпадаються у заданому відділі шлунково-кишкового тракту. Приклад 4. Склад ядра (г): сухий екстракт трави гороху посівного 0,124 лактоза 0,235 карбоксиметилцелюпоза 0,033 кальцію стеарат 0,0039 магнію стеарат 0,0041 маса ядра 0,400. Склад оболонки (г): метилцелюлоза 0,012 титану двоокис 0,003 тропеолін О 0,0005 маса оболонки 0,0155. Таблетки наведеного складу мають виражену терапевтичну активність, технологічні у виготовленні. Приклад 5. Склад ядра (г): сухий екстракт трави гороху посівного 0,126 лактоза 0,233 карбоксиметилцелюпоза 0,033 кальцію стеарат 0,004 магнію стеарат 0,004 маса ядра 0,400. Склад оболонки (г): метилцелюлоза 0,012 титану двоокис 0,003 тропеолін О 0,0005 маса оболонки 0,0155. Як і у попередньому прикладі таблетки мають високі фармакологічні та технологічні властивості. Вміст інгредієнтів, зокрема, активної речовини, лежить у межах даних інтервалів. Приклад 6. Склад ядра (г): сухий екстракт трави гороху посівного 0,100 лактоза 0,230 карбоксиметилцелюпоза 0,031 кальцію стеарат 0,020 магнію стеарат 0,019 маса ядра 0,400. Склад оболонки (г): метилцелюлоза 0,0121 титану двоокис 0,0029 тропеолін О 0,0005 маса оболонки 0,0155. Таблетки даного складу не мають ефективної терапевтичної дії внаслідок недостатньої дози активної речовини, бо визначена оптимальна доза сухого екстракту трави гороху посівного становить 0,125 г на одну таблетку. До того ж маса для таблетування у даному випадку має підвищену сипучість внаслідок підвищеного вмісту кальцію та магнію стеарату, що негативно впливає на міцність таблетки. Приклад 7. Склад ядра (г): сухий екстракт трави гороху посівного 0,200 лактоза 0,161 карбоксиметилцелюпоза 0,031 кальцію стеарат 0,004 магнію стеарат 0,004 маса ядра 0,400. Склад оболонки (г): метилцелюлоза 0,0119 титану двоокис 0,0031 тропеолін О 0,0005 маса оболонки 0,0155. Склад одержаної таблетки відзначається підвищеним вмістом сухого екстракту трави гороху посівного, але фармакологічна активність засобу при цьому суттєво не змінюється. Зниження вмісту лактози змінює вологосорбційні властивості маси таблетування, що негативно впливає на технологічні властивості таблетки. Приклад 8. З метою визначення специфічної фармакологічної активності засобу "Піфламін" вивчали його гепатопротекторну активність в умовах гострого ураження печінки щурів ССІ4 у порівнянні з силібором. Дослідних тварин було поділено на контрольну та дослідні групи. В досліді використовували безпородних щурів масою 200-220 г. Гострий гепатит викликали шляхом внутрішньошлункового вве-дення 50% масляного розчину ССl4 в дозі 0,7 мл/100 г маси тіла протягом 2 днів. Засіб "Піфламін" вводили тваринам дослідної групи внутрішньошлунково в дозах 25, 50, 100 мг/кг через 1 годину після введення ССl4. В якості препарату порівняння використовували силібор у дозі 25 мг/кг. Через 24 години після останнього введення ССl4 щурів забивали. В сироватці крові визначали активність АсAТ, рівень лужної фосфатази, глікоген печінки, МДА., відновлений глютатіон (ВГ), печінки, фібріноген, церулоплазмін, загальні ліпіди, холестерин сироватки, швидкість секреції жовчі, жовчні кислоти, холестерин жовчі. Дані досліду наведені у таблиці 3. Як свідчать дані таблиці 3, в умовах патології вірогідно підвищується рівень фібріногену і вірогідно знижується рівень загальних ліпідів та концентрація жовчних кислот в жовчі. "Піфламін" в дозі 100 мг/кг на тлі" патології сприяє підвищенню вмісту жовчних кислот і холестерину в жовчі. Силібор в меншій мірі ніж "Піфламін" підвищує вміст жовчних кислот в жовчі, але вірогідно знижує концентрацію холестерину в жовчі в порівнянні з патологію. Таким чином, одержані дані свідчать про, що в умовах патології "Піфламін" проявляє гепатопротекторний ефект на рівні препарату порівняння силібор. Результати всебічного вивчення токсичного впливу субстанції і таблеток "Піфламін" на окремі органи, системи і організм в цілому на 3 видах тварин показали, що тривале введення препарату "Піфламін" в терапевтичній дозі 100 мг/кг не чинить несприятливого впливу на функції життєвоважливих органів. Таким чином, пропонується ефективний засіб рослинного походження для лікування захворювань печінки "Піфламін", який проявляє гепатопротекторну дію на рівні препарату порівняння силі 4 30879 бору, виготовляється з доступної сировини, має необмежену вітчизняну сировинну базу, виготовляється за економічною технологією на стандарт ному обладнанні, що вробить його доступним для широких верств населення. Таблиця 1 Вивчення гепатопротекторної дії сухого екстракту трави гороху посівного в умовах гострого токсичного гепатиту у щурів, викликаного парацетамолом Вивчені показники Контроль АсАТ, ммоль/год. л 2,17±0,02 Відновлений глютатіон, умовн.од 0,15±0,05 МДА, мкмоль/г 250±12,2 4,9±0,7 Інтенсивність жовчовиділення, мг×хв. - 100 Жовчні кислоти, мг% 1227,6±110,4 Холестерин жовчі, мг% 27,5±1,4 Умови досліду Лікування патології сухим ексПатологія трактом трави гороху посівного 25 мг/кг 100 мг/кг 2,47±0,07* 2,33±0,06 2,28±0,08 0,20±0,04 0,17±0,08 0,19±0,02 300,6±187,6* 192,3±18,14 124,4±50,0** 4,0±0,5 8,3±0,9** 6,9±0,5** 642,5±27,4* 918,5±73,8** 1205,5±94,3** 23,0±6,1 18,0±1,5 29,5±0,8 Примітка: 1)* - відхилення вірогідне по відношенню до контролю (Р