Спосіб діагностики вірусного гепатиту в на фоні токсичних речовин

Способ диагностики вирусного гепатита В на фоне токсических веществ, включающий иммуногенетическое исследование крови путем выделения лимфоцитов, добавления их в антисыворотку, введение комплемента, последующую окраску раствора и определение фенотипа, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что выделение лимфоцитов производят на физиологическом растворе, комплемент вводят в количестве 0,004 мл, а при определении фенотипа дополнительно контролируют антиген НІА-В15 в локусе В. го CN Изобретение относится к медицине, преимущественно иммуннологии и наркологии, и может быть использовано для диагностики вирусного гепатита В на фоне наркомании. Наиболее близким к заявляемому объекту по сущности и достигаемому результату является способ иммуно-генетического исследования у больных вирусным гепатитом В на фоне алкоголизма, включающий забор крови выделения лимфоцитов, добавления их в антисыворотку, комплемент, последующей окраски и определения фенотипа, в котором выделение лимфоцитов выполняют растворением венозной гепаринированной крови раствором Хенкса, взятых в соотношении 5:5 мл, наслоением на 2 мл смеси фиколл-верографина центрифугированием в течение 15 с, съемом свет лого слоя лимфоцитов, отмываемого затем раствором Хенкса или среды 199 в пробирке, по меньшей мере, 3 раза, добавление лимфоцитов в антисыворотку выполняют под вазелиновым маслом и после термообработки при Т 37°С в течении 30 мин, сносят комплемент в каждую лунку, по меньшей мере, по 0,005 мл, инкубируют в термостате при Т 37°С в течении 60 мин и, перед определением фенотипа, окрашивают трипановым синим, вносимым в количестве 0.001 мл. инкубируют в течение 10-20 мин и стряхивают излишки красителя. Известное решение задачи несколько эффективнее аналога [1], так как иммуногенетическое исследование крови в отличие от токсикологического исследования мочи позволяет прогнозировать случаи злоупотреблений алкоголем, что повышает резуль 12629 раствор, поливитамины, витамин "Є" метилурацил, вилозен, папаверин, "аллохол*. Больной выписан иа 22 день болезни в стадии клинического и биохимического выздоровления Положительный эффект: как видно из примеров конкретно выполненного способа, предполагаемый способ позволяет значительно повысить способ диагностики, 8 назначить адекватную терапию, в результате чего значительно сокращены сроки лечения, удешевляется терапия. Таким образом, предлагаемое решение соответствует критерию промышленная применимость, т.к. может быть использовано в здравоохранении преимущественно для диагностики вирусного гепатита В на фоне наркомании. 10 Таблица 1 Эффективность способа при различных количествах используемого комплемента 0,003 0,004 _ Количество комплемента в мл Результаты эффективности реакции #### 0,005 '- нецелесообразно, так как повышает стоимость реакции. Таблица 2 Распределение Ag HLA у больных ВГВ на фоне наркомании Н!А антиген 815 Контроль (доноры) Генная Частота чистота антигена 0.046 9,09 ВГВ на фоне наркомании Генная Частота чистота антигена 46,51 0,265 Наркомания Генная чистота 0,025 Частота антигена 5,0 Таблица 3 Критерии соответствия и относительного риска при распределении AgHLA у больных ВГВ на фоне наркомании HIA антиген В15 ВГВ на фоне наркомании Р РР _ , 0,001 10,075 8,659 Упорядник Замовлення 4075 Техред М.Моргентал Наркомания РР 0,0 0.520 Коректор Л.Лукач Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655. ГСП, Ки»в-53, Львівська пл , 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул Гагаріна. 101 Р 4 УКРАЇНА ,„>УА(„> „1262? (ІЗ) (5і>5 G 01 N 3 3 / 4 9 ОПИС ДО ПАТЕНТУ ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД без проведення експертизи по суті на підставі Постанови Верховної Ради України N) 3769X11 від 23.ХІІ 1993 р Публікується в редакції заявника (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ ВІРУСНОГО ГЕПАТИТУ В НА ФОНІ ТОКСИЧНИХ РЕЧОВИН 1 (21)95062953 • (22) 23.06.95 (24)28.02.97 (46) 28,02.97. Бюл. Ns 1 (56) Химико-токсический анализ веществ, вызывающих одурманивание - Метод.рекомендации.М.,1987, с. 122 (прототип). (72) Суременко Микола Степанович, Журбіна Алла Іллівна. Легеза Костянтин Миколайович (73) Дніпропетровська державна медична академія (UA), Суременко Микола Степанович (UA), Журбіна Алла Іллівна (UA) (57) Способ диагностики вирусного гепатита В на фоне токсических веществ, включающий иммуногенетическое исследование крови путем выделения лимфоцитов, добавления их в антисыворотку, введение комплемента, последующую окраску раствора и определение фенотипа, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что выделение лимфоцитов производят на физиологическом растворе, комплемент вводят в количестве 0,004 мл, а при определении фенотипа дополнительно контролируют антиген НІА-В15 в локусе В. С > ю ск ю Изобретение относится к медицине, преимущественно иммуннологии и наркологии, и может быть использовано для диагностики вирусного гепатита В на фоне наркомании. Наиболее близким к заявляемому объекту по сущности и достигаемому результату является способ иммуно-генетического исследования у больных вирусным гепатитом В на фоне алкоголизма, включающий забор крови выделения лимфоцитов, добавления их в антисыворотку, комплемент, последующей окраски и определения фенотипа, в котором выделение лимфоцитов выполняют растворением венозной гепаринированной крови раствором Хенкса, взятых в соотношении 5:5 мл, наслоением на 2 мл смеси фиколл-верографина центрифугированием в течение 15 с, съемом свет лого слоя лимфоцитов, отмываемого затем раствором Хенкса или среды 199 в пробирке, по меньшей мере, 3 раза, добавление лимфоцитов в антисыворотку выполняют под вазелиновым маслом и после термообработки при Т 37°С в течении 30 мин, сносят комплемент в каждую лунку, по меньшей мере, по 0,005 мл, инкубируют в термостате при Т 37°С в течении 60 мин и, перед определением фенотипа, окрашивают трипановым синим, вносимым в количестве 0,001 мл, инкубируют в течение 10-20 мин и стряхивают излишки красителя. Известное решение задачи несколько эффективнее аналога [1], так как иммуногенетическое исследование крови в отличие от токсикологического исследования мочи позволяет прогнозировать случаи злоупотреблений алкоголем, что повышает резуль 12629 раствор, поливитамины, витамин "Е", метилурацил, вилозеи, папаверин, "аллохол". Больной выписан на 22 день болезни в стадии клинического и биохимического выздоровления Положительный эффект: как видно из примеров конкретно выполненного способа, предполагаемый способ позволяет значительно повысить способ диагностики, 10 8 назначить адекватную терапию, в результате чего значительно сокращены сроки лечения, удешевляется терапия Таким образом, предлагаемое решение соответствует критерию промышленная применимость, т.к. может быть использовано в здравоохранении преимущественно для диагностики вирусного гепатита В на фоне наркомании. Таблица 1 Эффективность способа при различных количествах используемого комплемента Количество комплемента в мл Результаты эффективности реакции ж 0,003 0.004 0,005 #### - нецелесообразно, так как повышает стоимость реакции. Таблица 2 Распределение Ag HLA у больных ВГВ на фоне наркомании HIA антиген В15 Контроль (доноры) Генная Частота антигена чистота 0,046 9,09 ВГВ на фоне наркомании Генная Частота антигена чистота 46,51 0,265 Наркомания Частота антигена 5,0 Генная чистота 0,025 Таблица 3 Критерии соответствия и относительного риска при распределении AgHLA у больных ВГВ на фоне наркомании HJA антиген ВГВ на фоне наркомании РР 10,075 В15 Упорядник Замовлення 4075 Р 8,659 0,001 Техред М.Моргентал Наркомания X* 0.0 РР Р 0,520 4 Коректор Л.Лукач Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655. ГСП. Київ-53, Львівська пл . 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород. вул.Гагаріна, 101 УКРАЇНА J.2629 (ІЗ) 5 G 01 N 33/49 ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО ОПИС ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД без проведення експертизи по суті на підставі Постанови Верховної Ради України N» 3769-ХИ від 23.ХІІ 1993 р Публікується в редакції заявника (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ ВІРУСНОГО ГЕПАТИТУ В НА ФОНІ ТОКСИЧНИХ РЕЧОВИН 1 (21)95062953 • (22) 23,06.95 (24)28.02.97 (46) 2802.97. Бюл. І г 1 М (56) Химико-токсический анализ веществ, вызывающих одурманивание - Метод.рекомендации.М., 1987, с. 122 (прототип). (72) Суременко Микола Степанович, Журбіна Алла Іллівна. Легеза Костянтин Миколайович (73) Дніпропетровська державна медична академія (UA), Суременко Микола Степанович (UA), Журбіна Алла Іллівна (UA) (57) Способ диагностики вирусного гепатита В на фоне токсических веществ, включающий иммуногенетическое исследование крови путем выделения лимфоцитов, добавления их в антисыворотку, введение комплемента, последующую окраску раствора и определение фенотипа, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что выделение лимфоцитов производят на физиологическом растворе, комплемент вводят в количестве 0,004 мл, а при определении фенотипа дополнительно контролируют антиген НІА-В15 в локусе В. С > ю Изобретение относится к медицине, преимущественно иммуннологии и наркологии, и может быть использовано для диагностики вирусного гепатита В на фоне наркомании. Наиболее близким к заявляемому объекту по сущности и достигаемому результату является способ иммуно-генетического исследования у больных вирусным гепатитом В на фоне алкоголизма, включающий забор крови выделения лимфоцитов, добавления их в антисыворотку, комплемент, последующей окраски и определения фенотипа, в котором выделение лимфоцитов выполняют растворением венозной гепаринированной крови раствором Хенкса, взятых в соотношении 5:5 мл, наслоением на 2 мл смеси фиколл-верографина центрифугированием в течение 15 с, съемом свет лого слоя лимфоцитов, отмываемого затем раствором Хенкса или среды 199 в пробирке, по меньшей мере, 3 раза, добавление лимфоцитов в антисыворотку выполняют под вазелиновым маслом и после термообработки при Т 37°С в течении 30 мин, сносят комплемент в каждую лунку, по меньшей мере, по 0,005 мл, инкубируют в термостате при Т 37°С в течении 60 мин и, перед определением фенотипа, окрашивают трипановым синим, вносимым в количестве 0,001 мл. инкубируют в течение 10-20 мин и стряхивают излишки красителя. Известное решение задачи несколько эффективнее аналога [1], так как иммуногенетическое исследование крови в отличие от токсикологического исследования мочи позволяет прогнозировать случаи злоупотреблений алкоголем, что повышает резуль 12629 тативность диагностики при определении вирусного гепатита на фоне алкоголизма. Однако, упомянутый способ определения наркотических веществ не достаточно экономичен, ибо в осуществлении чрезмерно насыщен промежуточными операциями, многостадиен, и требует использования больших объемов крови, дефицитных препаратов, в частности, растворов Хенкса или среды 199, дорогостоящего комплемента и остается мало эффективным, преимущественно, из-за низкой точности определения наркотического диагноза, например, вирусного гепатита В. В основу изобретения поставлена задача усовершенствовать способ определения наркотических веществ таким образом, чтобы он представился более экономичным и эффективным, преимущественно при диагностике вирусного гепатита В на фоне наркомании. Указанная задача решается тем, что способ определения генетических параметров индивида, включающий иммунологическое исследование крови путем выделения лимфоцитов, добавления их в антисыворотку, комплемент, последующей окраски и определения фенотипа, согласно предложению, выделение лимфоцитов производят на физиологическом растворе, а при определении фенотипа дополнительно контролируют антиген HIA-815 в локусе В, причем комплемент вводят, по меньшей мере, в количестве 0,004 мл. Выделение лимфоцитов на физиологическом растворе, вместо использования раствора Хенкса. взятых в соотношении к крови 5:5 мл, наслоения на 2 мл смеси фиколл-верографина центрифугированием в течение 15 сек., съемом светлого слоя лимфоцитов, отмываемого затем раствором Хенкса или среды 199, значительно экономичнее, поскольку сокращает использование в диагностике больших объемов крови, количество промежуточных операций над средой (стадий) и не требует применения упомянутых дефицитных препаратов, Наряду с этим, предлагаемый прием способствует выявлению лейкоцитарного антигена Н1А-В15 в локусе В, что позволяет усилить эффективность способа путем повышения точности диагностики вирусного гепатита В на фоне наркомании и прогнозирования в течение экспозиции гепатита. Это обусловлено и дополнительным контролем антигена HIA-B15 в локусе В, при определении фенотипа, - совокупности внешних признаков организма, сформировавшихся в результате взаимодействия генотипа и среды, как маркера взаимосвязи между антигена 5 10 15 20 25 30 35 40 ми главной системы гистосовместимости и вирусного гепатита- В. Контроль иных антигенов и конусов не позволит в соответствии с предложением решить поставленную задачу, именно выявление лейкоцитарного антигена локуса В HLA-B15 обеспечивает точную постановку диагноза вирусного гепатита В на фоне наркомании и прогноз течения заболевания. Что касается количества введения комплемента, в частности, кроличьего, приготавливаемого смешением более десяти сывороток, как дорогостоящего компонента реакции, то предусмотрено уменьшение нормы его использования, его вводят, по меньшей мере, - 0,004 мл. Использование комплемента, в количестве меньшем 0.004 мл нецелесообразно, ибо возникают трудности в выявлении антигена HIA-BL5 в локусе В, Использование комплемента в количестве большем 0,004 мл также нецелесообразно, так как возрастает себестоимость теста, повышение эффективности не отмечается (см. табл 1} Таким образом, каждый из предлагаемых признаков необходим, отсутствие одного.из них не позволяет повысить экономичность и эффективность способа определения наркотических веществ, в частности, вирусного гепатита В на фоне наркомании. Анализ источников известности, касающихся наркологии, иммунологии не позволил выявить признаки, отличающие предполагаемое изобретение от прототипа, что позволяет считать их существенными. Заявляемое решение задачи, кроме того является новым, поскольку оно не известно из уровня медицины, а также имеет изобретательский уровень, так как не исходит явным образом из этого уровня. Способ иммуногенетического использования на примере конкретного выполнения был реализован следующим образом. Вирусный гепатит протекающий на фоне иных 45 токсических поражений печени в частности, алкоголизма характеризуется повышенной степенью взаимосвязи между антигенами главной системы гистосовместимости и заболеванием. Маркером этой взаимосвязи 50 при алкоголизме является антигены В40. Для больных острым вирусным гепатитом В и наркоманией антиген НІ А В15. У здоровых лиц общей популяции он встречается в 9% случаев, у больных наркоманией в 5%. При 55 наличии вирусного гепатита В на фоне наркомании выявлена повышенная генная частота, показатели относительного риска, которые превышают таковые в контрольных группах. Полученные результаты представлены в табл, 2 и 3. 12629 Как видно из табл. 2, 3, Ад ЖА В15 встречается в популяции и у больных наркоманией значительно реже, чем при исследуемой сочетанной патологии. Это позволяет предполагать, что данный антиген, контро- 5 лируя определенные биохимические процессы организма, оказывает влияние на чувствительность к данной патологии. Учитывая что любая сочетанная патология требует изменения плана терапевтических 10 мероприятий, использование данного способа диагностики позволяет это производить в более ранние сроки. Предлагаемый способ иммуногенетического исследования на примере конкретно- 15 го выполнения был реализован следующим образом. П р и м е р 1. Больной В., 22 лет, поступил на 4 день болезни. Преджелтушный период протекал по смешанному варианту с 20 наличием жалоб на слабость, недомогание, тошноту» рвоту, снижение аппетита. Объективно определялась минимально выраженная интоксикация, среднеинтенсивная желтушность кожи и склер, увеличение пе- 25 чени -t-4,0-5,0-6,0 см, селезенки +2,0 см ниже края реберной дуги. Больной обследован: HBsAg-пол., Анти HBclgM-пол., АЛАТ-3,87 ммоль билирубин 134-65-69 ммоль/л, тимоловая проба 6 ед., сулемовая проба 1,8 мл, 30 НВ 108 г/л, эритроциты 3,7 Г/л, лейкоциты 5,0 г/л, п-4%, с-55%, л-39%, М-2%, СОЭ 4 мм/ч. Клинический диагноз ВГВ/А9+/. Лечение: стол 5а. 5, В/В: 5% раствор глюкозы, физиологический раствор, поливи- 35 тамины. Лечение оказалось малоэффективным, в течение 4 недель положительной динамики не отмечалось, заболевание приняло вопнообразное течение. Больной 40 дообследован: дополнение к анамнезу/1,5 года имеет место употребление кустарно изготовленных препаратов опия; заключение нарколога: эпизодическое злоупотребление опиатами: фенотив А2, 10 В1 5, 40 Cw4 кон- 45 центрация НВсАдЮ \ На основании комплексного обследования диагностирован ОВГВ (Ад+), сопутствующий: эпизодическое злоупотребление опиатами, хронический гепатит. 50 В связи с уточнением диагноза в терапию включены препараты: контрикал, прентал, пирроксан, витамин "Е", вилозен. Больной выписан в стадии реконвэлесценции со следующими показателями: HBsAg - 55 отрицательный, АЛАТ - 0,7 ммоль, билирубин 18-7-11 ммоль/л, тимоловая проба -1,0 ед.. сулемовая проба - 2,5 мл - через 14 дней. П р и м е р 2. Больной В., 28 лет, поступил на 16 день болезни. Из анамнеза изве стно, что заболевание началось с нарастания общей слабости, снижения аппетита, в дальнейшем присоединилась тошнота, насыщенная окраска мочи, ахолия кала. Желтушность склер отмечает с 10 дня болезни. Объективно при поступлении отмечались состояние средней тяжести, легкая желтушность кожи и склер, печень +2,0-4,0 см ниже края реберной дуги, селезенка не пальпировалась. Больной обследован: HBSAg-пол., Анти HBclg-пол., АЛАТ-3,37 ммоль, билирубин 125-56-69 ммоль/л, тимоловая проба 11 ед., сулемовая проба 1,4 мл; НЬ 126 г/л, эритроциты 4,45 г/л, лейкоциты 10,8 г/л, п-7%, с-54%, л-36%, М-3%, тр-258,0-10^ /л, общ. белок64 г/л, "С" -0, альбумины -51 %, -19%. Клинический диагноз: ХАГ (Ад+?). Лечение: стол 5а, 5, В/В 5% раствор глюкозы, раствор Рингера, физиологический раствор, гемодез, поливитамины, церукал, папаверин, панкреатин. Больной, несмотря на проводимую терапию дал две волны желтухи с отрицательной динамикой, увеличением АЛАТ - 4,6 ммоль, нарастанием показателей билирубина - 229-173-56 ммоль/л. Больной дообследован: заключение нарколога - "Полинаркомания", микроцитолимфотоксический тест: фенотип А-1,9 В-12, 15. СгВ Концентрация HBsAg 10~5 На основании дообследования диагностирован ОВГВ (Ад+), сопутствующий полинаркомания, хронический панкреатит. В терапию включены препараты: полисорб, контрикал, зуфиллин, - аминокапроновая кислота, вилозен, витамин "Е". Больной выписан через 16 дней на 68 день болезни со следующими показателями: HBSAg - отр., АЛАТ - 2,84 ммоль, билирубин 23-8-15. П р и м е р 3. Больной Л., 32 лет, поступил на 5 день болезни. Преджелтушный период протекал по смешанному варианту с преобладанием диспепсического синдрома. Объективно определялись минимальная интоксикация, среднеинтенсивная желтушность кожи и склер, увеличение печени +2,0-4,0 см ниже края реберной дуги, селезенка +1,0 см. Больной обследован: HBsAg пол., Анти НВс tgM-пол,, АЛАТ - 4,5 ммоль, билирубин 100-74-2бе ммоль/л, тимоловая проба 7,0 ед., сулемовая 1,8 мл, НЬ- 119 г/л, эритроциты 4,4 г/л, лейкоциты 9,6 г/л, п-1%, с 6,9%, л-25%, м-3%, э-2%, СОЭ 8 мм/ч, микроцитоксический тест А28.В15, 17, заключение нарколога: "Опкомания II ст.". Лечение: стол 5а, В/В 5% раствор глюкозы, гемодез, эуфиллин, физиологический $ 12629 раствор, поливитамины, витамин "Е'\ метилурацил, вилозен, папаверин, "аллохол". Больной выписан на 22 день болезни в стадии клинического и биохимического выздоровления. Положительный эффект: как видно из примеров конкретно выполненного способа, предполагаемый способ позволяет значительно повысить способ диагностики. 8 назначить адекватную терапию, в результате чего значительно сокращены сроки лечения, удешевляется терапия. Таким образом, предлагаемое решение соответствует критерию промышленная применимость, т.к. может быть использовано в здравоохранении преимущественно для диагностики вирусного гепатита В на фоне наркомании. 10 Таблица 1 Эффективность способа при различных количествах используемого комплемента ( 0,004 0.003 0,005 #### Количество комплемента в мл Результаты эффективности реакции ####ж - нецелесообразно, так как повышает стоимость реакции. Таблица 2 Распределение Ag HLA у больных ВГВ на фоне наркомании HIA антиген В15 Контроль (доноры) Частота Генная антигена чистота 9,09 0.046 ВГВ на фоне наркомании Генная Частота антигена чистота 46,51 0,265 Наркомания Частота антигена Генная чистота 0,025 5.0 Таблица 3 Критерии соответствия и относительного риска при распределении AgHLA у больных ВГВ на фоне наркомании HIA антиген РР 10,075 В15 Упорядник • Наркомания ВГВ на фоне наркомании Замовлення 4075 Р 8,659 0,001 Техред М.Моргентал X* 0,0 РР 0,520 Коректор Л.Лукач Тираж Підписне Державне патентне відомство України. 254655. ГСП. Київ-53. Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород. вул.Гагаріна. 101 Р 4