Спосіб кількісного визначення хромонів

Спосіб кількісного визначення хромонів, шляхом екстракції їх з аналізуємого зразку екстраген 30471 В основу винаходу поставлена задача створення такого способу кількісного визначення хромонів у сировині, яка включає сполуки такого типу, а також у лікарських препаратах і формах, із якомога більш низькою відносною помилкою визначення. Поставлена задача вирішується тим, що аналізуємий зразок екстрагують хлороформом з такою кратністю екстракції і до такого розведення екстракту, щоб припустима концентрація суми хромонів в перерахунку на келлін дорівнювала 0,02-0,04 мг на мл готового екстракту, а спектрофотометрування ведуть при довжині хвилі 324±1 нм. Спосіб дозволяє кількісно визначати вміст хромонів у плодах Аммі зубної чи в іншої подібної сировині, у препараті "Авісан", отриманої із Аммі зубної, чи подібному препараті, а також в таблетках "Авісан" чи подібних таблетках. Приклад 1 Біля 0,05 г (точна наважка) препарату "Авісан" вносять до стакану на 100 мл, приливають 25 мл хлороформу та перемішують 2 хвилини, хлороформне добування декантують крізь паперовий фільтр, який перед тим був змочуваний хлороформом, до мірної колби на 100 мл. Залишок у стакані оброблюють таким же чином ще 2 рази по 25 мл хлороформу і фільтрують крізь той самий фільтр до тієї ж колби. Залишок переносять на фільтр, промивають 10 мл хлороформу і доводять об'єм розчину хлороформом до мітки і перемішують. 5 мл отриманого розчину помішають до мірної колби на 25 мл, доводять об'єм розчину до мітки хлороформом і перемішують. Вимірюють оптичну густину отриманого розчину на спектрофотометрі при довжині хвилі 524 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм, використовуючи як розчин порівняння хлороформ. Паралельно вимірюють оптичну густину розчину стандартного зразку келліну. Процентний вміст суми хромонів X у препараті, перерахований на келлін, вираховують за формулою (1): D * m0 * 100 * 25 * 5 * 100 * 100 X= = D0 * m * 5 * 100 * 25 * (100 - W ) (1), D * m0 * 10000 = D0 * m * (100 - W ) D - оптична густина випробуваного розчину; D0 оптична густина розчину стандартного зразку келліну; m - маса наважки препарата, у грамах; m0 маса наважки стандартного зразку келліну, у грамах; W - втрата маси у процесі висушування препарату, у процентах. Вміст суми хромонів у препараті, перерахований на келлін, дорівнює 18,61%, розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахунку на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,03 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 0,56%, Метрологгічна характеристика наведена в табл. 1. Приклад 2 Біля 0,05 г (точна наважка) препарату "Авісан" вносять до стакану на 100 мл, приливають 25 мл хлороформу і далі проводять усі операції, як у прикладі 1. 3,3 мл отриманого розчину поміщають до мірної колби і проводять розбавлення, як у при кладі 1, після чого спектрофотометрують, як у прикладі 1 при довжині хвилі 323 нм. Проводять рахування за формулою (1) і отримують вміст суми хромонів у препараті, який у перерахунку на келлін дорівнює 19,01%. Розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахуванні на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,02 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 0,55%. Метрологічна характеристика наведена в табл. 1. Приклад 3 Біля 0,05 г (точна наважка) препарату "Авісан" вносять до стакану на 100 мл, приливають 25 мл хлороформу і далі проводять усі операції, як у прикладі 1. 6,7 мл отриманого розчину поміщають до мірної колби і проводять розбавлення, як у прикладі 1, після чого спектрофотометрують, як у прикладі 1 при довжині хвилі 325 нм. Проводять рахування за формулою (1) і отримують вміст суми хромонів у препараті, який у перерахунку на келлін дорівнює 19,70%. Розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахуванні на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,04 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 0,60%. Метрологічна характеристика наведена в табл. 1. Приклад 4 Біля 0,05 г (точна наважка) препарату "Авісан" вносять до стакану на 100 мл, приливають 25 мл хлороформу і далі проводять усі операції, як у прикладі 1. 1,7 мл отриманого розчину поміщають до мірної колби і проводять розбавлення, як у прикладі 1, після чого спектрофотометрують, як у прикладі 1 при довжині хвилі 320 нм. Проводять рахування за формулою (1) і отримують вміст суми хромонів у препараті, який у перерахунку на келлін дорівнює 19,53%. Розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахуванні на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,01 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 1,20%. Метрологічна характеристика наведена в табл. 1. Приклад 5 Біля 0,05 г (точна наважка) препарату "Авісан" вносять до стакану на 100 мл, приливають 25 мл хлороформу і далі проводять усі операції, як у прикладі 1. 8,3 мл отриманого розчину поміщають до мірної колби і проводять розбавлення, як у прикладі 1, після чого спектрофотометрують, як у прикладі 1 при довжині хвилі 329 нм. Проводять рахування за формулою (1) і отримують вміст суми хромонів у препараті, який у перерахунку на келлін дорівнює 19,19%. Розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахуванні на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,05 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 1,69%. Метрологічна характеристика наведена в табл. 1. Приклад 6 Три таблетки "Авісану", покритих оболонкою, по 0,05 г, після розтирання їх у порошок, переносять з допомогою 25 мл хлороформу до стакану місткістю 100 мл, і далі проводять усі операції, як у прикладі 1, а також послідовно проводять розведення при різних об'ємах розчинів зразку, як у прикладах 1, 2, 3, 4, 5. Спектрофотометрування про 2 30471 водять при різних довжинах хвилі в нм при зміні їх значень, як у згаданих прикладах. Процентний вміст суми хромонів X в таблетках, перерахований на келлін, вираховують за формулою (2): D' * m 0 * 100 * 25 * 5 D' * m0 * 2,5 X' = = (2), D 0 * n * 2 * 100 * 25 D0 * n D' - оптична густина випробуваного розчину; D0 оптична густина розчину стандартного зразку келліну; m0 - маса наважки стандартного зразку келліну, у грамах; n - кількість таблеток, взятих для аналізу. Вміст суми хромонів в одній таблетці, у перерахуванні на келлін, складає від 0,0081 до 0,0099 г. Відносна помилка в залежності від довжини хвилі спектрофотометрування складає для кожної довжини хвилі значення, наведені в табл. 2. Приклад 7 Аналітичний зразок сировини Аммі зубної подрібнюють до розміру частинок, які проходять крізь сито з розміром отворів 0,2 мм по ДГСТ 4403-77. Біля 0,25 г (точна наважка) сировини вносять до колби на 100 мл, додають 25 мл хлороформу і гріють із зворотним холодильником на гарячій водяній бані протягом 15 хвилин при помірному кипінні розчинника. Охолоджують до 20°С і декантують крізь паперовий фільтр до мірної колби місткістю 100 мл. Залишок у колбі екстрагують ще двічі, при тому декантують розчин у ту ж саму мірну колбу. Залишок сировини переносять на фільтр, двічі промивають, при тому кожен раз використовують по 5 мл хлороформу. Доводять об'єм розчину у колбі до мітки хлороформом і перемішують. 5 мл отриманого розчину поміщають до мірної колби на 25 мл, доводять об'єм розчину у колбі до мітки хлороформом і перемішують. Виміряють оптичну густину отриманого розчину на спектрофотометрі при довжині хвилі 324 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм, використовуючи як розчин порівняння хлороформ. Паралельно вимірюють оптичну густину розчину стандартного зразку келліну. Процентний вміст суми хромонів X" у сировині, у перерахуванні на келлін та суху речовину, вираховують за формулою (3): D' ' * m0 * 100 * 25 * 5 * 100 * 100 X' ' = = D0 * m * 5 * 100 * 25 * (100 - W ) (3), D' ' * m 0 * 10000 = D0 * m * (100 - W ) D'' - оптична густина випробуваного розчину; D0 оптична густина розчину стандартного зразку келліну; m - маса наважки сировині, у грамах; m0 – маса наважки стандартного зразку келліну, у грамах; W - втрата маси у процесі висушування сировині, у процентах. Вміст суми хромонів у сировині, перерахований на келлін, дорівнює 6,55%, розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахуванні на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,03 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 0,56%. Приклад 8 0,25 г наважки сировині, підготованої як у прикладі 7, вносять до колби на 100 мл, додають 25 мл хлороформу і далі проводять усі операції, як у прикладі 7. 3,3 мл отриманого розчину поміщають до мірної колби і проводять розбавлення, як у прикладі 7, після чого спектрофотометрують, як у прикладі 7 при довжині хвилі 323 нм. Проводять рахування за формулою (3) і отримують вміст суми хромонів у сировині, який у перерахунку на келлін дорівнює 6,49%. Розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахуванні на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,02 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 0,58%. Приклад 9 0,25 г наважки сировині, підготованої як у прикладі 7, вносять до колби на 100 мл, додають 25 мл хлороформу і далі проводять усі операції, як у прикладі 7. 6,7 мл отриманого розчину поміщають до мірної колби і проводять розбавлення, як у прикладі 7, після чого спектрофотометрують, як у прикладі 7 при довжині хвилі 325 нм. Проводять рахування за формулою (3) і отримують вміст суми хромонів у сировині, який у перерахунку на келлін дорівнює 6,57%. Розбавлення було виконане, якщо припускати, що вміст хромонів у перерахуванні на келлін в 1 мл екстракту дорівнює 0,04 мг. Відносна помилка вимірювання при використаній довжині хвилі дорівнює 0,60%, Відносні помилки для позаграничних параметрів при використанні для вимірювання довжині хвилі, при якій збільшується відносна помилка вимірювання, наведені в табл. 2. Дані з прикладів, а також наведені в табл. 1 метрологічні характеристики кількісного визначення хромонів у препараті "Авісан" за різних значень припущення вмісту хромонів у перерахунку на келлін, показують, що вибір припущення вмісту суми хромонів на 1 мл екстракту на рівні 0,020,04 мг дозволяє мати наймінімальнішу відносну помилку вимірювання в представлених експериментах. При цьому треба звернути увагу, що дані табл. 2 показують наявність взаємозв'язку причини і наслідку між обраним інтервалом довжині хвилі для спектрофотометрування та отриманням найбільш низької відносної помилки визначення аналізуємого об'єкту. Таким чином, вважаємо, що представлені дані підтверджують залежність між обраними параметрами способу та досягнутим наслідком у рішенні технічної задачі. Спосіб вимірювання по цьому винаходу з березня 1998 року використовують в Фармакопейних статтях на сировину Аммі зубної, на препарат "Авісан" і на таблетки "Авісан". 3 30471 Таблиця 1 Оптимальна припустима концентрація суми хромо- Кількісний вміст суми хромонів, в Метрологічна харакперерахунку на келлін, % теристика, % нів, в перерахунку на келлін, в препараті, мг/мл 0,005 18,34 Х=18,46 18,45 S2=8,52·10-3 18,56 S=9,23·10-2 18,49 ∆Х=0,29 e=1,59 0,01 19,48 Х=19,53 19,56 S2=5,38·10-3 19,61 S=7,33·10-2 19,45 ∆Х=0,23 e=1,20 0,02 19,02 Х=19,01 18,98 S2=1,06·10-3 18,99 S=3,25·10-2 19,05 ∆Х=0,10 e=0,54 0,03 18,65 Х=18,61 18,62 S2=1,06·10-3 18,57 S=3,25·10-2 18,61 ∆Х=0,10 e=0,56 0,04 19,74 Х=19,70 19,69 S2=1,38·10-3 19,65 S=3,72·10-2 19,71 ∆Х=0,12 e=0,60 0,05 19,06 Х=19,19 19,15 S2=1,03·10-3 19,29 S=1,02·10-2 19,24 ∆Х=0,32 e=1,69 Таблиця 2 Довжина хвилі, нм Помилка методу при аналізі сировині Помилка методу при аналізі препарату Помилка методу при аналізі таблеток 300 1,32 1,32 1,68 320 0,66 0,56 0,69 323 0,58 0,55 0,65 324 0,56 0,54 0,59 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 4 325 0,60 0,60 0,62 329 1,90 1,69 1,93