Кон’югат похідне каліхеаміцину-антитіло, спосіб його одержання та способи лікування

1. Спосіб отриманя кон'югатів "похідне мономерного каліхеаміцину/антитіло" із зниженим вмістом низькокон'югованої фракції (LCF), що мають формулу: Pr(-Х-S-S-W)m, де: Рr являє собою антитіло; X являє собою гідролізований лінкер, здатний вивільняти каліхеаміцин з вказаного кон’югата після його зв'язування і проникнення в клітинимішені; W являє собою каліхеаміцин; m означає середнє навантаження очищеного продукту кон’югата, при якому каліхеаміцин становить 4-10% за масою кон’югата; і (-Х-S-S-W)m являє собою похідне каліхеаміцину, де вказаний спосіб включає стадії: 2 (19) 1 3 довність SEQ ID NО:28. 6. Спосіб за п.1, де антитіло є гуманізованим антитілом і містить важкий ланцюг, що містить послідовність SEQ ID NО:30. 7. Спосіб за п.1, де антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність SEQ ID NО:28, і важкий ланцюг, що містить послідовність SEQ ID NО:30. 8. Спосіб за п.1, де антитіло містить послідовність SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO:2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27, або залишки 50-66 для gH1 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH4 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH6 на фігурі 6 для CDR-H2, SEQ ID NO:3 для CDR-H3, SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 і SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 9. Спосіб за п.8, де антитіло містить залишки 5066 послідовності SEQ ID NO:27 для CDR-H2. 10. Спосіб за п.3, де гуманізоване анти-CD22 антитіло являє собою CDR-прищеплене антитіло, яке являє собою варіант антитіла, отриманий відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання і що має підвищену специфічність до CD22 людини. 11. Спосіб за п.1, де каліхеаміцин являє собою гамма-каліхеаміцин або N-ацетил-гаммакаліхеаміцин. 12. Спосіб за п.1 або 11, де каліхеаміцин функціоналізований 3-меркапто-3метилбутаноїлгідразидом. 13. Спосіб за п.1, де вказаним гідролізованим лінкером є 4-(4-ацетилфенокси)бутанова кислота (АсBut). 14. Спосіб за п.1, де добавкою, що використовується в стадії (2)(b), є октанова кислота або її сіль. 15. Спосіб за п.1, де добавкою, що використовується в стадії (2)(b), є деканова кислота або її сіль. 16. Спосіб за п.1, де добавку, що використовується в стадії (2)(b), вводять в концентрації менше ніж 200 мМ. 17. Спосіб за п.16, де добавку вводять в концентрації менше ніж 100 мМ. 18. Спосіб за п.17, де добавку вводять в концентрації менше ніж 50 мМ 19. Спосіб за п.1, де процесом розділювальної хроматографії на стадії (3) є ексклюзійна хроматографія (SЕС). 20. Спосіб за п.1, де процесом розділювальної хроматографії на стадії (3) є ВЕРХ, РЕРХ або хроматографія на Сефакрилі S-200. 21. Спосіб за п.1, де процесом розділювальної хроматографії на стадії (3) є гідрофобна хроматографія (ГФХ). 22. Спосіб за п.21, де гідрофобну хроматографію (ГФХ) здійснюють з використанням як хроматографічного середовища фенілсефарози 6 Fast Flow, бутилсефарози 4 Fast Flow, октилсефарози 4 Fast Flow, Toyopearl Ether-650M, метилового ГФХ-середовища Macro-Prep або трет-бутилового ГФХ-середовища Macro-Prep. 23. Спосіб за п.21, де вказану гідрофобну хроматографію (ГФХ) здійснюють з використанням як хроматографічного середовища бутилсефарози 4 Fast Flow. 88599 4 24. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" із зниженим вмістом низькокон'югованої фракції (LCF), нижче 10 процентів, що має формулу: Pr(-Х-S-S-W)m, де: Рr являє собою анти-CD22 антитіло; X являє собою гідролізований лінкер, здатний вивільнювати каліхеаміцин з вказаного кон’югата після його зв’язування і проникнення в клітинимішені; W являє собою каліхеаміцин; m означає середнє навантаження очищеного продукту кон’югата, при якому каліхеаміцин становить 4-10% за вагою кон’югата; і (-Х-S-S-W)m являє собою похідне каліхеаміцину. 25. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло вибране з групи, що складається з моноклонального антитіла, химерного антитіла, антитіла людини, гуманізованого антитіла, одноланцюжкового антитіла і біологічно активного фрагмента антитіла, де біологічно активний фрагмент являє собою Fab, модифікований Fab, Fab', F(ab')2 або Fv, або мономер або димер важкого ланцюга. 26. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:19, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:27. 27. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло являє собою гуманізоване антитіло і містить легкий ланцюг, що має послідовність SEQ ID NO:28. 28. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло являє собою гуманізоване антитіло і містить важкий ланцюг, що має послідовність SEQ ID NO:30. 29. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність SEQ ID NO:28, і важкий ланцюг, що містить послідовність SEQ ID NO:30. 30. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де вказане антиСD22 антитіло має специфічність до CD22 людини і містить важкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на Фіг.1 як H1 (SEQ ID NO:1) для CDR-H1, як H2 (SEQ ID NO:2) або H2' (SEQ ID NO:13), або H2'' (SEQ ID NO:15), або H2''' (SEQ ID NO:16) для CDR-H2, або як H3 на Фіг.1 (SEQ ID NO:3) для CDR-H3, і містить легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на Фіг.1 як L1 (SEQ ID NO:4) для CDR-L1, як L2 (SEQ ID NO:5) для CDR-L2, або як L3 на Фіг.1 (SEQ ID NO:6) для CDR-L3. 31. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де антитіло містить важкий ланцюг, де його варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послі 5 довностей SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO:2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15 або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27, або залишки 50-66 для gH1 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH4 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH6 на фігурі 6 для CDR-H2, або SEQ ID NO:3 для CDR-H3, і містить легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2, або SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 32. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло містить SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO:2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27, або залишки 50-66 для gH1 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH4 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH6 на фігурі 6 для CDR-H2, SEQ ID NO:3 для CDR-H3, SEQ ID NO:4 для CDRL1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 і SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 33. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.32, де анти-CD22 антитіло містить залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27 для CDR-H2. 34. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.25, де гуманізоване анти-CD22 антитіло являє собою CDRприщеплене анти-CD22 антитіло. 35. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.34, де гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, яке являє собою варіант антитіла, отриманий відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання і що має підвищену специфічність до CD22 людини. 36. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен, що містить акцепторні каркасні області людини і донорні CDR, що не є людськими. 37. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.36, де акцепторні каркасні області людини варіабельного домену важкого ланцюга антитіла засновані на SEQ ID NO:21 і 22 і містять залишки в положеннях 1, 28, 48, 72 і 97 послідовності SEQ ID NO:8. 38. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.37, де анти-CD22 антитіло додатково містить донорні залишки в положеннях 68 і 70 послідовності SEQ ID NO:8. 39. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.36, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить акцепторну каркасну область людини, засновану на SEQ ID NO:17 і 18, і таку, що додатково містить донорні залишки в положеннях 2, 4, 42, 43, 50 і 65 послідовності SEQ ID NO:7. 40. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.39, де анти-CD22 антитіло додатково містить донорні залишки в положенні 3 послідовності SEQ ID NO:7. 41. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміци 88599 6 ну/анти-CD22 антитіло" за п.24, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:7, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:8. 42. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.25, де анти-CD22 антитіло містить гібрид CDR, що містить усічену донорну послідовність CDR, де пропущена частина донорного CDR заміщена іншою послідовність і утворює функціональний CDR. 43. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де каліхеаміцин являє собою гамма-каліхеаміцин або N-ацетилгамма-каліхеаміцин. 44. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24 або 43, де каліхеаміцин функціоналізований 3-меркапто-3метилбутаноїлгідразидом. 45. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, де гідролізований лінкер являє собою 4-(4-ацетилфенокси)масляну кислоту (AcBut). 46. Спосіб отриманя стабільної ліофілізованої композиції кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/антитіло", де спосіб включає: (а) розчинення кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/антитіло" за п.24 до кінцевої концентрації 0,5-2мг/мл в розчині, що містить кріозахисний агент в концентрації 1,5-5% за масою, полімерний наповнювач вконцентрації 0,5-1,5% за масою, електроліти в концентрації 0,01М-0,1М, агент, що сприяє розчиненню, в концентрації 0,005-0,05% за масою, буферний агент в концентрації 5-50 мМ, необхідній для доведення кінцевого значення рН розчину до 7,8-8,2, і воду; (b) розподіл вищезгаданого розчину по посудинах при температурі від +5 °С до +10 °С; (с) заморожування вказаного розчину при температурі заморожування від -35 °С до -50 °С; (d) проведення попередньої стадії ліофілізації замороженого розчину для його первинного сушіння під тиском 20-80 мікропаскаль і при температурі зберігання від -10°С до -40°С протягом 24-78 годин; і (е) проведення повторної стадії сушіння ліофілізованого продукту стадії (d) під тиском 20-80 мікропаскаль і при температурі зберігання від +10°С до +35°С протягом 15-30 годин. 47. Спосіб за п.46, де каліхеаміцин похідного каліхеаміцину являє собою гамма-каліхеаміцин або N-ацетилкаліхеаміцин. 48. Спосіб за п.46, де антитіло вибране з групи, що складається з моноклонального антитіла, химерного антитіла, антитіла людини, гуманізованого антитіла, одноланцюжкового антитіла і біологічно активного фрагмента, де біологічно активний фрагмент антитіла являє собою Fab, модифікований Fab, Fab', F(ab')2 або Fv, або мономер або димер важкого ланцюга. 49. Спосіб за п.48, де антитіло являє собою моноклональне антитіло людини. 50. Спосіб за п.48, де антитіло являє собою химерне антитіло. 51. Спосіб за п.48, де антитіло являє собою анти 7 тіло людини. 52. Спосіб за п.48, де антитіло являє собою гуманізоване антитіло. 53. Спосіб за п.46, де антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:19, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:27. 54. Спосіб за п.46, де гуманізоване антитіло являє собою CDR-прищеплене антитіло, що має специфічність відносно CD22 людини, і містить легкий ланцюг з послідовністю SEQ ID NO:28. 55. Спосіб за п.46, де гуманізоване антитіло являє собою CDR-прищеплене антитіло, що має специфічність відносно CD22 людини, і містить важкий ланцюг з послідовністю SEQ ID NO:30. 56. Спосіб за п.46, де антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:28, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:30. 57. Спосіб за п.46, де антитіло має специфічність відносно CD22 людини і містить важкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на фігурі 1 як H1 (SEQ ID NO:1) для CDR-H1, як H2 (SEQ ID NO:2) або H2' (SEQ ID NO:13), або H2'' (SEQ ID NO:15), або H2''' (SEQ ID NO:16) для CDRH2, або як H3 (SEQ ID NO:3) для CDR-H3, і містить легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на фігурі 1 як L1 (SEQ ID NO:4) для CDR-L1, як L2 (SEQ ID NO:5) для CDR-L2 або як L3 (SEQ ID NO:6) для CDR-L3. 58. Спосіб за п.46, де антитіло містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO:2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 для gH1 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH4 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH6 на фігурі 6 для CDR-H2, або SEQ ID NO:3 для CDR-H3, і легкого ланцюга, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 або SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 59. Спосіб за п.46, де антитіло містить SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO: 2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27, або залишки 50-66 для gH1 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH4 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH6 на фігурі 6 для CDR-H2, SEQ ID NO:3 для CDR-H3, SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 і SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 60. Спосіб за п.59, де антитіло містить залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27 для CDR-H2. 61. Спосіб за п.46, де гуманізоване антитіло являє собою CDR-прищеплене антитіло, яке являє собою варіант антитіла, що має підвищену специфічність відносно CD22 людини, де варіант антитіла отриманий відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання. 62. Спосіб за п.46, де антитіло містить варіабельний домен, що містить акцепторні каркасні області людини і донорні CDR, що не є людськими. 63. Спосіб за п.62, де акцепторні каркасні області 88599 8 людини варіабельного домену важкого ланцюга анти-CD22 антитіла засновані на SEQ ID NO:21 і 22 і містять донорні залишки в положеннях 1, 28, 48, 72 і 97 послідовності SEQ ID NO:8. 64. Спосіб за п.63, де антитіло, крім того, містить донорні залишки в положеннях 68 і 70 послідовності SEQ ID NO:8. 65. Спосіб за п.62, де антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить акцепторну каркасну область людини, засновану на SEQ ID NO:17 і 18, і, крім того, містить донорні залишки в положеннях 2, 4, 42, 43, 50 і 65 послідовності SEQ ID NO:7. 66. Спосіб за п.65, де антитіло, додатково, містить донорний залишок в положенні 3 послідовності SEQ ID NO:7. 67. Спосіб за п.46, де антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:7, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:8. 68. Спосіб за п.46, який додатково, необов'язково містить біоактивний агент в терапевтично ефективній кількості. 69. Спосіб за п.68, де біоактивним агентом є цитотоксичний засіб. 70. Спосіб за п.68, де біоактивним агентом є фактор росту. 71. Спосіб за п.68, де біологічним агентом є гормон. 72. Спосіб за п.68, де біологічним агентом є антитіло. 73. Спосіб за п.46, де кріозахисний агент вибраний з групи, що містить альдит, маніт, сорбіт, інозит, поліетиленгліколь, альдонову кислоту, уронову кислоту, альдарову кислоту, альдози, кетози, аміноцукри, альдити, інозити, гліцеральдегіди, арабінозу, ліксозу, пентозу, рибозу, ксилозу, галактозу, глюкозу, гексозу, ідозу, манозу, талозу, гептозу, глюкозу, фруктозу, глюконову кислоту, сорбіт, лактозу, маніт, метил-α-глюкопіранозид, мальтозу, ізоаскорбінову кислоту, аскорбінову кислоту, лактон, сорбозу, глюкарову кислоту, еритрозу, треозу, арабінозу, алозу, альтрозу, гулозу, ідозу, талозу, еритрулозу, рибулозу, ксилулозу, псикозу, тагатозу, глюкуронову кислоту, глюконову кислоту, глюкарову кислоту, галактуронову кислоту, мануронову кислоту, глюкозамін, галактозамін, сахарозу, трегалозу, нейрамінову кислоту, арабінани, фруктани, фукани, галактани, галактуронани, глюкани, манани, ксилани, леван, фукоїдан, карагенан, галактокаролозу, пектини, пектинові кислоти, амілозу, пулулан, глікоген, амілопектин, целюлозу, декстран, пустулан, хітин, агарозу, кератин, хондротин, дерматан, гіалуронову кислоту, альгінову кислоту, ксантанову камедь, крохмаль, сахарозу, глюкозу, лактозу, трегалозу, етиленгліколь, поліетиленгліколь, поліпропіленгліколь, гліцерин и пентаеритрит. 74. Спосіб за п.73, де кріозахисним агентом є сахароза. 75. Спосіб за п.74, де сахароза присутня в концентрації 1,5 % за масою. 76. Спосіб за п.46, де полімерним наповнювачем є декстран 40, присутній в концентрації 0,9% за масою. 9 77. Спосіб за п.46, де полімерним наповнювачем є гідроксіетильований крохмаль 40, присутній в концентрації 0,9% за масою. 78. Спосіб за п.46, де електролітом є хлорид натрію, присутній в концентрації 0,05М. 79. Спосіб за п.46, де агентом, що підвищує розчинність, є поверхнево-активна речовина. 80. Спосіб за п.79, де поверхнево-активною речовиною є полісорбат 80, присутній в концентрації 0,01% за масою. 81. Спосіб за п.46, де забуференим агентом є трометамін, присутній в концентрації 0,02М. 82. Спосіб за п.46, де рН розчину стадії (а) становить 8,0. 83. Спосіб за п.46, де розчин на стадії (b) розподіляють по судинах при температурі +5°С. 84. Спосіб за п.46, де на стадії (с) заморожування вказаного розчину в судинах здійснюють при температурі -45°С. 85. Спосіб за п.46, де на стадії (d) заморожений розчин піддають попередній стадії ліофілізації для первинного сушіння під тиском 60 мікропаскаль і при температурі зберігання -30°С протягом 60 годин. 86. Спосіб за п.46, де на стадії (е) ліофілізований продукт стадії (d) піддають другій стадії сушіння під тиском 60 мікропаскаль і при температурі зберігання +25 °С протягом 24 годин. 87. Композиція, що містить терапевтично ефективну дозу кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24, отримана: (а) розчиненням кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" до кінцевої концентрації 0,5-2 мг/мл в розчині, що містить кріозахисний агент в концентрації 1,5-5% за масою, полімерний наповнювач в концентрації 0,51,5% за масою, електроліти в концентрації 0,01М 0,1 М, агент, що сприяє розчиненню, в концентрації 0,005-0,05% за масою, забуферювальний агент в концентрації 5-50мМ, необхідній для доведення кінцевого значення рН розчину до 7,8-8,2, і воду; (b) розподілом вищезгаданого розчину по посудинах при температурі від +5°С до +10°С; (с) заморожуванням вказаного розчину при температурі заморожування від -35°С до -50°С; (d) проведенням попередньої стадії ліофілізації замороженого розчину для його первинного сушіння під тиском 20-80 мікропаскаль і при температурі зберігання від -10°С до -40°С протягом 24-78 годин; і (е) проведенням повторної стадії сушіння ліофілізованого продукту стадії (d) під тиском 20-80 мікропаскаль і при температурі зберігання від +10°С до +35°С протягом 15-30 годин. 88. Композиція за п.87, де анти-CD22 антитіло вибране з групи, що складається з моноклонального антитіла, химерного антитіла, антитіла людини, гуманізованого антитіла, одноланцюжкового антитіла і біологічно активного фрагмента, де біологічно активний фрагмент антитіла являє собою Fab, модифікований Fab, Fab', F(ab')2 або Fv, або мономер або димер важкого ланцюга. 89. Композиція за п.88, де анти-CD22 антитіло являє собою моноклональне антитіло людини. 88599 10 90. Композиція за п.88, де анти-CD22 антитіло являє собою химерне антитіло. 91. Композиція за п.88, де анти-CD22 антитіло являє собою антитіло людини. 92. Композиція за п.88, де анти-CD22 антитіло являє собою гуманізоване антитіло. 93. Композиція за п.87, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:19, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO: 27. 94. Композиція за п.87, де гуманізоване антиCD22 антитіло являє собою CDR-прищеплене антитіло, що має специфічність відносно CD22 людини, і містить легкий ланцюг з послідовністю SEQ ID NO:28. 95. Композиція за п.87, де гуманізоване антитіло являє собою CDR-прищеплене антитіло, що має специфічність відносно CD22 людини, і містить важкий ланцюг з послідовністю SEQ ID NO:30. 96. Композиція за п.87, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:28, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:30. 97. Композиція за п.87, де анти-CD22 антитіло має специфічність відносно CD22 людини, і містить важкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на фігурі 1 як H1 (SEQ ID NO:1) для CDR-H1, як H2 на Фіг.1 (SEQ ID NO:2) або H2' (SEQ ID NO:13), або H2'' (SEQ ID NO:15), або H2''' (SEQ ID NO:16) для CDR-H2, або як H3 на Фіг.1 (SEQ ID NO:3) для CDR-H3, і містить легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на фігурі 1 як L1 (SEQ ID NO:4) для CDR-L1, як L2 на Фіг.1 (SEQ ID NO:5) для CDR-L2, або як L3 на Фіг.1 (SEQ ID NO:6) для CDR-L3. 98. Композиція за п.87, де антитіло містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO:2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 для gH1 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH4 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH6 на фігурі 6 для CDR-H2, або SEQ ID NO:3 для CDR-H3, і легкого ланцюга, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 або SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 99. Композиція за п.87, де анти-CD22 антитіло містить SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO: 2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27, або залишки 50-66 для gH1 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH4 на фігурі 6, або залишки 50-66 для gH6 на фігурі 6 для CDR-H2, SEQ ID NO:3 для CDR-H3, SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 і SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 100. Композиція за п.99, де анти-CD22 антитіло містить залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27 для CDR-H2. 101. Композиція за п.88, де гуманізоване антиCD22 антитіло являє собою CDR-прищеплене антитіло, яке являє собою варіант антитіла, що має підвищену специфічність відносно CD22 людини, 11 де варіант антитіла отриманий відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання. 102. Композиція за п.87, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен, що містить акцепторні каркасні області людини і донорні CDR, що не є людськими. 103. Композиція за п.102, де акцепторні каркасні області людини варіабельного домену важкого ланцюга анти-CD22 антитіла засновані на SEQ ID NO:21 і 22 і містять донорні залишки в положеннях 1, 28, 48, 72 і 97 послідовності SEQ ID NO:8. 104. Композиція за п.103, де анти-CD22 антитіло, додатково, містить донорні залишки в положеннях 68 і 70 послідовності SEQ ID NO:8. 105. Композиція за п.102, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить акцепторну каркасну область людини, засновану на SEQ ID NO:17 і 18, і, крім того, що містить донорні залишки в положеннях 2, 4, 42, 43, 50 і 65 послідовності SEQ ID NO:7. 106. Композиція за п.105, де анти-CD22 антитіло, додатково, містить донорний залишок в положенні 3 послідовності SEQ ID NO:7. 107. Композиція за п.87, де анти-CD22 антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:7, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:8. 108. Композиція за п.87, де каліхеаміцин в похідному каліхеаміцину являє собою гаммакаліхеаміцин або N-ацетилкаліхеаміцин. 109. Композиція за п.87, яка додатково, необов'язково містить біоактивний агент. 110. Композиція за п.109, де біоактивним агентом є цитотоксичний засіб. 111. Композиція за п.109, де біоактивним агентом є фактор росту. 112. Композиція за п.109, де біологічним агентом є гормон. 113. Композиція за п.109, де біологічним агентом є антитіло. 114. Спосіб лікування індивідуума, що страждає проліферативним розладом, при якому експресується CD22, що включає введення терапевтично ефективної дози композиції, що містить кон'югат "мономерний каліхеаміцин/анти-CD22 антитіло" за п.24. 115. Спосіб лікування за п.114, де терапевтично ефективну дозу вказаної композиції вводять підшкірно, внутрішньочеревинно, внутрішньовенно, внутрішньоартеріально, інтрамедулярно, інтратекально, трансдермально, черезшкірно, інтраназально, місцево, внутрішньокишково, інтравагінально, під'язиково або ректально. 116. Спосіб лікування за п.114, де терапевтично ефективну дозу вказаної композиції вводять внутрішньовенно. 117. Спосіб за п.114, де індивідуумом є людина, а вказаним проліферативним розладом є рак. 118. Спосіб за п.117, де раковим захворюванням є злоякісна В-клітинна пухлина. 119. Спосіб за п.118, де злоякісною В-клітинною пухлиною є лейкоз. 120. Спосіб за п.119, де клітини вказаного лейкозу експресують антиген клітинної поверхні CD22. 121. Спосіб за п.118, де злоякісною В-клітинною 88599 12 пухлиною є лімфома. 122. Спосіб за п.121, де клітини вказаної лімфоми експресують антиген клітинної поверхні CD22. 123. Спосіб за п.118, де В-клітинною злоякісною пухлиною є неходжкінська лімфома. 124. Спосіб за п.117, де раковим захворюванням є карцинома. 125. Спосіб за п.117, де раковим захворюванням є саркома. 126. Спосіб за п.114, де каліхеаміцином в похідному каліхеаміцину в кон'югаті "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" є гаммакаліхеаміцин або N-ацетилкаліхеаміцин. 127. Спосіб за п.114, що включає введення терапевтично ефективної дози композиції, що містить кон'югат "мономерний каліхеаміцин/анти-CD22 антитіло" за п.24 з одним або декількома біологічно активними агентами. 128. Спосіб за п.127, де один або декілька біологічно активних агентів вибрані з групи, що складається з антитіл, факторів росту, гормонів, цитокінів, антигормонів, ксантинів, інтерлейкінів, інтерферонів і цитотоксичних лікарських засобів. 129. Спосіб за п.128, де біологічно активним агентом є антитіло. 130. Спосіб за п.129, де антитіло націлене проти антигену клітинної поверхні, що експресується на В-клітинних злоякісних пухлинах. 131. Спосіб за п.130, де антитіло, направлене проти антигену клітинної поверхні, що експресується на В-клітинних злоякісних пухлинах, вибране з групи, що складається з анти-CD19, анти-CD20 і анти-CD33 антитіл. 132. Спосіб за п.131, де анти-CD20 антитілом є ритуксимаб. 133. Спосіб за п.128, де цитокіни або фактори росту вибрані з групи, що складається з інтерлейкіну 2 (IL-2), TNF, CSF, GM-CSF і G-CSF. 134. Спосіб за п.128, де гормоном є стероїдний гормон, вибраний з естрогенів, андрогенів, прогестинів і кортикостероїдів. 135. Спосіб за п.128, де цитотоксичний лікарський засіб вибраний з групи, що складається з доксорубіцину, даунорубіцину, ідарубіцину, акларубіцину, зорубіцину, мітоксантрону, епірубіцину, карубіцину, ногаламіцину, меногарилу, пітарубіцину, валрубіцину, цитарабіну, гемцитабіну, трифлуридину, анцитабіну, еноцитабіну, азоцитидину, доксифлуридину, пентостатину, броксуридину, капецитабіну, кладрибіну, децитабіну, флоксуридину, флударабіну, гугеротину, пуроміцину, тегафуру, тіазофурину, адріаміцину, цисплатину, карбоплатину, циклофосфаміду, дакарбазину, вінбластину, вінкристину, мітоксантрону, блеоміцину, мехлоретаміну, преднізону, прокарбазину, метотрексату, фторурацилів, етопозиду, таксолу, аналогів таксолу і мітоміцину. 136. Спосіб за п.128, де терапевтично ефективну дозу композиції, що містить кон'югат "мономерний каліхеаміцин/анти-CD22 антитіло" за п.24, вводять разом з однією або декількома комбінаціями цитотоксичних агентів, що використовуються як складова частина курсу лікування, де вказана комбінація цитотоксичних агентів вибрана з: 13 А. СНОРР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і прокарбазин); В. СНОР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин і преднізон); С. СОР (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); D. САР-ВОР (циклофосфамід, доксорубіцин, прокарбазин, блеоміцин, вінкристин і преднізон); Е. m-ВАСОD (метотрексат, блеоміцин, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, дексаметазон і лейковорин); F. РroМАСЕ-МОРР (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); G. РroМАСЕ-CytaВОМ (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, цитарабін, блеоміцин і вінкристин); Н. МАСОР-В (метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, преднізон, блеоміцин і лейковорин); I. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); J. ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); К. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABV (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин і вінбластин); L. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); М. ChlVPP (хлорамбуцил, вінбластин, прокарбазин і преднізон); N. IMVP-16 (іфосфамід, метотрексат і етопозид); О. MIME (метил-gag, іфосфамід, метотрексат і етопозид); Р. DHAP (дексаметазон, висока доза цитарабіну і цисплатин); Q. ESHAP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну і цисплатин); R. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); S. САМР (ломустин, мітоксантрон, цитарабін і преднізон); Т. CVP-1 (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); U. ESHOP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну, вінкристин і цисплатин); V. EPOCH (етопозид, вінкристин і доксорубіцин, що вводиться протягом 96 годин з ударними дозами циклофосфаміду і преднізолу, що вводиться перорально); W. ICE (іфосфамід, циклофосфамід і етопозид); Х. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); Y. СНОР-В (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і блеоміцин); і Z. Р/DOCE (епірубіцин або доксорубіцин, вінкристин, циклофосфамід і преднізон). 137. Спосіб за п.128, де терапевтично ефективну дозу композиції, що містить кон'югат "мономерний каліхеаміцин/анти-CD22 антитіло" за п.24, вводять перед введенням однієї або декількох комбінацій цитотоксичних агентів, що використовуються як 88599 14 складова частина курсу лікування, де комбінація цитотоксичних агентів вибрана з: А. СНОРР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і прокарбазин); В. СНОР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин і преднізон); С. СОР (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); D. САР-ВОР (циклофосфамід, доксорубіцин, прокарбазин, блеоміцин, вінкристин і преднізон); Е. m-ВАСОD (метотрексат, блеоміцин, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, дексаметазон і лейковорин); F. РroМАСЕ-МОРР (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); G. РroМАСЕ-CytaВОМ (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, цитарабін, блеоміцин і вінкристин); Н. МАСОР-В (метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, преднізон, блеоміцин і лейковорин); I. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); J. ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); К. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABV (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин і вінбластин); L. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); М. ChlVPP (хлорамбуцил, вінбластин, прокарбазин і преднізон); N. IMVP-16 (іфосфамід, метотрексат і етопозид); О. MIME (метил-gag, іфосфамід, метотрексат і етопозид); Р. DHAP (дексаметазон, висока доза цитарабіну і цисплатин); Q. ESHAP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну і цисплатин); R. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); S. САМР (ломустин, мітоксантрон, цитарабін і преднізон); Т. CVP-1 (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); U. ESHOP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну, вінкристин і цисплатин); V. EPOCH (етопозид, вінкристин і доксорубіцин, що вводиться протягом 96 годин з ударними дозами циклофосфаміду і преднізолу, що вводиться перорально); W. ICE (іфосфамід, циклофосфамід і етопозид); Х. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); Y. СНОР-В (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і блеоміцин); і Z. Р/DOCE (епірубіцин або доксорубіцин, вінкристин, циклофосфамід і преднізон). 138. Спосіб за п.128, де терапевтично ефективну дозу композиції, що містить кон’югат “мономерний каліхеаміцин/анти-CD22 антитіло" за п.24, вводять після введення однієї або декількох комбінацій 15 цитотоксичних агентів, що використовуються як складова частина курсу лікування, де вказана комбінація біологічно активних агентів вибрана з: А. СНОРР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і прокарбазин); В. СНОР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин і преднізон); С. СОР (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); D. САР-ВОР (циклофосфамід, доксорубіцин, прокарбазин, блеоміцин, вінкристин і преднізон); Е. m-ВАСОD (метотрексат, блеоміцин, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, дексаметазон і лейковорин); F. РroМАСЕ-МОРР (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); G. РroМАСЕ-CytaВОМ (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, цитарабін, блеоміцин і вінкристин); Н. МАСОР-В (метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, точна доза преднізону, блеоміцин і лейковорин); I. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); J. ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); К. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABV (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин і вінбластин); L. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); М. ChlVPP (хлорамбуцил, вінбластин, прокарбазин і преднізон); N. IMVP-16 (іфосфамід, метотрексат і етопозид); О. MIME (метил-gag, іфосфамід, метотрексат і етопозид); Р. DHAP (дексаметазон, висока доза цитарабіну і цисплатин); Q. ESHAP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну і цисплатин); R. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); S. САМР (ломустин, мітоксантрон, цитарабін і преднізон); Т. CVP-1 (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); U. ESHOP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну, вінкристин і цисплатин); V. EPOCH (етопозид, вінкристин і доксорубіцин, що вводиться протягом 96 годин з ударними дозами циклофосфаміду і преднізолу, що вводиться перорально); W. ICE (іфосфамід, циклофосфамід і етопозид); Х. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); Y. СНОР-В (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і блеоміцин); і Z. Р/DOCE (епірубіцин або доксорубіцин, вінкристин, циклофосфамід і преднізон). 139. Спосіб за п.128, де терапевтично ефективну дозу композиції, що містить кон’югат “мономерний каліхеаміцин/анти-CD22 антитіло" за п.24, вводять 88599 16 разом з антитілом, націленим проти антигену клітинної поверхні, присутнього на злоякісних Вклітинних пухлинах, і де спосіб передбачає введення, але необов'язково, однієї або декількох комбінацій цитотоксичних агентів, що використовуються як складова частина курсу лікування, де вказана комбінація цитотоксичних агентів вибрана з: А. СНОРР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і прокарбазин); В. СНОР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин і преднізон); С. СОР (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); D. САР-ВОР (циклофосфамід, доксорубіцин, прокарбазин, блеоміцин, вінкристин і преднізон); Е. m-ВАСОD (метотрексат, блеоміцин, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, дексаметазон і лейковорин); F. РroМАСЕ-МОРР (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); G. РroМАСЕ-CytaВОМ (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, цитарабін, блеоміцин і вінкристин); Н. МАСОР-В (метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, точна доза преднізону, блеоміцину і лейковорину); I. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); J. ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); К. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABV (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин і вінбластин); L. МОРР (мехлоетамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); М. ChlVPP (хлорамбуцил, вінбластин, прокарбазин і преднізон); N. IMVP-16 (іфосфамід, метотрексат і етопозид); О. MIME (метил-gag, іфосфамід, метотрексат і етопозид); Р. DHAP (дексаметазон, висока доза цитарабіну і цисплатин); Q. ESHAP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну і цисплатин); R. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); S. САМР (ломустин, мітоксантрон, цитарабін і преднізон); Т. CVP-1 (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); U. ESHOP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну, вінкристин і цисплатин); V. EPOCH (етопозид, вінкристин і доксорубіцин, що вводиться протягом 96 годин з ударними дозами циклофосфаміду і преднізолу, що вводиться перорально); W. ICE (іфосфамід, циклофосфамід і етопозид); Х. СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); Y. СНОР-В (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і блеоміцин); і 17 Z. Р/DOCE (епірубіцин або доксорубіцин, вінкристин, циклофосфамід і преднізон). 140. Спосіб за п.139, де антитіло, націлене проти антигену клітинної поверхні, що експресується на В-клітинних злоякісних пухлинах, вибране з групи, яка складається з анти-CD19, анти-CD20 і антиCD33 антитіл. 141. Спосіб за п.140, де анти-CD20 антитіло являє собою ритуксимаб. 142. Спосіб за п.114, де анти-CD22 антитіло кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:19, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:27. 143. Спосіб за п.114, де анти-CD22 антитіло являє собою гуманізоване антитіло і містить легкий ланцюг з послідовністю SEQ ID NO:28. 144. Спосіб за п.114, де анти-CD22 антитіло являє собою гуманізоване антитіло і містить важкий ланцюг з послідовністю SEQ ID NO:30. 145. Спосіб за п.114, де анти-CD22 антитіло кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:28, і варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:30. 146. Спосіб за п.114, де анти-CD22 антитіло має специфічність відносно CD22 людини і містить важкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на фігурі 1 як H1 (SEQ ID NO:1) для CDR-H1, як H2 на Фіг.1 (SEQ ID NO:2) або H2' (SEQ ID NO:13), або H2'' (SEQ ID NO:15), або H2''' (SEQ ID NO:16) для CDR-H2, або як H3 на Фіг.1 (SEQ ID NO:3) для CDR-H3, і містить легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей, представлених на фігурі 1 як L1 (SEQ ID NO:4) для CDR-L1, як L2 на Фіг.1 (SEQ ID NO:5) для CDR-L2 або як L3 на Фіг.1 (SEQ ID NO:6) для CDR-L3. 147. Спосіб за п.114, де антитіло містить варіабельний домен важкого ланцюга, яке містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO:2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27, або залишки 50-66 gH1 на Фіг.6, або залишки 50-66 gH4 на Фіг.6, або залишки 50-66 gH6 на Фіг.6 для CDR-H2, або SEQ ID NO:3 для CDR-H3, і містить легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має щонайменше одну з послідовностей SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDRL2 або SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 148. Спосіб за п.114, де анти-CD22 антитіло кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" містить SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO: 2 або SEQ ID NO:13, або SEQ ID NO:15, або SEQ ID NO:16, або залишки 5066 послідовності SEQ ID NO:27, або залишки 50-66 gH1 на Фіг.6, або залишки 50-66 gH4 на Фіг.6, або залишки 50-66 gH6 на Фіг.6 для CDR-H2, SEQ ID NO:3 для CDR-H3, SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 і SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 149. Спосіб за п.114, де анти-CD22 антитіло 88599 18 кон’югата "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" містить SEQ ID NO:1 для CDR-H1, залишки 50-66 послідовності SEQ ID NO:27 для CDR-H2, SEQ ID NO:3 для CDR-H3, SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDRL2 і SEQ ID NO:6 для CDR-L3. 150. Спосіб лікування агресивних лімфом, що включає введення пацієнту, потребуючому лікування, терапевтично ефективної композиції кон’югата “похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" за п.24 разом з одним або декількома біологічно активними агентами. 151. Спосіб за п.150, де вказаним конъюгатом "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-CD22 антитіло" є СМС-544. 152. Спосіб за п.1, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від аспарагіну в положенні 55 за Кабатом. 153. Спосіб за п.152, де амінокислотим залишком в положенні 55 за Кабатом є глутамін. 154. Спосіб за п.1, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від треоніну в положенні 57 за Кабатом. 155. Спосіб за п.154, де амінокислотим залишком в положенні 57 за Кабатом є аланін або валін. 156. Спосіб за п.1, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від лізину в положенні 60 за Кабатом. 157. Спосіб за п.156, де амінокислотним залишком є аргінін. 158. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" за п.24, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від аспарагіну в положенні 55 за Кабатом. 159. Кон'югат “похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" за п.158, де амінокислотним залишком в положенні 55 за Кабатом є глутамін. 160. Кон'югат “похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" за п.24, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від треоніну в положенні 57 за Кабатом. 161. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" за п.160, де амінокислотним залишком в положенні 57 за Кабатом є аланін або валін. 162. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" за п.24, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від лізину в положенні 60 за Кабатом. 163. Кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" за п.162, де амінокислотним залишком є аргінін. 164. Спосіб за п.46, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від аспарагіну в положенні 55 за Кабатом. 165. Спосіб за п.164, де амінокислотним залишком в положенні 55 за Кабатом є глутамін. 19 88599 20 166. Спосіб за п.46, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від треоніну в положенні 57 за Кабатом. 167. Спосіб за п.166, де амінокислотним залишком в положенні 57 за Кабатом є аланін або валін. 168. Спосіб за п.46, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від лізину в положенні 60 за Кабатом. 169. Спосіб за п.168, де амінокислотним залишком в положенні 57 за Кабатом є аргінін. 170. Композиція за п.87, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від аспарагіну в положенні 55 за Кабатом. 171. Композиція за п.170, де амінокислотним залишком в положенні 55 за Кабатом є глутамін. 172. Композиція за п.87, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від треоніну в положенні 57 за Кабатом. 173. Композиція за п.172, де амінокислотним залишком в положенні 57 за Кабатом є аланін або валін. 174. Композиція за п.87, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від лізину в положенні 60 за Кабатом. 175. Композиція за п.174, де амінокислотним залишком є аргінін. 176. Спосіб за п.114, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від аспарагіну в положенні 55 за Кабатом. 177. Спосіб за п.176, де амінокислотним залишком в положенні 55 за Кабатом є глутамін. 178. Спосіб за п.114, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від треоніну, в положенні 57 за Кабатом. 179. Спосіб за п.178, де амінокислотним залишком в положенні 57 за Кабатом є аланін або валін. 180. Спосіб за п.114, де антитіло містить послідовність CDR-H2, що містить амінокислотний залишок, відмінний від лізину в положенні 60 за Кабатом. 181. Спосіб за п.180, де амінокислотним залишком є аргінін. Даний винахід відноситься до способів одержання кон'югатів "мономерний цитотоксичний лікарський засіб/носій" ("кон'югатів") з високим навантаженням лікарським засобом і, в основному, з низьким вмістом низькокон'югованої фракції (LCF). Більш конкретно, даний винахід відноситься до кон'югатів "анти-СD22 антитіло-мономерний каліхеаміцин". Даний винахід також відноситься до вказаних кон'югатів даного винаходу, до способів очищення цих кон'югатів, до фармацевтичних композицій, що містять вказані кон'югати, і до використання цих кон'югатів. Кон'югати лікарських засобів, розроблені для системної фармакотерапії, являють собою мішеньспецифічні цитотоксичні агенти. Вказана фармакотерапія базується на зв'язуванні терапевтичного агента з молекулою-носієм, що володіє специфічністю до визначеної популяції клітин-мішеней. Антитіла з високою афінністю по відношенню до антигенів є природними молекулами, що розпізнають мішень. Завдяки доступності високоафінних моноклональних антитіл використання терапевтичних засобів, що доставляються антитілом, є особливо перспективним. Токсичними речовинами, які були кон'юговані з моноклональними антитілами, є токсини, низькомолекулярні цитотоксичні лікарські засоби, модифікатори біологічних відповідей і радіонукліди. Кон'югати "антитіло-токсин" часто називають імунотоксинами, а імунокон'югати, що складаються з антитіл і низькомолекулярних лікарських засобів, таких як метотрексат і адріаміцин, називають хемоімунокон'югатами. Імуномодулятори містять модифікатори біологічних відповідей, які, як відомо, володіють регуляторними функціями, такі як лімфокіни, фактори росту і комплемент-активуючий фактор отрути кобри (CVF). Радіоімунокон'югати, які складаються з радіоактивних ізотопів, можуть бути використані як терапевтичні засоби для індукування загибелі клітин під дією їх випромінювання, або вони можуть бути використані для візуалізації. Передбачається, що опосередкована антитілом специфічна доставка цитотоксичних лікарських засобів у пухлинні клітини не тільки підвищує їх протипухлинну ефективність, але також і запобігає неспецифічному поглинанню цих лікарських засобів нормальними тканинами, і, тим самим, підвищує їх терапевтичні індекси. Даний винахід відноситься до імунокон'югатів, які включають антитіло як носій, що націлює, і які володіють специфічністю до антигенних детермінантів, що присутні на поверхні злоякісних клітин і кон'юговані з цитотоксичним лікарським засобом. Даний винахід відноситься до кон'югатів "цитотоксичний лікарський засіб - антитіло", де вказане антитіло володіє специфічністю до антигенних детермінантів, присутніх на клітинах, асоційованих зі злоякісними В-клітинними пухлинами, лімфопроліферативними розладами і хронічними запальними захворюваннями. Даний винахід також відноситься до способів продукування імунокон'югатів і до їх використання у терапії. Різні терапевтичні засоби, одержані на основі вказаних антитіл і призначені для лікування різних захворювань, включаючи рак і ревматоїдний артрит, були випробувані для клінічного застосування, або вони знаходяться на стадії клінічних випробувань щодо їх використання як лікарських засобів для лікування злоякісних пухлин, включаючи В-клітинні злоякісні пухлини, такі як неходж 21 кінська лімфома. Одним з таких терапевтичних засобів на основі антитіл є ритуксимаб (Rituxan™), немічене химерне антитіло, яке містить ділянку g1 (+mg1V-ділянку) людського антитіла, і яке є специфічним до поверхнево-клітинного антигену CD20, що експресується на В-клітинах. Дані терапевтичні засоби базуються на використанні антитіл і володіють опосередкованою комплементом цитотоксичністю (CDCC) або антитіло-залежною клітинною цитотоксичністю (ADCC), направленою проти В-клітин, або ці терапевтичні засоби базуються на використанні радіонуклідів, таких як 131І або 90Υ, і одержання і застосування таких терапевтичних засобів пов'язане з певними проблемами для лікарів-клініцистів і пацієнтів. Тому необхідність в одержанні імунокон'югатів, які не мали б недоліків сучасних терапевтичних засобів, одержаних на основі антитіл і використовуваних для лікування різних злоякісних пухлин, включаючи гемопоетичні злоякісні пухлини, такі як неходжкінська лімфома (НХЛ), і які можна було б легко і ефективно продукувати, а також повторно використовувати без індукування імунної відповіді, все ще залишається актуальною. Імунокон'югати, що містять член сімейства ефективних антибактеріальних і протипухлинних агентів, відомих під загальною назвою каліхеаміцини або комплекс LL-E33288 (див. патент США №4970198 (1990)), були розроблені для лікування мієлом. Найбільш ефективним з каліхеаміцинів є агент, позначений g1, який у даному описі буде просто позначатися гамма. Дані сполуки містять метилтрисульфід, який може бути підданий реакції взаємодії з відповідними тіолами з утворенням дисульфідів і з одночасним введенням функціональної групи, такої як гідразид, або іншої функціональної групи, яка може бути використана для приєднання похідного каліхеаміцину до носія (див. патент США №5053394). Використання кон'югатів "мономерне похідне каліхеаміцину/носій" у сучасній терапії раку різних типів обмежене через недостатню доступність специфічних агентів, що націлюють, (носіїв), а також через недосконалість технологій кон'югування, які, у випадку збільшення кількості похідного каліхеаміцину, кон'югованого з носієм (тобто збільшення навантаження кон'югату лікарським засобом), приводять до утворення білкових агрегатів. Оскільки більш високе навантаження лікарським засобом приводить до збільшення внутрішньої ефективності кон'югату, то бажано, щоб навантаження лікарським засобом було якомога вище, наскільки це дозволяють умови для збереження афінності білка-носія. Присутність агрегованого білка, який може бути неспецифічно токсичним та імуногенним, і який, тому, повинен бути видалений при терапевтичному застосуванні, утруднює процес великомасштабного виробництва даних кон'югатів і знижує вихід продуктів. Кількість каліхеаміцину, навантаженого на білок-носій (навантаження лікарським засобом), кількість агрегату, що утворюється внаслідок реакції кон'югування, і вихід одержуваного у результаті очищеного мономерного кон'югату є взаємопов'язаними факторами. Тому компроміс між більш високим навантаженням лікарським засобом і ви 88599 22 ходом кінцевого мономера може бути досягнутий шляхом вибору відповідної кількості реакційноздатного похідного каліхеаміцину, що додається у реакційну суміш для кон'югування. Тенденція кон'югатів цитотоксичного лікарського засобу, а зокрема, кон'югатів каліхеаміцину утворювати агрегати, є особливо проблематичною у тому випадку, коли реакцію кон'югування здійснюють з використанням лінкерів, як описано у патентах США №№5877296 і 5773001, які у всій своїй повноті вводяться у даний опис за допомогою посилання. У цьому випадку великий процент кон'югатів, що продукуються, знаходиться в агрегованій формі, що значно утруднює очищення кон'югатів стандартними способами (СМАспособами) для їх подальшого терапевтичного використання. У випадку деяких білків-носіїв, кон'югати навіть з вельми помірним навантаженням неможливо фактично одержати, за винятком хіба що у лабораторних масштабах. Отже, розробка вдосконалених методів одержання кон'югатів цитотоксичних лікарських засобів, таких як каліхеаміцинів, з носіями, які забезпечували б мінімізацію агрегації, а тому дозволяли б одержувати кон'югати, по можливості, з більшим навантаженням лікарським засобом і у той же час з високим виходом продукту, є вельми необхідною. Використовувані раніше методи кон'югування для одержання препаратів "мономерне похідне каліхеаміцину/носій" з високим навантаженням лікарським засобом/високим виходом і низьким ступенем агрегації були описані у літературі (див. патенти США №5712374 і США №5714586, які у всій своїй повноті вводяться у даний опис за допомогою посилання). І хоча ці способи дозволяють одержувати кон'юговані препарати зі значно зниженим вмістом агрегатів, однак, пізніше було виявлено, що дані способи дають можливість одержувати кон'югати, що мають неприйнятно високі рівні (45-65% ВЕРХ, % площі) низькокон'югованої фракції (LCF), тобто фракції, що складається, в основному, з некон'югованого антитіла. Присутність LCF у даному продукті означає неефективне використання антитіла, оскільки воно не містить цитотоксичного лікарського засобу. Це антитіло може також конкурувати з кон'югатом "каліхеаміцин-носій" за зв'язування з мішенню і, тим самим, потенційно знижувати ступінь доступності цієї мішені, що приводить до зниження ефективності цитотоксичного лікарського засобу. Тому, бажано розробити вдосконалений спосіб кон'югування, який забезпечував би значне зниження рівнів LCF і давав би прийнятні мінімальні рівні агрегації, але, при цьому, не впливав би значним чином на фізичні властивості вказаного кон'югату. Даний винахід відноситься до способів одержання кон'югатів "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій" ("кон'югатів") з високим навантаженням лікарським засобом і, в основному, з низьким вмістом низькокон'югованої фракції (LCF). Зокрема, даний винахід відноситься до одержання кон'югатів "мономерне похідне каліхеаміцину/носій", до вказаних кон'югатів, до композицій, до способу очищення таких кон'югатів і до використання цих кон'югатів. Більш конкретно, 23 даний винахід відноситься до способів одержання кон'югату "мономерне похідне каліхеаміцину - анти-СD22 антитіло" (СМС-544). В одному з варіантів свого здійснення даний винахід відноситься до вдосконаленого способу одержання кон'югатів, що забезпечує значне зниження рівнів LCF (нижче 10%) але, при цьому, не здійснює значного впливу на фізичні або хімічні властивості вказаного кон'югату. Даний винахід також відноситься до додатково вдосконаленого способу кон'югування, який, у порівнянні з вже описаними способами, дозволяє не тільки значно знизити рівні LCF, а також значно знизити ступінь агрегації у порівнянні з раніше описаними способами, і значно збільшити навантаження кон'югату лікарським засобом. Кон'югати даного винаходу мають формулу: Pr(-X-W)m, де: Рr являє собою білковий носій; X являє собою лінкер, що включає продукт реакції будь-якої реакційноздатної групи, яка може взаємодіяти з білковим носієм; W являє собою цитотоксичний лікарський засіб; m означає середнє навантаження для продукту очищеного кон'югату, таке, при якому вказаний цитотоксичний лікарський засіб складає 7-9% за масою кон'югату; і (-X-W)m являє собою похідне цитотоксичного лікарського засобу. В одному з варіантів кон'югати даного винаходу одержують способом даного винаходу, що включає стадії: (1) додавання похідного цитотоксичного лікарського засобу до білкового носія, де вказане похідне цитотоксичного лікарського засобу складає 4,5-11% за масою білкового носія; (2) інкубування цитотоксичного лікарського засобу і білкового носія у ненуклеофільному і сумісному з білком буферному розчині, що має рН у межах приблизно від 7 до 9, з продукуванням кон'югату "мономерний цитотоксичний лікарський засіб/носій", де вказаний розчин, крім того, містить (а) органічний співрозчинник і (b) домішку, що містить, принаймні, одну С6-С18-карбонову кислоту або її сіль, і де вказане інкубування здійснюють при температурі у межах приблизно від 30°С до 35°С протягом періоду часу приблизно від 15 хвилин до 24 годин; і (3) хроматографії кон'югату, одержаного на стадії (2), для відділення кон'югатів "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/білковий носій", що мають навантаження цитотоксичним лікарським засобом, яке складає у межах 4-10мас.%, і вміст низькокон'югованої фракції (LCF), який складає менше 10 процентів від некон'югованого білкового носія, похідного цитотоксичного лікарського засобу і агрегованих кон'югатів. В одному з варіантів здійснення винаходу білковий носій вказаного кон'югату вибраний з групи, що складається з гормонів, факторів росту, антитіл, фрагментів антитіл, міметиків антитіл, і їх генетично або ферментативно сконструйованих аналогів. 88599 24 В одному з варіантів здійснення винаходу вказаним білковим носієм є антитіло. У переважному варіанті здійснення винаходу вказане антитіло вибране з групи, що складається з моноклонального антитіла, химерного антитіла, людського антитіла, гуманізованого антитіла, одноланцюгового антитіла, Fab-фрагмента і F(аb)2-фрагмента. В іншому варіанті здійснення винаходу вказане гуманізоване антитіло направлене проти антигену клітинної поверхні CD22. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, яке включає варіабельну ділянку легкого ланцюга 5/44-gL1 (SEQ ID NO:19) і варіабельну ділянку важкого ланцюга 5/44-gH7 (SEQ ID NO:27). В іншому переважному варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, яке містить легкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:28. У ще одному переважному варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-СD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, яке містить важкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:30. В іншому переважному варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-СD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, яке містить легкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:28, і важкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:30. В іншому варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-СШ2 антитілом є CDRприщеплене антитіло, яке являє собою варіант антитіла, одержаний відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання і який володіє підвищеною специфічністю до людського CD22. В іншому своєму аспекті цитотоксичний лікарський засіб, що використовується для генерування кон'югату "мономерний цитотоксичний лікарський засіб/носій" даного винаходу, являє собою інгібітор полімеризації тубуліну, алкілувальний агент, який зв'язується з ДНК і руйнує її, інгібітор синтезу білка або інгібітор тирозинкінази. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаний цитотоксичний лікарський засіб вибраний з каліхеаміцинів, тіотепи, таксанів, вінкристину, даунорубіцину, доксорубіцину, епірубіцину, еспераміцинів, актиноміцину, аутраміцину, азасеринів, блеоміцинів, тамоксифену, ідарубіцину, доластатинів/ауристатинів, геміастерлінів та маїтанзиноїдів. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним цитотоксичним лікарським засобом є каліхеаміцин. В особливо переважному варіанті здійснення винаходу вказаним каліхеаміцином є гамма-каліхеаміцин або похідне N-ацетил-гаммакаліхеаміцину. У ще одному аспекті даного винаходу вказаний цитотоксичний лікарський засіб має функціональну 3-меркапто-3-метилбутаноїлгідразидну групу і кон'югований з білковим носієм за допомогою лінкера, що гідролізують, здатного вивільняти цитотоксичний лікарський засіб з вказаного кон'ю 25 гату після його зв'язування і проникнення у клітини-мішені. У переважному варіанті даного аспекту вказаним лінкером, що гідролізують, є 4-(4ацетилфенокси)бутанова кислота (AcBut). У ще одному аспекті даного винаходу у процесі кон'югування використовується октанова кислота або її сіль", або деканова кислота або її сіль як домішка для зниження ступеня агрегації і збільшення навантаження лікарським засобом. У ще одному аспекті даного винаходу кон'югати даного винаходу очищають методом хроматографічного розподілу. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаним методом хроматографічного розподілу, що використовується для розподілу кон'югату "похідне мономерного лікарського засобу - носій", є ексклюзійна хроматографія (SEC). В іншому варіанті здійснення винаходу методом хроматографічного розподілу, що використовується для розподілу кон'югату "похідне мономерного лікарського засобу - носій", є ВЕРХ, РЕХБ або хроматографія на Сефакрилі S-200. У переважному варіанті здійснення винаходу методом хроматографічного розподілу, що використовується для розподілу кон'югату "похідне мономерного лікарського засобу - носій", є гідрофобна хроматографія (ГФХ). В особливо переважному варіанті здійснення винаходу ГФХ здійснюють з використанням як хроматографічного середовища фенілсефарози 6 Fast Flow, бутилсефарози 4 Fast Flow, октилсефарози 4 Fast Flow, Toyopearl Ether-650M, метилового ГФХсередовища Macro-Prep або трет-бутилового ГФХсередовища Macro-Prep. У більш переважному варіанті здійснення винаходу ГФХ здійснюють з використанням як хроматографічного середовища бутилсефарози 4 Fast Flow. В іншому своєму аспекті даний винахід відноситься до кон'югату "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій", одержаного способом даного винаходу. У переважному варіанті цього аспекту використовуваним цитотоксичним лікарським засобом є каліхеаміцин, а використовуваним носієм є антитіло. В іншому переважному варіанті здійснення винаходу вказане антитіловибране з групи, що складається з моноклонального антитіла, химерного антитіла, людського антитіла, гуманізованого антитіла, одноланцюгового антитіла, Fabфрагмента і F(аb)2-фрагмента. У більш переважному аспекті винаходу використовується гуманізоване антитіло, направлене проти антигену клітинної поверхні CD22. В oдному з варіантів здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDRприщеплене антитіло, яке включає варіабельну ділянку легкого ланцюга 5/44-gL1 (SEQ ID NO:19) і варіабельну ділянку важкого ланцюга 5/44-gH7 (SEQ ID NO:27). В іншому варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-СD22 антитілом є CDRприщеплене антитіло, що містить легкий ланцюг, який має послідовність, наведену у SEQ ID NO:28. 88599 26 У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, що містить важкий ланцюг, який має послідовність, наведену у SEQ ID NO:30. В іншому переважному варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-СD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, що містить легкий ланцюг, який має послідовність, наведену у SEQ ID NO:28, і важкий ланцюг, який має послідовність, наведену у SEQ ID NO:30. У ще одному варіанті здійснення винаходу вказаним гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, яке являє собою варіант антитіла, одержаний відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання і який володіє підвищеною специфічністю до людського CD22. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним каліхеаміцином є гамма-каліхеаміцин або N-ацетил-гамма-каліхеаміцин. В одному з варіантів здійснення винаходу вказане похідне каліхеаміцину має функціональну 3меркапто-3-метилбутаноїлгідразидну групу. В іншому варіанті здійснення винаходу лінкером, що використовується для кон'югування вказаного лікарського засобу з вказаним носієм, є лінкер, що гідролізують, здатний вивільняти цитотоксичний лікарський засіб з кон'югату після його зв'язування і проникнення у клітини-мішені. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним лінкером, що гідролізують, є 4-(4ацетилфенокси)бутанова кислота (AcBut). В іншому своєму аспекті даний винахід відноситься до кон'югату "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло", що має формулу: Pr(-X-S-S-W)m, де: Рr являє собою анти-СD22 антитіло; X являє собою лінкер, що гідролізують, який включає продукт реакції будь-якої реакційноздатної групи, яка може взаємодіяти з антитілом; W являє собою радикал каліхеаміцину; m означає середнє навантаження для очищеного продукту кон'югування, таке, при якому вказаний каліхеаміцин складає 4-10% за масою кон'югату; a (-X-S-SW)m являє собою похідне калiхеаміцину, одержане способом даного винаходу. В одному з варіантів цього аспекту вказане антитіло вибране з групи, що складається з моноклонального антитіла, химерного антитіла, людського антитіла, гуманізованого антитіла, одноланцюгового антитіла, Fab-фрагмента і F(ab)2-фрагмента. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним антитілом є анти-CD22 антитіло, яке володіє специфічністю до людського CD22 і включає важкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених на Фіг.1 і позначених Н1 (SEQ ID NO:1) для CDR-H1, Н2 (SEQ ID NO:2), Н2' (SEQ ID NO:13), Н2" (SEQ ID NO:15) або Н2'" (SEQ ID NO:16) для CDR-H2; або Н3 (SEQ ID NO:3) для CDR-H3; і легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених на Фіг.1 і позначених L1 (SEQ ID NO:4) для CDR-L1, L2 (SEQ ID NO:5) для CDRL2 або L3 (SEQ ID NO:6) для CDR-L3. 27 В іншому переважному варіанті здійснення винаходу анти-СD22 антитіло включає важкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених у SEQ ID NO:1 для CDR-H1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 або SEQ ID NO:16 для CDRH2, або SEQ ID NO:3 для CDR-H3, і легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених у SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 або SEQ ID NO:6 для CDR-L3. У ще одному переважному варіанті здійснення винаходу анти-СD22 антитіло містить SEQ ID NO:1 для CDR-H1; SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 або SEQ ID NO:16 для CDR-H2; SEQ ID NO:3 для CDR-H3; SEQ ID NO:4 для CDR-L1; SEQ ID NO:5 для CDR-L2; або SEQ ID NO:6 для CDRL3. В іншому варіанті здійснення винаходу гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDR-прищеплене анти-СD22 антитіло, яке містить варіабельний домен, що включає людські акцепторні каркасні ділянки і не людські донорні CDR. В іншому варіанті здійснення винаходу гуманізоване анти-CD22 антитіло має людську акцепторну каркасну ділянку, де ділянки варіабельного домену важкого ланцюга вказаного антитіла базуються на людській консенсусній послідовності підгрупи І і включають не людські донорні залишки у положеннях 1, 28, 48, 71 і 93. В іншому варіанті здійснення винаходу вказане гуманізоване антитіло, крім того, включає не людські донорні залишки у положеннях 67 і 69. В одному з переважних варіантів здійснення винаходу CDR-прищеплене гуманізоване антитіло містить варіабельний домен легкого ланцюга, що включає людську акцепторну каркасну ділянку, яка базується на людській консенсусній послідовності підгрупи І, і крім того, включає не людські донорні залишки у положеннях 2, 4, 37, 38, 45 і 60. В іншому варіанті здійснення винаходу, вказане CDRприщеплене антитіло, крім того, включає не людський донорний залишок у положенні 3. В іншому варіанті здійснення винаходу CDRприщеплене антитіло включає варіабельну ділянку легкого ланцюга 5/44-gL1 (SEQ ID NO:19) і варіабельну ділянку важкого ланцюга 5/44-gH7 (SEQ ID NO:27). В іншому варіанті здійснення винаходу вказане CDR-прищеплене антитіло включає легкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:28, і важкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:30. В іншому переважному варіанті здійснення винаходу вказане CDR-прищеплене антитіло містить легкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:28, і важкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:30. У ще одному варіанті здійснення винаходу вказаним CDR-прищепленим анти-CD22 антитілом є варіант антитіла, одержаний відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання і який володіє підвищеною специфічністю до людського CD22. 88599 28 В іншому варіанті здійснення винаходу вказаним анти-СD22 антитілом є химерне антитіло, що містить послідовності варіабельних доменів легкого і важкого ланцюгів моноклонального антитіла, наведені у SEQ ID NO:7 і SEQ ID NO:8, відповідно. У ще одному варіанті здійснення винаходу вказане анти-CD22 антитіло містить гібридну CDR зі зрізаною донорною послідовністю CDR, де на місці відсутньої частини донорної CDR знаходиться інша послідовність, що замінює її, внаслідок чого утворює функціональна CDR. В особливо переважному варіанті здійснення винаходу вказаним похідним цитотоксичного лікарського засобу є або гамма-каліхеаміцин, або похідне N-ацетил-гамма-каліхеаміцин. В іншому своєму аспекті даний винахід відноситься до способу одержання стабільної ліофілізованої композиції кон'югату "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій". У переважному варіанті здійснення винаходу стабільну ліофілізовану композицію кон'югату "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій" одержують шляхом (а) розчинення вказаного кон'югату "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій" до кінцевої концентрації 0,5-2мг/мл у розчині, що містить кріозахисний агент у концентрації 1,5%-5мас.%, полімерний наповнювач у концентрації 0,51,5мас.%, електроліти у концентрації 0,01М-0,1М, агент, що сприяє розчиненню, у концентрації 0,005-0,05мас.%, агент, що забуферює, у концентрації 5-50мМ, необхідній для доведення кінцевого рН розчину до 7,8-8,2, і воду; (b) розподілу згаданого вище розчину по посудинах при температурі від +5°С до +10°С; (с) заморожування вказаного розчину при температурі заморожування від -35°С до -50°С; (d) проведення попередньої стадії ліофілізації замороженого розчину для його первинного сушіння під тиском 20-80 мікропаскаль і при температурі зберігання від -10°С до -40°С протягом 24-78 годин; і (e) проведення повторного сушіння ліофілізованого продукту стадії (d) під тиском 2080 мікропаскаль і при температурі зберігання від +10°С до +35°С протягом 15-30 годин. В одному з варіантів здійснення винаходу, кріозахисний агент, що використовується для ліофілізації кон'югату "цитотоксичний лікарський засіб/носій", вибраний з альдиту, маніту, сорбіту, інозиту, поліетиленгліколю, альдонової кислоти, уронової кислоти, альдарової кислоти, альдоз, кетоз, аміноцукрів, альдитів, інозитів, гліцеральдегідів, арабінози, ліксози, пентози, рибози, ксилози, галактози, глюкози, гексози, ідози, манози, талози, гептози, глюкози, фруктози, глюконової кислоти, сорбіту, лактози, маніту, метил-α-глюкопіранозиду, мальтози, ізоаскорбінової кислоти, аскорбінової кислоти, лактону, сорбози, глюкарової кислоти, еритрози, треози, арабінози, алози, альтрози, гулози, ідози, талози, еритрулози, рибулози, ксилулози, псикози, тагатози, глюкуронової кислоти, глюконової кислоти, глюкарової кислоти, галактуронової кислоти, мануронової кислоти, глюкозаміну, галактозаміну, сахарози, трегалози, нейрамінової кислоти, арабінанів, фруктанів, фуканів, галактанів, галактуронанів, глюканів, мананів, кси 29 ланів, левану, фукоїдану, карагенану, галактокаролози, пектинів, пектинових кислот, амілози, пулулану, глікогену, амілопектину, целюлози, декстрану, пустулану, хітину, агарози, кератину, хондротину, дерматану, гіалуронової кислоти, альгінової кислоти, ксантанової камеді, крохмалю, сахарози, глюкози, лактози, трегалози, етиленгліколю, поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, гліцерину і пентаеритритолу. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним кріозахисним агентом є сахароза, яка присутня у концентрації 1,5мас.%. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаний полімерний наповнювач, що використовується у процесі ліофілізації, вибраний з декстрану 40 або гідроксіетильованого крохмалю 40, і присутній у концентрації 0,9мас.%. В іншому варіанті здійснення винаходу електролітом, що використовується у розчині для ліофілізації, є хлорид натрію, який присутній у концентрації 0,05М. У переважному варіанті здійснення винаходу у процесі ліофілізації використовується агент, що підвищує розчинність. Вказаним агентом, що підвищує розчинність, переважно, є поверхневоактивна речовина. В особливо переважному варіанті здійснення винаходу вказаною поверхневоактивною речовиною є полісорбат 80, який присутній у концентрації 0,01мас.%. В одному з варіантів здійснення винаходу використовуваним агентом, що забуферює, є трометамін, який присутній у концентрації 0,02М. При цьому, переважно, щоб на початку ліофілізації рН розчину складав 8,0. Розчин, що містить кон'югат "цитотоксичний лікарський засіб/носій", розподіляють по посудинах при температурі +5°С до початку ліофілізації. У переважному варіанті здійснення винаходу розчин у посудинах заморожують при температурі -45°С; потім проводять попередню стадію ліофілізації для первинного сушіння замороженого розчину під тиском 60 мікропаскаль і при температурі зберігання -30°С протягом 60 годин; після цього проводять другу стадію сушіння ліофілізованого продукту під тиском 60 мікропаскаль і при температурі зберігання +25°С протягом 24 годин. В іншому своему аспекті даний винахід відноситься до композиції, що містить терапевтично ефективну дозу кон'югату "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій", одержаного способом даного винаходу. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаним носієм у кон'югаті "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій" є білковий носій, вибраний з гормонів, факторів росту, антитіл і міметиків антитіл. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним білковим носієм є людське моноклональне антитіло, химерне антитіло, людське антитіло або гуманізоване антитіло. У переважному варіанті здійснення винаходу вказане гуманізоване антитіло направлене проти антигену клітинної поверхні CD22. В особливо переважному варіанті цього аспекту винаходу вказане анти-СD22 антитіло володіє 88599 30 специфічністю до людського CD22 і включає важкий ланцюг, де варіабельний домен містить ділянку CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених на Фіг.1 і позначених Н1 (SEQ ID NO:1) для CDR-H1, Н2 (SEQ ID NO:2), Н2' (SEQ ID NO:13), Н2" (SEQ ID NO:15) або Н2"' (SEQ ID NO:16) для CDR-H2, або Н3 (SEQ ID NO:3) для CDR-H3; і легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених на Фіг.1 і позначених LI (SEQ ID NO:4) для CDR-L1, L2 (SEQ ID NO:5) для CDR-L2 або L3 (SEQ ID NO:6) для CDR-L3. В іншому переважному варіанті винаходу анти-СD22 антитіло включає важкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених у SEQ ID NO:1 для CDR-H1; SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 або SEQ ID NO:16 для CDR-H2; або SEQ ID NO:3 для CDR-H3, і легкий ланцюг, де варіабельний домен містить CDR, що має, принаймні, одну з послідовностей, наведених у SEQ ID NO:4 для CDR-L1, SEQ ID NO:5 для CDR-L2 або SEQ ID NO:6 для CDR-L3. У ще одному переважному варіанті винаходу анти-СD22 антитіло містить SEQ ID NO:1 для CDR-H1; SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15 або SEQ ID NO:16 для CDR-H2; SEQ ID NO:3 для CDR-H3; SEQ ID NO:4 для CDR-L1; SEQ ID NO:5 для CDR-L2i-SEQ ID NO:6 для CDR-L3. В особливо переважному варіанті винаходу вказаним гуманізованим анти-CD22 антитілом є CDR-прищеплене гуманізоване анти-СD22 антитіло, яке включає варіабельну ділянку легкого ланцюга 5/44-gL1 (SEQ ID NO:19) і варіабельну ділянку важкого ланцюга 5/44-gH7 (SEQ ID NO:27). В іншому особливо переважному варіанті винаходу вказаним гуманізованим анти-СD22 антитілом є CDR-прищеплене антитіло, яке володіє специфічністю до людського CD22 і містить легкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:28, і важкий ланцюг, що має послідовність, наведену у SEQ ID NO:30. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаним CDR-прищепленим антитілом є варіант антитіла, що володіє підвищеною специфічністю до людського CD22 і одержаний відповідно до протоколу здійснення афінного дозрівання. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаним мономерним цитотоксичним лікарським засобом є каліхеаміцин, переважно вибраний з гамма-каліхеаміцину або N-ацетил-каліхеаміцину. В одному з варіантів здійснення винаходу вказана композиція може, але необов'язково, містити додатковий біологічно активний агент. Таким біологічно активним агентом може бути цитотоксичний лікарський засіб, фактор росту або гормон. У ще одному своєму аспекті даний винахід відноситься до способу лікування індивідуума з проліферативним розладом, що передбачає введення такому індивідууму терапевтично ефективної дози композиції даного винаходу. Вказана композиція може бути введена підшкірно, внутрішньочеревинно, внутрішньовенно, внутрішньоартеріально, інтрамедулярно, інтратекально, трансдермально, черезшкірно, інтраназально, міс 31 цево, внутрішньошлунково, інтравагінально, під'язиково або ректально. У переважному варіанті винаходу композицію даного винаходу вводять внутрішньовенно. В одному з варіантів здійснення винаходу вказану композицію вводять індивідууму, який страждає проліферативним розладом, таким як рак. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним раковим захворюванням є злоякісна Вклітинна пухлина. Вказаною злоякісною Вклітинною пухлиною може бути лейкоз або лімфома, що експресує антиген клітинної поверхні CD22. У ще одному варіанті винаходу вказаним раковим захворюванням є карцинома або саркома. В іншому своєму аспекті даний винахід відноситься до способу лікування В-клітинної злоякісної пухлини, що передбачає введення пацієнту з вказаною злоякісною пухлиною терапевтично ефективної композиції, що містить кон'югат "цитотоксичний лікарський засіб - анти-СD22 антитіло" даного винаходу. У переважному варіанті здійснення винаходу, вказаною В-клітинною злоякісною пухлиною є лімфома, а зокрема, неходжкінська лімфома. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаний цитотоксичний лікарський засіб, що використовується для одержання кон'югатів даного винаходу, вибраний з групи, що складається з каліхеаміцинів, тіотепи, таксанів, вінкристину, даунорубіцину, доксорубіцину, епірубіцину, актиноміцину, аутраміцину, азасеринів, блеоміцинів, тамоксифену, ідарубіцину, доластатинів/ауристатинів, геміастерлінів, маїтанзиноїдів і еспераміцинів. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним цитотоксичним лікарським засобом є гамма-каліхеаміцин або N-ацетил-каліхеаміцин. В іншому варіанті винаходу вказане лікування передбачає введення кон'югату цитотоксичного лікарського засобу даного винаходу у комбінації з одним або декількома біологічно активними агентами, вибраними з антитіл, факторів росту, гормонів, цитокінів, антигормонів, ксантинів, інтерлейкінів, інтерферонів і цитотоксичних лікарських засобів. У переважному варіанті винаходу вказаним біологічно активним агентом є антитіло, направлене проти антигену клітинної поверхні, що експресується на В-клітинних злоякісних пухлинах. В іншому переважному варіанті винаходу вказане антитіло, направлене проти антигенів клітинної поверхні, що експресуються на В-клітинних злоякісних пухлинах, вибране з групи, що складається з анти-CD19, анти-СD20 і анти-СD33 антитіл. Такі антитіла включають анти-СD20 антитіло, ритуксимаб (Rituxan™). В іншому варіанті винаходу вказаними біологічно активними агентами є цитокіни або фактори росту, які включають, але не обмежуються ними, інтерлейкін 2 (IL-2), TNF, CSF, GM-CSF і G-CSF. В іншому варіанті винаходу вказаними біологічно активними агентами є гормони, а саме, естрогени, андрогени, прогестини і кортикостероїди. У ще одному варіанті здійснення винаходу вказаним біологічно активним агентом є цитотоксичний лікарський засіб, вибраний з доксорубіци 88599 32 ну, даунорубіцину, ідарубіцину, акларубіцину, зорубіцину, мітоксантрону, епірубіцину, карубіцину, ногаламіцину, меногарилу, пітарубіцину, валрубіцину, цитарабіну, гемцитабіну, трифлуридину, анцитабіну, еноцитабіну, азацитидину, доксифлуридину, пентостатину, броксуридину, капецитабіну, кладрибіну, децитабіну, флоксуридину, флударабіну, гугеротину, пуроміцину, тегафуру, тіазофурину, адріаміцину, цисплатину, карбоплатину, циклофосфаміду, дакарбазину, вінбластину, вінкристину, мітоксантрону, блеоміцину, мехлоретаміну, преднізону, прокарбазину, метотрексату, фторурацилів, етопозиду, таксолу, аналогів таксолу і мітоміцину. У переважному варіанті здійснення винаходу терапевтично ефективну композицію кон'югату "цитотоксичний лікарський засіб- анти-СD22 антитіло" вводять разом з однією або декількома комбінаціями цитотоксичних агентів, що використовуються як складова частина курсу лікування, де вказану комбінацію цитотоксичних агентів вибирають з: СНОРР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і прокарбазин); CHOP (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин і преднізон); COP (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); САР-ВОР (циклофосфамід, доксорубіцин, прокарбазин, блеоміцин, вінкристин і преднізон); m-BACOD (метотрексат, блеоміцин, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, дексаметазон і лейковорин); ProMACE-ΜΟΡΡ (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); ProMACE-CytaBOM (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, цитарабін, блеоміцин і вінкристин); МАСОР-В (метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, преднізон, блеоміцин і лейковорин); МОРР (мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); МОРР (мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABV (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин і вінбластин); МОРР (мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); Ch1VPP (хлорамбуцил, вінбластин, прокарбазин і преднізон); IMVP-16 (іфосфамід, метотрексат і етопозид); МІМЕ (метил-gag, іфосфамід, метотрексат і етопозид); DHAP (дексаметазон, висока доза цитарабіну і цисплатин); ESHAP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну і цисплатин); СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); CAMP (ломустин, мітоксантрон, цитарабін і преднізон) і CVP-1 (циклофосфамід, вінкристин і преднізон). У переважному варіанті здійснення винаходу терапевтично ефективну композицію кон'югату "цитотоксичний лікарський засіб - анти-СD22 антитіло" вводять перед введенням однієї або декількох згаданих вище комбінацій цитотоксичних лікарських засобів. В іншому переважному варіанті здійснення винаходу терапевтично ефективну композицію кон'югату "цитотоксичний лікарський 33 засіб - анти-СD22 антитіло" вводять після введення однієї або декількох згаданих вище комбінацій цитотоксичних лікарських засобів, що використовуються як складова частина курсу лікування. В іншому своєму аспекті даний винахід відноситься до способу лікування агресивних лімфом, що передбачає введення пацієнту, який потребує такого лікування, терапевтично ефективної композиції кон'югату "похідне мономерного каліхеаміцину-анти-СD22 антитіло" разом з одним або декількома біологічно активними агентами. У ще одному своєму аспекті даний винахід відноситься до використання композиції даного винаходу для лікування індивідуума з проліферативним розладом, таким як рак. Зокрема, вказаним раком є В-клітинна злоякісна пухлина, що експресує антиген CD22 на клітинній поверхні. Зокрема, такою злоякісною В-клітинною пухлиною є лейкоз або лімфома. В одному з варіантів здійснення винаходу вказаним раком є карцинома або лейкоз. В одному з варіантів здійснення винаходу терапевтично ефективну дозу вказаної композиції вводять підшкірно, внутрішньочеревинно, внутрішньовенно, внутрішньоартеріально, інтрамедулярно, інтратекально, трансдермально, черезшкірно, інтраназально, місцево, внутрішньошлунково, інтравагінально, під'язиково або ректально. У переважному варіанті винаходу терапевтично ефективну дозу вказаної фармацевтичної композиції даного- винаходу вводять внутрішньовенно. В іншому своєму аспекті даний винахід відноситься до використання кон'югату "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" даного винаходу для лікування індивідуума з В-клітинною злоякісною пухлиною, такою як неходжкінська лімфома. В одному з варіантів винаходу вказаний кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" даного винаходу вводять разом з одним або декількома біологічно активними агентами. В одному з варіантів винаходу вказані біологічно активні агенти вибрані з групи, що складається з антитіл, факторів росту, гормонів, цитокінів, антигормонів, ксантинів, інтерлейкінів, інтерферонів і цитотоксичних лікарських засобів. У переважному варіанті здійснення винаходу вказаним біологічно активним агентом є антитіло, направлене проти антигену клітинної поверхні, що експресується на В-клітинних злоякісних пухлинах, таке як антитіло проти CD19, CD20 або CD33. У переважному варіанті вказаним анти-СD20 антитілом є ритуксимаб (Rituxan™). В іншому варіанті здійснення винаходу вказаними біологічно активними агентами є цитокіни або фактори росту, такі як інтерлейкін 2 (IL-2), TNF, CSF, GM-CSF і G-CSF, або гормони, включаючи естрогени, андрогени, прогестини і кортикостероїди. В іншому варіанті здійснення винаходу біологічно активним агентом є цитотоксичний лікарський засіб, вибраний з доксорубіцину, даунорубіцину, ідарубіцину, акларубіцину, зорубіцину, мітоксантрону, епірубіцину, карубіцину, ногаламіцину, меногарилу, пітарубіцину, валрубіцину, цитарабіну, 88599 34 гемцитабіну, трифлуридину, анцитабіну, еноцитабіну, азацитидину, доксифлуридину, пентостатину, броксуридину, капецитабіну, кладрибіну, децитабіну, флуксуридину, флударабіну, гугеротину, пуроміцину, тегафуру, тіазофурину, адріаміцину, цисплатину, карбоплатину, циклофосфаміду, дакарбазину, вінбластину, вінкристину, мітоксантрону, блеоміїшну, мехлоретаміну, преднізону, прокарбазину, метотрексату, фторурацилів, етопозиду, таксолу, аналогів таксолу і мітоміцину. У переважному варіанті здійснення винаходу терапевтично ефективну дозу кон'югату "похідне мономерного каліхейміцину/анти-СD22 антитіло" вводять разом з однією або декількома комбінаціями цитотоксичних агентів, що використовуються як складова частина курсу лікування, де вказану комбінацію цитотоксичних агентів вибирають з: СНОРР (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і прокарбазин); CHOP (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин і преднізон); COP (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); САРВОР (циклофосфамід, доксорубіцин, прокарбазин, блеоміцин, вінкристин і преднізон); m-BACOD (метотрексат, блеоміцин, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, дексаметазон і лейковорин); ProMACE-ΜΟΡΡ (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); ProMACE-CytaBOM (преднізон, метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, етопозид, лейковорин, цитарабін, блеоміцин і вінкристин); МАСОР-В (метотрексат, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, преднізон, блеоміцин і лейковорин); МОРР (мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин); ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); МОРР (мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABV (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин і вінбластин); МОРР (мехлоретамін, вінкристин, преднізон і прокарбазин), що вводиться почергово з ABVD (адріаміцин/доксорубіцин, блеоміцин, вінбластин і дакарбазин); ChlVPP (хлорамбуцил, вінбластин, прокарбазин і преднізон); IMVP-16 (іфосфамід, метотрексат і етопозид); МІМЕ (метил-gag, іфосфамід, метотрексат і етопозид); DHAP (дексаметазон, висока доза цитарабіну і цисплатин); ESHAP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну і цисплатин); СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин); CAMP (ломустин, мітоксантрон, цитарабін і преднізон); CVP-1 (циклофосфамід, вінкристин і преднізон); ESHOP (етопозид, метилпреднізолон, висока доза цитарабіну, вінкристин і цисплатин); EPOCH (етопозид, вінкристин і доксорубіцин), що вводиться протягом 96 годин з ударними дозами циклофосфаміду і преднізону, що вводиться перорально), ICE (іфосфамід, циклофосфамід і етопозид), СЕРР(В) (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин, преднізон і блеоміцин), CHOP-В (циклофосфамід, доксорубіцин, вінкристин, преднізон і блеоміцин), СЕРР-В (циклофосфамід, етопозид, прокарбазин і блеоміцин) і P/DOCE (епірубіцин або доксЬрубіцин, вінкристин, циклофосфамід і преднізон). 35 В одному з переважних варіантів здійснення винаходу кон'югат "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" вводять перед введенням однієї або декількох комбінацій цитотоксичних агентів як частину курсу лікування. В іншому переважному варіанті здійснення винаходу терапевтично ефективну дозу кон'югату "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" вводять після введення однієї або декількох комбінацій цитотоксичних агентів як частину курсу лікування. В іншому переважному варіанті здійснення винаходу терапевтично ефективну дозу кон'югату "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" вводять разом з антитілом, направленим проти антигену клітинної поверхні, присутнього на В-клітинних злоякісних пухлинах, і ця терапевтично ефективна доза необов'язково містить одну або декілька комбінацій цитотоксичних агентів як частину курсу лікування. В іншому своєму аспекті даний винахід відноситься до використання кон'югату "похідне мономерного каліхеаміцину/анти-СD22 антитіло" з метою виготовлення лікарського засобу для лікування проліферативного розладу. Такий лікарський засіб може бути використаний для лікування В-клітинних проліферативних розладів або окремо, або у комбінації з іншими біологічно активними агентами. Короткий опис графічного матеріалу На Фіг.1 наведена амінокислотна послідовність CDR мишачого моноклонального антитіла 5/44 (SEQ ID NO:1-6). На Фіг.2 наведена ДНК і амінокислотна послідовність варіабельного домену (VL) легкого ланцюга мишачого моноклонального антитіла 5/44. На Фіг.3 наведена ДНК і амінокислотна послідовність варіабельного домену (VH) важкого ланцюга мишачого моноклонального антитіла 5/44. На Фіг.4 показана стратегія видалення сайту глікозилювання і реакційноздатного лізину з CDRH2. На Фіг.5 показана прищеплена конструкція для послідовності легкого ланцюга 5/44. DPK-9 являє собою акцепторну каркасну послідовність людської зародкової лінії. Вертикальні лінії вказують на відмінності між мишачими і людськими залишками. Підкреслені послідовності вказують на донорні залишки, які були збережені у трансплантаті. CDR позначені курсивом, набраним жирним шрифтом (для DPK-9 не показано). Трансплантат gL1 має 6 донорних каркасних залишків, а gL2 має 7 таких залишків. На Фіг.6 показана прищеплена конструкція для послідовності важкого ланцюга 5/44. DP7 являє собою акцепторну каркасну послідовність людської зародкової лінії. Вертикальні лінії вказують на відмінності між мишачими і людськими залишками. Підкреслені послідовності вказують на донорні залишки, які були збережені у трансплантаті. CDR позначені курсивом, набраним жирним шрифтом (для DP7 не показано). Трансплантати gH4 і gH6 мають 6 донорних каркасних залишків. Трансплантати gH5 і gH7 мають 4 донорних каркасних залишки. 88599 36 На Фіг.7 наведена карта вектора pMRR14. На Фіг.8 наведена карта вектора pMRR10.1. На Фіг.9 наведені результати Biacore-аналізу химерних мутантів 5/44. На Фіг.10 наведені олігонуклеотиди для збирання генів gH1 і gL1 5/44. На Фіг.11 наведена плазмідна карта проміжного вектора pCR2.1 (544gH1). На Фіг.12 наведена плазмідна карта проміжного вектора pCR2.1 (544gL1). На Фіг.13 наведені олігонуклеотидні кластери, що використовуються для створення додаткових трансплантатів. На Фіг.14 наведений графік, який ілюструє аналіз на конкуренцію між флуоресцентно міченим мишачим антитілом 5/44 і прищепленими варіантами. На Фіг.15 наведений графік, який ілюструє аналіз на конкуренцію між флуоресцентно міченим мишачим антитілом 5/44 і прищепленими варіантами. На Фіг.16 наведена повнорозмірна ДНК і амінокислотна послідовність прищеплених важкого і легкого ланцюгів. На Фіг.17 схематично наведений кон'югат "антитіло-NAc-гамма-каліхеаміцин-DMH". На Фіг.18 наведений графік, що ілюструє вплив СМС-544 на ріст В-клітинної лімфоми RAMOS. На Фіг.19 наведений графік, що ілюструє вплив СМС-544 на ріст великоклітинної В-лімфоми у моделі ксенотрансплантату in vivo у "голих" мишей. На Фіг.20 наведений графік, що ілюструє порівняння впливу СМС-544, одержаного методом кон'югування СМА-676 і методом кон'югування СМС-544, на ріст RL-лімфоми. На Фіг.21 наведений графік, який вказує на те, що оброблена ритуксимабом (Rituxan™) великоклітинна RL-лімфома є чутливою до СМС-544обробки. На Фіг.22 наведений графік, що ілюструє вплив ритуксимабу (Rituxan™) на цитотоксичну дію СМС-544. На Фіг.23 наведений графік, що ілюструє вплив СМС-544, ритуксимабу (Rituxan™) і СМА676 на виживання мишей SCID з дисемінованою ранньою В-клітинною лімфомою RAMOS. На Фіг.24 наведений графік, що ілюструє вплив СМС-544, ритуксимабу (Rituxan™) і СМА676 на виживання мишей SCID з дисемінованою пізньою В-клітинною лімфомою RAMOS. На Фіг.25 наведений графік, що ілюструє вплив СМС-544, ритуксимабу (Rituxan™) і СМА676 на виживання мишей SCID з дисемінованою пізньою В-клітинною лімфомою RAMOS. На Фіг.26 наведений графік, що ілюструє вплив СМС-544, ритуксимабу (Rituxan™) і СМА676 на виживання мишей SCID з дисемінованою пізньою В-клітинною лімфомою RAMOS. На Фіг.27 наведений графік, що ілюструє вплив СМС-544, ритуксимабу (Rituxan™) і СМА676 на виживання мишей SCID з дисемінованою пізньою В-клітинною лімфомою RAMOS. 37 На Фіг.28 наведений графік, що ілюструє протипухлинну активність СМС-544 з ритуксимабом (Rituxan™) або без нього, направлену проти неходжкінської RL-лімфоми. На Фіг.29 наведений графік, що ілюструє протипухлинну активність СМС-544 і CHOP, направлену проти неходжкінської RL-лімфоми. Кон'югати даного винаходу містять цитотоксичний лікарський засіб, дериватизований лінкером, який включає будь-яку реакційноздатну групу, що реагує з білковим носієм з утворенням кон'югату "похідне цитотоксичного лікарського засобу - білковий носій". Зокрема, кон'югати даного винаходу містять цитотоксичний лікарський засіб, дериватизований лінкером, який включає будь-яку реакційноздатну групу, що реагує з антитілом, використовуваним як білковий носій, з утворенням кон'югату "похідне цитотоксичного лікарського засобу - антитіло". Зокрема, вказане антитіло реагує з антигеном клітинної поверхні на В-клітинних злоякісних пухлинах. Нижче описаний вдосконалений спосіб одержання і очищення таких кон'югатів. Використання конкретних співрозчинників, домішок і конкретних реакційних умов у комбінації з процедурою розподілу приводить до утворення кон'югату "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/антитіло" зі значно більш низьким вмістом LCF. На противагу агрегованій формі, мономерна форма має значно більш високий терапевтичний індекс, а мінімізація LCF і значне зниження ступеню агрегації дозволяє використовувати вказане антитіло як вихідний матеріал в ефективному терапевтичному лікуванні завдяки запобіганню конкуренції LCF з більш високо кон'югованою фракцією (HCF). І. Носії Носії/агенти, що націлюють, даного винаходу, переважно, являють собою білкові носії/агенти, що націлюють. Такими носіями/агентами, що націлюють, є гормони, фактори росту, антитіла, фрагменти антитіл, міметики антитіл і їх генетично або ферментативно сконструйовані аналоги, які, незалежно від того, чи згадуються вони окремо або групою, будуть далі називатися "носіями" або "групами носіїв". Головною властивістю носія є його здатність розпізнавати антиген або рецептор, асоційований з небажаними клітинами, і зв'язуватися з ним з подальшою його інтерналізацією. Прикладами носіїв, що використовуються у даному винаході, є носії, описані у патенті США №5053394, який у всій своїй повноті вводиться у даний опис за допомогою посилання. Носіями, переважними для використання у даному винаході, є антитіла і міметики антитіл. Для генерування міметиків антитіла, які зв'язуються з антигенними детермінантами зі специфічністю антитіла, були використані не імуноглобулінові білкові каркасні молекули (публікація РСТ №WO 00/34784). Так, наприклад, каркас "мініантитіла", яке має укладку, подібну до імуноглобулінової укладки, був сконструйований шляхом делеції трьох бета-ланцюгів з варіабельного домену важкого ланцюга-моноклонального антитіла (Tramontano et al., J. Mol. Recognit. 7:9, 1994). Цей білок включає 61 залишок і може бути використа 88599 38 ний для представлення двох гіперваріабельних петель. Ці дві петлі були рандомізовані, а продукти були відібрані для зв'язування з антигеном, однак абсолютно очевидно, що каркасна ділянка має досить обмежене застосування через погану розчинність. Іншою каркасною ділянкою, що використовується для представлення петель, є тендамістат, тобто білок, який специфічно інгібує альфаамілази ссавців і являє собою "сендвіч"-структуру із 74 залишків, що складається з 6-ланцюгових бета-складчастих шарів, зв'язаних разом двома дисульфідними зв'язками (McConnell & Hoess, J. Моl. Biol. 250: 460, 1995). Даний каркас включає три петлі, але у наш час тільки дві з цих петель були оцінені на можливість рандомізації. Інші білки були протестовані на каркасні ділянки і були використані для представлення рандомізованих залишків на альфа-спіральних поверхнях (Nord et al., Nat. Biotechnol. 15: 772, 1997; Nord et al., Protein Eng. 8:601, 1995) і для представлення петель між альфа-спіралями у пучках альфаспіралей (Ku & Schultz, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 6552, 1995) і петель, обмежених дисульфідними містками, такими як дисульфідні містки інгібіторів малих протеаз (Markland et al., Biochemistry 35: 8045, 1996; Markland et al., Biochemistry 35: 8058, 1996; Rottgen & Collins, Gene 164:243, 1995; Wang et al., J. Biol. Chem. 270: 12250, 1995). Прикладами антитіл-носіїв, які можуть бути використані у даному винаході, є моноклональні антитіла, химерні антитіла, гуманізовані антитіла, людські антитіла і їх біологічно активні фрагменти. Переважно, такі антитіла направлені проти антигенів клітинної поверхні, що експресуються на клітинах-мішенях і/або тканинах, асоційованих з проліферативними розладами, такими як рак. Прикладами специфічних антитіл, направлених проти антигенів клітинної поверхні на клітинахмішенях, є, але не обмежуються ними, антитіла проти антигену CD22, який понадекспресується на більшості В-клітинних лімфом; G5/44, гуманізована форма мишачого анти-СD22 моноклонального антитіла; антитіла проти антигену клітинної поверхні CD33, який переважає на деяких людських мієлоїдних пухлинах, зокрема, при гострому мієлоїдному лейкозі; hP67.6, гуманізована форма мишачого анти-СD33 антитіла (див. патент США №5773001); антитіло проти антигену РЕМ, що виявляється на множині пухлин епітеліального походження, яка була позначена mР67.6 (див. I.D. Bernstein et al., J. Сlіn. Invest. 79: 1153 (1987) і I.D. Bernstein et al., J. Immunol. 128: 867-881 (1992)); і гуманізоване антитіло проти вуглецевого антигену Lewis Y, понадекспресованого на багатьох солідних пухлинах, позначене hu3S193 (див. патент США №6310185 В1). Крім того, як носії/агенти для доставки можуть бути також використані декілька комерційно доступних антитіл, таких як ритуксимаб (Rituxan™) і трастузумаб (Herceptin™). Ритуксимаб (Rituxan™) являє собою химерне антиСD20 антитіло, що використовується для лікування різних В-клітинних лімфом, а трастузумаб (Herceptin™) являє собою гуманізоване анти-Неr2 антитіло, що використовується для лікування раку молочної залози. 39 Прикладом антитіла, що використовується у даному винаході як носій, є молекула CDRприщепленого гуманізованого антитіла, направлена проти антигену клітинної поверхні CD22 і позначена G5/44. Це антитіло являє собою гуманізовану форму мишачого моноклонального антиСD22 антитіла, направленого проти антигену клітинної поверхні CD22, який переважає на деяких людських лімфомах. Використовуваний тут термін "молекула CDR-прищепленого антитіла" означає молекулу антитіла, в якій важкий і/або легкий ланцюги містять одну або декілька ділянок (CDR), що визначають комплементарність, включаючи, якщо необхідно, модифіковану CDR (далі називану просто CDR), де CDR від донорного антитіла (наприклад, мишачого моноклонального антитіла) була прищеплена до каркасної варіабельної ділянки важкого і/або легкого ланцюгів акцепторного антитіла (наприклад, людського антитіла). Переважно, щоб таке CDR-прищеплене антитіло мало варіабельний домен, що містить людські акцепторні каркасні ділянки, а також одну або декілька донорних CDR, визначених вище. Якщо CDR є прищепленими, то може бути використана будь-яка придатна послідовність каркасної акцепторної варіабельної ділянки, що відноситься до такого ж класу/типу, як і донорне антитіло, від якого походять вказані CDR, включаючи каркасні ділянки миші, приматів і людини. Прикладами каркасних людських ділянок, які можуть бути використані у даному винаході, є KOL, NEWM, REI, EU, TUR, ТЕІ, LAY і РОМ (Kabat et al., Seq. of Proteins of Immunol. Interest, 1: 310-334 (1994)). Так, наприклад, KOL ι NEWM можуть бути використані для важкого ланцюга, REI може бути використана для легкого ланцюга, a EU, LAY і РОМ можуть бути використані як для важкого, так і для легкого ланцюга. У CDR-прищепленому антитілі даного винаходу як акцепторне антитіло переважно використовувати антитіло, що має ланцюги, гомологічні ланцюгам донорного антитіла. Акцепторні важкі та легкі ланцюги необов'язково повинні походити від одного і того ж антитіла, і, якщо це необхідно, то вони можуть містити складові ланцюги, що мають каркасні ділянки, які походять від інших ланцюгів. Крім того, у CDR-прищепленому антитілі даного винаходу каркасні ділянки необов'язково повинні мати послідовність, яка точно співпадає з послідовністю акцепторного антитіла. Так, наприклад, незвичайні залишки можуть бути замінені залишками, які більш часто зустрічаються в антитілах, що належать до такого ж класу або типу, як і акцепторне антитіло. Альтернативно, вибрані залишки в акцепторних каркасних ділянках можуть бути замінені так, щоб вони відповідали залишкам, присутнім у тому ж положенні донорного антитіла, або вони можуть бути замінені консервативним залишком, що знаходиться у тому ж положенні донорного антитіла. Таких умов заміни потрібно додержуватися, принаймні, для збереження афінності донорного антитіла. Протокол відбору залишків в акцепторних каркасних ділянках, які, якщо це необхідно, повинні бути замінені, описаний у публікації РСТ №WO 91/09967, яка у 88599 40 всій своїй повноті вводиться у даний опис за допомогою посилання. Донорними залишками є залишки, що походять від донорного антитіла, тобто антитіла, від якого походять CDR. Антитіло даного винаходу може містити важкий ланцюг, де варіабельний домен як CDR-H2 (як визначено Kabat et al. (див. вище)) включає ділянку Н2', в якій можлива послідовність сайту глікозилювання була видалена з метою підвищення афінності антитіла до антигену. Альтернативно або додатково, антитіло даного винаходу може містити важкий ланцюг, де варіабельний домен як CDR-H2 включає (як визначено Kabat et al. (див. вище)) ділянку Н2", в якій лізиновий залишок знаходиться у положенні 60. Цей лізиновий залишок, який локалізований у доступному положенні у ділянці CDR-H2, і який розглядається як залишок, здатний вступати у реакцію з агентами кон'югування, що приводить до зниження афінності зв'язування з антигеном, замінений альтернативною амінокислотою. Крім того, антитіло даного винаходу може містити важкий ланцюг, де варіабельний домен як CDR-H2 (як визначено Kabat et al. (див. вище)) включає ділянку Н2'", в якій можлива послідовність сайту глікозилювання і лізиновий залишок у положенні 60 замінені альтернативними амінокислотами. Антитіло даного винаходу може включати: ціле антитіло, що має повнорозмірні важкі і легкі ланцюги; його біологічно активний фрагмент, такий як Fab, модифікований Fab, Fab', F(ab')2 або Fvфрагмент; мономер або димер легкого ланцюга або важкого ланцюга, або одноланцюгове антитіло, наприклад, одноланцюговий Fv, в якому варіабельні домени важкого і легкого ланцюга зв'язані пептидним лінкером. Аналогічним чином, варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів можуть бути об'єднані, якщо це необхідно, з іншими доменами антитіла. Антитіло даного винаходу може також включати модифікований Fab-фрагмент, де вказаною модифікацією є додавання однієї або декількох амінокислот, необхідних для приєднання ефекторної або репортерної молекули до С-кінця його важкого ланцюга. Переважно, щоб додаткові амінокислоти утворювали модифіковану шарнірну ділянку, що містить один або два цистеїнових залишки, до яких може бути приєднана ефекторна або репортерна молекула. Домени константної ділянки антитіла даного винаходу, якщо вони присутні, можуть бути вибрані, виходячи з передбачуваної функції вказаного антитіла, а зокрема, ефекторних функцій, які можуть бути, а можуть і не бути, необхідними. Так, наприклад, як домени константної ділянки можуть служити домени людського IgA, IgD, IgE, IgG або IgM. Зокрема, якщо дане антитіло призначене для терапевтичного використання і його ефекторні функції є необхідними, то можуть бути використані домени константної ділянки людського IgG, особливо ізотипів IgG1 і IgG3. Альтернативно, якщо вказане антитіло призначене для терапевтичного використання, але його ефекторні функції не є 41 необхідними або бажаними, то можуть бути використані ізотипи IgG2 і IgG4, або Fc-ділянка IgG1 може бути мутована для скасування ефекторної функції. Афінність зв'язування антитіла даного винаходу складає, принаймні, 5´10-8М, переважно, принаймні, 1´10-9М, більш переважно, принаймні, 0,75´10-10М, а найбільш переважно, принаймні, 0,5´10-10М. В одному зі своїх варіантів даний винахід відноситься до кон'югатів імунотоксину і до способів одержання таких кон'югатів з використанням варіантів антитіл або міметиків антитіл. У переважному варіанті здійснення винаходу варіанти антитіла даного винаходу направлені проти CD22 і володіють підвищеною афінністю по відношенню до CD22. Такі варіанти можуть бути одержані відповідно до різних протоколів забезпечення дозрівання афінності, включаючи мутовані CDR (Yang et al., J. Моl. Biol. 254, 392-403, 1995), перестановку ланцюгів (Marks et al., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), використання штамів-мутантів E.coli (Low et al., J. Моl. Biol., 250, 359-368, 1996), перестановку ДНК (Patten et al., Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724-733, 1997), фагове представлення (Thompson et al., J. Моl. Biol. 256, 77-88, 1996) і ПЛР за алельним виключенням (тільки алелю, що відповідає одній статі) (Crameri et al., Nature, 391, 288-291, 1998). Для експресії ДНК-послідовностей, що кодують носій, включаючи антитіла даного винаходу, може бути використана будь-яка придатна система клітина-хазяїн/вектор. При цьому можуть бути використані бактеріальні системи, наприклад, E.coli, та інші мікробні системи, частково для експресії фрагментів антитіл, таких як Fab- і F(аb')2фрагменти, а особливо Fv-фрагменти і фрагменти одноланцюгового антитіла, наприклад, одноланцюгові Fv-фрагменти. Для продукування більш великого антитіла, включаючи повнорозмірні молекули антитіл, можуть бути використані еукаріотичні експресійні системи клітин-хазяїв, наприклад, клітини ссавців. Придатними клітинамихазяями ссавців є СНО, мієломні клітини, дріжджові клітини, клітини комах, гібридомні клітини, клітини NSO, VERO або PER C6. Придатними експресійними системами також є трансгенні тварини і рослини. II. Терапевтичні агенти Терапевтичні агенти, придатні для використання у даному винаході, являють собою цитотоксичні лікарські засоби, які інгібують або переривають полімеризацію тубуліну; алкілувальні агенти, які зв'язуються з ДНК і руйнують її, і агенти, які інгібують синтез білка або основних клітинних білків, таких як протеїнкінази, ферменти і цикліни. Прикладами таких цитотоксичних лікарських засобів є, але не обмежуються ними, тіотепа, таксани, вінкристин, даунорубіцин, доксорубіцин, епірубіцин, актиноміцин, аутраміцин, азасерини, блеоміцини, тамоксифен, ідарубіцин, доластатини/ауристатини, геміастерліни, каліхеаміцини, еспераміцини та маїтанзиноїди. Переважними цитотоксичними лікарськими засобами є каліхеаміцини, які відносяться до метилтрисульфідних протипухлинних антибіотиків. Приклади каліхеамі 88599 42 цинів, які можуть бути використані у даному винаході, описані, наприклад, у патентах США №№4671958, 4970198, 5053394, 5037651 і 5079233, які у всій своїй повноті вводяться у даний опис за допомогою посилання. Переважними каліхеаміцинами є похідні гамма-каліхеаміцину або похідні N-ацетил-гамма-каліхеаміцину. III. Кон'югати "похідне цитотоксичного лікарського засобу/носій" Кон'югати даного винаходу мають формулу Pr(-X-W)m, де: Рr являє собою білковий носій; X являє собою лінкер, що включає продукт реакції будь-якої реакційноздатної групи, яка може взаємодіяти з білковим носієм; W являє собою цитотоксичний лікарський засіб; m означає середнє навантаження для очищеного продукту кон'югування, таке, при якому вказаний каліхеаміцин складає 4-10% за масою кон'югату; і (-X-W)m являє собою цитотоксичний лікарський засіб. Переважно, X має формулу: (CO-Alk1-Sp1-Ar-Sp2-Alk2-C(Z1)=Q-Sp), де: Alk1 і Alk2 незалежно являють собою зв'язок або розгалужений або нерозгалужений (С1С10)алкіленовий ланцюг; Sp1 являє собою зв'язок, -S-, -О-, -CONH, NHCO-, -NR'-, -N(CH2CH2)2N- або -X-Ar1-Y-(CH2)n-Z, де Χ, Υ і Ζ незалежно являють собою зв'язок, -NR', -S - або -О-, за умови, що якщо n=0, то, принаймні, один з Υ і Ζ повинен являти собою зв'язок, а Аr являє собою 1,2-, 1,3- або 1,4-фенілен, необов'язково заміщений однією, двома або трьома групами, вибраними з (С1-С5)алкілу, (С1-С4)алкокси, (С1С4)тіоалкокси, галогену, нітро, -COOR', -CONHR', (CH2)nCOOR', -S(CH2)nCOOR', -O(CH2)nCONHR' або -S(CH2)nCONHR', за умови, що якщо Alk1 являє собою зв'язок, то Sp1 також являє собою зв'язок; n дорівнює цілому числу від 0 до 5; R' являє собою розгалужений або нерозгалужений (С1-С5)ланцюг, необов'язково заміщений однією або двома групами, вибраними з -ОН, (С1С4)алкокси, (С1-С4)тіоалкокси, галогену, нітро, (С1С3)діалкіламіно або (С1-С3)триалкіламоній-А-, де Аявляє собою фармацевтично прийнятний аніон, що утворює сіль; Аr являє собою 1,2-, 1,3- або 1,4-фенілен, необов'язково заміщений однією, двома або трьома групами, вибраними з (С1-С6)алкілу, (С1С5)алкокси, (С1-С4)тіоалкокси, галогену, нітро, COOR', -CONHR', -O(CH2)nCOOR', -S(CH2)nCOOR', -O(CH2)nCONHR' або -S(CH2)nCONHR', де n і R' визначені вище, або Аr являє собою 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 1,6-, 1,7-, 1,8-, 2,3-, 2,6- або 2,7-нафтиліден, або 43 де кожний нафтиліден або фенотіазин необов'язково заміщені однією, двома, трьома або чотирма групами, вибраними з (С1-С6)алкілу, (С1С5)алкокси, (С1-С4)тіоалкокси, галогену, нітро, COOR', -CONHR', -O(CH2)nCOOR', -S(CH2)nCOOR' або -S(CH2)nCONHR', де n і R' визначені вище, за умови, що якщо Аr являє собою фенотіазин, то Sp являє собою зв'язок, приєднаний тільки до азоту; Sp2 являє собою зв'язок, -S- або -О-, за умови, що якщо Alk2 являє собою зв'язок, то Sp2 також являє собою зв'язок; Z1 являє собою Н, (С1-С5)алкіл або феніл, необов'язково заміщений однією, двома або трьома групами, вибраними з (С1-С5)алкілу, (С1С5)алкокси, (С1-С4)тіоалкокси, галогену, нітро, COOR', -ONHR', -O(CH2)nCOOR', -S(CH2)nCOOR', O(CH2)nCONHR' або -S(CH2)nCONHR', де n і R' визначені вище; Sp являє собою прямий або розгалужений двовалентний або тривалентний (С1-C18)радикал, двовалентний або тривалентний арильний або гетероарильний радикал, двовалентний або тривалентний (С3-C18)циклоалкільний або гетероциклоалкільний радикал, двовалентний або тривалентний арил- або гетероариларил(С1-C18)радикал, двовалентний або тривалентний циклоалкіл- або гетероциклоалкілалкіл(С1-C18)радикал або двовалентний або тривалентний ненасичений (С2С18)алкільний радикал, де гетероарил, переважно, являє собою фурил, тієніл, N-метилпіроліл, піридиніл, N-метилімідазоліл, оксазоліл, піримідиніл, хіноліл, ізохіноліл, N-метилкарбазоїл, амінокумариніл або феназиніл, і де, у тому випадку, якщо Sp являє собою тривалентний радикал, то Sp може бути, крім того, заміщений нижчою (С1С5)діалкіламіногрупою, нижчою (С1С5)алкоксигрупою, гідроксигрупою або нижчою (С1С5)алкілтіогрупою; і Q являє собою =NHNCO-, =NHNCS-, =NHNCONH-, =NHNCSNH- або =NHO-. Alk1 переважно являє собою розгалужений або нерозгалужений (С1-С10)алкіленовий ланцюг; Sp' являє собою зв'язок, -S-, -О-, -CONH-, -NHCO - або -NR', де R' визначений вище, за умови, що якщо Alk1 являє собою зв'язок, то Sp1 також являє собою зв'язок; Аr являє собою 1,2-, 1,3- або 1,4-фенілен, необов'язково заміщений однією, двома або трьома групами, вибраними з (С1-С6)алкілу, (С1С5)алкокси, (С1-С4)тіоалкокси, галогену, нітро, COOR', -CONHR', -O(CH2)nCOOR', -S(CH2)nCOOR', -O(CH2)nCONHR' або -S(CH2)nCONHR', де n і R' визначені вище, або Аr являє собою 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 1,6-, 1,7-, 1,8-, 2,3-, 2,6- або 2,7-нафтиліден, кожний з яких необов'язково заміщений однією, двома, трьома або чотирма групами, вибраними з (С1-С6)алкілу, (С1-С5)алкокси, (С1-С4)тіоалкокси, галогену, нітро, -COOR', -CONHR', -O(CH2)nCOOR', -S(CH2)nCOOR', -O(CH2)nCONHR' або S(CH2)nCONHR'. Ζ1 являє собою (С1-С5)алкілабо феніл, необов'язково заміщений однією, двома або трьома групами, вибраними з (С1-С5)алкілу, (С1-С4)алкокси, (С1-С4)тіоалкокси, галогену, нітро, -COOR', CONHR', -O(CH2)nCOOR', -S(CH2)nCOOR', 88599 44 O(CH2)nCONHR' або -S(CH2)nCONHR'; Alk2 і Sp2, взяті разом, утворюють зв'язок, а Sp і Q є такими, як вони були визначені вище. У патенті США №5773001, який у всій своїй повноті вводиться у даний опис за допомогою посилання, описані лінкери, які можуть бути використані разом з нуклеофільними похідними, а зокрема, гідразидами і спорідненими нуклеофілами, одержаними з каліхеаміцинів. Дані лінкери є особливо придатними у тих випадках, коли найкраща активність досягається при утворенні зв'язку між лікарським засобом і лінкером, що гідролізують. Дані лінкери містять дві функціональні групи. Однією з таких груп звичайно є карбонова кислота, що використовується для реакції взаємодії з носієм. Така кислотна функціональна група, якщо вона є відповідним чином активованою, може утворювати амідний зв'язок з вільною аміногрупою вказаного носія, такою як амін бічного ланцюга лізину антитіла або іншого білкового носія. Іншою функціональною групою звичайно є карбонільна група, тобто альдегід або кетон, які реагують з відповідним чином модифікованим терапевтичним агентом. Дані карбонільні групи можуть реагувати з гідразидною групою на вказаному лікарському засобі з утворенням гідразонового зв'язку. Такий зв'язок є таким, що гідролізують, що дозволяє терапевтичному агенту вивільнятися з кон'югату після зв'язування з клітинами-мішенями. Найбільш переважним біфункціональним лінкером для використання у даному винаході є 4-(4ацетилфенокси)бутанова кислота (AcBut), яка утворює переважний кон'югат, що складається з βкаліхеаміцину, g-каліхеаміцину або N-ацетил-gкаліхеаміцину, функціоналізованого за допомогою реакції взаємодії з 3-меркапто-3-метилбутаноїл гідразидом, AcBut-лінкером, і з людського або гуманізованого антитіла IgG, використовуваного як носій, що націлює. IV. Мономерне кон'югування Гідрофобна природа багатьох цитотоксичних лікарських засобів, включаючи каліхеаміцини, створює певні труднощі в одержанні кон'югатів мономерного лікарського засобу з високим навантаженням лікарським засобом і з прийнятними виходами, необхідними для його терапевтичного застосування. Дана проблема ще більш ускладнюється збільшенням гідрофобності зв'язку, що надається лінкерами, такими як AcBut-лінкер, як описано у патенті США №5773001, а також збільшенням довжини ковалентного зв'язку, що розділяє терапевтичний агент і носій (антитіло). Агрегація кон'югатів "похідне цитотоксичного лікарського засобу/носій" з підвищеним навантаженням лікарським засобом обумовлена гідрофобною природою лікарських засобів. Навантаження лікарським засобом часто має обмеження і не дозволяє одержувати прийнятні кількості мономерного продукту. У деяких випадках, наприклад, у випадку кон'югатів, описаних у патенті США №5877296, одержання кон'югату з потрібним виходом і з потрібним навантаженням терапевтичним засобом у реакційних умовах, описаних у патенті США №5Θ53394, часто представляє певні труднощі через надмірну агрегацію. Ці реакційні 45 умови передбачають використання ДМФ як співрозчинника у реакції кон'югування. Тому необхідно розробити способи, які дозволяли б збільшити навантаження лікарським засобом з одержанням більш високого виходу, але без агрегації і, відповідно, без втрати матеріалу. Методи зниження агрегації описані у патентах США №№5712374 і 5714586, які у всій своїй повноті вводяться у даний опис за допомогою посилання. У цих патентах описані білкові носії, включаючи, але не обмежуючись ними, білки, такі як людські або гуманізовані антитіла, що використовуються для доставки цитотоксичних терапевтичних агентів, такі як, наприклад, hP67.6 та інші описані там гуманізовані антитіла. Як вказується у даних патентах, було виявлено, що використання ненуклеофільного, сумісного з білком забуференого розчину, що містить (і) пропіленгліколь як співрозчинник і (іі) домішку, що включає, принаймні, одну С6-С18карбонову кислоту, звичайно дозволяє продукувати кон'югати "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій" з більш високим навантаженням лікарським засобом, з більш високим виходом та зі зниженим ступенем агрегації, що володіють чудовою активністю. Описаними у цих патентах кислотами, переважно, є С7-С12-кислоти, а найбільш переважною кислотою є октанова кислота (така як каприлова кислота) або її солі. Переважними забуференими розчинами для кон'югатів, одержаних з Nгідроксисукцинімідоефірів (OSu) або інших аналогічним чином активованих складних ефірів, є забуферений фосфатом фізіологічний розчин (PBS) або N-2-гідроксіетилпіперазин-N'-2етансульфонова кислота (буфер HEPES). Забуферений розчин, що використовується у таких реакціях кон'югування, не може містити вільних амінів або нуклеофілів. Буфери, придатні для кон'югатів інших типів, можуть бути легко визначені фахівцем. Альтернативно, було виявлено, що використання ненуклеофільного, сумісного з білком, забуференого розчину, що містить третбутанол і не містить яких-небудь інших домішок, дозволяє продукувати кон'югати "похідне мономерного каліхеаміцину/носій" з більш високим навантаженням лікарським засобом, з більш високим виходом та зі зниженим ступенем агрегації. Кількість співрозчинника, необхідного для утворення мономерного кон'югату, до деякої міри варіюється в залежності від використовуваного білка і може бути визначена будь-яким фахівцем без зайвого експериментування. Кількість домішок, необхідних для ефективного утворення мономерного кон'югату, також варіюється в залежності від використовуваного антитіла. Така кількість також може бути визначена будь-яким фахівцем без зайвого експериментування. Як описано у патентах США №№5712374 і 5714586, додавання пропіленгліколю у кількості від 10% до 60%, переважно, від 10% до 40%, а найбільш переважно приблизно 30% за об'ємом всього розчину, і домішки, що містить, принаймні, одну С6-С18карбонову кислоту або її сіль, а переважно, каприлову кислоту або її сіль у кількості від 20мМ до 100мМ, переважно, від 40мМ до 90мМ, а 88599 46 найбільш переважно, приблизно від 60мМ до 90мМ у реакційну суміш для кон'югування дозволяє продукувати кон'югати "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій" з більш високим навантаженням лікарським засобом, з більш високим виходом та зі зниженим ступенем агрегації. Можуть бути також використані й інші сумісні з білком органічні співрозчинники, що не є пропіленгліколем, такі як етиленгліколь, етанол, ДМФ, ДМСО і т.п.Деякі з цих органічних співрозчинників або всі вказані співрозчинники були використані для перенесення лікарського засобу у суміш для кон'югування. Альтернативно, як описано у вказаних патентах, концентрація С6-С18карбонової кислоти або її солі може бути збільшена до 150-300мМ, а концентрація співрозчинника може бути знижена до 110%. В одному з варіантів вказаною карбоновою кислотою є октанова кислота або її сіль. У переважному варіанті карбоновою кислотою є деканова кислота або її сіль. В іншому переважному варіанті вказаною карбоновою кислотою є каприлова кислота або її сіль, де вказана каприлова кислота присутня у концентрації 200мМ разом з 5% пропіленгліколем або етанолом. В іншому альтернативному варіанті, описаному у даних патентах, для одержання кон'югатів "похідне мономерного цитотоксичного лікарського засобу/носій" з більш високим навантаженням лікарським засобом, з більш високим виходом та зі зниженим ступенем агрегації, у реакційну суміш для кон'югування може бути доданий трет-бутанол у концентраціях від 10% до 25%, а переважно, 15% за об'ємом всього розчину. Ці встановлені умови кон'югування були використані для одержання кон'югату СМА-676 (Gemtuzumab Ozogamicin), який у наш час є у продажу під торговим знаком Мілотарг™ (Mylotarg™). При розробці цього способу лікування гострого мієлоїдного лейкозу (ГМЛ), було проведене дослідження за допомогою іонообмінної хроматографії, яке показало, що каліхеаміцин не виявляє однорідного розподілу по всьому антитілу. Велика частина каліхеаміцину локалізується, приблизно, на одній половині антитіла, а інша його частина присутня в LCF, яка містить лише невеликі кількості каліхеаміцину. Отже, необхідність у розробці вдосконалених способів кон'югування цитотоксичних лікарських засобів, таких як каліхеаміцини, з носіями, які мінімізували б ступінь агрегації і дозволяли б досягти більш високого однорідного навантаження лікарським засобом зі значно більш високим виходом продукту - кон'югату, залишається вельми актуальною. Конкретним прикладом може служити кон'югат С5/44-МАс-гамма-каліхеаміцин-DMH-AcBut, який буде далі називатися СМС-544 і який, у загальних рисах, показаний на Фіг.17. Для продукування СМС-544 бажане зниження кількості LCF до