Спосіб підвищення ефективності антибіотиків

Реферат: Спосіб підвищення ефективності антибіотиків, при якому використовують антимікробний агент катіонний поліпептид поліміксин, антимікробний агент карбопенем іміпенем. Додатково вводять колоїдний водний розчин наночасток срібла. UA 114084 U (54) СПОСІБ ПІДВИЩЕННЯ ЕФЕКТИВНОСТІ АНТИБІОТИКІВ UA 114084 U UA 114084 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі медицини і ветеринарії, лікування інфекційних захворювань. Відомим аналогом є композиція [1], де пропонуються антибіотики, основою яких є феніколкарбонат або його сольват. Отримуються композиції за допомогою синтезу пропонованої основи і інших речовин. Недоліком аналога є складна технологія отримання композицій і контроль ефективності кінцевого продукту, необхідність використання коштовного устаткування, тривалість процесу отримання кінцевого продукту, складність контролю його якості. Відомим аналогом є фармацевтична композиція [2] для лікування інфекційних захворювань вух у тварин, яка містить орбіфлоксацин або одну з його фармацевтично прийнятних солей; фунгіцидно ефективну кількість фармацевтично прийнятної сполуки триазолу, моногідрат фуроату мометазону та принаймні один фармацевтично прийнятний носій, причому зазначена композиція є суспензією. Недоліком аналога є обмежена сфера застосування, наявність речовин, які окремо застосовуються при лікуванні інфекційних хвороб, незрозуміло, що є робочою речовиною в пропонованій суспензії і як вона впливає на ефективність композиції. Відомим аналогом є композиція для орального застосування [3], що містить хінолоновий антибіотик, яка складається з суміші: a) гелетвірного полімеру з в'язкістю від 5 до 400 сПз, виміряною для 2 %-го водного розчину при температурі 20 °C, і b) суміші принаймні двох похідних хінолону, що являють собою суміш солі з вільною основою або сумі л солей, у вигляді одноразової добової терапевтичної дози. Недоліками аналога є необхідність контролю параметрів протягом всього процесу синтезу, та наявність коштовного обладнання. Відомим аналогом є спосіб одержання водорозчинної лікарської форми антибіотика з групи рифаміцинів [4], солюбілізованого альбуміном до порошку-ліофілізата, що включає: а) розчинення антибіотика з групи рифаміцинів, яка включає рифабутин, рифампіцин, рифапентин і рифаксимін і їх фармацевтично прийнятні похідні, в органічному розчиннику, вибраному з групи розчинників, що змішуються з водою, яка включає ацетон, етанол та ізопропанол; б) додавання до розчину, отриманого на стадії а), водного розчину альбуміну, отриманого розчиненням 1-10 % м/о альбуміну в стерилізованій демінералізованій воді; в) перемішування отриманої суміші; г) фільтрацію; д) додавання кріопротектора; е) заморожування; ж) висушування ліофільне або розпилювальне. Недоліками аналога є відносно складний процес отримання кінцевого продукту, тривалий час його отримання, наявність коштовного обладнання, чималі витрати енергетичних ресурсів. Найближчим аналогом є протимікробна композиція для інгібування біоплівкоутворення Pseudomonas aeruginosa [5], що містить антимікробний агент - катіонний поліпептид поліміксин, антимікробний агент карбопенем іміпенем. Недоліком найближчого аналога є коштовні компоненти і вузька сфера застосування. В основу корисної моделі поставлена задача підвищення ефективності антибіотиків, які дали змогу суттєво зменшити негативний вплив антибіотиків на організм людини і тварин при їх застосуванні, виключити супутні грибкові ускладнення і знизити вартість лікування антибіотиками. Поставлена задача вирішується тим, що способі підвищення ефективності антибіотиків, що при якому використовують антимікробний агент - катіонний поліпептид поліміксин, антимікробний агент карбопенем іміпенем, згідно з корисною моделлю, додатково водять колоїдний водний розчин наночасток срібла. Спосіб, може бути реалізований шляхом додавання до антибіотиків колоїдного розчину наночасток срібла в концентрації 0,5 %, 0,25 %. Синергітичну дію антибіотиків і наносрібла ілюструє дослід № С1. Дата 06-09.09.2012 Мета: визначення існування синергетичної протимікробної дії антибіотиків і водного розчину наночасток срібла. Матеріали: - № 5-17-5 - водний розчин срібла, виробництва ООО "Галвокс" Львів, Україна, отриманий 05.09.2012; 1 UA 114084 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 - Гентаміцин (Gentamycini sulfas Darnitsa, с. 71010), розчин для ін'єкцій в ампулах по 2 мл, 40 мг/мл; - Цефтриаксон КМП (ВАТ Киевмедпрепарат, с. 1521010, p. 11.2012), порошок для приготування розчину, 0,5 г флакон; - Тетрацикліну гідрохлорид (ЗАТ НВЦ "Борщаговский хіміко-фармацевтичний завод", с. 100411, p. 05.2014), пігулки 100 мг; - Тест-культура мікроорганізмів S.aureus ATCC 25923 - Поживні середовища: 1) поживний бульйон, ін. Оболенск, Росія; 2) поживний агар, "Експериментальний завод медичних препаратів", м. Київ, Україна. Методи: 1. Приготування розчинів № 5-17-5 з різними концентраціями срібла (метод подвійних розведень). Розведення вихідного препарату проводили стерильною дистильованою водою до кінцевої концентрації 10 %, подальші розведення проводили на поживному бульйоні до кінцевої концентрації 0,0625 %. 2. Приготування розчинів з різними концентраціями гентаміцину (метод подвійних розведень). Розведення вихідного препарату проводили стерильною дистильованою водою до концентрації 40 мкг/мл, а потім живильним бульйоном до кінцевої концентрації 0,03125 мкг/мл. 3. Приготування розчинів з різними концентраціями ципрофлоксацину (метод подвійних розведень). Таблетку в асептичних умовах подрібнювали, потім розчиняли стерильною дистильованою водою, якій проводили розведення до концентрації препарату 25 мкг/мл, потім живильним бульйоном до кінцевої концентрації 0,03125 мкг/мл. 4. Приготування розчинів з різними концентраціями цефтриаксону (метод подвійних розведень). Розведення вихідного препарату проводили стерильною дистильованою водою до концентрації 200 мкг/мл, а потім живильним бульйоном до кінцевої концентрації 0,25 мкг/мл. 5. Приготування розчинів з різними концентраціями тетрацикліну (метод подвійних розведень). Таблетку в асептичних умовах подрібнювали, потім розчиняли стерильною дистильованою водою, якій проводили розведення до концентрації препарату 100 мкг/мл, потім живильним бульйоном до кінцевої концентрації 0,03125 мкг/мл. 6. Приготування розчинів з сріблом і антибіотиками. До ряду пробірок з концентраціями антибіотиків, що подвійно зменшуються, на поживному бульйоні вносили (1:1) 0,5 % розчин срібла на поживному бульйоні, тобто при з'єднанні розчинів досягалася необхідна концентрація антибіотика і 0,25 % концентрація препарату срібла. Всього приготовлено 3 ряди: - концентрація гентаміцину 4,0-0,03125 мкг/мл+0,25 % розчину срібла; - концентрація цефтриаксону 32-0,25 мкг/мл + 0,25 % розчину срібла; - концентрація тетрацикліну 16-0,03125 мкг/мл+0,25 % розчину срібла. 7. Приготування суспензії тест-штаму S.aureus ATCC 25923 щільністю 0,5 ОД McFarland готували за допомогою приладу Densi-La-Meter (Lachema, Чехія). 8. Визначення МІК (мінімальної концентрації, тобто мінімальної концентрації протимікробного речовини, що затримує ріст тест-штаму мікроорганізму в стандартному досвіді) проводили макрометоцомом серійних розведень в бульйоні (НД - Наказ МОЗ України № 167 від 05.04.2007 р. "Про погодження матеріалів методичних вказівок "Визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів"). У всі приготовані дворазово убуваючі концентрації розчинів антибіотиків, срібла та 5 антибіотиків + срібло, а також в контрольну пробірку вносили 5*10 мікробних клітин/мл суспензії стафілокока. Контролями служили бульйон без протимікробних речовин з культурою стафілокока, бульйони з додаванням перший розведення випробуваних препаратів без стафілококу. Інкубація при 35 °C 18 годин. Облік результатів. Обліковою ознакою є наявність або відсутність мутності бульйону (росту культури) в пробірках. У контролі культури - муть, в контролях протимікробних речовин відсутність каламуті. Концентрація препарату в останній пробірці з прозорим бульйоном відповідає МІК препарату. 2 UA 114084 U 5 9. Визначення МБК (мінімальної бактерицидної концентрації). З трьох останніх пробірок з прозорим бульйоном проводили висів на чашки з живильним агаром. Інкубація при 37 °C 20 годин. Облік результатів. МБК - відзначена мінімальна концентрація препарату, висів з якої не дав зростання на агарі. Результати: Контроль культури - бульйон мутний (зростання). Контроль протимікробних препаратів - бульйон прозорий. Таблиця 1 Визначення МІК і МБК розчину № 5-17-5 для тест-штаму S.aureus ATCC 25923 Тест-штамм S.aureus ATCC 25923 Наявність каламуті (зростання) в пробірках (чашках) з концентраціями препарату № 5-17-5 (%) 0,5 0,25 0,125 немає/немає муть/ріст муть/ріст 10 МІК і МБК розчину № 5-17-5 для тест-штаму S.aureus ATCC 25923 0,5 %. Таблиця 2 Результати визначення МІК гентаміцину і гентаміцину + 0,25 % препарату срібла для тест-штаму S.aureus ATCC 25923 Діюча речовина Гентаміцин Гентаміцин + 0,25 % Ag 15 Наявність каламуті (зростання) в пробірках з концентраціями гентаміцину (мкг/мл) 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 0,125 0,0625 1,03125 немає немає немає немає немає муть муть муть немає немає немає немає немає немає муть муть МІК гентаміцину для тест - штаму S.aureus ATCC 25923-0,25 мкг/мл,при додаванні срібла 0,125 мкг/мл. Таблиця 3 Результати визначення МБК гентаміцину і гентаміцину + 0,25 % препарату срібла для тестштаму S.aureus ATCC 25923 Діюча речовина Гентаміцин Гентаміцин + 0,25 % Ag Наявність зростання на живильному агарі при висіві з пробірок з концентраціями гентаміцину (мкг/мл) 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 0,125 0,0625 0 03125 немає немає немає ріст ріст немає немає немає немає ріст ріст МБК гентаміцину для тест-штаму S.aureus ATCC 25923-1,0 мкг/мл, при додаванні срібла 0,5 мкг/мл. 20 Таблиця 4 Результати призначення МІК цефтриаксону і цефтриаксону + 0,25 % препарату срібла для тестштаму S.aureus ATCC 25923 Діюча речовина Цефтриаксон Цефтриаксон + 0,25 % Ag Наявність каламуті (зростання) в пробірках з концентраціями цефтриаксону (мкг/мл) 32,0 16,0 8,0 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 немає немає немає немає немає муть муть муть немає немає немає немає немає немає муть муть 3 UA 114084 U МІК цефтриаксону для тест-штаму S.aureus АТСС 25923-2,0 мкг/мл, при додаванні срібла 0,5 мкг/мл. Таблиця 5 Результати визначення МБК цефтриаксону і цефтриаксону + 0,25 % препарату срібла для тестштаму S.aureus АТСС 25923 Діюча речовина Цефтриаксон Цефтриаксон + 0,25 % Ag 5 Наявність зростання на живильному агарі при висіві з пробірок з концентраціями цефтриаксону (мкг/мл) 32,0 16,0 8,0 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 немає ріст ріст ріст ріст немає немає немає ріст ріст МБК цефтриаксону для тест-штаму S.aureus АТСС 25923-32,0 мкг/мл, при додаванні срібла - 8,0 мкг/ мл. Таблиця 6 Результати визначення МІК тетрацикліну і тетрацикліну + 0,25 % препарату срібла для тестштаму S.aureus АТСС 25923 Діюча речовина Тетрациклин Тетрациклин + 0,25 % Ag 10 Наявність каламуті (зростання) в пробірках з концентраціями тетрацикліну (мкг/мл) 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 0,125 0,0625 0,03125 немає немає немає немає немає муть муть муть немає немає немає немає немає немає муть муть МІК тетрацикліну для тест-штаму S.aureus АТСС 25923-0,25 мкг/мл, при додаванні срібла 0,125 мкг/мл. Таблиця 7 Результати визначення МБК тетрацикліну і тетрацикліну + 0,25 % препарату срібла для тестштаму S.aureus АТСС 25923 Діюча речовина Тетрациклін Тетрациклін + 0,25 % Ag Наявність зростання на живильному агарі при висіві з пробірок з концентраціями тетрацикліну (мгг/мл) 16,0 8,0 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 0,125 ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст немає немає немає немає ріст ріст ріст ріст Висновок: виявлено синергетичне дію водного розчину срібла (препарат № 5-17-5) та антибіотиків для тест- штаму S.aureus АТСС 25923 (зменшення МІК і МБК в 2-4 рази). 15 20 25 Джерело інформації: 1. Карбонати феніколових антибіотиків. Патент України № 96285 МПК (2006) A61L 31/16 25.10.2011, бюл. № 20. Аналог. 2. Фармацевтична композиція, яка містить антибіотик, триазол і кортикостероїд. Патент України № 89793 МПК (2006) A61L 10.03.2010, бюл. № 5. Аналог. 3. Композиція хінонового антибіотика (варіанти) і спосіб її одержання. Патент України № 83616, МПК (2006), A61L 11.08.2008, бюл. № 15. Аналог. 4. Спосіб одержання водорозчинної лікарської формі антибіотика з групи рифаміцинів. Патент України № 108527, МПК (2006), А61 12.05.2015, бюл. № 4/2015. Аналог. 5. Протимікробна композиція для інгібування біоплівкоутворення pseudomonas aeroginosa. Патент України № 82743, МПК (2006) А61К 31/00, 12.08.2013 бюл. № 15/2013. Прототип. 4 UA 114084 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Спосіб підвищення ефективності антибіотиків, при якому використовують антимікробний агент катіонний поліпептид поліміксин, антимікробний агент карбопенем іміпенем, який відрізняється тим, що додатково вводять колоїдний водний розчин наночасток срібла. Комп’ютерна верстка М. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5