Спосіб виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія

Реферат: Спосіб виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, включає отримання біологічного матеріалу та використання неспецифічних лабораторних критеріїв. Проводять забір маткового змиву для біохімічного дослідження, визначають еластазоподібну активність (ЕПА), трипсиноподібну активність (ТПА) та рівень кислотостабільних інгібіторів (КСІ). UA 91914 U (12) UA 91914 U UA 91914 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до способів виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, та може бути використана в лабораторній діагностиці для визначення наявності запального процесу, асоційованого з гіперпластичними захворюванням ендометрія, і оцінки ступеня виразності деструктивного компоненту при запальній реакції. Проблема вивчення гіперпластичних процесів жіночої репродуктивної системи залишається актуальною, що пов'язано, з одного боку, із широкою розповсюдженістю, а з іншого - з невирішеними питаннями етіопатогенезу цієї патології. Існує гормонозалежний патогенетичний варіант гіперплазії ендометрія, що характеризується хронічною гіперестрогенемією, та автономний варіант, при якому ендокринні порушення не виражені або відсутні, проте в анамнезі виявляється зв'язок із травматичними ушкодженнями при багаторазових абортах і діагностичному вискоблюванні, а також запальними процесами у хворих на гіперплазію ендометрія. Як найближчий аналог (прототип) вибрано спосіб виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія (Хмельницкий O.K. Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний. – Спб: Сотис, 1994. – С. 136-144; Кузнецова А.В. Хронический эндометрит. Архив патологи. – 2000. – № 3. – С. 48-52), що полягає в отриманні біологічного матеріалу та проведенні стандартного гістологічного дослідження, за допомогою якого оцінюють комплекс загальних морфологічних ознак хронічного запалення і наявності деструктивних змін, тобто порушень мікроциркуляції, лімфо-лейкоцитарної інфільтрації, кліткової деструкції, некротичних та склеротичних змін. Ознаками, які збігаються з істотними ознаками заявленого способу, є отримання біологічного матеріалу та використання неспецифічних лабораторних критеріїв запального процесу. Технічним результатом корисної моделі є можливість використання менш інвазивного способу отримання біологічного матеріалу (замість діагностичного вискоблювання проводиться забір маткового змиву), можливість кількісної оцінки інтенсивності деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, висока інформативність незалежно від фази менструального циклу. Причинами, які перешкоджають досягненню очікуваного технічного результату, є інвазивність і високий ризик виникнення ускладнень (перфорація матки, кровотеча, інфекційні ускладнення) при отриманні біологічного матеріалу для гістологічного дослідження, низька точність оцінки морфологічних змін і складність їх аналізу при гіперплазії ендометрія, асоційованої із запальним процесом, відсутність параметричності результатів, яка б дозволяла оцінювати інтенсивність запального компоненту, необхідність попереднього планування дослідження з урахуванням фази менструального циклу. Гістологічна діагностика хронічного запального процесу, асоційованого з гіперплазією, є складною і не завжди достовірною та вимагає проведення інвазивної процедури діагностичного вискоблювання, що значною мірою обмежує можливості спостереження за перебігом запального процесу в динаміці. В основу корисної моделі поставлена задача вдосконалення способу-прототипу шляхом використання замість гістологічного дослідження біоптату ендометрія спектрофотометричного визначення в матковому змиві активності протеолітичних ферментів та їх інгібіторів, які є універсальними ефекторами біохімічної альтерації та відображають інтенсивність запальнодеструктивних процесів. Слід зазначити, що еластаза і трипсиноподібні ферменти є найбільш важливими протеїназами з деструктивним потенціалом, які здатні руйнувати практично всі протеїнові структури тканин та органів, а кислотостабільні інгібітори належать до класу основних серпинів, які на тканинному рівні нейтралізують активність протеїназ. Поставлена задача вирішується тим, що в способі виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, що включає отримання біологічного матеріалу та використання неспецифічних лабораторних критеріїв, відповідно до корисної моделі, проводять забір маткового змиву для біохімічного дослідження, визначають еластазоподібну активність (ЕПА), трипсиноподібну активність (ТПА), рівень кислотостабільних інгібіторів (КСІ), та при підвищенні ЕПА до 13,10 нМ/мг·хв., ТПА - до 28,25 нМ/мг·хв., при значенні КСІ від 30,0 мIO/мг і вище встановлюють помірну інтенсивність деструкції при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, а при збільшенні ЕПА більше 13,10 нМ/мг·хв., ТПА – більше 28,25 нМ/мг·хв. і зниженні КСІ нижче 30,0 мIO/мг встановлюють високу інтенсивність деструкції при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. Між сукупністю існуючих ознак запропонованого способу й очікуваним технічним результатом виявляється наступний причинно-наслідковий зв'язок: отримання як біологічного матеріалу маткового змиву, забір якого є менш інвазивним методом у порівнянні з 1 UA 91914 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 діагностичним вискоблюванням, з подальшим визначенням рівнів еластазоподібної активності, трипсинподібної активності та кислотостабільних інгібіторів дозволяє виявити наявність і ступінь інтенсивності деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, можливість здійснювати кількісну оцінку інтенсивності деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, підвищити точність діагностики, а також повисить інформативність оцінки незалежно від фази менструального циклу. Спосіб полягає в наступному. Матковий змив отримують шляхом введення в порожнину матки 3-4 мл підігрітого фізіологічного розчину через педіатричний одноразовий катетер Фолея без попереднього розширення цервікального каналу. До протилежного кінця катетера приєднують 10-ти мл шприц. Уведену рідину аспірують через 20-30 секунд. Отримують 2-3 мл маткового змиву, який заморожують і зберігають при температурі від -15 °C до -18 °C до проведення біохімічного дослідження. Для визначення ЕПА в маткових змивах застосовують спектрофотометричний метод, заснований на реєстрації швидкості ферментативного гідролізу синтетичного субстрату N-t-вос-аланіл-n-нітрофенілового ефіру (БАНФЕ). Приріст оптичної щільності вимірюють при довжині хвилі 347,5 нм, а результати виражають у нМ гідролізованого субстрату на 1 мг вмісту загального білка за 1 хв. Для визначення ТПА в маткових змивах застосовують спектрофотометричний метод, заснований на реєстрації швидкості відщіплення N-бензоїл-L-аргініну (БА) від синтетичного субстрату N-бензоїл-L-аргініну етилового ефіру (БАЕЕ) (Reanal). Розрахунок активності проводиться за приростом оптичної щільності в пробі за 1 хвилину і відображається в нмолях БА, звільненого на 1 мг вмісту загального білка за 1 хв. Для вимірювання рівня КСІ проводять попередню підготовку біологічного матеріалу. Для цього матковий змив розбавляють у два рази 0,05 М ацетатним буфером і прогрівають протягом 20 хвилин при температурі 60 °C на водяній бані. Отриманий екстракт нейтралізують 0,05 М NaOH до нейтральних значень, центрифугують і отримують супернатант, який використовують для подальшого біохімічного дослідження. КСІ визначають методом, що заснований на реєстрації гальмування приросту оптичної щільності проби за рахунок БАЕЕестеразної активності трипсину кислотостабільними інгібіторами протеїназ при довжині хвилі 253 нм. Активність КСІ сироватки крові виражають в інгібіторних одиницях, що наводяться на 1 мг вмісту загального білка проби. Отримані дані порівнюють із контрольними значеннями здорових людей, діагностують наявність та ступінь інтенсивності запального компоненту при гіперплазії ендометрія. При підвищенні ЕПА до 13,10 нМ/мг·хв., ТПА - до 28,25 нМ/мг·хв. та при значенні КСІ від 30,0 мIO/мг і вище встановлюють помірну інтенсивність деструкції при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, а при збільшенні ЕПА більше 13,10 нМ/мг·хв., ТПА – більше 28,25 нМ/мг·хв. і зниженні КСІ нижче 30,0 мIO/мг встановлюють високу інтенсивність деструкції при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. Для підтвердження результатів, отриманих при визначенні активності протеїназ і їх інгібіторів як діагностичних критеріїв деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, проведена серія клінічних досліджень з визначенням активності стану протеїназ-інгібіторної системи в маткових змивах 89 хворих жінок з різними гістологічними формами гіперплазії ендометрія. Як контроль застосовували вимірювання аналогічних показників у 18 клінічно здорових жінок. У табл. 1 наведено активність неспецифічних протеїназ і кислотостабільних інгібіторів у маткових змивах у жінок з різними формами гіперплазії ендометрія, тобто рівні еластазоподібної, трипсиноподібної активності та кислотостабільних інгібіторів у маткових змивах і показана можливість використання цих показників для виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. Виражене підвищення ЕПА в маткових змивах більш ніж у 5 разів, ТПА - у 2,5 рази та зниження КСІ в 3 рази нижче контролю зафіксоване при клінічному обстеженні жінок, хворих на різні форми гіперплазії ендометрія, підтверджує можливість використання параметрів протеїназ-інгібіторної системи як діагностичного критерію деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. У результаті проведених досліджень було встановлено, що при підвищенні ЕПА до 5 разів по відношенню до норми, тобто до 13,10 нМ/мг·хв., ТПА - до 2,5 разів, тобто до 28,25 нМ/мг·хв., а рівня КСІ вище за 30,0 мІО/мл встановлюють помірну інтенсивність деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. 2 UA 91914 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 При збільшенні ЕПА більше 13,10 нМ/мг·хв., ТПА - вище 28,25 нМ/мг·хв. та зниженні КСІ до рівня, меншого ніж 30,0 мІО/мл, встановлюють високу інтенсивність деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. У табл. 2 наведено активність неспецифічних протеїназ та кислотостабільних інгібіторів у маткових змивах у жінок з різними формами гіперплазії ендометрія в 1 і 2 фази менструального циклу. У способі виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, як інструментальні методи використовують спектрофотометрію, як значущі показники використовують показники активності компонентів неспецифічної протеїназінгібіторної системи маткового змиву: еластазоподібну активність (ЕПА), трипсиноподібну активність (ТПА) і рівень кислотостабільних інгібіторів (КСІ), і при підвищенні активності протеїназ до 5 разів по відношенню до норми, тобто еластазоподібної активності до 13,10 нМ/мг·хв., трипсиноподібної активності - до 2,5 разів, тобто до 28,25 нМ/мг·хв., а рівня КСІ вище за 30,0 мІО/мл встановлюють помірну інтенсивність деструктивного компоненту при запаленні, асоційованим з гіперплазією ендометрія. При збільшенні ЕПА більше 13,10 нМ/мг·хв., ТПА вище 28,25 нМ/мг·хв. і зниженні КСІ до рівня меншого ніж 30,0 мІО/мл встановлюють високу інтенсивність деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. Було встановлено, що рівень активності неспецифічних протеїназ і кислотостабільних інгібіторів у маткових змивах жінок, хворих на гіперплазію ендометрія, не залежить від фази менструального циклу, що значно підвищує діагностичні можливості заявленого способу. У порівнянні зі способом-прототипом спосіб виявлення деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, що заявляється, дозволяє, використовуючи спектрофотометричні методи дослідження еластазоподібної, трипсиноподібної активності та кислотостабільних інгібіторів, визначити наявність у хворої запального процесу, асоційованого з гіперплазією ендометрія, оцінити інтенсивність деструктивного компоненту, підвищити точність діагностики, обґрунтувати необхідність проведення протизапальної терапії без застосування інвазивного та небезпечного методу діагностичного вискоблювання та очікування належної фази менструального циклу, що може бути використане при встановленні інтенсивності деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. Спосіб підтверджується наступними прикладами його використання. Приклад 1. Хвора С., вік 37 років, звернулася зі скаргами на ановуляторні маткові кровотечі помірної інтенсивності та міжменструальні кров'янисті виділення. Було проведене первинне обстеження, до якого входило і стандартне морфологічне дослідження біоптату, у результаті якого був встановлений діагноз простої гіперплазії ендометрія. Також було проведено біохімічне дослідження протеїназ-інгібіторної системи маткового змиву, внаслідок якого було виявлено підвищення рівнів ЕПА до 12,4 нМ/мг·хв., ТПА - до 34,5 нМ/мг·хв. і зниження рівня КСІ до 55,6 мІО/мг. Таким чином, було встановлено помірну інтенсивність деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія, та було прийнято рішення призначити стандартну комбіновану гормональну терапію. Приклад 2. Хвора Г., вік 35 років, звернулася зі скаргами на періодичний біль внизу живота, ановуляторні маткові кровотечі. Було проведене первинне обстеження, до якого входило і стандартне морфологічне дослідження біоптату, який було отримано за допомогою діагностичного вискоблювання ендометрія. Встановлено діагноз комплексної гіперплазії ендометрія, призначено комбіновану гормональну терапію. Призначена терапія не призвела до істотного клінічного результату (зберігався біль внизу живота). Було призначено діагностику за пропонованим способом, тобто біохімічне дослідження протеїназ-інгібіторної системи маткового змиву, у результаті якого було виявлено підвищення рівнів ЕПА до 17,6 нМ/мг·хв., ТПА - до 19,5 нМ/мг·хв., і зниження рівня КСІ до 21,6 мІО/мг. Було встановлено високу інтенсивність деструктивного компоненту при запаленні, асоційованому з гіперплазією ендометрія. Завдяки застосуванню запропонованого способу терапевтична схема була своєчасно доповнена використанням антибактеріальних, імуномодулюючих засобів, фізіотерапевтичними методами лікування. Порівняння зі способом-прототипом показує, що використання даного способу дозволяє забезпечувати підвищення точності діагностики, скорочує час для призначення адекватної протизапальної терапії, визначає необхідну тривалість курсу терапії і прогноз. 60 3 UA 91914 U Таблиця 1 Групи n Контроль 18 Проста ГЕ 41 Комплексна ГЕ 36 Комплексна ГЕ з атипією 12 ЕПА нМоль/мг хв. 2,62±0,41 * 19,8±3,32 * 24,3±5,5 * 22,71±5,02 ТПА нМоль/мг хв. 11,3±1,3 * 28,12±4,77 * 36,41±6,27 * 25,57±3,39 КСІ мІО/мг 88,1±16,1 * 23,2±4,9 * 31,3±13,0 * 0 Примітка. Зірками позначена достовірність порівнянь (р