Спосіб одержання інтерферону

Г , j КЕ ПОДЛНЬ-ІИ f СПУЕЛ'*ИС«*НИ:О ; ' І В ОТКРЫТОЙ П1:ЧАТИ СОЮЗ СОЗЕТСНИХ СОЦИАЛИСТ И* !£СНИХ РЕСПУБЛИК II72II6 А 61 К 45/02// А 61 К 35/50 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОЫИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОЬРЕТа^/ІЙ И ОТНРЫТКЛ О s СТСЛ/ЇГ К ABTOPCKCiViy (21) 35/41122/23-13 (22) 18.01.83 (71) Институт мякробаологдд is вирусология ям.Д,К»Заболоткого (72) Н.Я.Садьзк, С.Р.РЄЗНЙК, Л.Д.КрИБОхатская и А.И.ЗаБироха (53) 615.361(083.8) g С П (54) СПОСОБ ПО2УЧЕШЫ HHIL&EPOHA і. Изобретение относится к ной вирусологии, медицинской и ветеринар а именно к способам получения интерферона для профилактики и терапии вирусных заболеваний человека и животных. Цель изобретения - увеличение .выхода интерферона. Способ поясняется следующими примерами. Пример I . Небнке миндалины свиней отбирают после убоя животных и помещают в среду/19Э, содержащую 2% сыворотки кропи крупного рогатого скота и антибиотики (пенициллин 100 ед/мл» стрептомицин 50 сд/мл). Материал должен быть подвергнут дальнейшей обработке не позднее 24 ч.-ч. с момента убоя животных. Миндалины очищают от соединительной ткани, измельчают до гомогенного состояния, а затем разводят (соотношение объемов 1:4) средойл'-199, содержащей сыворотку и антибиотики,и фильтрую? для удаления крупных частиц через два слоя стерильной марли. Подсчитывают в камере Горяева количество жизых клеток;'которые подкрашивают трипано вым сини},!. Мертзые клетки окрашиваются в синий цвет. Многократные наблюдения свидетельствуют, что из одной миндалины массой 20 г (миндалины бывают от 5 до 25 г) получают 5.10 цитов (в то лШ время из I л 8 лимфо п крови получают 3-4.10 леккоциq тов). из 100 г гомогената небных миндалин получают 1-3.IGV лим фоцитов, 5 зависимости от результата подсчета полученную взвесь растворяют средойл'-199 с 5^ сыворотки и антибкотиками ,по концентрации 5.10° кл/мл. 3 приготовленную суспензию вносят надуктор интерферона - важциониый вирус ГЬьлкасла шташл К из из расчета 10 ТЦПк П /,„_.„ и ставят длл инкубации прл 37°С в течение 20ч. По окончании фугируют при ІС00 инкубации суспензию центри об/мин, в течение 15 мин, надо сосочную жид кость сливают, а осадок утилизируют. С помощью 0,1н.НС1 доводят рН надосадочной жидкости до 2,2 и выдерживают в холодильной к а мере в течение 4 сут , (для инактивации пензии вируса-индуктора). створом Ліііп оставшегося в сус Затем рН суспензии доводят 20%-кым ра до 7,2.Антивирусную активность полученного ин терферона определяют в культуре первичных клеток эмбриона свиней, которые заражают вирусом везикулярного стоматита штамм Индиана в дозе 100 TLHRQ. ИЗ лимфоцитов миндалин можно получить гораздо большее количество интерферона, чем из лейкоцитов. 3 организме свиней кровь состзвляето-8% от массы животного, т . е . , собрав всю дровь животного (массой 100 кг)^можно получить из нее О 1-3.10 лин I л лимфоцитов, в то же время только из одной пары минда (кассой по 20 г) выход лимфоцитов в 3-4 раза больше. Из крови свиней можно получить 80-100 мл интерферона, а из 100 г гомогената небных миндалин-до 500 мл интерферона. Пример 2. Отбор окологлоточных лимфоузлов производят во время разделки туши животного и все последующие операции выполняют аналогично, как и в случае с небными миндалинами. Пул окологлоточных лимфоузлов (6 узлов, общей массой 100 г)очицают от соединительной ткани, измельчают до гомогенного состояния, разводят в соотношении 1:4 средой*199, содержащей сыворотку крупного рогатого скота и антибиотики, и фильтруют через два слоя стерильной марли для удаления крупных частиц. Полученные лимфоциты обрабатывакзт Ъ-$SS!s(f/Hь (Л (хлористым аммонием) в соотношении 1:5, встряхивают и центрифугируют при 1000 об/мин - 15 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют в среде№ЭЭ с сывороткой и антибиотиками. В камере Горяева считают количество живых клеток. Из окологлоточных лимфоузлов одного животного получают 8-10.10° лимфоцитов. В зависимости от результата подсчета полученную суспензию разводят средой^199 с Ъ% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиками до концентрации 5.10 кл/мл. В приготовленную суспензию вносят индуктор интерферона - вирус болезни Ньюкасла штамм Н из расчета 10 ТЦДсд/клетку и инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 20 ч, Затем проводят то же операции, как и в примере!с лимфоцитами небных миндалин. Селезенки свиней отбирают так же, как миндалины и лимфоузлы, во время разделки туяи(масса селезенок у животных колеблется от 0,1 до 0,3% от массы тела, з среднем *** 0,2%). Селезенку очищаэт от соединительной ткани и измельчают до гомогенного состояния. Гомогенизированную ткань тщательно суспендирует в среде/-19Э с антибиотиками и сывороткой (соотношение объемов 1:3) и фильтруют для удаления крупных частиц через два слоя стерильной марли. К фильтрату добавляют 0,33^-ный раствор хлористого аммония ( АИц tt ) в соотношении 1:5, перемеривают и центрифугируют при 1000 об/ыин в течениеіб мкн. Надоседочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют в средел-199 с ЪЪ сыворотки л антлбіготиками. Из селезенки езжей массой 200 г получают до 5.10 лимфоцитов. Индукцию интерферона в лимфоцитах селезки осуществляют в тех же условиях, что и в предьщущих примерах. Формула изобретения Способ получения интерферока из сырья животного происхождения, включающий инкубирование продуцента интерферона в питательной среде Т? 199 в присутствии вируса-ицпуктора с последующим выделением целевого продукта и инактивацией вяруеа~индуктора? отличающийся тем, что , с целью увеличения выхода интерферона» в качестве сырья используют лимфокдные органы животных, которые гомогенизируют и проводят инкубирозание в питательной среде, дополнительно содержащей 2-5% сыворотки крови крупного рогатого скота при температуре 39-40°С. Ф.И., Ковохатский А.С., "Интерферон и его индукторы \ М., 1980, с 4,. 97, 99. . «Авторское свидетельство СССР В 839547да.А 61 К 45/02,197; лі г^ *~ Оґ* Попнисано к Пе ,ати '*4. Ufi {