Косметичний крем

Реферат: UA 83294 U UA 83294 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель, що заявляється, належить до галузі косметики, зокрема до засобів для догляду за шкірою, та може бути використана для отримання косметичних кремів, які сприяють омолоджуванню шкіри людини, розгладженню зморшок, відновленню нормального стану шкіри, зокрема її вологості, пружності, міцності, еластичності, природного кольору та гладкості. Відомі численні косметичні засоби, які поліпшують зовнішній вигляд шкіри. Зокрема відомі косметичні засоби, застосування яких дозволяє накопичувати та утримувати у клітці вологу, що на деякий час усуває або запобігає сухості та втраті еластичності шкіри. Відомі косметичні засоби, що містять антиоксиданти, які зв'язують вільні радикали, що утворюються у шкірі, або перешкоджають утворенню нових, це у результаті призводить до запобігання протікання реакцій, які нещадно відображаються на нормальному стані клітини. Наприклад, відомі препарати, які як антиоксиданти містять аскорбінову кислоту або вітамін Е (Holck David E.E., John D. Ng. Facial skin rejuvenation. Curr Opin in Ophthalmol 14:249). Також відомі косметичні засоби, що містять речовини, наприклад ретиноїди (Holck David E.E., John P. N. Facial skin rejuvenation, Curr Opin in Ophthalmol 14:248), які стимулюють активність фібробластів та синтез нових колагенових волокон у дермі, а також мітотичну активність та оновлення клітин в епідермісі, що призводить до зниження товщини рогового шару, збільшення товщини зернистого шару шкіри та поліпшення структури шкіри. Недоліками відомих косметичних засобів є те, що вони як правило дають лише незначний ефект стосовно поліпшення деяких функцій шкіри та її зовнішнього вигляду, не впливаючи при цьому на процеси старіння клітин шкіри та забезпечення її життєдіяльності. В основу корисної моделі поставлено задачу створення косметичного крему, до складу якого входять тільки компоненти рослинного походження, як активний інгредієнт, так і основа, комплексна дія якого спрямована на омолоджування шкіри людини, розгладження зморшок, відновлення нормального стану шкіри, зокрема її вологості, пружності, міцності, еластичності, природного кольору та гладкості. Оптимізація впливу косметичних засобів на шкіру прямо залежить від глибини проникнення їхніх молекул у шарі кожної тканини. Серед біологічно активних інгредієнтів, які самі здатні проникати крізь мембрану клітин та впливати на усі шари шкіри - епідерміс, дерму та гіподерму, найбільш перспективними, з точки зору винахідників, є поліпептиди рослинного походження. Отже, поставлена задача вирішується шляхом розробки нового косметичного крему, який містить активний компонент та носій, де активний компонент складається з біологічно активних поліпептидів рослинного походження молекулярної маси від 1 до 98 кДа, а носій являє собою основу рослинного походження, при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: активний компонент - 5-40, носій - решта. Передумовами створення косметичного засобу рослинного походження є дослідження імунної системи рослин, яка складається з поліпептидів малої молекулярної маси. Такі поліпептиди розпізнаються імунною системою людини як "свої", у порівнянні з поліпептидами тваринного походження, що засвоюються організмом людини тільки частково. Механізм дії зазначених поліпептидів до кінця ще не вивчений, але деякі закономірності в структурі та механізмі їх дії вже відомі. Доведено, що більшість таких пептидів взаємодіють із клітинною мембраною клітин епідермісу, дерми та гіподерми, точніше, із подвійним ліпідним шаром мембрани та рецепторами-білками на мембрані завдяки ліганд-ліганд взаємодії. Значну роль відіграє той факт, що поліпептиди завжди несуть позитивний заряд, а на поверхні ліпідного подвійного шару мембрани заряд негативний. Незважаючи на те, що кожний шар шкіри людини, зокрема епідерміс, дерма та гіподерма, відіграє свою захисну та спеціальну функцію, до того ж має суттєві відмінності один від одного щодо складу та структури, поліпептиди, які формують активний компонент косметичного засобу, благотворно впливають на всі ці шари шкіри. Зокрема вплив косметичного засобу на зовнішній шар епідермісу полягає у підтримці активності та життєдіяльності спеціальних ліпідів, які охоплюють кожну клітину зовнішнього шару епідермісу, блокують вологу та не дозволяють їй випаровуватися, що сприяє збереженню вологості та пружності кожної клітини епідермісу. Оскільки функціонально дерма відіграє найбільш важливу роль у стані шкіри людини, необхідно також мати інструмент впливу на цей шар та його складові: колаген, волокна еластину, сальні залози. Поліпептиди, що входять до складу косметичного засобу, сприяють активному формуванню колагену, що складається з амінокислот, які входять до складу поліпептидів, завдяки чому забезпечується міцність та пружність з'єднувальної тканини людини. Оскільки з віком (у середньому після 25 років) виробництво фібробластами власного колагену помітно знижується, що приводить до дистрофії колагенових волокон, а це у свою чергу відбивається на стані шкіри 1 UA 83294 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 - зниження пружності шкіри, поява зморшок, погіршення кольору шкіри, то внесення до шкіри людини додаткового "будівельного матеріалу" у вигляді поліпептидів, значно поліпшує продуктивність та активність фібробластів. Аналогічну дію косметичний засіб надає й волокнам еластину, які забезпечують еластичність волокон з'єднувальної тканини людини. Також експериментально визначено вплив косметичного засобу на гіподерму, яка забезпечує основу та підтримку епідермісу та дермі, відіграє роль амортизатора для зовнішніх шарів шкіри. Несподівано було знайдено, що використання рослинних поліпептидів малих розмірів, молекулярна маса яких знаходиться у діапазоні від 1 до 98 кДа, значно підвищує біологічний вплив препарату на всі шари шкіри людини. Даний факт пояснюється тим, що малі молекули легше транспортуються в тканини організму, а також мають більшу тропність до лігандної взаємодії з мембранними рецепторами. До того ж, ці малі активні пептиди діють у дуже малих (нано- та піко-) концентраціях. Зрозуміло, що для підвищення впливу активного компонента на шкіру людини, необхідно забезпечити транспортування його без втрати активності до всіх шарів шкіри. За думкою винахідників, розрахунки яких підтверджені експериментально, найбільш придатним носієм є носій рослинного походження. Саме такі носії ефективно доставляють поліпептиди, що входять до складу активного інгредієнта, до усіх необхідних куточків шкіри людини. Створений косметичний засіб у вигляді комплексу рослинного походження своєю ефективною дією сприяє омолоджуванню шкіри людини, розгладженню зморшок, відновленню нормального стану шкіри, зокрема її вологості, пружності, міцності, еластичності, природного кольору та гладкості. У результаті дослідження великої кількості рослин з метою використання їх для формування активного компонента косметичного засобу несподівано було знайдено, що на кінцеву ефективність активного компонента впливають тільки розміри біологічно активних поліпептидів рослинного походження, зокрема молекулярною масою від 1 до 98 кДа. Тобто, "частинки" будьякої рослини у вигляді поліпептидів зазначеної молекулярної маси, незалежно від індивідуальних властивостей рослини, формували активний компонент з визначеною вище ефективністю. Це стосувалося як відомих лікарських рослин, так й рослин, які ніколи не використовувалися у фармацевтиці з лікувальною метою. Експериментальним шляхом було знайдено, що доцільно використовувати основу, яка містить інгредієнти рослинного походження, вибрані з групи, що складається з буферних агентів, желеутворюючих агентів, стабілізаторів, консервантів, ароматизаторів тощо. Наведені нижче фігури ілюструють дослідження складу та властивостей косметичного засобу, що заявляється. Фіг. 1 - діаграма розділення поліпептидів препарату в 10 % ПААГ; Фіг. 2, 3 - зображення фрагмента шкіри пацієнтки до та після застосування косметичного крему; Фіг. 4, 5 - зображення фрагмента шкіри пацієнтки до та після застосування косметичного крему; Фіг. 6, 7 - зображення фрагмента шкіри пацієнтки до та після застосування косметичного крему. Способи отримання поліпептидів з рослинної сировини відомі з рівня техніки. Зокрема відомий спосіб може містити такі етапи: стерилізація, промивання, висушування, подрібнення до порошкоподібного стану, екстрагування, фільтрування. Зокрема для отримання активного компонента косметичного засобу за корисною моделлю, що заявляється, та контролю молекулярної маси поліпептидів, що входять до його складу може бути використаний наступний відомий спосіб: - вихідну сировину рослинного походження промивали у воді протягом 1 години; - промиту сировину висушували у сушарці протягом 30 хвилин; - отриману сировину змішували з фізіологічним розчином та екстрагували; - отриманий екстракт обробляли на центрифузі протягом 4 годин при швидкості 5000 об/хв.; - фільтрували з використанням фільтрів з розміром личка не більше за 0,2 мкм; - отриману сировину змішували з фізіологічним розчином та екстрагували; - отриманий фільтрат обробляли на центрифузі протягом 4 годин при швидкості 5000 об/хв.; - фільтрували з використанням фільтрів з розміром личка не більше за 0,2 мкм; - отриманий фільтрат ліофілізували при температурі -70 °С протягом 48 годин. 2 UA 83294 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Після отримання препарату, що містить біологічно активні поліпептиди рослинного походження, у вигляді ліофілізованого порошку, визначали поліпептидний склад даного препарату (також використовуючи відомі з рівня техніки способи). 1. З метою зменшення концентрації солей препарат розводили у забуферированому фізіологічному розчині (PBS) та пропускали через знесолюючу мікроцентрифужну колонку (Pierce) підготовлену згідно інструкції виробника. 2. Електрофоретичне розділення поліпептидів здійснювали на пластинках з 4,5 % концентруючим та 10 % розділюючим поліакриламідним гелем у присутності додецилсульфату натрію (SDS) в буферній системі Леммлі, згідно зі стандартною процедурою, з використанням камери Mini Protean 3 (Biorad). Електрофорез проводили при струмі 10 мА до и 30 мА після входження зразків до розділюючого гелю. 3. Отримані гелі відмивали від SDS 5 хвилин водою та фіксували протягом 10 хвилин у суміші 50 % метанолу, 10 % оцтової кислоти та 40 % води. Гелі фарбували протягом 1 години у такій самій суміші, яка додатково містила 0.2 % барвника Coomassie R-250. Фон у забарвлених гелях відмивали декількома змінами суміші 45 % метанолу, 10 % ацетату та 45 % води. Отримані гелі з видимими поліпептидними фракціями сканували за допомогою систем и документації гелів G:BOX (Syngene). 4. Аналіз суміші пептидів здійснювали за допомогою високоефективної рідинної хроматографії (HPLC) з наступною тандемною мас-спектрометрією мас з використанням LTQ FT ICR спектрометра мас (Hybrid-2D-Linear Quadrupole Ion Trap, Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer) (Thermo Electron Corp). Перед аналізом суміш піддавали стандартній процедурі відновлення 100 мМ ДТТ протягом 30 хвилин при температурі 56 °C, алкілування йодоацетамідом протягом 45 хвилин при кімнатній температурі в темряві, та часткового розщеплення модифікованим трипсином для секвенування (Promega) протягом ночі. Зразки, що додатково містили 0,1 % трифтороацетату (TFA) та 2 % ацетонітрилу (AcN), наносили на вхідну колонку RP-18 (LC Packings) з 0,1 % трифосфоацетатом та водою як рухомою фазою, а пізніше пропускали через нано-HPLC колонку RP-18 (nanoACQUITY UPLC ВЕНС18) в градієнті ацетонітрилу (0-60 % протягом 30 хвилин) у присутності 0,05 % форміату зі швидкістю 150 нл за хвилину. Вихід колонки був безпосередньо сполученим з джерелом іонів (ESI) спектрометра мас, який працював у режимі переключення між простою (MS) та тандемною (MS/MS) мас-спектрометрією у залежності від даних. Отримані вихідні дані перетворювали за допомогою програмного забезпечення Mascot Distiller та використовували для наступного пошуку за допомогою програмного забезпечення Mascot (Matrix Science) проти невиродженої бази даних NCBI. 5. Після електрофоретичного розділення препарату в гелях забарвлених Coomassie R-250 було знайдено декілька фракцій поліпептидів (фіг. 1). Препарат містить декілька мінорних фракцій поліпептидів з видимими молекулярними масами в межах від 1 до 98 кДа. Білкові фракції молекулярних мас нанесені не середній доріжці (М). 6. Також проводили LC-MS/MS аналіз поліпептидного складу препарату, який надав можливість одночасного визначення складу та амінокислотних послідовностей багатьох поліпептидів, які містяться у складній суміші. Дані зі спектрометра обробляли за допомогою спеціального програмного забезпечення Mascot (Matrix Science), що дало змогу визначити відомі білки та пептиди, які входили до складу препарату, а також невідомі пептиди, які, ймовірно, є частинами більш крупних поліпептидних молекул, інформація щодо яких відсутня у базі даних. Значну частину відомих поліпептидів складають різні додаткові білки рослин, наприклад легумін та/або легумін-подібні білки, запасні глобуліни, круциферин, глутелін, а також рослинні білки з ферментативною активністю, наприклад фосфоглицераткіназа, дегідрогеназа/редуктаза SDR, фруктозобисфосфатальдолаза, супероксиддисмутаза, малатдегідрогеназа, глутаматдегідрогеназа, бета-амілаза, гліоксалаза та інш. Результати LC-MS/MS аналізу показують, що препарат містить велику кількість поліпептидів рослинного походження з різними амінокислотними послідовностями. Приклад 1. Для виготовлення крему була розроблена емульгелева основа. До складу олійної фази (25 %) було введено тільки природні жири, воски та олії, які, крім формоутворюючої функції, самі забезпечують живильний ефект шкірі. Для забезпечення колоїдної та термостабільності емульсійної системи ми вибрали комплексний емульгатор (суміш емульгаторів І і ІІ-го роду) та розчин високомолекулярної речовини (ВМС) - натрію альгінату. Введення до складу водного дисперсійного середовища ВМС дозволяє підвищити стабільність емульсії при нижчій концентрації емульгаторів (негативна дія емульгаторів проявляється у зменшенні 3 UA 83294 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 епідермального бар'єру шкіри, а саме руйнуванні водно-ліпідної оболонки та рогових ліпідів епідермісу). Якісний склад основи: - Суміш жирних олій: абрикосова олія, олія проростків пшениці; - Віск рисових висівок (загущувач) - Віск трояндовий (загущувач) - Абрикосовий віск (загущувач) - Цетиловий спирт (емульгатор ІІ-го роду) - Олівем (напівсинтетичний емульгатор 1-го роду на основі оливкової олії) - Альгінат натрію (ВМС - стабілізатор гетерогенної системи) - Вода очищена (дисперсне середовище) До складу приготовленої основи вводили активний компонент у формі розчину: 1 мг активного компонента у вигляді ліофілізованого порошку розводили у 5 мл води для ін'єкцій; розчин емульгували з 95 ч основи та одержували 100 г засобу. Препарат розфасовували у 5 пластмасових баночок для кремів по 20 г. Кількість 20 г була передбачена для застосування протягом 5 днів. Дослідження тривало 20 днів, тому препарат готовили 4 рази. Для проведення 1-ої фази дослідження було вибрано 5 добровольців - жінки віком від 38 до 55 років. Протягом 20 днів жінки застосовували щоденно на ніч приготовлений крем. Через 2 місяці дослідження провели повторно (II фаза дослідження). Для об'єктивної оцінки ефективності крему обличчя жінок фотографували перед початком і на 21 день дослідження. Також суб'єктивно жінки оцінювали власні спостереження і відчуття від застосування засобу. Результати дослідження Жінки характеризували, що крем має належну консистенцію, середню жирність, добре всмоктується в шкіру; після 10-денного застосування спостерігали покращення кольору шкіри, зменшення розміру дрібних зморшок, підвищення еластичності шкіри. На фіг. 2-7 зафіксовано видимий ефект (розгладження зморшок) до і після експерименту. Приклад 2. В експерименті брали участь 20 жінок різних вікових груп (від 35 до 60 років) з різними типами шкіри. У всіх жінок відмічалися такі прояви старіння, як дряблість та зморшки, сухість, потоншення та провисання шкіри, фотопігментація. Усім пацієнткам було запропоновано використання як нічного косметичного засобу, косметичний крем за корисною моделлю, що заявляється, який вони наносили на шкіру обличчя один раз в день перед сном, протягом одного місяця (Спосіб виготовлення співпадає із способом виготовлення засобу за Прикладом 1). Вже на 20 день спостереження у всіх пацієнток зникла сухість шкіри, поліпшився колір шкіри та її еластичність. У всіх пацієнток відмічалося розгладження зморшок та и підтягування шкіри обличчя 10-15 %. Використання косметичного крему за корисною моделлю, що заявляється, можна розглядати як альтернативу хірургічному впливу. Жодна з пацієнток не скаржилася на появу будь-яких алергічних реакцій на використаний косметичний крем. Усім пацієнткам рекомендовано продовжити використання косметичного крему для подальшої оцінки його ефективності. Доцільно застосовувати косметичний крем за корисною моделлю, що заявляється, й жінкам у в період перед та після менопаузи, оскільки за рахунок зниження рівня естрогену шкіра потоншується, стає менш пружною та більш сухою, що приводить до збільшення кількості зморшок та провисанню шкіри. Висновки: В результаті багатьох клінічних досліджень була встановлена схожість дії поліпептидів з дією, яку має ботулінічний токсин, але на відміну від останнього, поліпептиди не паралізують м'язи та не порушують натуральну міміку обличчя, а м'яко подавляють та зменшують скорочення м'язів обличчя, що приводить до їхнього розслаблення, запобігає формуванню нових мімічних зморшок та сприяє розгладженню зморшок, що вже існують, та тонких ліній. Додатковою перевагою косметичного крему з таким складом є також той факт, що його можна наносити на будь-які ділянки тіла. Отже, косметичні засоби на основі поліпептидів: - Підвищують захисні функції шкіри, стійкість клітин до кисневого голодування та дії токсинів, допомагають підтримувати необхідну активність клітинних систем, що приводить до кращого захисту шкіри від шкідливого впливу факторів зовнішнього середовища. 4 UA 83294 U 5 10 15 20 - Укріплюють контур обличчя, поліпшують його колір та тонус шкіри, укріплюють волокна колагену та еластину, стимулюють його синтез, що приводить до зменшення існуючих зморшок та надає шкірі підтягнутий, пружній та здоровий вигляд. - Мають антиоксидантний вплив та сповільнюють процеси старіння в організмі. - Впливають на функціональну активність шкіри в критичних умовах. Навіть в самих агресивних умовах зовнішнього середовища, за допомогою поліпептидів в шкірі підтримується необхідне співвідношення зрілих, активних клітин та клітин, що діляться, а також здоровий клітинний метаболізм. Шкіра адекватно адаптується до умов навколишнього середовища, що змінюються, та зберігає активність усіх своїх функцій. - Запускають процеси поновлення та відновлення шкіри на клітинному рівні, запускають активність генів, які відповідають за поділ клітини, тобто за поновлення та самовідновлення клітин шкіри. - Сприяють відновленню мікроциркуляції в тканинах шкіри та укріплюють стінки судин, що дозволяє поліпшити кровообіг та живлення шкіри. - Укріплюють фолікули волос та стимулюють їх зростання. - Поліпептиди не викликають виробляння антитіл, що зводить до мінімуму можливість алергічних реакцій на активні компоненти косметичних засобів. Згідно з отриманими даними, можна зробити висновок, що косметичний крем, який заявляється, може використовувати в косметології для поліпшення зовнішнього вигляду шкіри людини. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 30 1. Косметичний крем, що містить активний компонент та носій, який відрізняється тим, що активний компонент складається з біологічно активних поліпептидів рослинного походження молекулярної маси від 1 до 98 кДа, а носій являє собою основу рослинного походження, при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: активний компонент 5-40 носій решта. 2. Крем за п. 1, який відрізняється тим, що основа містить інгредієнти рослинного походження, вибрані з групи, яка складається з буферних агентів, желеутворюючих агентів, стабілізаторів, консервантів, ароматизаторів тощо. 5 UA 83294 U 6 UA 83294 U Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 7