Спосіб діагностики злоякісного пухлинного росту в організмі людини

1. Спосіб діагностики злоякісного пухлинного росту в організмі людини за оптичною щільністю сироватки крові, що включає додання до досліджуваної сироватки стабілізатора у співвідношенні 1:10, з подальшим послідовним з інтервалом у часі доданням до стабілізованої сироватки розчину трилону Б, ліофілізованої C2 2 (19) 1 3 77549 4 в сироватці крові обстежуваного. Він полягає в 420 нм, від значення оптичної щільності сироватки тому, що КБК, які присутні в сироватці крові на вершині піка віднімають значення оптичної онкологічного хворого фіксуються на молекулі щільності при 364 нм, якщо пік знаходиться в комплексону, потім зв'язуються з імуноглобулінами інтервалі діапазону 420-500 нм, значення оптичної донорської сироватки по типу антиген-антитіло і щільності при 364 нм віднімають від значення врешті проявляються за рахунок взаємодії з азотоптичної щільності в основі піка, і коли одержаний нокислим сріблом, шляхом зміни коефіцієнтів показник є від'ємним числом або ж спостерігається співвідношення оптичної щільності сироватки з лінійна оберненопропорційна залежність, говорять реактивами та без реактивів. про відсутність злоякісної пухлини, коли показник У вказаному способі (CST), в якості одного з дорівнює або більше нуля - про її наявність. Крім реагентів тест-системи, використовувалась свіжа того, дослідження оптичної щільності сироватки донорська сироватка. Вона мала короткий термін проводять з інтервалом в 1-2 нм. зберігання. У зв'язку з цим, було необхідно кожні 3Цей спосіб діагностики дозволяє виявити в 5 днів отримувати нові порції сироватки від різних сироватці крові специфічні білкові комплекси за донорів. Іноді траплялось так, що серед цих допомогою уніфікованої тест-системи "Онкотестдонорів були люди, які перед забором крові прий2". Ця система на відміну від попереднього спосомали якісь ліки, або алкоголь, чи наркотики. Тому, бу CST, у якому застосовувалось 3 реагенти, використання їхньої сироватки в якості реактиву, включає 4 різних реактиви: стабілізатор сироватки, призводило до помилково-позитивних результатів. розчин комплексону, висушену за допомогою За кілька років застосування було виявлено ліофільної сушки донорську сироватку крові і розряд недоліків методу, які не дають можливості чин азотнокислого срібла. його широкого втілення в клінічну лабораторну Згідно з винаходом, у попередньо розведену практику. До недоліків, виявлених у процесі стабілізатором сироватку крові обстежуваного, з досліджень CST належать наступні: 10-хвилинним інтервалом вводять розчин ком1. Технічна неможливість фотометричного плексону, донорську сироватку та розчин азотнодослідження сироватки у 20-30 відсотків обстежукислого срібла, потім опромінюють денним ваних, у зв'язку з її високою оптичною щільністю. світлом, і додають ще 1 мл стабілізатора з метою 2. Незручності при застосуванні та іноді зупинки реакції. Результат визначають за допомопомилкові результати тесту, за рахунок короткого гою аналізу кривих оптичної щільності, отриманих терміну зберігання (2-3 дні) реактиву - донорської при порівняльній фотометрії сироватки в діапазоні сироватки крові. 360-500 нм. 3. Незручності при необхідності впродовж дня Згідно зі способом сироватку обстежуваного обстежити більше 50 хворих, за рахунок короткого перед виконанням реакції розводять терміну зберігання їх сироватки крові (не більше стабілізатором у співвідношенні 1:10, а Зх годин після отримання). співвідношення останніх реактивів тест-системи до 4. Помилкові результати тесту, за рахунок отриманого розчину становить 1:100. неможливості зупинити реакцію зміни оптичної Сироватка, що обстежується, може щільності сироватки після завершення зберігатися при температурі нижче -20°С протягом опромінення. 3 діб. 5. Помилкові результати тесту в зв'язку з Згідно з винаходом (Онкотест-2), замість наявністю у 40% хворих змін оптичної щільності не свіжої сироватки використовують висушену за дов інтервалі 400-4 Юнм, а в більш широкому помогою ліофільної сушки сироватку, що має діапазоні -від 390 до 420 нм, а також поява додаттермін зберігання до 2-х років. Ця сироватка бекових піків в інших діапазонах. реться 1-2 рази на рік, у попередньо обстежених і 6. Відсутність єдиного стандартизованого і повністю здорових донорів. Перед ліофільною сертифікованого набору (тест-системи) реагентів сушкою свіжа донорська сироватка перевіряється для виконання способу. на діагностичну ефективність в реакції "ОнкотестЗ метою усунення вищевказаних недоліків бу2" шляхом обстеження пацієнтів з відомими ла поставлена задача розробити нову спосіб вионкологічними та іншими захворюваннями. явлення КБК, який отримав назву - "Онкотест-2". Ліофільна сушка перевіреної партії сироватки Поставлена задача вирішується запропоновавиконується в стерильних пробірках Еппендорфа в ним способом діагностики злоякісного пухлинного об'ємі 1 мл. Перед використанням у суху сироватросту в організмі людини за оптичною щільністю ку також додається 1 мл стабілізатора. сироватки крові, що включає додання до Результат реакції за винаходом може бути отдосліджуваної сироватки стабілізатора у римано тільки після порівняльного сканування співвідношенні 1:10 з подальшим, послідовним з сироватки з реактивами проти сироватки без них в інтервалом у часі доданням до стабілізованої сидіапазоні 360 - 500 нм, із шагом у 1-2 нм. роватки розчину трилону Б, ліофілізованої Згідно зі способом діагностики злоякісного донорської сироватки крові та розчину азотнокисросту в організмі людини -"Онкотест-2", відповідно лого срібла у співвідношенні 110:1:1:1, до запропонованого винаходу до сироватки крові опромінення денним світлом і зупинку реакції досліджуваного послідовно з інтервалом в 10 хв. шляхом введення стабілізатора в дозі, що станододають розчин комплексону, донорську сироватку вить половину від первинної, аналіз кривих крові та розчин азотнокислого срібла та оптичної щільності сироватки в діапазоні 360-500 відрізняється тим, що 0,2 мл сироватки обстежунм, за результатами якого, якщо пік оптичної ваного попередньо розводять 2 мл розчину щільності знаходиться в інтервалі діапазону 390стабілізатора, додають до неї послідовно 5 77549 6 стандартизовані компоненти тест-системи у інформативність реакції і в 10 разів зменшує співвідношенні 1:100: трилон Б, розведену необхідну кількість сироватки й реагентів. Якщо не стабілізуючим розчином висушену донорську сирозводити сироватку, її оптична щільність у бароватку крові та розчин азотнокислого срібла. Ще гатьох хворих буде перевищувати технічні одну пробірку з розведеною аналогічно сироватможливості фотометрії спектрофотометра. кою обстежуваного, але без додавання реактивів, Реагенти тест-системи стандартизовані таким залишають як контроль. Після опромінення впрочином, що їх кількісне співвідношення до розчину довж години штучним денним світлом, у сироватку сироватки крові обстежуваного має бути 1:1:1. з реагентами і в контрольну додають по 1 мл Оптимальна кількість кожного реагенту по стабілізатора. За допомогою спектрофотометра, відношенню до розчину сироватки має бути 1:100. з'єднаного з комп'ютером, проводять вимірювання Збільшення або зменшення кількості реактивів, що оптичної щільності сироватки з реагентами додаються у сироватку, або зміна їх відносно контролю в діапазоні від 360 до 500 нм, з співвідношення між собою призводить до отришагом у 1-2 нм. При цьому отримують характерні мання помилково-позитивних або помилковокриві оптичної щільності, аналіз яких дозволяє негативних результатів реакції. визначити результат реакції. У пацієнтів, що не Донорська сироватка крові, що є одним з мають злоякісного пухлинного росту, графік має реактивів тест-системи, готується шляхом вигляд кривої лінійної залежності, на якій змішування сироваток 0(1)Rh + групи крові, взятих попередній рівень оптичної щільності завжди виу 1-2 здорових чоловіків і 1-2 здорових жінок. Щоб щий за наступний (фіг. 1). уникнути можливостей впливу на результат реакції Криві при позитивному результаті завжди ма"Онкотест-2" особливостей донорських сироваток ють виражені піки оптичної щільності (Фіг. 2-3). або не визначених захворювань донорів, Чисельний вираз позитивного тесту - це виконується тестування пулу донорських сироварізниця між показниками оптичної щільності на ток за методикою "Онкотест-2" у пацієнтів зі вставершині піку й на його основі. Результат позитивновленими онкологічними і не онкологічними заного тесту завжди більше за нуль. (Нуль також хворюваннями. Якщо результати тесту і діагноз вважається позитивним результатом). захворювання співпадає, перевірену сироватку Найчастіше піки оптичної щільності утворюрозливають у пробірки Еппендорфа по 1 мл і ються в інтервалі 390-420 нм, але можуть бути і в піддають ліофільній сушці. Перед використанням інших діапазонах спектру. Нерідко мають місце суху сироватку розводять 1 мл стабілізатора. два, або більше піків. У цьому випадку результат Термін використання 3 дні. Зберігати при обчислюється за показниками найбільшого (Фіг. 2температурі 4-6°С. Одного флакона ліофілізованої 4). сироватки достатньо для обстеження 50 пацієнтів. За відсутності КБК крива оптичної щільності Стабілізатор, що додається до сироватки обсироватки обстежуваного не відрізняється від констежуваного після опромінення, призначений для тролю і має лінійну залежність, тобто кожний зупинки реакції. Як показали дослідження, оптипопередній показник більший за наступний (Фіг. мальне співвідношення стабілізатору до сироватки 1,5). Результат тесту в таких випадках є різницею після опромінення має бути 1:2. Якщо не додавати між показником оптичної щільності на 364 нм і на стабілізуючий розчин, оптична щільність сироватки 400 нм і має завжди від'ємний знак. під впливом реагентів продовжує змінюватись, що Дослідним шляхом встановлено, що на призводить у 40% випадках до отримання помилреакцію "Онкотест-2" впливають порядок і терміни ково-позитивних результатів. Якщо добавити зберігання сироватки крові пацієнта, ступінь її розбільше стабілізатора результат реакції часто стає ведення стабілізуючим розчином, кількісне помилково-негативним. співвідношення при введенні реактивів тестДля отримання достовірних результатів метосистеми, як між собою так і сироваткою, ду "Онкотест-2" необхідно використовувати діагностична якість донорської сироватки, об'єм сучасні спектрофотометри, в яких є можливість стабілізатора, що додається в сироватку після безперервного сканування сироватки в діапазоні опромінення, а також методика виконання 360-500 нм, поєднані з комп'ютером і постачені фотометрії і особливості аналізу її результатів. програмним забезпеченням, яке дозволяє отримуСироватка крові обстежуваного має бути отвати графіки кривих оптичної щільності і римана не пізніше, ніж через 2 години після взяття вимірювати її показники. Дослідним шляхом встакрові за допомогою центрифуги, на обертах не новлено, що негативний результат тесту більших за 2 тис. на хв., протягом 10-15 хв. Більш встановлюється тільки тоді коли протягом усієї високі оберти призводять у деяких пацієнтів до кривої відсутні піки оптичної щільності. гемолізу еритроцитів. Гемолізована або хільозна У попередньому винаході CST позитивний ресироватка не придатна для реакції. Сироватка зультат реакції визначали тільки при появі піків може зберігатися до початку реакції при оптичної щільності в інтервалі 400-410 нм, що бутемпературі 4-6°С - 3 години, при температурі ло причиною частих помилок тесту. Це можна ба25°С - до 3 діб. Порушення вказаних максимальчити на прикладі наступної кривої. них строків збереження сироватки призводить до Якщо оцінювати результат цієї реакції за помилково-позитивних результатів тесту. попереднім винаходом CST, то він має бути негаПеред початком введення реактивів тесттивним, бо оптична щільність сироватки в даного системи сироватку досліджуваного обов'язково хворого в інтервалі 400-410нм нижча, ніж на потрібно розвести стабілізуючим розчином у 364нм. Насправді, як видно на малюнку, крива має співвідношенні 1:10. Це на 20-30% підвищує додатковий пік оптичної щільності на 440 нм, що 7 77549 8 свідчить про наявність у хворого злоякісної пухливинаходу, представлені в таблиці 1. ни. Дані, що підтверджують можливість здійснення Таблиця 1 Назва параметрів, що досліджуються 1 .Термін зберігання сироватки обстежуваного при температурі нижчій за-20 С 2.0б`єм стабілізатора, що додається до сироватки обстежуваного перед початком реакції. 3. Об’ємне відношення дози стабілізатора, що додається для зупинки реакції, до його первинної дози 4. Об’ємне відношення дози кожного з реактивів до досліджуваної вихідної сироватки 5. Діапазон спектру, на якому аналізується оптична щільність сироватки досліджуваного Кількісні показники до 3 діб більше 3 діб Не додається Додається менше ніж 1:10 Додається 1:10 Додається більше 1:10 Не додається, або додається менше ніж 1:2 Додається 1:2 Додається більше 1:2 1:50 1:10 1:15 і більше 364, 400-410НМ 360 - 500нм 500 - 700нм Параметри, що характеризують результат Тест негатив. Тест позитив. + +* Тест помилково-позитивний У 20-30% тест не інформат. Тест помилково-позитивний + + Тест помилково-негативний Тест помилково позитивний + + Тест помилково-негативний Тест помилково позитивний + + Тест помилково-негативний Тест помилково-негативний + + Результат не інформативний ** - означае достовірний результат тесту Найкращий спосіб здійснення тесту: Беруть тест-систему "Онкотест-2", у якій знаходиться : стабілізуючий розчин, розчин трилону Б, ліофілізована сироватка крові і розчин азотнокислого срібла. З вени обстежуваного набирають 3-5 мл крові. Центрифугують на обертах 1500-2000 на хв. Отримують сироватку. В двох пробірках розводять по 0,2 мл сироватки 2 мл стабілізатора. Одну пробірку залишають в якості контролю, а в іншу послідовно з інтервалом у 10 хв. додають по 0,02 мл трилону Б, сироватки розведеної 1 мл стабілізатора і розчину азотнокислого срібла. Дослідну і контрольну пробірки розміщують поряд під опромінення штучним денним світлом (2-2,5 тис. люкс) впродовж 1 години. Потім до кожної пробірки додають по 1 мл стабілізатора і знімають криву оптичної щільності досліду відносно контролю в діапазоні 360-500 нм з шагом в 1-2 нм. Якщо крива має лінійну залежність, тобто піки оптичної щільності відсутні, результат вважається негативним, що свідчить про відсутність у обстежуваного злоякісного пухлинного росту. При появі піків оптичної щільності - результат розцінюється, як позитивний, тобто у обстежуваного з великою ймовірністю є злоякісне новоутворення. В чисельному вимірі результат тесту отримують або відніманням від значення оптичної щільності сироватки на вершині піка значення на 364 нм., якщо пік оптичної щільності з'являється в інтервалі 390-420 нм, або рівня оптичної щільності у його основі, якщо піки утворюються в подальшому діапазоні у межах 500 нм. При відсутності злоякісної пухлини показник тесту – від'ємне число, при її наявності - тест стає більше 0. Для кращого розуміння винаходу наводяться приклади конкретного виконання способу. Приклад 1 В лабораторію направлено 5 мл крові пацієнта К. з підозрою на злоякісну пухлину легенів. Шляхом центрифугування (1500 об./хв.) була отримана сироватка, по 0,2мл якої розлито у 2 пробірки. В кожну додано 2мл стабілізатору. В першу пробірку з інтервалом у 10хв. послідовно добавлено реагенти тест-системи -розчин трилону Б, розведена ліофілізована донорська сироватка і розчин азотнокислого срібла. Через годину після засвічування пробірок під штучним денним світлом, для гальмування реакції в кожну пробірку додано по Імл стабілізатора. За допомогою спектрофотометра Solar PV 1251C знята крива оптичної щільності дослідної сироватки відносно контролю в діапазоні 360 -500нм (фіг.5). Отримана крива має лінійну залежність, що свідчить про відсутність в організмі обстежуваного злоякісного пухлинного росту. Для спрощення розрахунків показники оптичної щільності множаться на 1000. Результат реакції обчислюється шляхом відніманням від величини оптичної щільності на 398 нм (0,0723х1000-72,3) її значення на 364 нм (0,0868х1000=86,8) і становить (-11,8). Після дообстеження і хірургічного лікування остаточний діагноз хворого - ехінокок правого легеня. Приклад 2 Пацієнтка Ф. звернулась для обстеження за методом CST з профілактичною метою. Враховуючи, що вона звернулась у другій половині дня перед закриттям лабораторії, приїхала з іншого міста і не могла здати кров наступного ранку, бо мала їхати додому, було вирішено взяти кров і отримати сироватку, а тест провести наступного дня. Сироватка була заморожена до -25 С. Вранці її розморозили і провели реакцію CST згідно технології попереднього патенту. Д364=0,032, Дmах400-410=0,041 9 77549 10 нм, що свідчить про наявність у сироватці хворої Д max 400 410 0,041 Дрез. 13 , КБК. Результат реакції обчислюється шляхом Д364 0,032 відніманням від величини оптичної щільності на Коефіцієнт склав 1,3, що свідчило про 400 нм (0,0612х1000=61,2) її значення на 364 нм наявність у обстежуваної злоякісного пухлинного (0,0529х1000=52,9) і становить (8,3). Після дообросту. стеження у хворої знайдено рак тіла матки. Враховуючи відсутність скарг і молодий вік (27 Приклад 4 років) обстежуваної, вирішено зробити додаткове В лабораторію надійшло Юмл крові хворого обстеження за методом "Онкотест-2". С., у якого при рентгенологічному обстеженні виЗалишки сироватки по 0,2 мл в двох пробірках явлена пухлина правої нирки. Отриманої кількості розвели двома мл стабілізатора у кожній. Одну сироватки було достатньо, щоб зробити обстепробірку залишили в якості контролю, а в іншу ження за методом CST. Після проведення реакції послідовно з інтервалом у 10 хв. додали реактиви згідно технології попереднього винаходу і тест-системи: по 0,02 мл трилону Б, донорської фотометрії на апараті КФК-2, отримано наступний сироватки розведеної 1 мл стабілізатора і розчину результат: азотнокислого срібла. Дослідну і контрольну Д364=0,058, Дmах400-410=0,057 пробірки опромінювали штучним денним світлом Д max 400 410 0,057 (2-2,5 тис. люкс), впродовж 1 години. Потім до Дрез. 0,98 Д364 0,058 кожної пробірки додали по 1 мл стабілізатора і за допомогою спектрофотометра Solar PV 1251C Згідно попереднього винаходу CST, результат зняли криву оптичної щільності досліду відносно тесту менший за одиницю враховується, як негаконтролю в діапазоні 360-500 нм із шагом в 1 нм. тивний. Вирішено перевірити отримані данні і зро(Фіг.6). бити обстеження за методом "Онкотест-2". Отримана крива має лінійну залежність. РеЗалишок сироватки по 0,2мл в кожну пробірку, зультат реакції обчислюється шляхом відніманням розвели 2мл стабілізатора і послідовно з від величини оптичної щільності на 400 нм інтервалом у 10хв. в дослідну пробірку добавили (0,0452х1000-45,2) її значення на 364 нм по 0,02мл кожного реактива тест-системи. Після (0,0498х1000=49,8) і становить (-4,6). При конодногодинного опромінення штучним денним трольному обстеженні цієї ж самої пацієнтки через світлом у кожну пробірку добавили по 1 мл рік показник становив (-4,8). стабілізатора і за допомогою спектрофотометра Приклад 3 Solar PV 1251C зняли криву оптичної щільності Пацієнтка Л. звернулась для профілактичного досліду відносно контролю в діапазоні 360-500 нм обстеження ризику виникнення онкологічного заз шагом в 1 нм. (Фіг.8). хворювання. В родині у матері і її сестри були Отримана крива оптичної щільності має пік на злоякісні пухлини статевих органів. Жінка - з 40 кг 395нм, який не міг бути виявлений за методикою надлишкової ваги. Вдалося взяти тільки 2мл крові CST. Оптична щільність піка дорівнює 0,0599, а на із вени. Після центрифугування отримано 0,5мл 364нм - 0,0582. Для спрощення розрахунків велисироватки, по 0,2мл якої розлито у 2 пробірки. В чини оптичних щільностей множимо на 1000 і від кожну додано 2мл стабілізатору. В першу пробірку щільності піка віднімаємо щільність на 364нм: 59,9 з інтервалом у 10хв. послідовно добавлено реа-58,2 = 1,7. Тобто результат тесту позитивний, що генти тест-системи - розчин грилону Б, розведену свідчить про наявність у хворого злоякісної пухлиліофілізовану донорську сироватку і розчин азотни. нокислого срібла. Через годину після засвічування Після операції, результат гістологічного пробірок під штучним денним світлом, для гальмудослідження пухлини -світлоклітинний рак нирки. вання реакції в кожну пробірку додано по Імл З метою вивчення діагностичних можливостей стабілізатора. За допомогою спектрофотометра винаходу "Онкотест-2", в якості методу скринінгу Solar PV 1251C знята крива оптичної щільності злоякісних пухлин нами проаналізовані результати дослідної сироватки відносно контролю в діапазоні використання способу при обстеженні пацієнтів, 360 - 500нм (фіг.7). що звернулись до лабораторії в продовж 2002р. Спектрограма утворює 2 піки - на 400 і на 470 Таблиця 2 Данні про скринінг онкологічних захворювань з використанням методу "Онкотест-2" Контингент обстежуваних Практично здорові люди Вагітні Хронічні запальні захворювання Гострі запальні захворювання Аутоіммуні захворювання Ендокринні захворювання Доброякісні пухлини Злоякісні пухлини до лікування Число обстежуваних 12 4 91 3 6 35 58 25 ІН 12 3 83 2 2 29 51 Результати ІП ПП ПН 1 8 1 4 6 7 20 5 11 77549 12 Продовження табл.2 Число обстежуваних Контингент обстежуваних ІН 17 Результати ІП ПП 11 Онкологічні хворі після радикальних операцій (III кл. гр.) Хворі з рецидивами та метастазами Інші, не онкологічні захворювання 13 25 Загалом: 289 6 11 23 21 6 ПН 2 2 31 35 7 Діагностична інформативність способу визначалась за Таблицею 2 [Власов В.В.: Эффективность диагностических исследований // М. "Медицина", 1988, 200стр.]. Таблиця 3 Позитивний (+) Позитивний(+) Істино позитивний (ІП) Негативний(-) Помилково негативний(ПН) Результат онкотеста Чутливість ІП/(ІП+ПН) Отримані результати наведені в таблиці 4. Запропонований спосіб стосовно до раніше відомих має переваги, які полягають: - у можливості зберігати сироватку обстежуваного протягом 3-х діб до проведення реакції, - у зниженні в 10 разів мінімального об'єму необхідної для дослідження сироватки, - у створенні уніфікованої і стандартизованої тест-системи "Онкотест-2" з тривалим терміном зберігання, за рахунок дрібного розподілу (по 1 мл) і ліофільному висушуванню донорської сироватки крові, у зменшенні кількості помилок в результатах тесту завдяки: а) введенню в сироватку до початку прове Негативний (-) Прогностичність Помилково позипозитивного ретивний (ПП) зультату (П+) ІП/ІП+ПП)( Прогностичність Істино негативнегативного рений(ІН) зультату (П-) ІН/(ПН+ІН) Поширеність Специфічність (ІП+ПН)/(ІП+ПП+П ІН/(ПП+ІН) Н+ІН) дення реакції і після опромінення зразків стабілізуючого розчину, б) використанню як реактиву тест-системи донорської сироватки, діагностична ефективність якої попередньо перевірена в онкологічних і інших хворих, в) аналізу не фіксованих показників оптичної щільності сироватки, а широкого діапазону видимого спектру (360 -500нм). З позиції теорії статистичних рішень [Файнзильберг Л.С. К вопросу о полезности диагностических методов в задачах скрининга // Управляющие системы и машины. 2002.-№6. - с. 10-17.], а також даних національного канцер-реєстру України (Бюлетень національного канцер-реєстру України №4 // 2003.-httpV/www.i.com.uaA^ucr), було доведено, що скринінгове обстеження за методом "Онкотест-2", для ранньої діагностики раку є корисним у віковій категорії від 45 до 65. років. Таких людей в Україні нараховується 18 млн. Тому запропонований спосіб визначення злоякісного пухлинного росту в організмі людини під назвою "Онкотест-2" є ефективним і може бути покладений в основу Національної Програми зниження смертності від онкологічних захворювань. 13 77549 14 15 77549 16 17 Комп’ютерна верстка М. Клюкін 77549 Підписне 18 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601