Спосіб застосування химерного поліпептиду фактора ix

Реферат: UA 115120 C2 (12) UA 115120 C2 Винахід стосується способу контролю або запобігання випадків кровотечі у суб'єкта-людини, що цього потребує, який передбачає введення суб'єкту химерного поліпептиду Фактора IX (FIX), що включає FIX і FсRn зв'язувальний партнер (FсRn ВР), у дозі від 50 до 180 МО/кг з інтервалом дозування від 9 до 18 днів, у якому зазначений FсRn ВР включає Fc або альбумін, і у якому концентрація в плазмі крові химерного поліпептиду FIX досягає мінімального рівня щонайменше 1 МО/дл через 6 днів у згаданого пацієнта. UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Рівень техніки Галузь винаходу [01] Даний винахід відноситься в цілому до галузі терапії захворювань гемостазу. Рівень техніки [02] Гемофілія B (також відома як хвороба Кристмаса) є однією з найпоширеніших наслідуваних хвороб крові у світі. Вона приводить до зниження in vivo і in vitro згортання крові й потребує постійного медичного спостереження протягом життя хворого. За відсутності втручання, хворі будуть страждати від спонтанної кровотечі в суглобах, яка приводить до сильного болю і від шкідливої для здоров'я відсутності рухливості; кровотечі в м'язах, що приводять до акумуляції крові в цих тканинах; спонтанної кровотечі в горлі й шиї, яка за відсутності невідкладного лікування може спричинити асфіксію; ниркової кровотечі; поширені також тяжкі кровотечі після хірургічного втручання, незначних випадкових ушкоджень або видалення зубів. [03] Нормальна коагуляція крові in vivo потребує як мінімум серинових протеаз Факторів II (протромбін), VII, IX, X і XI (розчинних білків плазми); кофакторів, що включають трансмембранний білковий тканинний фактор і плазматичні білкові Фактори V і VIII; фібриноген, трансглютаміназу Фактор XIII, фосфоліпід (включаючи активовані тромбоцити) і кальцій. Додаткові білки, що включають каллікреїн, кініноген високої молекулярної маси і Фактор XII є необхідними в деяких із тестів згортання in vitro, і можуть відігравати роль при патологічних порушеннях in vivo. [04] При гемофілії згортання крові порушується через відсутність певних плазматичних факторів згортання крові. Причиною гемофілії B є дефіцит Фактора IX, що може бути результатом як зменшення синтезу білка Фактора IX, так і дефективною молекулою зі зниженою активністю. Лікування гемофілії проводять шляхом заміщення відсутнього фактора згортання екзогенними концентратами фактора, високо збагаченими Фактором IX. Однак виробництво такого концентрату із крові пов'язане з великою кількістю технічних труднощів, як описано нижче. [05] При очищенні Фактора IX із плазми (одержаний із плазми Фактор IX; pdFIX) майже виключно виходить активний Фактор IX. Однак таке очищення фактора IX із плазми є дуже важким, оскільки Фактор IX представлений у плазмі тільки у низькій концентрації (5 мкг/мл. Andersson, Thrombosis Research 7: 451 459 (1975). Крім того, очищення з крові потребує видалення або інактивації інфекційних агентів, таких як ВІЛ і вірус гепатиту С. Більше того, pdFIX має короткий період напіввиведення і, отже, потребує частого дозування. Рекомбінантний фактор IX (rFIX) також є доступним, але має такий самий короткий період напіввиведення і потребує такого ж частого дозування, як і pdFIX (наприклад, 2-3 рази на тиждень для профілактики). rFIX також володіє нижчим значенням поступового відновлення (K значенням) порівняно з pdFIX, що робить необхідним застосування більш високих доз rFIX, порівняно з pdFIX. [06] Зниження смертності, запобігання ушкодженню суглобів і покращена якість життя стали важливим досягненням внаслідок розробки одержаного із плазми і рекомбінантного Фактора IX. Пролонгований захист від кровотечі стане іншим значним прогресом у лікуванні пацієнтів з гемофілією B. Однак на теперішній час не розроблені продукти, які надавали би пролонгований захист. Отже, залишається необхідність в удосконалених способах лікування гемофілії, що виникла внаслідок нестачі Фактора IX, які б краще переносились і були би більш ефективними, ніж існуючі способи терапії . СУТЬ ВИНАХОДУ [07] Даний винахід пропонує способи введення Фактора IX із застосуванням хімерних поліпептидів, що містять Фактор IX, і гібридів таких хімерних поліпептидів; полінуклеотидів, що кодують такі хімерні й гібридні поліпептиди; клітин, що містять такі полінуклеотиди; і способи виробництва таких хімерних і гібридних поліпептидів з використанням таких клітин. У деяких варіантах втілення Фактор IX хімерний поліпептид являє собою Фактор IX FcRn зв’язувальний партнер (BP) хімерний поліпептид, такий як Фактор IX Fc хімерний поліпептид. В інших варіантах втілення Фактор IX хімерний поліпептид являє собою Фактор IX-XTEN поліпептид. [08] Даний винахід надає спосіб введення Фактора IX пацієнту, який потребує цього, включаючи введення пацієнту дози щонайменше приблизно 10, щонайменше приблизно 20, або щонайменше приблизно 25 МО/кг Фактора IX FcRn BP хімерного поліпептиду, наприклад, Фактора IX-Fc хімерного поліпептиду або Фактора IX-XTEN хімерного поліпептиду, з інтервалом між введенням лікарського засобу приблизно один раз на тиждень або рідше. [09] У деяких варіантах втілення концентрація в плазмі крові хімерного поліпептиду досягає середнього мінімального значення щонайменше приблизно 1 МО/дл через щонайменше 1 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 приблизно 6 днів у щонайменше приблизно 70%, щонайменше приблизно 80%, щонайменше приблизно 90%, або приблизно 100% популяції пацієнтів, або досягає у пацієнта мінімального значення щонайменше приблизно 1, 2, 3, 4 або 5 МО/дл через щонайменше приблизно 6 днів. У деяких варіантах втілення рівень у плазмі вищезгаданого хімерного поліпептиду досягає середнього мінімального значення приблизно 1-5 або 1-3 МО/дл. Таке мінімальне або середнє мінімальне значення може бути досягнуте після приблизно 6, приблизно 7, приблизно 8, приблизно 9, приблизно 10, приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13, приблизно 14, приблизно 15, приблизно 16, приблизно 17, приблизно 18, приблизно 19, приблизно 20, приблизно 21, приблизно 22, приблизно 23, приблизно 24, приблизно 25, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35, приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39 або приблизно 40 днів. [010] У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид має сильно редуковану фосфорилізацію і сульфатацію порівняно з одержаним із плазми Фактором IX. У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид є менше, ніж на 25% фосфорильованим і менше, ніж на 25% сульфатованим, наприклад, менше, ніж на 25% повністю повністю фосфорильованим і сульфатованим. У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид є менше, ніж приблизно на 10% фосфорильованим і менше, ніж приблизно на 9% сульфатованим. У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид має паттерн / розподілення гама карбоксилювання, вміст гама карбоксилювання, паттерн / розподілення сиалювання, і / або вміст сиалювання, подібний (тобто в межах 10%) або такий самий як у Фактора IX Fc хімерного поліпептиду в Прикладах 56. [011] У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид має поступове відновлення більше ніж 0,7 або більше, ніж 0,75 мкг/мл (антиген). У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид має середнє поступове відновлення (K-значення) (активність; спостережуване) щонайменше приблизно 0,8, щонайменше приблизно 0,9, або щонайменше приблизно 1 МО/дл на МО/кг. [012] У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид демонструє один або більше фармакокінетичних параметрів у зазначеної популяції пацієнтів або у зазначеного пацієнта, обраного із групи, що складається з: [013] (a) середній кліренс (CL) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 3,36 ± 0,93 мл/год/кг; середній кліренс (CL) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 3,0-3,72, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, або 3,72 мл/год./кг; середній кліренс (CL) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів, приблизно у 2,5 рази нижче, ніж кліренс поліпептиду, що містить зазначений Фактор IX без зазначеного FcRn BP; кліренс (CL) (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 1,84 - 4,58 мл/год./кг. [014] (б) середній час затримання (MRT) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів є не меншою, ніж приблизно 68,05 ± 11,16 годин; середнє MRT (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76 або 78 годин; середній MRT (активність) у зазначеної популяції пацієнтів є приблизно втричі довшим, ніж середній MRT поліпептиду, що містить зазначений Фактор IX без зазначеного FcRn BP; середній час затримання (MRT) (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 53,1-85,8 годин; середній час затримання (MRT) (активність) у зазначеного пацієнта становить щонайменше приблизно 45, приблизно 50, приблизно 55, приблизно 60, приблизно 65, приблизно 70, приблизно 75, приблизно 80, приблизно 85, або приблизно 90 годин; [015] (в) середній t1/2бета (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 52,5 ± 9,2 годин; середній t1/2бета (активність) у зазначеної популяції пацієнтів, становить приблизно 47 - 60 годин, приблизно 47, приблизно 48, приблизно 49, приблизно 50, приблизно 51, приблизно 52, приблизно 53, приблизно 54, приблизно 55, приблизно 56, приблизно 57, приблизно 58, приблизно 59, приблизно 60 годин; середній t 1/2бета (активність) у зазначеної популяції пацієнтів, приблизно в 3 рази довше, ніж середнє t 1/2бета поліпептиду, що містить зазначений Фактор IX без зазначеного FcRn BP; t1/2бета (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 40 - 67,4, приблизно 40, приблизно 45, приблизно 50, приблизно 55, приблизно 60, приблизно 65, приблизно 70 або приблизно 75 годин; [016] (г) середнє поступове відновлення (K значення) (активність; спостережуване) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 0,93 ± 0,18 МО/дл на МО/кг; середнє поступове відновлення (K значення) (активність; спостережуване) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 0,85 - 1,0, приблизно 0,85, приблизно 0,86, приблизно 0,87, приблизно 0,88, приблизно 0,89, приблизно 0,90, приблизно 0,91, приблизно 0,92, приблизно 0,93, приблизно 0,94, приблизно 0,95, приблизно 0,96, приблизно 0,97, приблизно 0,98, приблизно 0,99, приблизно 1,0, приблизно 1,05, приблизно 1,10 або приблизно 1,15 МО/дл на 2 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 МО/кг; середнє поступове відновлення (K значення) (активність; спостережуване) у зазначеної популяції пацієнтів, приблизно на 24% краще, ніж середнє поступове відновлення поліпептиду, що містить зазначений Фактор IX без зазначеного FcRn BP; поступове відновлення (K значення) (активність; спостережуване) у зазначеного пацієнта становить приблизно 0,62 - 1,17 МО/дл на МО/кг; [017] (д) середній Vss (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 226 ± 67,76 (скоректований до 69,8) мл/кг; середній Vss (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 200 - 300, приблизно 200, приблизно 210, приблизно 220, приблизно 230, приблизно 240, приблизно 250, приблизно 260, приблизно 270, приблизно 280, приблизно 290 або приблизно 300 мл/кг; Vss (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 145 - 365 мл/кг; [018] (f) середня AUC/доза (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 32,44 ± 10,75 МО*год/дл на МО/кг; середня AUC/доза (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 26 - 40, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35, приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39 або приблизно 40 МО*год/дл на МО/кг; AUC/доза у зазначеного пацієнта становить приблизно 21,80 – 54,30 МО*год/дл на МО/кг. [019] У деяких варіантах втілення доза хімерного поліпептиду містить значно більш низьку (в 10-100 раз) концентрацію (0,01-0,001%) активованого FIX (FIXa), ніж у продуктах Фактора IX, що виробляються на даний час, таких як MONONINE™ (pdFIX; CSL Behring)) або BENEFIX™ (Wyeth; rFIX) (0,1%). Така концентрація може бути в 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 або 100 разів нижчою, ніж у продуктів, що виробляються на даний час або становити 0,01, 0,05, 0,0033, 0,0025, 0,002, 0,00167, 0,00142, 0,00125, 0,00111 або 0,001%. [020] У деяких варіантах втілення інтервал між введенням лікарського засобу становить 6 18, 6 - 10, 9 - 18, щонайменше 6, щонайменше 7, щонайменше 8, щонайменше 9, щонайменше 10, щонайменше 11, щонайменше 12, щонайменше 13, щонайменше 14, щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17, або щонайменше 18 днів, щотижня, двічі на місяць, або один раз на місяць. Інтервал між введенням лікарського засобу може бути профілактичним інтервалом між введенням лікарського засобу , фіксованим профілактичним інтервалом між введенням лікарського засобу або індивідуалізованим профілактичним інтервалом між введенням лікарського засобу . [021] Способи винаходу застосовуються до пацієнта, який потребує контролю або запобігання кровотечі або епізодів кровотечі, який потребує інтермітуючої терапії, який потребує профілактичного лікування або який потребує лікування за вимогою. [022] Терапевтичні дози, які можуть бути застосовані в способах винаходу, становлять приблизно 25-180, приблизно 20-180, приблизно 20-50, приблизно 20-100, приблизно 10-180, приблизно 10-50, приблизно 10-30 або приблизно 50-100 МО/кг. Доза може бути фіксованою дозою або індивідуалізованою дозою. [023] У деяких варіантах втілення хімерний поліпептид вводять внутрішньовенно або підшкірно. [024] Суб’єктом у способах винаходу може бути суб’єкт-людина або ссавець, що не є людиною. Ссавці, що не є людьми, включають мишей, собак, приматів, мавп, кішок, коней, корів, свиней і інших свійських тварин і маленьких тварин. [025] Хімерний поліпептид може бути у формі гібрида, що містить другий поліпептид у поєднанні із зазначеним хімерним поліпептидом, при цьому зазначений другий поліпептид містить або складається переважно з FcRn BP, наприклад, Fc. Хімерний поліпептид може бути щонайменше на 90%, щонайменше на 95% або 100% ідентичний послідовності Фактора IX, послідовності Fc або як послідовності Фактора IX, так і послідовності Fc у Таблицях 2A(SEQ ID NO:2) і/або 2B (SEQ ID NO:4), з сигнальною послідовністю (ями) і поліпептидом або без них. [026] Хімерний поліпептид або гібрид може вводитись як частина фармацевтичної композиції, що містить щонайменше одну допоміжну речовину. [027] Винахід також надає самі вищеописані хімерні й гібридні поліпептиди, полінуклеотиди, що їх кодують, людські ембріональні клітини, що культивуються, які містять полінуклеотиди, і способи виробництва таких хімерних і гібридних поліпептидів, і поліпептиди, що виробляються такими способами. КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР [028] ФІГ. 1. Схема одного типу Фактора IX хімерного поліпептиду, Фактора IX-Fc гібрида. [029] ФІГ. 2. Групова середня концентрація FIXFc у порівнянні з часовими профілями; порівняння номінальної дози. 3 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [030] ФІГ. 3. Групова середня активність FIXFc у порівнянні з часовими профілями; порівняння номінальної дози. [031] ФІГ. 4. Дерево розв'язків віднімання базового рівня. [032] ФІГ. 5. Пропорційне дозі зростання Cmax і AUC для FIX активності. [033] ФІГ. 6. Оцінена терапевтична тривалість rFIXFc при 50 (A) і 100 (б) МО/кг. [034] ФІГ. 7. Пропорційне дозі зростання Cmax і AUC для FIX антигена. [035] ФІГ. 8. Фармакокінетичні оцінки для rFIXFc антигена при 50 (A) і 100 (б) МО/кг номінальних дозах. [036] ФІГ. 9. Точна кореляція між rFIXFc активністю і рівнями антигена. Необхідно 2 відзначити, що внаслідок перерахунку PK активності, як обговорюється в Прикладі 11, R = 0,946. [037] ФІГ. 10. rFIX-Fc доменна структура і посттрансляційні модифікації. PRO: пропептид, розщеплений процесуючим ферментом. GLA: містить 12 γ-карбоксильованих залишків глутамінової кислоти (Gla). ACT PEP: активаційний пептид розщеплюється для одержання активної протеази. Інші модифікації: N- і O- глікозилювання, Asp(64) β-гідроксилювання, Tyr сульфатація, Ser фосфорилювання. [038] ФІГ. 11. SDS-PAGE гель очищення проміжних продуктів і очищеного FIXFc мономера. Проби з різних етапів очищення FIXFc аналізували за допомогою невідновлювального SDSPAGE. Доріжка 1: Маркери SeeBlue плюс молекулярної маси (Invitrogen). Доріжка 2: порожня доріжка. Доріжка 3: Білок A завантажений. Доріжка 4: Білок A елюат. Доріжка 5: Фрактогель DEAE елюат. Доріжка 6: Q Seph FF елюат. Доріжка 7: кінцевий об’єм FIXFc. Доріжка 8: порожня доріжка. Доріжка 9: кінцевий об’єм редукованого FIXFc. [039] ФІГ. 12. Функціональна активність FIXFc у дефіцитних за FIX мишей. Дефіцитним за FIX мишам була внутрішньовенно введена доза 219 МО/кг FIXFc (3 або 4 на групу, 6 груп, n = 23) або 200 МО/кг rFIX (3 або 4 на групу, 5 груп, n = 23) в час = 0. Проби крові відбирали в різний час після введення дози (від 0,25 год. до 96 год) і аналызували на активність згортання з використанням аналізу FIX активності. * rFIX активність не визначалась у всіх мишей в точках часу через 48 год. після введення дози. [040] ФІГ. 13. Час згортання цільної крові FIXFc у порівнянні з рекомбінантним FIX у дефіцитних по FIX мишей. Дефіцитні по FIX миші (6 на групу) одержали внутрішньовенно дозу 50 МО/кг FIXFc або 50 МО/кг rFIX. Проби крові відбирали перед введенням дози і в різний час після введення дози. Проби крові інкубували за температури 37°C і візуально перевіряли на присутність згустків крові один раз на хвилину. Відзначався час, необхідний для формування згустків крові, і коли активність згортання поверталася до базового рівня (тобто згустки не формувалися), додаткові проби не одержували (проби збиралися від 15 хв. до 144 год. для FIXFc або від 15 хв. до 72 год. для rFIX). [041] ФІГ. 14. Фармакодинаміка FIXFc у дефіцитних за FIX мишей. Дефіцитним за FIX мишам була введена доза 219 МО/кг FIXFc (5 на групу, 6 груп, n = 30) або 200 МО/кг rFIX (4 або 5 на групу, 6 груп, n = 28) на День 0, 4 і 8. Проби плазми крові відбирали шляхом пункції серця через 15 хв. і 96 год. після введення кожної дози і вимірювали активність згортання з використанням аналізу FIX активності. Плазму також відбирали із крові хвоста через 8, 24, 48 і 72 год. після введення кожної дози. Рівні FIXFc були виміряні у всіх пробах з використанням аналізу ELISA, специфічного для FIXFc. (A) Виміряна активність порівняно з розрахованою активністю. Активність згортання для FIXFc розраховували з використанням аналізу FIX активності через 15 хв. і 96 год. після введення трьох доз. Було визначено, що активність згортання in vitro для FIXFc становила 43,8 ± 5,4 МО/мг. Ґрунтуючись на цій активності (МО/мг) і виміряних рівнях білка, розрахований рівень активності згортання був визначений в точках часу 15 хв, 8, 24, 48, 72 і 96 год. після введення кожної дози. (б) У дефіцитних за FIX мишей, яких пролікували трьома дозами 200 МО/кг rFIX, рівні FIX були розраховані з використанням FIX-специфічного аналізу ELISA. Використовуючи виміряні показники специфічної активності FIXFc і rFIX, стало можливим порівняти розраховану активність згортання для всіх проб, проаналізованих за допомогою ELISA. [042] ФІГ. 15. Фармакокінетика і фармакодинаміка FIXFc у дефіцитних за FIX собак. Двом собакам з гемофілією B ввели шляхом внутрішньовеннї інфузії 140 МО/кг FIXFc. Проби крові відбирали через 5, 15 і 30 хв, і через 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 27, 30, 48, 51, 54, 72, 80, 96, 126, 144 і 168 год. (A) Метод сендвіч-ELISA з використанням FIX імобілізованого антитіла і Fc-HRP ідентифікуючого антитіла був використаний для вимірювання концентрації інтактного FIXFc у пробах крові собак з гемофілією B. (б) FIX активність згортання вимірювали у всіх точках часу відносно стандартної кривої, сгенерованої з FIXFc. (в)Кров, відібрану у тварин, негайно аналізували на час згортання цільної крові. Проби крові інкубували за температури 28°C і 4 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 візуально перевіряли на присутність згустків крові один раз на хвилину, і реєстрували час, за який формувався згусток. [043] ФІГ. 16. Фармакокінетика FIXFc у яванських макак. Макакам була введена однократна доза (0,5, 2 і 10 мг/кг, що відповідає приблизно 25, 100 або 500 МО/кг) FIXFc (n = 2, 3 і 3, відповідно). Проби крові відбирали через 0,25, 0,5, 1, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144 і 168 год. після введення дози і плазму готували для аналізу концентрації білка за допомогою FIXFcспецифічного ELISA. [044] ФІГ. 17. rFIXFc і BENEFIX™ демонструють порівнянну активність і залежну від дози реакцію в цільній крові мишей з HemB. (A) Параметри аналізу ROTEM®. rFIX або BENEFIX™ додавали в кров HemB мишей і вимірювали параметри згортання за допомогою аналізу ® ROTEM . (б)-(г)Залежна від дози відповідь, вимірювання (б) CT, (в)CFT і (г)альфа-кут. [045] ФІГ. 18. Визначення ефективності у невідкладних випадках у моделі відсікання хвоста у мишей з гемофілією. [046] ФІГ. 19. (A) Втрата крові після відрізання хвоста у окремих HemB мишей, пролікованих rFIXFc або BENEFIX™. (б) Залежна від дози реакція на rFIXFc і BENEFIX™ за медіанною втратою крові після відрізання хвоста у HemB мишей. [047] ФІГ. 20. Модель кровотечі при розсіченні хвостової вени (TVT) у HemB мишей: модель для характеристики венозної кровотечі у пацієнтів з важкою гемофілією. [048] ФІГ. 21. Пролонгована активність rFIXFc у порівнянні з BENEFIX™ у дослідних HemB ® мишей за результатами аналізу ROTEM цільної крові. (A) CT, (б) CFT, (в)Альфа-кут, і ® (г)часткова кореляція між активністю згортання цільної крові (CT) за ROTEM у порівнянні з плазматичною активністю за aPTT. [049] ФІГ. 22. Пролонгована ефективність FIXFc у порівнянні з BENEFIX™ у моделі кровотечі при розсіченні хвостової вени (TVT) у HemB мишей. (A) Виживаність: ступені виживаності порівнювали у мишей, які одержували BENEFIX™ за 24 години до TVT, і у мишей, які одержували rFIXFc за 72 години до TVT, і (б) Зупинка кровотечі: ступені кровотечі порівнювали у мишей, які одержували BENEFIX™ за 24 години до TVT, і у мишей, які одержували rFIXFc за 72 години перед TVT. [050] ФІГ. 23. Кореляція між поступовим відновленням активного rFIXFc відносно маси тіла у 12 пацієнтів, які одержували однократну дозу 12,5 - 100 МО/кг rFIXFc. [051] ФІГ. 24. Моделювання за способом Монте-Карло з використанням структурної PK моделі rFIXFc активності для створення профілів активність-час для досягнення мінімального рівня 1 МО/дл вище базового рівня після щотижневого (A), кожні 10 днів (б) або кожні два тижні режиму дозування (C). Медіанні PK параметри популяції і релевантні варіації між пацієнтами і у одного пацієнта були взяті з Фази 1/2a клінічного дослідження. 1000 суб’єктів увійшли в моделювання дозового режиму з 14-16 точками відбору проб для кожного суб’єкта, і середні значення ± SD профілів активність-час від 1000 суб’єктів були сконструйовані графічно для різних режимів дозування. [052] ФІГ. 25. Моделювання за способом Монте-Карло для rFIXFc доз для досягнення мінімального рівня 1 МО/дл (1%), на основі перерахованих фармакокінетичних даних. (A) один раз на тиждень, (б) кожні 10 днів, і (в)кожні два тижні. ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ [053] Даний винахід надає спосіб лікування нестачі Фактора IX, наприклад, гемофілії B, Фактором IX, з застосуванням більш тривалого інтервалу між введенням лікарського засобу і/або покращених фармакокінетичних параметрів, ніж це можливо з відомими на даний час продуктами з Фактором IX. Даний винахід також надає покращені Фактор IX хімерні поліпептиди, Фактор IX хімерні полінуклеотиди і способи їх виробництва. [054] "Введення", як використовується тут, означає надання фармацевтично прийнятного Фактор IX поліпептиду винаходу пацієнту фармацевтично прийнятним способом. Кращими способами введення є внутрішньовенні, наприклад, внутрішньовенна ін'єкція і внутрішньовенна інфузія, наприклад, за допомогою центрального венозного доступу. Додаткові шляхи введення включають підшкірне, внутрішнм'язове, пероральне, назальне і пульмонарне введення, краще підшкірне. Фактор IX хімерні поліпептиди і гібридні білки можуть бути введені як частина фармацевтичної композиції, що містить щонайменше одну допоміжну речовину. Переваги даного винаходу включають: покращене дотримання режиму; зниження ушкоджень через кровотечу; підвищений захист суглобів від кровотеч; профілактику ушкодження суглобів; знижену болісність; знижену смертність; пролонгований захист від кровотечі; зниження тромботичних випадків; і покращену якість життя. [055] "Хімерний поліпептид" при використанні тут, означає поліпептид, який містить у собі щонайменше два поліпептиди (або їх частини, такі як субпослідовності або пептиди) із різних 5 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 джерел. Хімерні поліпептиди можуть включати два, три, чотири, п'ять, шість, сім або більше поліпептидів або їх частин з різних джерел, таких як різні гени, різні кДНК або різні тварини, або інші види. Хімерні поліпептиди можуть включати один або більше лінкерів, що зв'язують різні поліпептиди або їх частини. Таким чином, поліпептиди або їх частини можуть бути з'єднані прямо або вони можуть бути з'єднані непрямо, за допомогою лінкерів, або обома способами, з одним хімерним поліпептидом. Хімерні поліпептиди можуть включати додаткові пептиди, такі як сигнальні послідовності й такі послідовності як 6His і FLAG, що сприяє очищенню або детекції білка. Крім того, хімерні поліпептиди можуть мати амінокислотні або пептидні добавки на Nі/або C-кінці. Прикладами хімерних поліпептидів винаходу є Фактор IX-FcRn BP хімерні поліпептиди, наприклад, Фактор IX-Fc хімерні поліпептиди, такі як FIXFc на Фігурі 1, SEQ ID NO:2 (Таблиця 2) і Приклади 1-4, зі своєю сигнальною послідовністю або без і пропептид. Інші приклади хімерних поліпептидів винаходу включають, не обмежуючись перерахованим, Фактор IX-XTEN хімерні поліпептиди. Фактор IX може бути гібридизований або з N-кінцем, або з Cкінцем XTEN. [056] Хімерний поліпептид може містити послідовність, щонайменше на 90% або щонайменше на 95% або 100% ідентичну Фактору IX і FcRn BP, наприклад, Fc амінокислотну послідовність, показану в Таблиці 2A без сигнальної послідовності і пропептидної послідовності (амінокислоти з 1 по 642 з SEQ ID NO:2), або альтернативно, з пропептидною послідовністю, або альтернативно з сигнальною послідовністю і пропептидною послідовністю. [057] "Культура", "культивувати" і "культивування" як використовується тут, означає інкубувати клітини в умовах in vitro, які дають клітинам можливість рости або ділитися, або підтримують клітини в живому стані. "Клітини, що культивуються" при використанні тут означає клітини, які розмножуються in vitro. [058] "Фактор IX" і "FIX" при використанні тут означає функціональний Фактор IX поліпептид у своїй нормальній ролі в коагуляції, якщо не зазначене інше. Таким чином, термін Фактор IX включає різні поліпептиди, які є функціональними, і полінуклеотиди, які кодують такі функціональні варіанти поліпептидів. Кращі Фактор IX поліпептиди являють собою людські, бичачі, свинячі, собачі, котячі й мишачі Фактор IX поліпептиди. Відомі поліпептиди повної довжини і полінуклеотидні послідовності Фактора IX, а також багато функціональних варіантів, наприклад, фрагменти, мутанти і модифіковані версії. Фактор IX поліпептиди включають повної довжини Фактор IX, повної довжини Фактор IX без Met на N-кінці, повної довжини Фактор IX без сигнальної послідовності, зрілий Фактор IX (без сигнальної послідовності й пропептиду), і зрілий Фактор IX з додатковим Met на N-кінці. Фактор IX краще виробляється рекомбінантними способами ("рекомбінантний Фактор IX" або "rFIX"), тобто він не є природним або одержаним із плазми крові. [059] Відомо дуже багато функціональних варіантів Фактора IX. Міжнародна публікація номер WO 02/040544 A3, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти, які демонструють підвищену стійкість до інгібування гепарином, на сторінці 4, рядки 9-30, і на сторінці 15, рядки 6-31. Міжнародна публікація номер WO 03/020764 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти Фактора IX з редукованою імуногенністю T-клітин у Таблицях 2 і 3 (на сторінках 14-24), і на сторінці 12, рядки 1-27. Міжнародна публікація номер WO 2007/149406 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває функціональний мутант Фактора IX молекул, який демонструє підвищену білкову стабільність, підвищений період напіввиведення in vivo і in vitro і підвищену стійкість до протеаз від сторінки 4, рядок 1 до сторінки 19, рядок 11. WO 2007/149406 A2 також розкриває хімерний і інший варіант Фактора IX молекул від сторінки 19, рядок 12 до сторінки 20, рядок 9. Міжнародна публікація номер WO 08/118507 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти Фактора IX, які демонструють підвищену активність згортання крові, від сторінки 5, рядок 14 до сторінки 6, рядок 5. Міжнародна публікація номер WO 09/051717 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти Фактора IX, що мають підвищене число Nзв'язаних і/або O-зв'язаних сайтів глікозилювання, яке приводить до зростання періоду напіввиведення і/або затримання, від сторінки 9, рядок 11 до сторінки 20, рядок 2. Міжнародна публікація номер WO 09/137254 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, також розкриває мутанти Фактора IX з підвищеним числом сайтів глікозилювання від сторінки 2, параграф [006] до сторінки 5, параграф [011] і від сторінки 16, параграф [044] до сторінки 24, параграф [057]. Міжнародна публікація номер WO 09/130198 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває функціональний мутант Фактора IX молекул, який має підвищене число сайтів глікозилювання, що приводить до зростання періоду напіввиведення, від сторінки 4, рядок 26, до сторінки 12, рядок 6. Міжнародна публікація 6 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 номер WO 09/140015 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває функціональні Фактор IX мутанти, які мають підвищену кількість Cys залишків, що може бути використане для полімерної (наприклад, PEG) кон'югації, від сторінки 11, параграф [0043] до сторінки 13, параграф [0053]. [060] Крім того, сотні нефункціональних мутацій Фактора IX ідентифіковані у пацієнтів з гемофілією, багато з яких розкриті в Таблиці 1, на сторінках 11-14 Міжнародної публікації номер WO 09/137254 A2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Такі нефункціональні мутації не включені у винахід, але надають додатковий посібник того, які мутації з більшою або меншою імовірністю приведуть до одержання функціонального Фактор IX поліпептиду. [061] Фактор IX (або Фактор IX частина хімерного поліпептиду) може бути щонайменше на 90% або щонайменше на 95% або щонайменше на 100% ідентичним Фактору IX амінокислотної послідовності, показаної в Таблиці 2A без сигнальної послідовності і пропептидної послідовності (амінокислоти з 1 по 415 з SEQ ID NO:2), або альтернативно, з пропептидною послідовністю, або з пропептидною і сигнальною послідовністю (повної довжини Фактор IX). [062] Коагуляційна активність Фактора IX виражається в Міжнародних Одиницях (МО). Одна МО активності Фактора IX відповідає приблизно кількості Фактора IX в одному мілілітрі нормальної плазми крові людини. Деілька досліджень підходять для вимірювання активності Фактора IX, включаючи одностадійне дослідження згортання крові (активований частковий тромбопластиновий час; aPTT), час утворення тромбіну (TGA) і ротаційна тромбоеластографія (ROTEM®). Див., наприклад, Приклад 3. [063] "FcRn зв’язувальний партнер" або "FcRn BP" при використанні тут, означає зв’язувальні партнери функціонального неонатального Fc рецептора (FcRn), якщо не зазначене інше. FcRn зв’язувальний партнер є будь-якою молекулою, яка може специфічно зв'язуватися з FcRn рецептором з наступним активним транспортом FcRn рецептором FcRn зв’язувального партнера. Таким чином, термін FcRn BP включає будь-які варіанти IgG Fc, які є функціональними. Наприклад, область Fc частини IgG, яка зв'язується з FcRn рецептором, описана на основі рентгеноструктурної кристалографії (Burmeister et al. 1994, Nature 372:379, включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання). Головна контактна ділянка Fc з FcRn знаходиться поруч із з'єднанням CH2 і CH3 доменів. Всі Fc-FcRn контакти знаходяться усередині одного Ig важкого ланцюга. FcRn Bps включають цілий IgG, Fc фрагмент IgG, і інші фрагменти IgG, які включають повний зв’язувальний регіон FcRn. Головні контактні сайти включають амінокислотні залишки 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 і 314 CH2 домену і амінокислотні залишки 385-387, 428 і 433-436 CH3 домену. Всі посилання щодо амінокислотної нумерації імуноглобулінів або фрагментів імуноглобулінів, або ділянок, засновані на роботі Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Public Health, Bethesda; MD, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. (FcRn рецептор виділений з декількох видів ссавців, включаючи людину. Відомі послідовності людських FcRn, щурячих FcRn і мишачих FcRn (Story et al. 1994, J. Exp. Med. 180: 2377), включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.) FcRn BP може містити CH2 і CH3 домени імуноглобулінів з петльовими ділянками імуноглобуліну або без них. Наведені як приклад FcRn BP варіанти надані в WO 2004/101740 і WO 2006/074199, які включені в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. [064] FcRn BP також включає альбумін і його фрагменти, які зв'язуються з FcRn. Краще альбумін являє собою альбумін людини. Фактор IX може бути з'єднаний або з N-кінцем альбуміну або з C-кінцем альбуміну, за умови, що Фактор IX компонент Фактор IX-альбумін гібридного білка може процесуватися ферментативно активною пропротеїнконвертазою для одержання процесованого поліпептиду, що містить Фактор IX. Приклади альбуміну, такі як його фрагменти, які можна використовувати в даному винаході, відомі, наприклад, Патент США No. 7592010; Патент США No. 6686179; і Schulte, Thrombosis Res. 124 Suppl. 2:S6-S8 (2009), кожний з яких включений у дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. [065] FcRn BP (або ділянка FcRn BP у хімерному поліпептиді) може містити одну або більше мутацій, і комбінацій мутацій. [066] FcRn BP ((або ділянка FcRn BP у хімерному поліпептиді) може містити мутації, що надають збільшений період напіврозпаду, такі як M252Y, S254T, T256E і їх комбінації, як розкрито в роботі Oganesyan et al., Mol. Immunol. 46:1750 (2009), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; H433K, N434F і їх комбінації, як розкрито в роботі Vaccaro et al., Nat. Biotechnol. 23:1283 (2005), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; мутанти розкриті на сторінках 1-2, параграф [0012], і в Прикладах 9 і 10 США 7 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2009/0264627 A1, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; і мутанти розкриті на сторінці 2, параграфи з [0014] по [0021] зі США 20090163699 A1, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. [067] FcRn BP (або ділянка FcRn BP у хімерному поліпептиді) також може включати наступні мутації: Fc регіон IgG може бути модифікований відповідно до добре відомих процедур, таких як сайт-спрямований мутагенез і подібними для одержання модифікованих IgG або Fc фрагментів або їх частин, які будуть зв'язуватися з FcRn. Такі модифікації включають модифікації, далекі від контактуючих сайтів FcRn, а також модифікації в межах контактуючих сайтів, які зберігають або навіть підсилюють зв'язування з FcRn. Наприклад, наступні одиночні амінокислотні залишки у людському IgG1 Fc (Fcy1) можуть бути заміщені без значної втрати Fc зв’язувальної афінності для FcRn: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A, T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q295A, Y296F, N297A, S298A, Y300F, R301A, V303A, V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, A330S, P331A, P331S, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A, K340A, Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A, K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N389A, N390A, Y391F, K392A, L398A, S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A и K447A, де наприклад P238A представляє дикий тип проліну, заміщений аланіном у позиції номер 238. На додаток до аланіну, інші амінокислоти можуть бути заміщені диким типом амінокислот у позиціях, позначених вище. Мутації можуть бути впроваджені однократно в Fc, даючи початок більше, ніж одній сотні FcRn зв’язувальних партнерів, що відрізняються від нативного Fc. Крім того, комбінації двох, трьох або більше із цих індивідуальних мутацій можуть бути введені разом, даючи початок ще сотням FcRn зв’язувальних партнерів. Деякі із цих мутацій можуть давати нову функціональність відносно FcRn зв’язувального партнера. Наприклад, один варіант втілення включає N297A, видаляючи висококонсервативний сайт N-глікозилювання. Дія цієї мутації зменшує імуногенність, тим самим підсилюючи циркулюючий півперіод FcRn зв’язувального партнера, і компенсуючи нездатність FcRn зв’язувального партнера зв'язуватися з FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB і FcyRIIIA, без афінності до FcRn, що заважає (Routledge et al. 1995, Transplantation 60:847, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; Friend et al. 1999, Transplantation 68:1632, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; Shields et al. 1995, J. Biol. Chem. 276:6591, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання). Крім того, щонайменше три людські Fc гама рецептора, очевидно, розпізнають сайт зв'язування IgG усередині нижньої петльової ділянки, звичайно амінокислоти 234-237. Отже, інший приклад нової функціональності й потенційно зниженої імуногенності може стати результатом мутацій у цій ділянці, як, наприклад, шляхом заміщення амінокислот 233-236 людського IgG1 "ELLG" на відповідну послідовність із IgG2 "PVA" (з однією амінокислотною делецією). Показано, що FcyRI, FcyRII і FcyRIII, які опосередковують різні ефекторні функції, не будуть зв'язуватися з IgG1, якщо інтродуковані такі мутації. (Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; і Armour et al.1999, Eur. J. Immunol. 29:2613, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання). Як додатковий приклад нової функціональності, що виникає внаслідок мутацій, описаних вище, в деяких випадках афінність до FcRn може бути підвищена більше, ніж у дикого типу. Ця підвищена афінність може відображати підвищений ступінь «увімкнення», знижений ступінь «вимкнення» або як підвищений ступінь «увімкнення», так і знижений ступінь «вимкнення». Вважається, що мутації надають підвищену афінність FcRn, включаючи T256A, T307A, E380A і N434A (Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276:6591, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання). [068] FcRn BP (або ділянка FcRn BP у хімерному поліпептиді) може бути щонайменше на 90% або щонайменше на 95% або на 100% ідентичною Fc амінокислотної послідовності, показаної в Таблиці 2A або B без сигнальної послідовності (амінокислоти від 1 до 227 з SEQ ID NO:2), або альтернативно, із сигнальною послідовністю. [069] Термін "гібридні" поліпептиди і білки, при використанні тут, означає комбінацію хімерного поліпептиду з другим поліпептидом. Хімерний поліпептид і другий поліпептид у гібриді можуть бути зв'язані один з одним за допомогою нековалентних взаємодій білок-білок, таких як заряд-заряд або гідрофобні взаємодії. Хімерний поліпептид і другий поліпептид у гібриді можуть бути зв'язані один з одним через ковалентний зв'язок (зв’язки), такі як дисульфідні зв'язки. Хімерний поліпептид і другий поліпептид у гібриді можуть бути зв'язані один з одним за допомогою більше ніж одного типу зв'язку, таких як нековалентні й дисульфідні зв'язки. Гібриди 8 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 описані в WO 2004/101740, WO2005/001025, Патенті США No. 7,404,956, патенті США No. 7,348,004 і WO 2006/074199, кожний з яких включений в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Другий поліпептид може бути другою копією того ж хімерного поліпептиду або може бути неідентичним хімерним поліпептидом. У кращих варіантах втілення другий поліпептид являє собою поліпептид, що містить FcRn BP, наприклад, Fc. У кращих варіантах втілення хімерний поліпептид являє собою Фактор IX-FcRn BP, наприклад, Фактор IX-Fc хімерний поліпептид, а другий поліпептид повністю складаєтьсяз Fc. Див., наприклад, Фігуру 1, Приклади 1-3 і Таблицю 2 (SEQ ID Nos:2 і 4). Див., наприклад, US 7404956, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. [070] Другий поліпептид у гібриді містить або повністю складається з послідовності, щонайменше на 90% або щонайменше на 95% або 100% ідентичній амінокислотній послідовності, показаній в Таблиці 2B без сигнальної послідовності (амінокислоти з 1 по 227 з SEQ ID NO:4), або альтернативно, з сигнальною послідовністю. [071] Поліпептид даного винаходу також включає Фактор IX, гібридизований з одним або більше XTEN поліпептидами. Schellenburger et al., Nat. Biotech. 27:1186-90 (2009), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Фактор IX може бути гібридизований або з N-кінцем XTEN поліпептиду, або з C-кінцем XTEN поліпептиду. XTEN поліпептиди включають, але не обмежуючись перерахованим, поліпептиди, розкриті в WO 2009/023270, WO 2010/091122, WO 2007/103515, US 2010/0189682, і US 2009/0092582, кожна з яких включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. [072] "Інтервал між введенням лікарського засобу" при використанні тут означає кількість часу, яка проходить між введенням повторних доз пацієнту. Інтервал між введенням лікарського засобу в способах винаходу, що використовують хімерний FIX-FcRn BP, наприклад, хімерний FIX-Fc, може бути щонайменше від півтора до восьми раз довше, ніж інтервал між введенням лікарського засобу, необхідний для еквівалентної кількості (у МО/кг) зазначеного Фактора IX без FcRn BP, наприклад, Fc частини (тобто поліпептиду, який складається із зазначеного FIX). Інтервал між введенням лікарського засобу при введенні, наприклад, Фактора IX-Fc хімерного поліпептиду (або гібрида) винаходу може бути щонайменше у півтора раза довше, ніж інтервал між введенням лікарського засобу, необхідний для еквівалентної кількості зазначеного Фактора IX без FcRn BP, наприклад, Fc частини (тобто поліпептиду, що складається із зазначеного Фактора IX). Інтервал між введенням лікарського засобу може бути щонайменше від півтора до восьми раз довше, ніж інтервал між введенням лікарського засобу, необхідний для еквівалентної кількості зазначеного Фактора IX без, наприклад, Fc частини (або поліпептиду, що складається із зазначеного Фактора IX). [073] У деяких варіантах втілення інтервал між введенням лікарського засобу становить 618, 6-10, 9-18, щонайменше 6, щонайменше 7, щонайменше 8, щонайменше 9, щонайменше 10, щонайменше 11, щонайменше 12, щонайменше 13, щонайменше 14, щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17 або щонайменше 18 днів. Інтервал між введенням лікарського засобу може становити щонайменше приблизно один разу на тиждень, і може становити 6-10 днів, наприклад, приблизно 7-10, приблизно 7-9, приблизно 7-8, приблизно 8-10, приблизно 910, приблизно 6-7, приблизно 8-9, приблизно 6, приблизно 7, приблизно 8, приблизно 9, або приблизно 10 днів. [074] Інтервал між введенням лікарського засобу може становити 9-18 днів, наприклад, приблизно 9-17, приблизно 9-16, приблизно 9-15, приблизно 9-14, приблизно 9-13, приблизно 912, приблизно 9-11, приблизно 9-10 днів, приблизно 10-18, приблизно 11-18, приблизно 12-18, приблизно 13-18, приблизно 14-18, приблизно 15-18, приблизно 16-18, приблизно 17-18 днів, приблизно 10-11, приблизно 11-12, приблизно 12-13, приблизно 13-14, приблизно 14-15, приблизно 15-16, і приблизно 16-17 днів, приблизно 9, приблизно 10, приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13, приблизно 14, приблизно 15, приблизно 16, приблизно 17, або приблизно 18 днів. Інтервал між введенням лікарського засобу може становити приблизно 10-14 днів. Інтервал між введенням лікарського засобу може становити приблизно кожні два тижні або двічі на місяць. Інтервал між введенням лікарського засобу може становити більше, ніж 18 днів, наприклад, приблизно 19, приблизно 20, приблизно 21, приблизно 22, приблизно 23, приблизно 24, приблизно 25, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35, приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39, або приблизно 40 днів. Інтервал між введенням лікарського засобу може бути фіксованим інтервалом, наприклад, 7 днів для 25-50 МО/кг, 10-13 днів для 50-100 МО/кг або 14 днів для 100-150 МО/кг. Фіксований інтервал і доза визначаються так, що комбінація інтервалу і дози буде приводити до мінімального рівня, який становить щонайменше приблизно 1-5 або щонайменше приблизно 1-3, або щонайменше приблизно 1, 9 UA 115120 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 щонайменше приблизно 2, або щонайменше приблизно 3 МО/дл FIX активності в популяції пацієнтів або у окремого пацієнта. Фіксований інтервал між введенням лікарського засобу може також становити 7 днів для 20-50 МО/кг, 10-14 днів для 50-100 МО/кг, 14-16 днів для 100-150 МО/кг, 7 днів для 10-50 МО/кг, 10-13 днів для 15-100 МО/кг, або 14-15 днів для 50-150 МО/кг. Фіксований інтервал між введенням лікарського засобу може також становити 7 днів для 10-30 МО/кг, 10 днів для 15-50 МО/кг, 11 днів для 20-70 МО/кг, 12 днів для 25-85 МО/кг, 13 днів для від 30 до 100 МО/кг, 14 днів для від 40 до 125 МО/кг і 15 днів для 50–150 МО/кг. [075] У кращих варіантах втілення інтервал між введенням лікарського засобу становить 20 МО/кг один раз на тиждень, 40 МО/кг кожні 10 днів або 100 МО/кг кожні два тижні (двічі на місяць). [076] Інтервал між введенням лікарського засобу може, альтернативно, бути індивідуалізованим інтервалом, який визначений для кожного суб’єкта на основі фармакокінетичних даних або іншої інформації про зазначеного суб’єкта. Комбінація індивідуалізованої дози/інтервалу між введенням лікарського засобу може бути такою ж самою, як для фіксованих інтервальних режимів у попередніх параграфах, або може відрізнятися, як проілюстровано в Прикладах. Режим може спочатку бути з фіксованим інтервалом між введенням лікарського засобу, а потім може змінитися на індивідуалізований інтервал між введенням лікарського засобу. [077] "Лікування за вимогою" при використанні тут означає лікування, яке призначено для застосування протягом короткого часу і відповідає існуючому стану, такому як епізод кровотечі, або виявлена короткочасна необхідність, така як плановане хірургічне втручання. Стани, які можуть потребувати лікування за вимогою, включають епізод кровотечі, гемартроз, м'язову кровотечу, ротову кровотечу, геморрагію, крововилив у м'яз, ротовий крововилив, травму, травму голови, шлунково-кишкову кровотечу, внутрішньочерепний крововилив, внутрішньочеревний крововилив, внутрішньогрудний крововилив, перелом кістки, кровотечу в центральній нервовій системі, кровотечу в заглотковому просторі, кровотечу в зачеревному просторі або кровотечу в піхву клубово- поперекового м'яза. Інші епізоди кровотечі також включені. Пацієнт може потребувати хірургічної профілактики, периоперативного догляду або підготовки до оперативного втручання. Такі хірургічні операції включають мале хірургічне втручання, велике хірургічне втручання, видалення зуба, тонзилектомію, інші стоматологічні/грудні й лицьові операції, видалення пахової грижі, сіновектомію, повну заміну колінного суглоба, заміну інших суглобів, краніотомію, остеосинтез, травматологічну хірургію, внутрішньочерепні операції, внутрішньочеревні операції, внутрішньогрудні операції. Інші операції також включені. Додаткові стани, які можуть потребувати лікування за вимогою, включають ті, що перераховані в Таблиці 26. [078] Додаткові стани, які можуть потребувати лікування за вимогою, включають малий крововилив, гемартроз, поверхневий м'язовий крововилив, крововилив у м'які тканини, середній крововилив, внутрішнм'язовий крововилив або крововилив у м'які тканини з розшаруванням, крововилив у слизові, гематурію, сильний крововилив, глотковий крововилив, заглотковий крововилив, ретроперітонеальний крововилив, крововилив у центральній нервовій системі, удари, порізи, подряпини, крововилив у суглоб , носову кровотечу, ротову кровотечу, кровотечу з ясен, внутрішньочерепну кровотечу, внутрішньчеревну кровотечу, малий спонтанний крововилив, кровотечу після серйозної травми, помірний шкірний синець або спонтанний крововилив у суглоби, м'язи, внутрішні органи або в мозок. Додаткові причини для лікування за вимогою включають необхідність у периоперативному догляді при хірургічному втручанні або видаленні зуба, велике хірургічне втручання, великі хірургічні операції в порожнині рота, урологічні операції, операції при грижі, ортопедичні операції, такі як заміна колінного, тазостегнового або будь-якого іншого основного суглоба. [079] Скорочення: AUCINF AUCα AUCβ Альфа HL Бета HL C168 Cmax CV% Площа під кривою концентрація-час від нуля нескінченності Площа під кривою концентрація-час над фазою розподілення Площа під кривою концентрація-час над фазою виведення Півперіод фази розподілення Півперіод фази виведення; також позначається як t 1/2 Оцінена FIXFc активність вище базової приблизно через 168 год. після введення дози Максимальна концентрація, що присутня на Tmax Відсоток коефіцієнта варіації 10 UA 115120 C2 Cl IVR Kзначення MRT N NC NR SD SE TBLP1 TBLP3 TBLP5 VSS V1 5 10 15 20 25 30 35 40 Кліренс in vivo відновлення (%) Поступове відновлення Середній час затримання Номер Не розраховувалось Не повідомлялось Стандартне відхилення Стандартна помилка Модель-прогнозований час після введення дози, коли FIXFc активність зменшується приблизно до 1 МО/дл вище базового рівня Модель-прогнозований час після введення дози, коли FIXFc активність зменшується приблизно до 3 МО/дл вище базового рівня Модель-Прогнозований час після введення дози, коли FIXFc активність зменшується приблизно до 5 МО/дл вище базового рівня Об’єм розподілення на стаціонарній фазі Об’єм розподілення в центральному компартменті [080] Фармакокінетичні (PK) параметри включають вищевказані терміни і наступні терміни, які мають своє звичайне значення в даній галузі техніки, якщо не зазначене інше. Деякі з термінів більш детально пояснюються в Прикладах. PK параметри можуть ґрунтуватися на рівні FIX антигена (часто позначеному в даній заявці в дужках як "антиген") або на рівні FIX активності (часто позначеній в даній заявці в дужках як "активність"). У літературі PK параметри часто ґрунтуються на рівні FIX активності через присутність у плазмі деяких пацієнтів ендогенних неактивних FIX, які заважають можливості оцінити введений (тобто екзогенний) FIX, використовуючи антитіло до FIX. Однак коли FIX вводиться як частина гібридного білка, що містить гетерологічний пептид, такий як FcRn BP, то FIX антиген що вводиться (тобто екзогенний) може бути точно виміряний з використанням антитіла до гетерологічного поліпептиду. Крім того, певні PK параметри можуть бути засновані на прогнозованих даних (часто позначуваних у даній заявці в дужках як " модель-прогнозовані") або на спостережуваних даних (часто позначуваних у даній заявці в дужках як "спостережуване"), і переважно засновані на спостережуваних даних. [081] "Базовий" при використанні тут означає найнижчий підрахований рівень Фактора IX у плазмі крові у пацієнта перед введенням дози. У дослідженні вперше проведеному на людині, описаному в Прикладі 1, рівні Фактора IX у плазмі були підраховані у двох точках часу перед введенням дози: на скринінговому візиті й безпосередньо перед введенням дози. Періоди часу перед введенням дози розглядалися як нуль (базовий рівень) для цілей обчислень, тобто для одержання даних "з відніманням базового рівня". Див., наприклад, Фігуру 4. Альтернативно, (a) базовий рівень у пацієнтів, чия FIX активність перед лікуванням становила