Засіб для інгібування пролактину

1. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролактину, який містить принаймні один біциклічний дитерпен лабданового чи клероданового типу відповідно до принаймні однієї загальної формули (І), (II), (III) або (IV): 2 3 75864 4 2. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролакз пунктів 1-8 для приготування лікарського засобу тину за п. 1, який відрізняється тим, що містить для зменшення рівнів пролактину для лікування сполуку, яка має таку формулу: передменструального синдрому, мастодинії, розладів менструального циклу, зокрема від оліго- до аменореї. 10. Клерод-Y,14-дієн-13-ол, де Y = положення кільця 1, 2, 3, 4(18), 6, 7 або 8(17). 11. Застосування клероду-Y,14-дієн-13-олу, де Y = положення кільця 1, 2, 3, 4(18), 6, 7 або 8(17), для . приготування лікарського засобу для зменшення 3. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролакрівнів пролактину або для приготування ліків для тину за п. 1, який відрізняється тим, що містить лікування передменструального синдрому, мастосполуку, яка має таку формулу: динії, розладів менструального циклу, зокрема від оліго- до аменореї. 12. Клерод-Y,Z,14-триєн-13-ол, де Y або Z = положення кільця 1, 3 або 1, 4(18), або 1, 6, або 1, 7, або 1, 8(17), або положення кільця 2, 4(18) або 2, 6, або 2, 7, або 2, 8(17) або положення кільця 4(18), 6 або 4(18), 7, або 4(18), 8(17), або поло. ження кільця 6, 8(17). 4. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролак13. Застосування клероду-Y,Z,14-триєн-13-олу, де тину за п. 1, який відрізняється тим, що містить Y або Z = положення кільця 1, 3 або 1, 4(18), або 1, сполуку, яка має таку формулу: 6, або 1, 7, або 1, 8(17), або положення кільця 2, 4(18) або 2, 6, або 2, 7, або 2, 8(17), або положення кільця 4(18), 6 або 4(18), 7, або 4(18), 8(17), або положення кільця 6, 8(17), для приготування лікарського засобу для зменшення рівнів пролактину або для приготування ліків для лікування перед. менструального синдрому, мастодинії, розладів 5. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролакменструального циклу, зокрема від оліго- до аметину за п. 1, який відрізняється тим, що містить нореї. сполуку, яка має таку формулу: 14. Застосування сполуки, вибраної з групи, яка складається з сполук, що мають таку формулу: . 6. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролактину за п. 1, який відрізняється тим, що містить сполуку, яка має таку формулу: , зокрема . 7. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролактину за п. 1, який відрізняється тим, що містить сполуку, яка має таку формулу: . 8. Лікарський засіб для зменшення рівнів пролактину за п. 1, який відрізняється тим, що містить сполуку, яка має таку формулу: (ротумаріфуран); ; (склареол); а також . 9. Застосування сполуки відповідно до будь-якого 5 Даний винахід стосується лікарських засобів для зменшення рівнів пролактину. Екстракти вербняку звичайного (Vitex agnuscastus) вже давно використовуються в медицині природних засобів для лікування передменструального синдрому. Незадовго перед менструацією пацієнтки часто скаржаться на відчуття напруженості в грудях, що клінічно супроводжується підвищеним рівнем пролактину. Екстракти вербняку звичайного мають властивість зменшувати рівень пролактину, що клінічно та фармакологічно підтверджується в попередньому рівні техніки. У попередньому рівні техніки робились численні спроби охарактеризувати або навіть виділити ті речовини вербняку звичайного, які саме полегшують стан передменструального синдрому. Так, дисертація Daniel Berger "Vitex agnuscastus: Unbedenklichkeit und Wirksamkeit beim pramenstruellen Syndrom, Wirkphnzipien and Wirkmechanismen eines neu entwickelten Extraktes" [Вербняк звичайний: Визнана безпечність та ефективність при передментруальному синдромі, діючі принципи і механізми нового розробленого екстракту], Факультет Філософії та Природничих наук Базельського університету, 13 січня 1998p., розглядає численні аспекти, пов'язані з вербняком звичайним. У цій дисертації описано ряд різних складових, які вивчались для пояснення фармакологічних властивостей лікарського засобу. Так і в препаратах з листя, і в препаратах з плодів вербняку звичайного було виявлено іридоїдні глікозиди аукубін, агнузид та евростозид. Крім того, з плодів можна виділити ліпофільні флавоноли кастицин, пендулетин, хризоспленол D і 3,6,7,4'-тетраметиловий ефір 6гідроксикемпферолу. У попередньому рівні техніки також описується, що в плодах вербняку звичайного можна виявити прогестерон, 17α-гідроксипрогестерон, тестостерон і епітестостерон. Крім цього, ще близько 73 різні сполуки було виявлено у плодах вербняку звичайного, в основному монотерпени, такі як α-пінен, сабінен, βфеландрен і 4-терпінеол, та сесквітерпени, такі як β-каріофілен, ало-аромадендрен, гермакрен В, спатуленол та -кадінол. Окрім зазначених вище класів речовин, у плодах вербняку звичайного виявлені значні кількості жирних кислот: насичених, мононенасичених і поліненасичених. Так, у плодах виявлено, наприклад, α-ліноленову кислоту, олеїнову кислоту, стеаринову кислоту, пальмітинову кислоту, лінолеву кислоту та адренову кислоту. Подальше дослідження ефірної олії з плодів 75864 6 (солідагенон); для приготування лікарського засобу для зменшення рівнів пролактину. вербняку звичайного також виявляє присутність дитерпенів. У зазначеній вище дисертації повідомляється, що з плодів вербняку звичайного було виділено такі дитерпени: ротундифуран, вітексилактон і 6β,7βдіацетокси-13-гідрокси-лабда-8,14-дієн, структурні формули яких подано нижче: 6β,7β-Діацетокси-13-гідрокси-лабда-8,14-дієн У попередньому рівні техніки застосовувались численні способи тестування з метою визначення механізмів дії екстрактів вербняку звичайного і того, чи може якась певна речовина або клас речовин пояснити фармакологічні ефекти повного екстракту. Так, проводились, наприклад, вимірювання на різних опіоїдних рецепторах, на рецепторі бензодіазепіну, на сайті репоглинання серотоніну, на рецепторі гістаміну-H1 та рецепторі допаміну-D2. З метою перевірки результатів досліджень зв'язування рецепторів, проведених на рецепторі допаміну-D2 з фракціями, одержаними з вербняку звичайного, і, отже, визначення дійсних діючих речовин у зазначеному попередньому рівні техніки проводились експерименти з відомими складовими вербняку звичайного (чистими речовинами). Такими чистими складовими були аукубін, кастицин, гоморієнтин, лінолева кислота, лутеолін-7глікозид, орієнтин і дитерпени вітексин, ротундифуран, 6β,7р-діацетокси-13-гідрокси-лабда-8,14дієн. Проте, у зазначеній дисертації [сторінка 154, 7 75864 8 Глава 2.3.4.5] ясно вказується, що жодна з випробовуваних сполук не мала достатньо низьку величину ІС50, щоб можна було пояснити (лише цією (IV) єдиною сполукою) дію і, отже, фармакологічні ефекти повного екстракту або ліпофільної гексанової фракції вербняку звичайного. Виходячи з зазначеного попереднього рівня де R1=Η, С1-С3 алкіл або С1-С3 ацил; техніки, мета цього винаходу полягає у забезпеде кільця А і/або В у випадку загальної форченні чистих речовин з плодів вербняку звичайномули (І) або (II) необов'язково заміщені в положенго, що зробить можливим виробництво лікарського ні 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8 або 9, принаймні, одним радизасобу для лікування передменструального синдкалом ОХ, де X=Н, С1-С3 алкіл або С1-С3 ацил; рому у вигляді фармацевтичної композиції. де кільця А і/або В у випадку загальної форЗазначена мета досягається лікарським засомули (III) або (IV) необов'язково заміщені у полобом за пунктом 1 та новими речовинами за пункженні 1, 2, 3, 4, 6, 7 або 8, принаймні, одним радитом 12 і пунктом 14. калом ОХ, де X=Н, С1-С3 алкіл або С1-С3 ацил; У рамках даного винаходу було несподівано де, необов'язково, принаймні один атом вугвиявлено, що сполуки з класу біциклічних дитерлецю у положеннях 17, 18, 19 і 20 заміщений рапенів справляє вплив, що полягає у зменшенні дикалом ОХ, де X=Н, С1-С3 алкіл або С1-С3 ацил; рівнів пролактину, на культивовані гіпофізарні кліде, необов'язково, принаймні, одна група СН3 тини щурів. Дуже ймовірно, що цей механізм може у положеннях 17, 18, 19 і 20 заміщена групою СОбути перенесено на людей. ОН; Діючі дитерпени можуть мати скелетну струкде, необов'язково, принаймні, одне з положень туру, як лабданового, так і клероданового типу: кільця 1, 2, 3, б або 7 є кетогрупою; і де, необов'язково, принаймні, один подвійний зв'язок присутній в положеннях кільця 1, 2, 3, 6, 7, 8, 8(17) формули (І) і (III); та де, необов'язково, принаймні, один подвійний зв'язок присутній в положеннях кільця 1, 2, 3, 4(18), 6, 7, 8, 8(17) формули (II) і (IV). Наведені нижче сполуки є більш прийнятними втіленнями даного винаходу: Зокрема, було виявлено, що ефект зменшення рівнів пролактину на культивовані гіпофізарні клітини може досягатись з використанням сполук відповідно до загальних формул І-IV, які мають, у той самий час, низьку цитотоксичність: (I) (II) (III) 9 75864 10 а також гексану у ділильній лійці, фазу н-гексану вилучаклерода-Y,14-дієн-13-ол, де Υ= положення кіють, а водну фазу екстрагують знову струшуванльця 1, 2, З, 4 (18) , 6, 7 або 8 (17); та ням з н-гексаном. клерода-Y,Ζ,14-триєн-13-ол, де Υ або Ζ= поПодальша концентрація за пониженого тиску ложення кільця 1, 3 або 1, 4(18) або 1, 6 або 1, 7 об'єднаних гексанових фаз дає 300мг залишку. або 1, 8(17) або положення кільця 2, 4(18) або 2, 6 Одержаний таким чином залишок далі віддіабо 2, 7 або 2, 8(17) або положення кільця 4(18), 6 ляють за допомогою рідинної хроматографії висоабо 4(18), 7 або 4(18), 8(17) або положення кільця кого тиску. Для цього використовують колонку 6, 8(17). 21,4 300мм з С-18 матеріалом, що має розмір Вдалося збагатити та охарактеризувати подібчастинок 8мкм, в якості нерухомого середовища. ні сполуки з етанольно-водного екстракту плодів Хроматографію проводять у потоку 10мх/хвил. вербняку звичайного, одержаного фракціонованою суміші ацетонітрилу/води 60/40 в якості розчинниліпофільною екстракцією, та визначити їх струкка. Після завантаження зразку вміст ацетонітрилу туру. лінійно збільшується до 100% протягом 60 хвилин. Зокрема, екстракція високоліпофільними розУсі дитерпени елююють в об'ємі між 350 та чинниками, такими як вуглеводні С5-С10 з серед450мл. З 300мг гексанової фази одержують прибньою довжиною ланцюга, зокрема, н-гексан, давализно 38мг суміші дитерпенів. Ці дитерпени у підла збільшення ефекту зменшення рівнів хожий спосіб збирають у вигляді фракцій. пролактину. Більше того, екстракція з плодів вербПодальше очищення одержаної таким чином няку звичайного надкритичною вуглекислотою дасуміші дитерпенів проводять за допомогою препавала посилення діючого принципу, що можна зверативної тонкошарової хроматографії на силікагести до сполук загальних формул І-IV. льних шарах завтовшки 1 мм з різними агентами Усі сполуки відповідно до цього винаходу, потоку відповідно до опису, наведеного нижче для структурні формули яких наведені вище, демонокремих речовин. Виявлення здійснюють реагенструють інгібування виділеного пролактину на лактом анісового альдегіду (DAB 10, 1997). Зони чистотропних клітинах гіпофізу щурів. тих дитерпенів на тонкошаровій пластині елююВ окремих тестах на цитотоксичність було виють, використовуючи хлороформ/метанол, та явлено, що всі виділені та охарактеризовані відпоаналізують за допомогою поєднаної газової хровідно до цього винаходу сполуки мали низьку циматографії та мас-спектрометрії. тотоксичність, що робить їх особливо Приготування 98-146 (позначений «146» на привабливими для створення фармацевтичних Фіг.1): композицій. 6β-Ацетокси-9α-гідрокси-15,16-епоксиКрім того, було виявлено, що названі речовини 13(16),14-лабдадієн (ротундифуран) також зв'язуються з рецептором рекомбінантного допаміну-D2 людини. Подальші вигоди і ознаки даного винаходу випливають з опису втілень та креслень, де: Фіг.1 ілюструє вплив біциклічних дитерпенів на вивільнення пролактину з культивованих гіпофізаАгент потоку: хлороформ/метанол 95/5 рних клітин щурів. Величина Rf: 0,75 Етанольний екстракт з плодів вербняку звиХарактеристичні фрагменти недериватованої чайного готують у відомий по суті спосіб шляхом речовини у ГХ-МС: мацерації або перколяції органічними розчинникаm/z=362 [M]+, 344, 302, 287, 284, 207, 150, 135, ми або сумішами органічних розчинників з водою 95, 81. або надкритичною вуглекислотою. Приготування 98-119 (позначений «119» на З цією метою застосовують, більш прийнятно, Фіг.1.): суміші етанолу з водою у співвідношенні від 50:50 Клерода-у,14,-дієн-13-ол до 90:10 при температурі від 20 до 60°С. Агент потоку: хлороформ / метанол 95/5 Одержаний таким чином екстракт розподіляВеличина Rf: 0,63 ють між двома незмішуваними фазами, що мають Характеристичні фрагменти недериватованої різну полярність. Для цього в якості ліпофільної речовини у ГХ-МС: фази використовують алкани, галогеновані вуглеm/z=290 [M]+, 272, 257, 243, 229, 191, 189, водні, кетони, складні ефіри, а в якості гідрофільної фази - спирти і воду. Більш прийнятно, використовують ідентичні об'єми С5-С7 алканів та сумішей етанолу/води у співвідношенні 1:2-1:10. Ліпофільна фаза має активність зменшення рівню пролактину. Вона може бути далі очищена у Приготування 98-153 (не зображено на Фіг.1): відомі способи, такі як, наприклад, рідинна хромах,13-Дигідрокси-14-лабден тографія високого тиску та препаративна тонкоАгент потоку: хлороформ/метанол 95/5 шарова хроматографія відомим, по суті, методом. Величина Rf: 0,37 З 1кг розмелених плодів вербняку звичайного Характеристичні фрагменти недериватованої готують екстракт шляхом перколяції 10л етаноречовини у ГХ-МС: лу/води 6/4(об./об.). Одержаний з цього концентm/z=290 [M-H2O]+, 275, 272, 257, 191, 177 рований екстракт, що має сухий залишок 1,75г, розподіляють між 375 мл 15% EtOH та 375мл н 11 75864 Приготування 98-152 (не зображено на Фіг.1): 6β,7β-Діацетокси-13-гідрокси-лабда-8,14-дієн Агент потоку: хлороформ/метанол 99/1 Відстань потоку 16см, розвинутий 3х Величина Rf: 0,5 Характеристичні фрагменти недериватованої речовини у ГХ-МС: m/z=346 [М-60]+, 307, 304, 286, 247, 205, 187, 177, 135 Приготування 98-166 (позначений «166» на Фіг.1): х-Гідрокси-у-кето-15,16-епокси-13(16),14лабдадієн Агент потоку: хлороформ/н-гексан 90/10 Розвинутий 3х, відстань потоку 16см Величина Rf: 0,74 Характеристичні фрагменти недериватованої речовини у ГХ-МС: m/z=318 [M]+, 300, 285, 193, 166, 95, 81 Комп’ютерна верстка Т. Чепелева 12 Приготування 98-167 (позначений «167» на Фіг.1): х-Ацетокси-13-гідрокси-лабда-у,14-дієн Агент потоку: хлороформ/н-гексан 90/10 Розвинутий 3х, відстань потоку 16см Величина Rf: 0,55 Характеристичні фрагменти недериватованої речовини у ГХ-МС: m/z=330 [М-Н2О]+ 288, 270, 255, 249, 189, 132, 119, 71 Вплив на вивільнення пролактину: Визначення вивільнення пролактину з культивованих гіпофізарних клітин самців щурів проводили, [як описано в Jarry et. al., Experimental and Clinical Endocrinology, Vol.102, (1994) 448-454]. Дитерпени додавали до культур клітин в етанольному розчині. Відповідні етанольні концентрації та допамін використовували в якості контролю. Середнє значення виміряної концентрації пролактину у надосадовій рідині клітин, інкубованих у недоповненому середовищі, прийняте за 100%. Дитерпени значно зменшують вивільнення пролактину. Результати подані на Фіг.1, яка ілюструє зменшення вивільнення пролактину з культивованих гіпофізарних клітин щурів, спричинене біциклічними дитерпенами. В якості контролю використовувались середовище, середовище плюс етанол і 10-4 молярний допамін (=DA-4M). Концентрації наведені у мг дитерпену на мл середовища. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601