Засіб для інгібування тромбіну

УКРАЇНА (19) UM (11) Л»Н**О (13) С2 (51) 6 А61К31/33, 31/38, 31/40, 31/445 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ОПИС ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТА МЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (54) ЗАСІБ ДЛЯ ІНГІБУВАННЯ ТРОМБІНУ (21)94129200 (22)19 12.1994 (24)15 11 2000 (31)08/171,394 (32)21.12 1993 (33) US (46) 15 11.2000, Бюл. № 6, 2000 р. (72) Солл ДанІел Джон (US), Сміт Джеральд Флойд (US) (73) ЕЛІ ЛІЛЛІ ЕНД КОМПАНІ (US) (56) 1 US 441 8068 , 2911 .198 3, tn t С І.З А 6 1 К 31/445; С 07 D 409/12 , 2. US 5075321, 24.12 .1991, lntC I.5 A61 К 31/56 . 3. Гепарин (Лекарственн&е средства). Ма шковский М.Д. - Мин ск. "Белор усь". - 1988 . - 4 .2 . - С . 65-68 . (57) 1. Применение производных бензотиофена общей формулы 4. Применен ие п о п . 1 , о тли ча ющее ся тем, что указанное соединение является ОСМ гСН3 - N где R 1 и R3 я вля ются н езави симо во дородом , О О или его гидрохлоридом. 5. Применение по п. 1 , о тличающееся тем , что ингибирование тромбина необходимо для ингибирования соп утствующи х заболе ваний или расст ройств. 6. Применение по п 1 , о тличающее ся тем , что ингибирование тромбина необходимо для ингибирования соп утствующи х заболе ваний или расст ройств, и указанное соединение является гидрох лоридом. 7. Применение по п 1 , о тли чающее ся тем , что ингибирование тромбина необходимо для ингибирования соп утствующи х заболе ваний или расст ройств, и указанное применение является профи лактическим. 8. Применение по п 1 , о тличающее ся тем , что ингибирование тромбина необходимо для ингибирования соп утствующи х заболе ваний или расст ройств, и указанное соединение является -СНз, -С - (C v~Ce алкил) или -С -Аг, где Аг я вля ется необязательно замещенным фенилом; R2 выбран из группы, состоящей из пирролидино и липеридино; или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, в качестве средства для ингабирования тромбина. 2 Пр именени е п о п. 1, о тли ча юще еся тем , что указанное соединение является гидрохлоридом. 3 . Пр именени е п о п. 1, о тли ча юще еся тем , что указанное применение является профи лактическим. или его гидрохлоридом. II II 29446 Пусковым механизмом процессов свертывания крови и тромбозов является каскад протеолитических реакций, ведущий к образованию тромбина Тромбин путем протеолиза удаляет активированные пептиды из А а и В р-цепей фибриногена, который растворен в плазме крови, и тем самым инициирует образование нерастворимого фибрина. Эффект антикоагуляции в настоящее время , достигается путем применения гепаринов и кумаринов Парентеральный фармакологический контроль коагуляции и тромбоза основан на ингибировании тромбина с помощью гепаринов. Гепарины осуществляют непрямое воздействие на тромбин, усиливая ингибиторный эффект эндогенного антитромбина III (основной физиологический ингибитор тромбина) Поскольку сывороточный уровень антитромбина 111 варьирует, а также в силу то го, что поверхностно-связанный тромбин резистентен к механизму непрямого ингибирования, лечение гепарином может быть неэффективным. Так как коагуляционные пробы, как полагают, являются эффективными и безопасными, мониторинг уровня гепарина может осуществляться с помощью этих проб (в частности, проба на время частичной активации тромбо пластин а - ВЧАТ) Кумарины препятствуют образованию тромбина, блокируя посттрансляционное гамма-карбоксилирование при синтезе протромбина и других белкой этого типа. В силу такого механизма действия эффект кумаринов развивается медленно, через 6-24 часа после применения. Кроме того, они не являются селективными анти коагулянтам и. Применение кумаринов также требует мониторинга с помощью коагуляционных проб (в частности, пробы на время образования протромбина). Настоящее изобретение является открытием, что соединения, представленные в изобретении, как это изложено ниже, являются ингибиторами тромбина, имеющими биологическую активность при оральном применении. Настоящее изобретение представляет методы ингибирования тромбина, включающие введение людям, нуждающимся в лечении, эффективного количества соединения, описанного формулой I. OCHaCHa-ft8 где R 1 и R3 я вля ются незави симо во дородом , О О II * « -СНз, -С- (Сі-Св)алкил), или -С- Аг, где Аг является необязательно замещенным фенилом; R2 выбран из группы, состоящей из пирролидино, гексаметиленимино, и пиперидино; и его фармацевтически приемлемых солей и соль в ато а. Настоящее изобретение описывает открытие, что выбранная группа 2-феиил-З-ароилбенэотиофенов (бенэотиофены) из формулы I пригодна для ингибирования тромбина. Использование указанных соединений в качестве антикоагулянтов показано для профилактики и лечения таких тромбоэмболических заболеваний, как венозный тромбоз, легочная эмболия, тромбоз артерий, а частности, ишемия миокарда, инфаркт миокарда и тромбоз сосудов головного мозга, общие и местные состояния повышенной свертываемости крови, например, такие, которые сопровождают ангиопластику и операции коронарного шунтирования, а также генерализованные поражения тканей, возникающие как результат воспалительных процессов Методы лечения, предлагаемые в данном изобретении, применимы на практике путем введения человеку или млекопитающему необходимой дозы соединения формулы і или его фармакологически приемлемой соли или сольвата, которые эффективны в ингибировании тромбина или сопровождающих его заболеваний или состояний. Термин "ингибирование" подразумевает его основное общепринятое значение, которое включает профилактическое введение препарата человеку или млекопитающему, позволяющее контролировать и/или лечить избыток тромбина при сопровождающих его заболеваниях и состояниях Как таковой, представленный метод включает оба подхода - медицинское терапевтическое и/или профилактическое лечение в зависимости от показаний. Ралоксифен - соединение, описываемое в настоящем изобретении, представляет собой гидрохлорид соединения формулы I, где R1 и R3 являются водородом и R2 является 1-пиперидинипом. Как правило, соединение смешивают с общепринятыми наполнителями, растворителями или носителями и прессуют в виде таблеток, либо готовят в виде эликсиров или растворов для обычного орального применения, либо для внутримышечного или вн утривенного введения Соединения также могут быть применены трансдермально или использованы для создания дозированных препаратов с замедленным высвобождением и тому подобное. Соединения, используемые в настоящем изобретении, могут быть получены в соответствии с методами, которые подробно описаны в патентах США Ns№ 4113814; 4418068; 4380635 и которые представлены здесь в виде ссылок. Как правило, процессы начинаются с бенэо(в)тиофена, имеющего 6-гидроксильную и 2-(4гидроксифенильную) группы Исходное соединение защищено, ацилировано или пишено защитных групп для получения соединений формулы I. Примеры получения таких соединений приведены в вышеуказанных патентах США. Под термином "необязательно замещенный фенил" понимается фенил или фенил, замещенный одним или двумя следующими заместителями: Ct-Сеалкил, Сі-Сдалкокси, гидрокси, нитро хлор, фтор, трихлорметил, или трифторметил. Соединения, используемые в методах настоящего изобретения, образуют соли фармацев 29446 тичєски приемлемых кислот и солей присоединения основания с разнообразными органическими и неорганическими кислотами и осно ваниями и включают, в том числе, физиологи чески приемлемые соли, которые часто используются в химико-фармацевти ческом производстве. Такие соли также являются частью настоя щего изобретения. Типи чные неор ганиче ские кислоты, применяемые для образования таки х со лей, включают: хлористо водородн ую, бромистоводородн ую, иодистоводородн ую, азотн ую, серн ую, фо сфорн ую, фо сфорно ватую и том у подобное. Мо гут также применяться соли , происхо дя щие из органических кисло т, таки х как алифати ческие моно- и дикарбоноаые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, гидроксиалкановые и гидроксилалкандикарбоновые кислоты, ароматические кисло ты, а ли фати ческие и ароматические суль фокисло ты . Таким образом, такие фармацевтически приемлемые соли включают ацетат, фенилацотат, три фторацетат, акрилат, аскорбат, бензоат, хлорбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, метилбензоат, с-ацетоксибензоат, нафталин-2-бенэоат, бромид, изобутират, фенилбутира т, р-гидроксибутира т, бутин-1 , 4диоат, гексин-1,4-диоат, капронат, каприлат, хлорид, циннамит, цитрат, формиат, фумарат, гликолят, гептаноат, гиппурат, лактат, малат, малеат, гидроксималеат, малонат, манделат, мезилат, никотинат, изоникотинат, нитрат, оксалат, фталат, тетрафталат, фосфат, ортофосфат, монофосфат, метафосфат, пирофосфат, пропиолят, пропионат, фениппропионат, салицилат, себацинат, сукцинат, суберат, сульфа т, бисульфат, пиросульфат, сульфит, бисульфит, сульфонат, бензолсульфонат, пбромфенилсульфонат, хлорбензолсульфонат, этансульфонат, 2-гидроксизтансульфонат, метансульфонат, нафталин-1-суль фонат, нзфталин-2сульфонат, п-толуолсульфонат, ксилопсульфонат, тартрат и тому подобное. Предпочтительной солью является гидрохлорид. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот обычно образуются путем реакции соединения формулы I с эквимолярным или избыточным количеством кислоты. Реагенты, как правило, смешиваются в соответствующем растворителе , таким как диэтило вый эфир или бензол. Соль обычно осаждается из раствора в течение от 1 ч до 10 дней и может быть отделена фильтрованием, либо удалением растворителя стандартным способом. Основания, обычно используемые для образования солей, включают: гидроксид аммония, гидроксиды щелочных и щелочноземельных металлов, карбонаты, а также алифатические первичные, вторичные и третичные амины, алифатические диамины. Наиболее пригодны для получения солей основания: гидроксид аммония, карбонат калия, метиламин, диэтиламин, этиленамин и цикл ore ксил амин. Фармаце вти чески п риемлемы е со ли , как правило , харак териз уются повы шенной растворимо стью в сра внен ии с и схо дным сое дин ением, и поэтом у ча ще всего при годным для таких лекарствен ны х форм, как жидкости и ли эмульсии. Фармацевтические лекарственные формы готовят хорошо известными приемами. Например, соединения могут быть сформированы с применением общепринятых наполнителей, растворителей или носителей в форме таблеток, капсул, взвесей, порошков и тому подобное. Примерами наполнителей, растворителей и носителей, которые пригодны для таких лекарственных форм, являются следующие вещества: наполнители и разбавители, такие как крахмал, сахара, маннит и кремнийсодержащие соединения; связующие агенты, такие как карбокси метил целлюлоз а и другие производные целлюлозы, алгинаты, желатин и поливинилпирролидон; увлажняющие агенты, такие как глицерол; дезинтегрирующие агенты, такие как карбонат кальция и бикарбонат натрия; агенты, замедляющие растворение, такие как парафин, и ускоряющие всасывание, такие как четвертичные соединения аммония; поверхностно активные агенты, такие как цетиловый спирт, моностеарат глицерина; адсорбенты, такие как каолин и бенто нит; смазывающие вещества, такие как тапьк, стеараты кальция и магния, твердый полиэтиленгл и коль. Указанные соединения также могут бы ть приготовлены как эликсиры или растворы для обычного орального применения, или в виде растворов длп парентерального введения, например, внутримышечным, подкожным или внутривенным путем. Кроме того, эти соединения хорошо подходят для создания дозирова*нных препаратов с замедленным высвобождением и тому подобное. Лекарственные формы могут быть составлены таким образом, что активные ингредиенты выделяются только или преимущественно в определенном участке кишечного тракта в определенный период времени. Из полимерных веществ или воска могут быть сделаны покрывающие и защитные оболочки. В соответствии с настоящим изобретением индивидуальная дозировка соединения формулы !, необходимая для ингибирования тромбина при соответствующи х заболеваниях и состояниях будет зависеть о т природы и тяжести заболевания, способа применения и други х связанных факторов, решение в отношении которых принимается лечащим врачом. Как правило, допустимая и эффекти вная суточная доза колебле тся от 0 ,1 до 1000 мг/сут и наиболее часто составляет от 50 до 200 мг/сут. Выбранные дозы вводятся больному, нуждающемуся в лечении, от одного до трех раз в сутки или чаще при необходимости более эффективного ингибирования тромбина или сопровождающих его заболеваний или состояний. Обычно более предпочтительно применять соединение формулы І в форме соли присоединения кислоты, как это принято для фармацевтических препаратов, несущи х основную групп у,, такую как пиперидиновое кольцо. Существуют также преимущества при введении соединений данного изобретения оральным путем. Для таких целей пригодны следующие дозированные лекарственные формы для орального применения. Лекар ствен ные формы в приводимых ниже лекарственных препаратах понятие "Активный ингредиент" обозначает соединение формулы I. 29446 Лекарственная форма 1 : Же латино вые капсулы Твердые желатиновые капсулы готовятся с использованием следующи х ве ществ: Ингредиент Количество (м г/капсулу) Активный ингредиент. 0,1-ЮОО Крахмал, NF 0-650 Сыпучий порошок крахмала 0-650 Силиконовая жидкость 350сантисток 0-15 Ингредиенты смешивали, пропускали через сито № 45 меш США и заполняли смесью твердые желатиновые капсулы Примеры специфических капсул, приготовленных на основе ралоксифена, приведены ниже: Лекарственная форма 2: Капсула с ралоксифеном Ингредиент Количество (мг/капсулу) Ралоксифен ' ' . 1 Крахмал, NF 112 Сыпучий порошок крахмала 225.3 Силиконовая жидкость 350 сантисток 1,7 Лекарственная форма 3: Капсула с ралоксифеном Ингредиент Количество (мг/капсулу) Ралоксифен 5 t Крахмал, NF 108 Сыпучий порошоккрахмала 225,3 Силиконовая жидкость 350 сантисток 1,7 Лекарственная форма 4: Капсула с ралоксифеном Ингредиент Количество (мг/капсулу) Ралоксифен 10 Крахмал, NF $03 Сыпучий порошок крахмала 225,3 Силиконовая жидкость 350 сантисток 1,7 Лекарственная форма 5: Капсула с ралоксифеном Ингредиент Количество (мг/капсулу) Ралоксифен 50 Крахмал, NF 150 Сыпучий порошок крахмала 397 Силиконовая жидкость 350 сантисток 3,0 Вышеуказанные специфические лекарственные формы могут бьпъ изменены в разумных пределах. Таблетированные лекарственные формы готовятся с использованием следующи х ингредиентов' Лекарственная форма 6 : Табле тки Ингредиент Количество (мг/капсулу) Активный ингредиент 0,1-1000 Микрокристаллическая целлюлоза 0-650 Двуокись кремния 0-650 Стеариновая кислота 0-15 Компоненты смешиваются и прессуются в форме таблеток. В виде альтернативы таблетки, содержащие от 0,1 до 1000 мг активного ингредиента каждая, готовятся следующим образом. Лекарственная форма 7: Таблетки Ингредиент Количество (мг/габлетку) Активный ингредиент 0,1-1000 Крахмал 45 Микрокристаллическая целлюлоза 35 Поливинилпирролидон (в виде 10% водного раствора) 4 Натрий-карбоксиметилцеллюлоза 4,5 Стеарат магния 0,5 Тальк 1,0 Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускали через сито № 45 меш США и тщательно перемешивали. Раствор поливинилпирролидона смешивали с полученным порошком и затем снова пропускали через сито № 14 меш США. Полученные таким образом гранулы высушивали при 50-60°С и повторно пропускали через сито № 18 меш США. Натри й-карбоксиметил целлюлозу, стеарат магния и тальк, пропустив предварительно через сито № 60 меш США, затем добавляли к гранулам, которые после тщательного перемешивания прессовали в виде таблеток. Суспензии, содержащие каждая от 0,1 до 1000 мг активного ингредиента в объеме 5 мл на одну дозу, готовили следующим образом: Лекарственная форма 8: С успензии Ингредиент Количество (мг/5 мл) Активный ингредиент 0,1-1000 мг Натрий-карбоксиметилцеллюлоза 50 мг Сироп 1,25 мл Раствор бензойной кислоты 0,10 мл Ароматизатор qS. Краситель шактическое лечение в зависимости от показаний. Дальнейшее осуществление изобретения связано с лечением у человека или животных состояний, при которых необходимо ингибирование тромбина. Ожидают, что соединения изобретения будут эффективны у животных, в том числе у человека, при лечении или профилактике тромбоза и состояний гиперкоагуляции в крови и тканях. Заболевания, при которых соединения имеют потенциальное применение, включают лечение или 29446 профилактику тромбозов и состояний гипедкоагуляции в крови и тканях. Заболевания, при которых соединения имеют потенциальное применение для лечения и/или профилактики, включают венозный тромбоз и легочную эмболию, артериальный тромбоз, такой как ишемия миокарда, инфаркт миокарда, лабильная стенокардия, вызванный тромбозом удар и тромбозы периферических артерий. Кроме того, соединения предположительно применимы при лечении или профилактике атеросклеротических заболеваний, таких как коронарный атеросклероз, церебральный атеросклероз и атеросклероз периферических артерий. Далее, соединения, как ожидают, будут эффективны при совместном применении с тромболитиками при инфаркте миокарда. Далее, соединения имеют вероятную эффективность в профилактике реокклюзии после тромболиэа, черезкожной трансмуральной ангиопластики и операции коронарного шунтирования. Далее, имеется предположение об их использовании для предотвращения повторных тромбозов после микрохирургических операций. Далее, ожидается применение таких соединений в антикоагуляционной терапии в связи с применением искусственных органов и сердечных клапанов. Далее, ожидается использование соединений в качестве антикоагуляционных препаратов для лечения при гемодиализе и диммеминированной внутрисосудиетой коагуляции (генерализованный тром6огеморран*ческий синдром). Дальнейшие аспекты их применения включают промывание катетеров и механических приспособлений, используемых у больных in vivo, а также в качестве антикоагулянтов для хранения in vitro крови, плазмы и других и х продуктов. Еще более дальней перспективой является возможность применения этих соединений при други х заболеваниях, при которых свертываемость крови может быть основным компонентом патологического процесса или является причиной вторичной патологии, таких как опухоли, имеющие метастазы, воспалительные заболевания, включая артриты и диабет. Описываемые соединения с антикоагулянтной активностью вливания, внутримышечной инъекции или подкожно.Ме тод данного изобретения также применим на практике в сочетании с лиэирующими тромбы агентами, например, такими, как тканевой активатор а плазминогена (tPA), модифицированный tPA, стрептокиназа или урокинаэа. В тех случаях, когда происходит образование тромба и артерия или вена блокированы полностью или частично, обычно употребляются лизирующие агенты. Соединение, предлагаемое в изобретении, может быть применено до или вместе с лизирующим агентом, либо введено после их использования отдельно или совместно с лизирующим агентом, и желательно далее его применять вместе с аспирином) для предотвращения повторного образования тромба. Метод, предлагаемый в изобретении, также осуществим в сочетании с антагонистом гликопротеиново го llb-llla рецеп тора тромбоци тов, кото рый ингибирует аггрегацию тромбоцитов. Соединение изобретения может применяться до или совместно с антагонистом lltHlla рецептора, либо вводится после и х использования для предотвра щения первичного или повторного образования тромба. Метод этою изобретения также целесообразно сочетать с введением аспирина. Соединение изобретения может применяться до или вместе с аспирином, либо после их использования для предотвращения первичного или повторного образования тромба. Как сказано выше, предпочтительно соединение настоящего изобретения применять в сочетании с лизирующим агентом и аспирином. Способность соединений настоящего изобретения эффективно ингибировать тромбин оценивали в одной или более следующих проб. Соединения, представляемые изобретением (формула I), ингибируют действие тромбина у млекопитающих. Ингибирование тромбина может быть выявлено посредством измерения ингибироаания амидазной активности тромбина in vitro в пробе гидролиза тромбином хромогенного субстрата М-бензоил-О-фенилаланил-(_-валил-1_-аргинил-п-нитроанилид; М-бензоил-D-Phe-L-VaI-L-Argп-нитроанилид. Проба осуществлялась путем смешивания 50 мкл буфера (0,03 М Трис, 0,15 М NaCI, pH 7,4) с 25 мкл раствора чело веческого тромбина (очищенный тромбин человека, En zyme, Research Laboratories, South Bend, Indiana, концентрация 8 NIH единиц/мл) и 25 мкл тест-соединения в растворителе (50% воды и 50% метанола (viv). Затем к смеси добавляли 150 мкл водного раствора хромогенного субстрата (0,25 мг/мл) и измеряли скорость гидролиза субстрата посредством мониторинга реакций выделения п-нитроанилина в 405 нм. Были построены стандартные кривые путем нанесения концентрации свободного тромбина в отношении к скорости гидролиза. Скорость гидролиза, наблюдаемую с тестируемым соединением, затем преобразовывали в значения "свободного тромбина" в соответствующи х пробах с помощью стандартных кривых. Связанный тромбин (связанный с тест-соединением) рассчитывали посредством вычитания количества свободного тромбина в каждой пробе из известного исходного количества тромбина, использованного в данной пробе. Количество свободного ингибитора в каждой пробе рассчитывали вычитанием числа молей связанного тромбина из числа молей добавленного ингибитора (тест-соединение). Величина Касса представляет собой гипотетическую константу. Величина Касса представляет собой гипотетическую константу равновесия реакции между тромбином и тест-соединением (1). Тромбин Тромбин-1 [Тромбин -I] Величина Касса* І(тромбин) х (I)] Значение ве личины Касса рассчи ты вали для ряда концентраций тест-соединения и среднее значение выражали в единица х ли тра на моль. В основном следуя процедурам, описанным выше для человеческого тромбина, и используя другую коагуляционную систему серии протеаз человека с соотве тствующими указанными ниже 29446 хромогенними субстратами, определяли выборочно соединения данного изобретения в отношении к коагуляционному фактору серии протеаз. Человеческие факторы Ха, ІХз, ХІа, ХН приобретены в Enzyme, Research Laboratories, South Bend, Indiana, человеческая урокиназа получена из Leo Pharmaceuticals, Denmark; рекомбинантный активированный белок С (аРС) приготовлен в Є1І Lilly and Со в основном в соответствии с патентом США 4981952, представленным здесь полностью в виде ссылки. Хромогенные субстраты; N-бензоnH-lle-Glu-Gly-Arg-n-HHTpoaHwwfl (для фактора Ха; М-СЬг-О-Агд-СІу-Агд-п-нитроанилид (для пробы с фактором 1Ха как субстрат фактора Ха); Пироглютамил-Рго-Агд-п-нитроанилид (для фактора ХІа и для аРС); H-D-Pro-Phe-Агд-п-нитроанилид (для фактора ХНа); и Пироглютамил-СІу-Агд-л-нитроанилид (для урокиназы) приобретены в Kabi Vitrum, Stockholm, Sweden или в Midwest Brotech, Fishes Indiana. Бычий трипсин куплен в V\forthington Biochemicals, Freehold, New Jersey и человеческий сывороточный капликреин - в КаЫ Vttrum. Хромогенный субстрат H-D-Pro-Phe-Агд-п-нитроанилид для сыворото чного калликреина приобретен в Kabi Vitrum, Stockholm, Sweden. N-бензоли-РпеVal-Arg-п-нитроанилид, являющийся субстратом для тромбина и для трипсина, синтезирован в соответствии с методами, описанными выше для соединений данного изобретения с использованием известных способов связывания белков из имеющихся в наличии коммерческих реагентов. Челове ческий плазмин приобре тен в Eoeheinger Mannheim, Indiana polis, Indiana, nt-Pa приобретен как одноцепочечный активный реферанс-преларат в American Diagnostica Greenwich, Connecticut; модифицированный t-PA6 (mt-PA6) приготовлен в Eli Lilly and Co, с помощью известных методов (см. Burck et al, J. Biol. Chem. 265, 5120-5177, 1990). Хромогенный субстрат плазмина H-D-Val-Leu-Lys-n-HHTpoaHHnnfl и субстрат H-Dlle-Pro-Arg-п-нитроанилид для тканевого активатора ппазминогена (t-PA) куплены в Kabi Vitram. Stockholm, Sweden. В описанных выше хромогенных субстратах 3-х буквенные символы Не, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu и Lys использованы для обозначения соответствующей аминокислотной группы изолейцина, глутаминовой кислоты, глицина, пролина, аргинина, фенилаланина, валина, лейцина и лизина, соответственно. Ингибиторы тромбина предпочтительно должны быть резервными в фибринолизе, вызываемом урокиназой тканевым активатором ппазминогена (t-PA) и стрептокиназой. Это может быть важно при терапевтическом использовании таких препаратов в виде дополнительной тромболитической терапии стрептокиназой, t-PA или урокиназой, и при их использовании в качестве эндогенных усиливающи х фибринолиз противотромбозных агентов (в отношении t-PA и урокиназы). В дополнение к отсутствию интерференции с амидазной активностью фибринолитических протеаз, такая запасная фибринолитическая система может быть изучена на модели лизиса сгустков плазмы человека с помощью соответствующих фибринолитических активаторов ллазминогеиа. Материалы ' ' Сыворотку получали от собак смешанного р аз веден ия (любо й по л. Ha ze tton - LR E, Kalamazoo, Michigan, USA), посредством венной пункции в 3,8% цитрат. Фибриноген выделяли из свежей сыворотки собак, человеческий фибриноген - из полученной ACD в тот же день человеческой крови в виде фракции 1-2 согласно ранее описанным процедурам и инструкциям. Smith, Biochem. J., 185, Ml (1980); Smith et al., Biochemistry, II, 2958-2967 (1972). Человеческий фибриноген