Застосування композиції, яка містить вірусоподібні частинки hpv16 і hpv18 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції і/або хвороби, спричиненої групою hpv онкогенних типів, способи індукування імунної

1. Застосування композиції, яка містить вірусоподібні частинки (ВПЧ) HPV16 і ВПЧ HPV18 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції і/або хвороби, спричиненої групою HPV онкогенних типів, вибраних з наступного переліку: а. гр упа типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68; b. гр упа HPV31, HPV33, HPV35, HPV52 та HPV58; c. гр упа HPV31, HPV35 і HPV58; d. HPV31; e. HPV45; та f. HPV52. 2. Застосування за п. 1, яке відрізняється тим, що ВПЧ HPV комбінують з ад'ювантом. 3. Застосування за п. 2, яке відрізняється тим, що ад'ювантом є комбінація солі алюмінію і 3D MPL. UA (21) a200505919 (22) 18.12.2003 (24) 26.01.2009 (86) PCT/EP2003/014562, 18.12.2003 (31) 60/435,035 (32) 20.12.2002 (33) US (31) 60/496,653 (32) 20.08.2003 (33) US (46) 26.01.2009, Бюл.№ 2, 2009 р. (72) ДУБІН ҐЕРІ, ІННІС БРЮС, СЛАУІ МОНСЕФ МОХАММЕД, ВЕТТЕНДОРФФ МАРТІН АНН СЕСІЛЬ (73) ҐЛАКСОСМІТКЛАЙН БАЙОЛОДЖІКАЛЗ С А (56) BALSLEY JF ET AL: "Progress in the development of human papillomavirus vaccines for HPV-11 and HPV-16/18 and mapping of a critical neutralizing epitope." 18TH INTERNATION AL PAPILLOMAVIRUS CONFERENCE 2000, [Online] 2000, Піднято з Internet: [retrieved on 2004-05-03]. HPV Clinical Workshop & 20th International Papillomavirus Conference 2002, October 4-9, Paris, Institut Pasteur. Villa-L et al., A dose-ranging safety and immunogenicity study of a quadrivalent HPV (type 6/11/16/18) L1 VLP vaccine in women. BASS E: "Progress in the Search of a vaccine against human papilloma virus" IAVI REPORT OCTOBER/NOVEMBER 2002, [Online] 10 October 2002 (2002-10-10. Піднято з Internet: [retrieved on 2004-04-21]. Brown-DR et al., A dose-ranging study of the safety and immunogenicity profiles of a quadrivalent HPV (types 6, 11, 16, and 18) L1 VLP candidate vaccine in younghealthy women. ABstr O-51 19th International Papillomavirus Conference, Sept-2001, Florianopolis, Brazil. COMBITA ALBA-LUCIA ET AL: "Identification of two cross-neutralizing linear epitopes within the L1 major capsid protein of human papillomaviruses." JOURNAL OF VIROLOGY. UNITED STATES JUL 2 (19) 1 3 85377 4 4. Застосування за п. 3, яке відрізняється тим, що ад'ювантом є комбінація гідроксиду алюмінію і 3D MPL. 5. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів, яке відрізняє ться тим, що ВПЧ є L1 ВПЧ. 6. Застосування за п. 5, яке відрізняється тим, що композиція містить в 0,5 мл дозі 20 мкг ВПЧ HPV16 L1 та 20 мкг ВПЧ HPV18 L1 та ад'ювант, який складається з 500 мкг гідроксиду алюмінію та 50 мкг 3D MPL. 7. Спосіб індукування імунної реакції проти однієї або кількох груп онкогенних типів HPV за п. 1, який включає введення пацієнту композиції, що містить ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18. 8. Спосіб профілактики інфекції і/або хвороби, спричиненої однією або кількома групами онкогенних типів HPV за п. 1, який включає введення пацієнту композиції, що містить ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18. 9. Спосіб за будь-яким з пп. 7-8, який відрізняється тим, що композиція додатково містить ад'ювант. 10. Спосіб за п. 9, який відрізняє ться тим, що ад'ювант включає сіль алюмінію і 3D MPL. Винахід стосується вірусоподібних часток (ВПЧ) вірусу папіломи людини (HPV) і його використання у медицині, зокрема, у захисті проти інфекції і/або захворювання, викликаних гетеролопчним вірусом типу HPV Папіловіруси є малими ДНК-вірусами пухлини, які є високоспецифічними за типом На сьогодні були описані більше 100 індивідуальних генотипів папіловірусу людини Віруси HPV є звичайно специфічними до шкіри (наприклад, HPV1 і HPV2) або слизових поверхонь (наприклад, HPV6 і HPV11) і звичайно викликають доброякісні пухлини (бородавки), які залишаються на декілька місяців або років Такі злоякісні пухлини можуть бути неприємними для особи, але, за незначними винятками, не загрожують життю. Деякі віруси HPV, відомі як онкогенні типи HPV, пов'язані з раками Найсильніший позитивний зв'язок між HPV і раком у людини існує між HPV16 і HPV18 і раком шиї матки, який є найчастішою злоякісністю у країнах що розвиваються, з приблизно 500000 нових випадків у світі кожного року. Іншими вірусами HPV, які викликають інтерес, пов'язаний з раком, є віруси типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 і 68. Вірус HPV, як і його частки (ВПЧ), були запропоновані як потенційні вакцини для лікування від HPV Досліди на тваринах показали, що ВПЧ не дає перехресного захисту проти інфікування іншими типами HPV [див, наприклад, Suzich J.A., et al. Proc Natl Acad Sci, 92 11553-11557,1995, і Breitburd, Seminars in Cancer Biology, vol.9, 1999, pp.431-445]. Отже, існує потреба у вакцині для захисту від багатьох типів HPV. Задачею винаходу є задовольнити цю вимогу. Згідно з першим аспектом, винахід стосується використання суміші ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18 для профілактики інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше вірусами групи онкогенних HPV, виключаючи типи 16 і 18. Винахід також стосується використання суміші ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18 у приготування медикаменту для профілактики інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше вірусами групи онкогенних HPV, виключаючи типи 16 і 18. Згідно з другим аспектом, винахід стосується використання суміші ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18 для профілактики інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше HPV з групи типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Винахід також стосується використання суміші ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше вірусами HPV3 групи типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Згідно з третім аспектом, винахід стосується використання ВПЧ HPV16 у профілактиці інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше HPV з групи типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Винахід також стосується використання ВПЧ HPV16 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше HPV з групи типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Згідно з четвертим аспектом, винахід стосується використання ВПЧ HPV18 у профілактиці інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше HPV з групи типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Винахід також стосується використання ВПЧ HPV18 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції або хвороби, спричиненої одним або більше HPV з групи типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. 11. Спосіб за п. 10, який відрізняється тим, що сіллю алюмінію є гідроксид алюмінію. 12. Спосіб профілактики у популяції суб'єктів інфекції, спричиненої однією або більше групами онкогенних типів HPV за п. 1, який включає введення пацієнту композиції, що містить ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18, причому введення цієї композиції забезпечує профілактику інфекції та/або хвороби щонайменше на 15 % кращу, ніж введення плацебо. 13. Вакцинна композиція, яка включає ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18 і забезпечує перехресний захист проти інфекції і/або хвороби, спричиненої групою онкогенних типів HPV, за винятком типів HPV16 і HPV18. 5 85377 Зокрема, винахід стосується способу індукування імунної реакції проти одного або більше типів HPV, вибраних з групи, що складається з усіх онкогенних ракових типів, виключаючи типи 16 і 18, який включає введення пацієнту композиції, що містить ВПЧ HPV16. Бажаним є спосіб індукування імунної реакції проти одного або більше типів HPV, вибраних з групи, що складається з HPV31, HPV33, HPV35, HPV52 і HPV58. Найбільш бажаним є спосіб індукування імунної реакції проти одного або більше типів HPV, вибраних з групи, що складається з HPV31, HPV35 і HPV58. В іншому втіленні композиція, що використовується у способі, містить ВПЧ HPV18 і/або ад'ювант. У ще одному втіленні індукована імунна реакція забезпечує профілактику інфекції переліченими вище типами HPV. У ще одному втіленні винахід стосується способу індук ування імунної реакції проти одного або більше типів HPV, вибраних з групи, що складається з усіх онкогенних ракових типів, виключаючи типи 16 і 18, який включає введення пацієнту композиції, що містить ВПЧ HPV16. Бажаним є спосіб індукування імунної реакції проти одного або більше типів HPV, вибраних з групи, що складається з типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 і 68. Бажаним є також спосіб індукування імунної реакції проти одного або більше типів HPV, вибраних з групи, що складається з HPV45 і HPV58. В іншому втіленні композиція, що використовується згідно з цим способом, містить ВПЧ HPV18 і/або ад'ювант. У ще одному втіленні композиція, що використовується згідно з цим способом, містить ВПЧ HPV18 і/або ад'ювант. В іншому втіленні індукована імунна реакція забезпечує профілактику інфекції переліченими вище типами HPV. Бажаним є описаний вище спосіб, згідно з яким імунна реакція індукується проти будь-якого з вірусів типів 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 або 12 визначених індивідуальних груп (згідно з розміром бажаної групи). Було несподівано виявлено, що застосування ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18 дає перехресний захист проти інфекції однією або більше HPV з груп онкогенного типу, виключаючи типи 16 і 18 (до онкогенного типу належать віруси, здатні спричиняти рак). Група онкогенних типів включає типи або складається з типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, 82, 26, 53 і 66. Зокрема, застосування ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18 забезпечує перехресний захист проти інфекції і/або хвороби, спричиненої HPV з групи типів 31, 33, 35, 39,45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 і 68, які дали називатимемо групою "типів високого ризику раку". Були визначені особливості захисту проти всієї групи типів високого ризику раку і проти певних конкретних типів і комбінацій типів. Ефект полягає у доданні до "гомологічного" захисного ефекту проти HPV16 і HPV18 дії ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18, відповідно. Як такі, ВПЧ HPV16 і ВПЧ HPV18 можуть бути використані проти HPV16, HPV18 і інших типів HPV. Перехресний захист означає, що гострота інфекції для групи HPV онкогенних типів (інфекція може бути тимчасовою або стійкою)) і/або онкогенної хвороби, спричиненої інфекцією HPV є ниж 6 чою у гр упі осіб, вакцинованих HPV16 і/або 18 ВПЧ, бажано, типів 16 і 18, ніж у невакцинованій групі. Повний перехресний захист проти типу або групи типів не розглядається у винаході; будь-який рівень перехресного захисту є корисним. Бажаним рівнем перехресного захисту є такий, який дає у вакцинованій групі 5%-не зниження інфекції і/або хвороби порівняно з невакцинованою групою, більш бажано мати зниження інфекції і/або хвороб на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90% або навіть до 100%. Перехресний захист можна оцінювати виявленням присутності нуклеїнової кислоти, специфічної до різних онкогенних типів у вакцинованих і контрольних групах. Таке виявлення можна здійснити, наприклад, використовуючи методи, описані у WO 03014402, і посилання у цьому документі стосовно, зокрема, неспецифічної ампліфікації ДНК HPV і подальшого виявлення типів ДНК з використанням системи LіPA, описаної у WO 99/14377 і у Kleter et al, [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517], повний зміст яких включено у цей опис посиланням. Для виявлення ДНК HPV у зразку можна застосовувати будь-який метод, наприклад, використання затравки, специфічної до кожного типу HPV, що досліджується. Придатні затравки відомі фахівцям або можуть бути легко побудовані, якщо відомими є послідовності HPV онкогенних типів. Перехресний захист зручно спостерігати у жіночих популяціях, бажано, у жінок, серонегативних до інфекції HPV або серонегативних до HPV16 і 18, бажано, спостерігаючи досексуальну активність дівчат-підлітків. Перехресний захист (оцінений через захист, спостережений у вакцинованій групі порівняно з контрольною групою) бажано спостерігати, порівнюючи з будь-яким одним онкогенним типом, відмінним від типів 16 або 18, з будь-якою групою типів високого ризику раку, а саме, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 або 68, або, колективно з такими групами типів високого ризику раку, як будь-який з типів 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 або 11, або з усіма типами високого ризику раку. Всі можливі комбінації типів 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 і 11 високого ризику раку є вартими дослідження і, як такі, існують різні відмінні одна від одної "групи" індивідуалізованих тут типів ВПЧ, для яких рівень перехресного захисту може бути аналізований у порівнянні з групою плацебо. Бажано використовувати HPV16 і/або ВПЧ HPV18 для профілактики Інфекції HPV будь-якою такою групою типів HPV. Згідно з винаходом, перехресний захист проти інфекції і/або хвороби забезпечується такими бажаними групами типів HPV: А - група, що включає один або більше типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. В - група згідно з А, яка включає HPV типу 31 і один або більше HPV типів 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. С - група згідно з В, яка включає HPV типу 31 і один або більше HPV типів 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. 7 85377 D - група згідно з А-С, яка включає HPV типу 35 і один або більше HPV типів 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Ε - група згідно з А-D, яка включає HPV типу 39 і один або більше HPV типів 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. F - гр упа згідно з А-У, яка включає HPV типу 45 і один або більше HPV типів 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. G - гр упа згідно з А-F, яка включає HPV типу 51 і один або більше HPV типів 52, 56, 58, 59, 66, 68. Η - група згідно з А-G, яка включає HPV типу 52 і один або більше HPV типів 56, 58, 59, 66, 68. І - група згідно з А-Н, яка включає HPV типу 56 і один або більше HPV типів 58, 59, 66, 68. J - гр упа згідно з А-І, яка включає HPV типу 58 і один або більше HPV типів 59, 66, 68. К - група згідно з А-J, яка включає HPV типу 59 і один або більше HPV типів 66, 68. L - група згідно з А-К, яка включає HPV типу 66 і HPV типу 68. Зокрема, було виявлено, що у популяції частота інфікування групи плацебо щонайменше однією з груп типів високого ризику раку була на 38% вищою, ніж у жінок, вакцинованих вакциною, що містила ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18. Отже, винахід стосується, зокрема, використання композиції, що містить ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18, для профілактики у популяції інфекції одним або більше типами високого ризику раку. Бажано, щоб композиція була щонайменше на 20% більш ефективною, ніж плацебо, у профілактиці у популяції інфекції групою, що складається з типів високого ризику раку, бажано, щонайменше на 25% більше ефективною, більш бажано, щонайменше на 30% більш ефективною, краще щонайменше на 34%, найкраще щонайменше на 38% більш ефективною у профілактиці інфекції. Винахід стосується використання композиції, яка, бажано, включає ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18, у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції одним або більше HPV типів 31, 33, 35, 52 і 58. Було виявлено, що у популяції частота інфікування групи плацебо щонайменше однією з груп типів 31, 33, 35, 52 і 58 була на 43% вищою, ніж у жінок, вакцинованих вакциною, що містила ВПЧ HPV16 і 18. Отже, винахід стосується, зокрема, використання композиції, що містить ВПЧ HPV16 і 18, для профілактики у популяції інфекції одним або більше типами HPV31, 33, 35, 52 і 58. Бажано, щоб композиція була щонайменше на 10% більш ефективною, бажано, щонайменше на 15% більш ефективною, більш бажано, щонайменше на 20% більш ефективною, краще щонайменше на 25%, найкраще щонайменше на 30% або щонайменше на 37%, або щонайменше на 43% більш ефективною у профілактиці інфекції. Винахід стосується використання композиції, яка, бажано, включає ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції одним або більше HPV типів 31, 35 і 58. Було також виявлено, що у популяції частота інфікування групи плацебо щонайменше однією з груп типів 31, 35 і 58 була на 58% вищою, ніж у 8 жінок, вакцинованих вакциною, що містила ВПЧ HPV16 і 18. Отже, винахід стосується, зокрема, використання композиції, що містить ВПЧ HPV16 і 18, для профілактики у популяції інфекції одним або більше типами HPV 31, 35 і 58. Бажано, щоб композиція була щонайменше на 20% більш ефективною, ніж плацебо у профілактиці у популяції інфекції типами HPV 31, 35 і 58, більш бажано, щонайменше на 25% більше ефективною, краще щонайменше на 30%, найкраще щонайменше на 35% або щонайменше на 40%, або щонайменше на 45%, або щонайменше на 49%, або щонайменше на 55% або більше, більш ефективною у профілактиці інфекції. Винахід стосується використання композиції, яка, бажано, включає ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції одним або більше HPV типів 45 і 49. Було, зокрема, виявлено, що у популяції імовірність інфікування групи плацебо щонайменше однією з груп типів 45 і 49 була на 58% вищою, ніж у жінок, вакцинованих вакциною, що містила ВПЧ HPV16 і 18 Отже, винахід стосується, зокрема, використання композиції, що містить ВПЧ HPV16 і 18 для профілактики інфекції у популяції одним або більше типами HPV 45 і 49. Бажано, щоб композиція була щонайменше на 20% більш ефективною, ніж плацебо, у профілактиці інфекції у популяції типами HPV 45 і 49, більш бажано, щонайменше на 30% більше ефективною, найкраще щонайменше на 33% більш ефективною у профілактиці інфекції. Винахід стосується також способу профілактики Інфекції HPV у популяції, де вакцинація ВПЧ HPV16 ВПЧ HPV18 або їх сумішшю забезпечує перехресний захист проти інфекції такими групами типів HPV всі онкогенні типи HPV (виключаючи типи 16 і 18) будь-яка з груп, визначених у п.п.Α-L вище, гр упа типів високого ризику раку, група HPV31, 35, 58, група HPV31, 33, 35, 52, 58, група HPV 45 і 59. Захист проти всіх членів гр упи колективно перевищує захист, спостережений з плацебо. Бажано, щоб композиція, що містить ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18, забезпечувала перехресний захист проти щонайменше однієї інфекції HPV 35 і HPV 52. Бажано, щоб композиція, що містить ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18, забезпечувала перехресний захист проти щонайменше однієї інфекції HPV16 і HPV18 Винахід також стосується використання ВПЧ HPV16 у профілактиці інфекції однією або більше групами типів, бажано, групою, яку складають HPV типів 31, 33, 35, 52, 58, або групою, яку складають HPV типів 31, 35, 58. Винахід також стосується використання ВПЧ HPV16 у приготуванні медикаменту для профілактики інфекції однією або більше групами типів високого ризику раку, бажано, групою, яку складають HPV типів 31, 33, 35, 52, 58, або групою, яку складають HPV типів 31, 35 і 58. Винахід також стосується використання ВПЧ HPV18 у профілактиці інфекції однією або більше 9 85377 групами типів високого ризику раку, бажано, групою, яку складають HPV типів 45 і 59. ВПЧ HPV16 винаходу можна використовувати без ВПЧ будь-яких інших типів HPV і використовувати у комбінації з ВПЧ будь-яких інших типів HPV Бажано використовувати ВПЧ HPV16 у комбінації з ВПЧ HPV18. Бажано використовувати ВПЧ HPV16, ВПЧ HPV 18 і їх комбінації для забезпечення захисту проти індивідуальних онкогенних типів, бажано, проти типів високого ризику раку, зокрема, HPV типів 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. На додаток до забезпечення перехресного захисту бажано використовувати імуногенну композицію винаходу, найкраще комбінацію ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18, для активної імунізації дорослих жінок і дівчат-підлітків, починаючи з віку 10р., для профілактики однієї або більше інфекцій HPV16 і HPV18, стійкої інфекції HPV16 і HPV18 і асоційованої з HPV16 і HPV13 неоплазії шийки матки. Бажано використовувати імуногенну композицію згідно з винаходом для профілактики неоплазії шийки матки, асоційованої з інфекцією іншими (не HPV16, 18) онкогенними типами. ВПЧ HPV і способи отримання ВПЧ є добре відомими ВПЧ звичайно будують з структурних протеїнів L1 і, як варіант, L2 вірусу [див, наприклад, WO 9420137 і WO 9405792]. Будь-яка ВПЧ HPV згідно з винаходом може бути використана для забезпечення перехресного захисту, наприклад, ВПЧ L1 або L1+L2. Бажано використовувати ли ше ВПЧ L1. ВПЧ може включати протеїн L1 повної довжини. Для формування ВПЧ бажано використовувати усічений протеїн L1. Бажано, щоб усіканням був видалений сигнал локалізації ядра. Бажано, щоб усікання було усіканням С-терміналу. Бажано, щоб С-термінальне усікання видаляло менше 50 амінокислот, більш бажано, менше 40 амінокислот. У випадку, коли ВПЧ є ВПЧ HPV16, бажано, щоб усікання С-терміналу видаляло 34 амінокислот з L1 HPV16. У випадку, коли ВПЧ є ВПЧ HPV18 бажано, щоб усікання С-терміналу видаляло 35 амінокислот з L1 HPV16. Усічені протеїни L1 є зручними функціональними похідними протеїну L1. Функціональні похідні протеїну L1 здатні підвищувати імунну реакцію (якщо необхідно, з придатними ад'ювантами), причому така імунна реакція здатна розпізнавати ВПЧ, складену з протеїну L1 повної довжини і/або типу HPV, від якого походить протеїн L1 ВПЧ згідно з винаходом можуть також включати інші типи функціональних похідних протеїну, включаючи таких мутантів протеїнів HPV, усічених або повної довжини, як мутанти стирання, заміщення або введення. Придатні похідні включають також оптимізовані послідовності кодонів. Протеїн L1 або його похідна може бути також злитим протеїном, наприклад, одержаними злиттям протеїнів L1 і L2 або раннім протеїном. Протеїн L1 або його функціональна похідна можуть утворювати ВПЧ, а утворення ВПЧ може бути оцінене стандартними методами, наприклад, електронною мікроскопією і динамічним лазерним розсіюванням світла. 10 ВПЧ можна отримати у будь-якому клітинному субстраті, приготовленому, наприклад, з клітин дріжджів або комах, або, наприклад, з бакуловірусних клітин. Процедури приготування ВПЧ є добре відомими [див. WO 9913056 і US 6 245 568 і посилання у них, повний зміст яких включений посиланням]. ВПЧ бажано будува ти методами демонтажу і повторного складання, які можуть дати більш стабільні і/або гомогенні ВПЧ папіловірусу [див., наприклад, McCarthy et al, 1998 "Quantitative Disassembly and Reassembly of Human Papillomavirus Type 11 Virus-like Particles in Vitro", J. Virology 72(1): 33-41], де описано демонтаж і повторне складання ВПЧ рекомбінантного L1 HPV11, отриманої з клітин комах для приготування ВПЧ. У WO 9913056 і US 6 245 568 також описано демонтаж і повторне складання для приготування ВПЧ HPV. Бажано приготовляти ВПЧ HPV згідно з винаходом, як це описано у WO 9913056 або US 6 245 568. ВПЧ винаходу можна комбінувати з ад'ювантом. Вакцини згідно з винаходом можуть містити придатний ад'ювант або імуностимулятор, наприклад (але без обмеження), детоксикований ліпід будь-якого походження, нетоксичні похідні ліпіду А, сапоніни, і інші реагенти, здатні стимулювати реакцію типу ТН1. Було відомо, що ентеробактеріальний ліпополісахарид (LPS) є потужним стимулятором імунної системи, хоча його використання в ад'ювантах було обмеженим внаслідок його токсичності. Нетоксична похідна LPS, монофосфорилліпід (MPL), який отримують видаленням карбогідратної групи ядра і фосфату з кінцевого глюкозаміну, була описана у Ribi et al. [1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ Corp., NY, p.407-419] і, згідно з цим описом, має таку стр уктуру: Ще однією детоксикованою версією MPL, яку отримують видаленням ацильного ланцюга у позиції 3 дисахаридного стрижня, є 3-Одеацилований монофосфорилліпід (3D-MPL). Його можна очистити і приготувати методами, описаними у GB 2122204В, посилання в якому стосуються 11 85377 приготування дифосфорилліпіду А і його 3-Одеацилованих варіантів. Бажаною формою 3D-MPL є емульсія малих часток діаметром менше 0,2мкм; спосіб її виготовлення описаний у WO 94/21292. Водні композиції з монофосфорилліпідом і ПАВ були описані у WO 9843670 А2. Ад'юванти з бактеріальними ліпополісахаридами для використання у композиціях згідно з винаходом можна очистити і обробити за допомогою бактеріальних джерел або синтезувати. Наприклад, очищений монофосфорилліпід був описаний у Ribi et al., 1986 (supra), а 3-О-деацилований монофосфорил- або дифосфорилліпід з Salmonella sp. були описані у GB 2220211 і US 4 912 094. Інші очищені і синтетичні ліпополісахариди були описані у Hilgers et al, 1986, Int.Arch.Allergy.Immunol, 79(4):392-6; Hilgers et al, 1987, Immunology, 60(l): 141-6; і ЕР 0 549 074 B1), зокрема, бажаним бактеріальним ліпополісахаридним ад'ювантом є 3DMPL. Відповідно, похідними LPS, які можуть бути використані згідно з винаходом, є імуностимулятори, подібні за структурою LPS або MPL або 3DMPL. Згідно з іншим аспектом винаходу, похідними LPS можуть бути ациловані моносахариди, які є частиною згаданої вище стр уктури MPL. Сапоніни були описані у Lacaille-Dubois, Μ. and Wagner H. [1996, review of the biological і pharmacological activities of saponins, Phytomedicine vol.2, pp.363-386]. Сапоніни є стероїдними або тритерпеновими глікозидами, широко розповсюдженими у рослинах і морських тваринах. Сапоніни можуть утворювати колоїдні розчини у воді, які піняться при струшуванні, і давати в осаді холестерол. Поблизу клітинних мембран сапоніни створюють пористі структури у мембрані, які викликають вибухання мембрани. Прикладом цього явища є гемоліз еритроцитів, який є властивістю сапонінів (не всіх). Сапоніни є відомими як ад'юванти у вакцинах для системного введення. Ад'ювант і гемолітична активність сапонінів були детально вивчені у роботі Lacaille-Dubois and Wagner, supra). Наприклад, Quil А. (отриманий з кори південноамериканського дерева Quil-laja Saponaria Molina) і його фракції були описані у US 5 057 540 і у "Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, С R., Crit Rev TherDrug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2): 1-55; і ЕР 0 362 279 B1. Часткові структури, відомі як імуностимулювальні комплекси (ISCOMS), які містять фракції Quil, є гемолітичними і були використані у приготування вакцин [Могеіп, В., ЕРО 109 942 В1; WO 96/11711; WO 96/33739]. Гемолітичні сапоніни QS21 і QS17 (фракції Quil А, очищені хроматографією) були описані як потужні системні ад'юванти, а способи їх виготовлення були описані у патенті США No 5 057540 і ЕР 0 362 279 В1. Інші сапоніни, що були використані при дослідженні системних вакцин, включають ті, що були отримані з інших видів рослин, наприклад, Gypsophila і Saponaria [Bomford et al., Vaccine, 10(9): 572-577, 1992]. Удосконалена система включає комбінацію нетоксичної похідної ліпіду і похідну сапоніну, зокрема, комбінацію QS21 і 3D-MPL [див. WO 12 94/00153] або менш реактогенну композицію, в якій QS21 гаситься холестеролом [WO 96/33739]. Особливо потужною бажаною ад'ювантною композицією з QS21 і 3D-MPL є масляно-водна емульсія, описана у WO 95/17210. Відповідно, одним з втілень винаходу є вакцина з ад'ювантом детоксикованим ліпідом або нетоксичною похідною ліпіду А, бажано, з ад'ювантом монофосфорилліпідом або його похідною. Бажано, щоб вакцина додатково містила сапонін, найкраще, QS21. Бажано, щоб композиція додатково включала масляно-водну емульсію. Винахід також включає спосіб приготування вакцинної композиції з сумішшю пептиду L2 згідно з винаходом і фармацевтично прийнятного наповнювача, наприклад, 3DMPL. Додатковими компонентами, які бажано включати у вакцинну композицію з ад'ювантом, можуть бути, наприклад, октоксиноли і описані тут поліетиленові естери, зокрема, tоктилфеноксиполіетоксиетанол (Triton X-100) і моноолеат поліоксиетиленсорбітану (Tween 80); і похідні солей жовчної або холінової кислот, зокрема, деоксихолат або тауродеоксихолат натрію. Отже, бажані композиції включають 3D-MPL, Triton X-100, Tween 80 і деоксихолат натрію, які можна комбінувати з препаратом антигену L2 для отримання бажаної вакцини. В одному з бажаних втілень винаходу вакцина містить везикулярну ад'ювантну композицію, яка включає холестерол, сапонін і похідну LPS. Відповідно, бажана ад'ювантна композиція містить одношарову везикулу, яка включає холестерол з ліпідним подвійним шаром, який, бажано, містить диолеоїлфосфатидилхолін, а сапонін і похідна LPS зв'язані з ліпідним подвійним шаром або заглиблені у нього. Більше бажано, щоб ці ад'ювантні композиції включали QS21 як сапонін і 3D-MPL як похідну LPS, причому відношення ОБ21:холестерол має становити від 1:1 до 1:100 (маса/маса), найкраще, 1:5 (маса/маса). Такі композиції були описані у ЕР 0 822 831 В, включеному посиланням. Вакцини згідно з винаходом доцільно використовувати у комбінації з алюмінієм, при цьому вони повністю або частково абсорбуються в алюмінієві ад'юванти. Бажаним ад'ювантом є алюмінієва сіль, бажано, у комбінації з 3D MPL, наприклад, фосфат алюмінію і 3D MPL. Можна також застосувати гідроксид алюмінію з 3D MPL. Згідно з винаходом, найбільш бажаною є комбінація ВПЧ з алюмінієвою сіллю або з алюмінієвою сіллю + 3D MPL. Бажаною алюмінієвою сіллю є гідроксид алюмінію. Вакцин може також містити алюміній або сполуку алюмінію як стабілізатор. Вакцини винаходу можна вводити пацієнту різними шляхами, наприклад, орально, локально, підшкірно, через слизову (звичайно внутрішньовагінально), внутрішньовенно, внутрішньом'язово, через ніс, під'язично, черезшкірно і супозиторієм. Як варіант, вакцину можна також компонувати або вводити сумісно з іншими антигенами HPV, наприклад, з раннім антигеном або антигенами не 13 85377 HPV. Останні можуть забезпечити захист від інших хвороб, переважно таких, що передаються статевим шляхом, наприклад, симплекс-вірусу герпесу, EBV, хламідії і ВІЛ. Зокрема, бажано, щоб вакцина містила gD або її відрізок від HSV. Завдяки цьому вакцина надасть захист як проти HPV, так і проти HSV. Дози компонентів вакцини залежать від стану, статі, віку і маси пацієнта, шляху введення пацієнту і типу HPV Кількість також залежить від кількості типів ВПЧ. Доцільно вводити пацієнту вакцину у кількості, достатній для створення імунологічної захисної реакції. Доза вакцини має становити 1100мкг, бажано, 5-80мкг, більше бажано, 5-30мкг, найбільш бажано, 5-20мкг, найкраще 5, 6, 10, 15 або 20мкг кожної ВПЧ. Всі вакцини винаходу бажано використовувати для вакцинації дівчат-підлітків віком 10-15, бажано, 10-13р. Вакцини можна також вводити жінкам, в яких виявлено абнормальний мазок або після хірургічної операції видалення, спричиненого HPV, або таких, що є серонегативними і ДНКнегативними для ракових типів HPV. Бажано вводити вакцину у 2- або 3-дозовому режимі, наприклад, у 0-, 1-місячному режимі або у 0- ,1- і 6-місячному режимі, відповідно. Бажано, щоб режим вакцинації включав підтримуючі ін'єкції через 5-10 років, бажано, 10 років. Бажаною формою вакцини є рідка композиція, хоча вакцину можна ліофілізувати і відновити перед введенням. Бажано, щоб імуноген згідно з винаходом (ВПЧ HPV16 і або HPV18) при використанні як вакцину застосовували у вигляді композиції вакцини з наповнювачем. Отже, винахід, зокрема, стосується використання вакцини HPV16 або HPV18, наприклад, такої, як вакцина лише L1 для профілактики Інфекції НРV. Приклад 1 Здорові жінки віком 15 і 25р. були імунізовані сумішшю ВПЧ L1 HPV16 і HPV18. Ці жінки були: 1) серонегативні для HPV16 і HPV18; 2) негативні для високого ризику інфекції HPV шийки матки (виявлено за допомогою PCR HPV); 3) мали протягом життя не більше 6 статевих партнерів і 4) нормальний мазок РАР. Суміш містила на 0,5-мілілітрову дозу 20мкг ВПЧ L1 HPV16, 20мкг ВПЧ L1 HPV18 і була ад'ювантована 500мкг гідроксиду алюмінію і 50мкг 3D MPL. Гр упа плацебо одержала ін'єкцію 500мкг гідроксиду алюмінію. Ефективність вакцини (Е.В.) проти типів HPV високого ризику раку оцінювали як поліпшення Е.В. (%%) захисту проти інфекції вакциною порівняно з групою плацебо. Перехресний захист оцінювали через виявлення наявності нуклеїнової кислоти, специфічної 14 для різних онкогенних типів у вакцинованих і контрольних група х. Для виявлення використали процедури, описані у WO 03014402 і посиланнях у ньому, зокрема, для неспецифічного підсилення ДНК HPV з подальшим виявленням типів ДНК з використанням системи LiPA, описаної у WO 99/14377 і у Kleter et al., [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517], зміст яких включено посиланням. Для виявлення ДНК HPV, однак, можна застосува ти будь-який метод, наприклад, специфічний до типу PCR, з використанням затравок, специфічних для кожного типу HPV, що досліджується. Придатні затравки відомі фахівцям і можуть бути легко отримані, якщо відомими є послідовності онкогенних типів HPV. Ефективність вакцини оцінювали проти інфекцій всіма 12 типами високого ризику раку, філогенетично пов'язаними типами HPV16 (31, 35, і 58; 31, 33, 35, 52 і 58) і філогенетично пов'язаними типами HPV18 (45 і 59). Початковий аналіз проводили на "ІТТ" (Намір обробляти гіпотетичну когорту, що репрезентує всіх осіб, що одержали щонайменше одну дозу вакцини). Ці дані наведені у табл.1. Результати, наведені у табл.2, 3 стосуються "АТР" (Згідно з протоколом) групи для тих пацієнтів, що відповідали всім критеріям досліду. Табл.2 містить дані проміжного аналізу, одержані від усіх пацієнтів тоді, коли для щонайменше 50% когорти пройшло 18 місяців після першої вакцинації. Табл.3 містить кінцеві результати від пацієнтів на 18-му місяці після першої вакцинації (місяць 0). У групі АТР всі пацієнти отримали 3 дози вакцини на 0-му, 1-му і 6-му місяцях І були серенегативними на 6-му місяці. Дані табл.1 показують, що імунізація сумішшю ВПЧ HPV16 і ВПЧ НР18 забезпечує перехресний захист проти інших типів HPV. На цій стадії розміри зразків є занадто малими для точного статистичного аналізу, однак дані показують позитивну тенденцію і дозволяють припустити, що імунізація HPV16 і ВПЧ HPV18s є ефективною проти інфекцій іншими типами HPV. Все це було підтверджене у процесі досліду. Табл.2 показує, що HPV16 і HPV18 забезпечують статистично значущий перехресний захист проти групи типів високого ризику раку 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 і 68. Табл. З показує, що, за винятком типів, прив'язаних з HPV18 (які показують дуже помітну тенденцію) існує статистично значущий перехресний захист проти групи HPV31, 35, 58; групи HPV31, 33, 35, 52, 58; і 12 типів високого ризику раку (відмінних від HPV16/18). 15 85377 16 Таблиця 1 Аналізовані типи HPV HPV31, 35, 58 HPV31, 33, 35, 52, 58 HPV45, 59 HPV31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 Ефективність % інфі% інфі- вакцини (%): Кількість кованих 95%-й 95%-й Кількість кованих інфікованих 1-(А/В)×100, довірчийдовірчий інфікованих жінок жінок з корекцією жінок (груінтервал інтервал Ρ жінок (гру- (група (група на відносний па плаце(ниж. (верхня па вакцини) вакциплацебо розмір груп бо) межа) межа) ни) = А =В вакцини і плацебо 5 1,1 11 2,4 55,1 -29,1 84,4 0,127 17 3,8 24 5,4 30,3 -29,7 62,6 0,252 3 0,7 6 1,3 50,6 -97,7 87,6 0,309 27 6,3 Зразки були отримані від пацієнтів на 9-му, 12му, 15-му і 18-му місяцях і випробувані на Інфікування типами HPV, визначеними вище. 40 9,4 34,6 -6,5 59,9 0,086 Таблиця 2 - ефективність вакцини після трьох доз у профілактиці тимчасових гетеролопчних інфекцій Таблиця 2 Ефективність вакцини проти інфекції типами, філогенетично пов'язаними з HPV16, типами, філогенетично пов'язаними з HPV18, типами, філогенетично пов'язаними з HPV16 і/або HPV18, і всіма типами високого ризику, виключаючи HPV16 і HPV18 - когорта АТР (місяць 6-18) Тип інфекції пов’язаний з HPV16 пов'язаний з HPV16 пов'язаний з HPV16 пов'язаний з HPV16/18 пов'язаний з HPV16/18* високий ризик Швидкість нападу Вакцина Плацебо N n AR Ν n AR 433 12 2,8 438 24 5,5 423 29 6,9 423 46 10,9 442 9 2,0 449 16 3,6 433 21 4,9 438 41 9,4 423 34 8,0 423 56 13,2 385 53 13,8 386 88 11,8 N - кількість осіб певної когорти n - кількість осіб тимчасово інфікованих HPV AR - швидкість нападу (n/Ν) 95% СІ - 95%-й довірчий інтервал нижня межа =1-exp(log(arv/arp)+1,96*sqrt(1/nv-1/Nv+1/np-1/(Np+0,5)) верхня межа =1-exp(log(arv/arp)-1,96*sqrt(1/nv1-/Nv+1/np-1/(Np+0,5)) якщо кількість випадків у вакцині =0: нижня межа* =1-exp(log(arv*/arp*)+1,96*sqrt(1/nv-1/Nv+1/np-1/(Np+0,5)) верхня межа* =1-exp(log(arv*/arp*)-1,96*sqrt(1/nv-1/Nv+1/np-1/(Np+0,5)) де arv - швидкість нападу у реципієнтів інфекції аrр - швидкість нападу у реципієнтів плацебо nν - кількість випадків у реципієнтів інфекції Νν - кількість випадків і їх відсутності у реципієнтів інфекції nр - кількість випадків у реципієнтів плацебо Ефективніст вакцини % 49,4 37,0 42,9 48,2 39,3 39,6 95% 0,2 1,6 -27,9 13,8 9,0 17,7 СІ 74,4 59,6 74,5 68,9 59,5 55,7 p 0,060 0,052 0,223 0,012 0,019 0,001 Νp - кількість випадків і їх відсутності у реципієнтів плацебо пов'язані з НРV16: філогенетично пов'язані з HPV16 типи 35, 31, 58, без урахування інших типів HPV пов'язані* з НРV16: філогенетично пов'язані з HPV16 типи 35, 31, 58, 33, 52, без урахування інших типів HPV пов'язані з НРV18: філогенетично пов'язані з HPV18 типи 45, 59, без урахування інших типів HPV пов'язані з HPV16 і/або НРV18: філогенетично пов'язані з HPV16 і/або HPV18 типи 35, 31, 58, 45, 49, без урахування інших типів HPV пов'язані* з HPV16 і/або НР\/18:філогенетично пов'язані з HPV16 і/або HPV18 типи 35, 31, 58, 33, 52, 45, 49, без урахування інших типів HPV ** - типи високого ризику, виключаючи HPV16 і HPV18. 17 85377 18 Таблиця 3 % інфі% інфіПовна кільКількість Кількість кованих інфікованих кованих кість пацієнАналізовані тів з наявноюінфікованих жінок жінок (гру- жінок типи HPV жінок (гру- (група (група інформацією па плацепа вакцини) вакцини) плацена групу бо) =А бо) = В HPV31, 35, 58 HPV31, 33, 35, 52 HPV 45, 59 HPV31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, Ефективність вакцини (%): 1-(А/В)×100, з корекцією на відносний розмір груп вакцини і плацебо 95%-й 95%-й довірчий довірчий інтервал інтервал (нижня (верхня межа) межа) Ρ 412 11 2,7 26 6,3 57,9 15,9 78,9 0,012 403 28 6,9 48 12,2 43,0 11,0 63,5 0,015 421 10 2,4 15 3,6 33,5 -46,3 69,8 0,319 368 58 15,8 90 25,3 37,7 16,2 53,6 0,002 Зразки були отримані від пацієнтів на 9-му, 12-му, 15-му і 18-му місяцях і випробувані на Інфекцію типами HPV, визначеними вище. Комп’ютерна в ерстка А. Рябко Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601