4-(n-бензил) амінокарбоніл-1-метилпіридиній йодид-знеболюючий засіб з інтерфероногенними, протизапальними та жарознижуючими властивостями

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии болевых синдромов (головные, мышечные, суставные боли, болевой синдром при остеохондрозе, радикулитах, каудитах, ганглионитах), острых респираторных вирусных инфекций, гриппа, лихорадочных состояний с помощью нового физиологически активного вещества из группы аралкиламидов изоникотиновой кислоты - 4-(Nбензил)аминокарбонил-1-метил-пиридиний йодида (амизона). Аналоги по структуре, обладающие сходным спектром активности в клинике, среди известных лекарственных средств не обнаружены (в литературе не описаны). Аналогами по анальгезирующему и интерфероногенному действию являются соответственно амидопирин и мефенамовая кислота (1). Недостатками амидопирина являются способность вызывать при длительном применении агранулоцитоз, наличие мутагенных свойств (2), Недостаткамимефенамовой кислоты являются раздражающее действие на желудочно-кишечный тракт, способность при длительном введении вызывать агранулоцитоз (1,2). Задачей предполагаемого изобретения является получение обезболивающего средства с интерфероногенным, противовоспалительным, жаропонижающим действием, отличающегося от известных анальгезирующих и противовоспалительных средств наличием иммуношэдулирующей активности, отсутствием способности вызывать привыкание и пристрастие, оказывать ульцероген-ное, гемо-, гепато-, нефротоксическое действие. Поставленная задача реализуется созданием препарата на основе физиологически активного вещества из группы аралкиламидов изоникотиновой кислоты, точнее 4-(М-бензил)аминокаобонил-1-ме Амизон представляет собой ярко-желтый или желтый с оранжевым оттенком кристаллический порошок со слабым специфическим запахом с молекулярной массой 354,19, плавится при 185-189°С с разложением, растворим в воде, малорастворим в 95% спирте, практически нерастворим в хлороформе и эфире. Синтез препарата состоит из двух стадий, прост в исполнении, технологичен, не требует создания специальных установок. Смесь 12,3 г (0,1 моль) изоникотиновой кислоты и 21,4 г (0,2 моль) бензиламина помещают в круглодонную колбу, снабженную нисходящим Холодильником, и нагревают на масляной бане при 200-220°С в течение 30-40 мин. При этом вначале отгоняется образующаяся в результате конденсации вода (контроль конца реакции осуществляется по определению количества выделившейся воды), а затем избыток бензиламина. Остаток в колбе охлаждают и добавляют 100мл ацетона. Колбу снабжают обратным холодильником, механической мешалкой с затвором, капельной воронкой и нагревают до 40-50°С. Прибавляют 28,4 г (0,2 моль) йодистого метила при интенсивном размешивании в течение 2 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, желтоватый кристаллический осадок отфильтровывают, промывают эфиром, сушат. Кристаллизируют из этанола с добавлением активированного угля. Выход 30,0 г (90% от теории). ИК-спектр 4-(N-бензил)аминокарбонил-1-метилпиридиний йодида см-1: 1670 (ОО), 1540 (NH), 855 (монозамещенный бензол). УФ-спектр в виде спиртового раствора, l, нм: 267 ±2. Амизон относится к ненаркотическим анальгетикам, обладает интерфероноген-ной, противовоспалительной, жаропонижающей активностью. Экспериментальные данные показывают, что амизон малотоксичен, не уступает по аиалыезирующей активности амидопирину, бруфену, на отдельных моделях ортофену (пример 1). По противовоспалительной и жаропонижающей активности амизон превосходит применяемые в медицинской практике бруфен, бутадион, салицилат натрия, мефена-минат натрия (примеры 2 и 3), Наличие в спектре фармакологической активности амизона интерфероногенных свойств (пример 4) расширяет сферу применения препарата, в частности, для повышения резистентное™ организма к вирусной (гриппозной) инфекции (пример 5). Отсутствие гемотоксических свойств и раздражающего действия на желудочно-кишечный тракт выгодно отличает амизон от известных ненаркотических анальгетиков, нестероидных противовоспалительных средств. Амизон назначают перорально из расчета 1-2 таблетки (0,25-0,5 г.) 2-3 раза в сутки (до 1,5 г) при головных, мышечных, суставных болях, болях при остеохондрозе, радикулитах, каудитах, ганглионитах, острых респираторных вирусных инфекциях, гриппе, лихорадочных состояниях. При болевых синдромах, лихорадочных состояниях из расчета 1-2 таблетки (0,25-0,5 г) по мере необходимости. Для лечения ОРВЙ, гриппа - по 1-2 таблетки (0,25-0,5 г) 3 раза в сутки. Продолжительность непрерывного приема препарата - 10 дней. Пример 1. Анальгезирующая активность амизона на моделях термического, химического, механического раздражения. В качестве химического раздражителя использовали 3% уксусную кислоту, внутрибрюшинное введение которой из расчета 0,1 мл/10 г массы мышам приводит к возникновению у подопытных животных "корчей" непроизвольных сокращений брюшных мышц, сопровождающихся вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины (3). Регистрация "корчей" производилась в течение 21 мин с момента введения кислоты. Амизон и препараты сравнения вводили внутрижелудочно в интервале доз, позволяющем в дальнейшем рассчитать ЕД50 для каждого препарата (4). Как показали эксперименты (табл.1), амизон обладает значимой анальгезирую-щей активностью на данной модели ноци-цептивной стимуляции. При этом, он превосходит по активности производные пиразолона (анальгин, амидопирин, бутадион), салицилат натрия, бруфен, но несколько уступает по активности ортофену. По широте терапевтического действия (отношение ЕД50 к ЛД50)амизон существенно превосходит все указанные препараты (табл.1). Исследование анальгезирующей активности амизона при термическом раздражении проведено по методу "горячей пластинки" (5). Критерием оценки служил процент изменения к исходному латентного периода реакции "облизывания" задней лапы. Эксперименты показали (табл.2), что амизон обладает значимой анальгезирующей активностью в данном тесте. При этом, на указанной модели болевого раздражения амизон превосходит по анальгезирующей активности анальгин, ортофен, бутадион, бруфен, салицилат натрия. В эквимолярных с амидопирином дозах превосходит по активности последний (табл.2). Влияние амизона на болевую чувствительность при механическом раздражении интактной лапки в сравнении с воспаленной исследовано по методу Randall et Sellrto (6). Воспаление вызывали путем субплантарного введения крысам 0,1 мл 1 % раствора каррагенина. Амизон и препараты сравнения вводили перорально за 1 ч до введения кар-рагенина. Пороги болевой чувствительности измеряли до введения веществ и через 4 ч после введения каррагенина (пик воспаления). Эксперименты показали, что амизон, обладая значимой анальгезирующей активностью в данном тесте (табл.3), существенно превосходит по активности препараты сравнения амидопирин и анальгин. Пример 2. Противовоспалительная активность амизона Сравнительное изучение противовоспалительной активности амизона салицилата натрия, бутадиона и бруфена, мефенамината натрия проведено на моделях формалинового, каолинового, каррагенинового отеков, которые вызывали у крыс путем субплантарного введения 0,1 мл 2% раствора формалина, 10% раствора каолина, 1% раствора каррагенина. Величину отека регистрировали плетизмометрически (7) на пике воспаления (4 ч после введения флогогенных веществ) и рассчитывали процент ингибиции отека (8). Испытуемые вещества вводили внутрибрюшинно или перорально за 30 или 60 мин до введения флогогенных агентов. Эксперименты показали, что при внут-рибрюшинном введении в дозе 10% ЛД50 амизон превосходит по активности бруфен, салицилат натрия, мефенаминат натрия на моделях формалинового и каолинового отеков и проявляет активность, близкую к таковой бутадиона (табл.4). При пероральном введении амизон также проявляет выраженный антиэкссудативный эффект. При этом, по способности предупреждать развитие каррагенинового отека амизон в 11 раз активнее салицилата натрия, в 6 раз бутадиона, в 2,5 раза - бруфена (при сопоставлении ЕД50, выраженных в мМ/кг) (табл.5). На модели формалинового отека амизон при пероральном введении эффективнее салицилата натрия, бутадиона и бруфена соответственно в 19, 6 и 5 раз. Пример 3. Жаропонижающие свойства амизона. Жаропонижающие свойства амизона исследовались на крысах массой 150-180 г. Повышение температуры тела у крыс достигалось введением пирогенала (500 МПД, внутривенно, на 1 кг массы тела) или молока (5 мл/кг внутримышечно). Исследуемые препараты вводили перорально в период максимального подъема температуры у животных -(2 ч после введения пирогенала, 3 ч после введения молока). Температуру тела у крыс измеряли с помощью электротермометра в прямой кишке на глубине 2-3 см. Изменение температуры регистрировали в динамике через 1,2,3 ч с момента введения препарата. Установлено, что амизон в дозе 5% ЛД50 на модели пирогеналовой лихорадки проявляет эффект, близкий ктаковому при использовании бруфена, бутадиона и салицилата натрия в дозе 10% ЛД50 (табл.6). На модели "Молочной лихорадки" амизон при внутрибрюшинном введении в дозе 50 мг/кг (1/7 ЛД50) снижал температуру тела животных на 1,6±0,22°С. Пример 4. Интерфероногенные свойства амизона. Интерферон в сыворотке крови мышей определяли по методу подавления цитопатического действия вируса везикулярного стоматита (9). Использовали перевиваемую культуру лимфоидных клеток мышей ОН (получена из института проблем онкологии АН УССР). Двукратные разведения сывороток вносили в пробирки с культурой клеток и инкубировали в течение 24 ч при температуре 37°С. Для разведения сывороток (1:41:512) использовали среду 199 с 5% сыворотки крупного рогатого скота. Затем культуральную среду удаляли и вносили вирус в дозе 100 ИЕ/мл. Спустя 20-24 ч проводили учет индукции интерферона. Опыты проведены на мышах массой 16-18 г, В каждой серии использовано по 5 белых нелинейных мышей. Применяли 2 способа введения амизона: внутрибрюшин-но (1; 10; 100 мг/кг, объем вводимой жидкости составлял 0,2 мл на мышь) и перорально (25,50 и 100 мг/кг). Мышей декапитировали через 6 и 18 ч после введения препарата. Кровь собирали в гепаринизированные пробирки. Контрольные серии составили интактные животные и мыши, которым вводили стандартный индуктор интерферона поли И:поли Ц. Пробирки помещали на 24 ч в камеру с температурой 4°С, подкис центрифугировали, подкисляли 6 н. HCI до рН 2,0 и оставляли на 24-48 ч при 4°С, затем рН доводили до 7,2-7,4 и готовили разведения сывороток. Полученные результаты (табл.7) свидетельствуют, что при внутрибрюшинном введении амизона максимальный уровень интерферона регистрируется спустя 18 ч при использовании его в дозах 10 и 1 мг/кг, В случае перорального использования препарата высокий уровень интерферона (1:256) определялся спустя 18 ч после введения амизона в дозе 50 мг/кг. У интактных животных титр интерферона составил 1:4, а у мышей, получавших поли И:поли Ц-1:512 (через 6 ч) и 1:64 (через 18 ч). Следовательно амизон обладает выраженной интерферо-ногенной активностью, сравнимой со стандартным индуктором поли И:поли Ц. В отличие от последнего эффект амизона развивается медленнее (максимум через 18 ч). Пример 5. Защитный эффект амизона при гриппозной инфекции. Амизон вводили интраназально однократно белым нелинейным мышам массой 18-20 г по 0,05 мл в количестве 1 мг на мышь за 24 ч до заражения вирусом гриппа А (нконг) 68, адаптированным к мышам в количестве, соответствующем 10 ЛД50. В качестве эталонного препарата использовали ремантадин (1 мг/мышь, однократно, интраназально). Амизон оказывает выраженный защитный эффект при гриппозной инфекции, сопоставимый с таковым ремантадина (табл.8).