Кон’югат еритропоетину, композиції, що його містять, та способи профілактики та/або лікування хвороб

1. Кон'югат, причому згаданий кон'югат включає глікопротеїн еритропоетину, який має як мінімум одну вільну аміногрупу та біологічну активність in vivo, яка полягає у тому, що згаданий глікопротеїн примушує клітини кісткового мозку до підвищення продукування ретикулоцитів та еритроцитів, і його вибирають з групи, до складу якої входять людський еритропоетин та його аналоги, які мають послідовність людського еритропоетину, модифіковану доданням від 1 сайту до 6 сайтів глікозилування або перегрупуванням як мінімум одного сайту глікозилування, при цьому згаданий глікопротеїн є ковалентно зв'язаним з "n" полі(етиленглікольними) групами формули

-СО-(СН2)х-(ОСН2СН2)m -ОR,

де -CO кожної полі(етиленглікольної) групи утворює амідний зв'язок з однією зі згаданих аміногруп; де

R - нижчий алкіл,

х дорівнює 2 або 3,

m становить від приблизно 450 до приблизно 900,

n дорівнює 1-3  та

n та m вибирають таким чином, що молекулярна маса згаданого кон'югату без врахування глікопротеїн еритропоетину становить від 20 кілодальтонів до 100 кілодальтонів.

2. Кон'югат за п. 1 формули:

P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n, (І)

де х, m, n та R відповідають визначенню, яке було наведено у п. 1, та Р - залишок глікопротеїну без n аміногрупи (аміногруп), яка утворює амідний зв'язок (зв'язки) зі згаданою полі(етиленглікольною) групою (групами).

3. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, де R - метил.

4. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, де m становить від приблизно 650 до приблизно 750.

5. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, де n - 1.

6. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, де R - метил; m становить від приблизно 650 до приблизно 750; та n - 1.

7. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, який має формулу

[СН3О(СН2СН2O)mСН2СН2СН2СО-NН]n-Р,

де m становить від 650 до 750, n - 1 та Р відповідає визначенню, яке було наведено у пункті 2.

8. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, де згаданим глікопротеїном є людський еритропоетин.

9. Кон'югат за будь-яким з попередніх пп. 1-7, де згаданий глікопротеїн людського еритропоетину експресується активацією ендогенного гена.

10. Кон'югат за будь-яким з попередніх пп. 1-9, де згаданий глікопротеїн має послідовність, представлену в SEQ ID NO:1.

11. Кон'югат за будь-яким з попередніх пп. 1-8, де згаданий глікопротеїн має послідовність людського еритропоетину, модифіковану доданням від 1 сайту до 6 сайтів глікозилування.

12. Кон'югат за будь-яким з попередніх пп. 1-11, де згаданий глікопротеїн має послідовність людського еритропоетину, модифіковану модифікацією, яку вибирають з групи, до складу якої входять:

Asn30Thr32,

Asn51Thr53,

Asn57Thr59,

Asn69,

Asn69Thr71,

Ser68Asn69Thr71,

Val87Asn88Thr90,

Ser87Asn88Thr90,

Ser87Asn88Gly89Thr90,

Ser87Asn88Thr90Thr92,

Ser87Asn88Thr90Ala162,

Asn69Thr71Ser87Asn88Thr90,

Asn30Thr32Val87Asn88Thr90,

Asn89lle90Thr91,

Ser87Asn89lle90Thr91,

Asn136Thr138,

Asn138Thr140,

Thr125  та

 Pro124Thr125.

13. Кон'югат за будь-яким з попередніх пп. 1-12, де згаданий глікопротеїн має послідовність, яка включає послідовність людського еритропоетину, та другу послідовність на карбокси-кінцевій ділянці згаданої послідовності людського еритропоетину, де згадана друга послідовність включає як мінімум один сайт глікозилування.

14. Кон'югат за п. 13, де згадана друга послідовність включає послідовність, яку було одержано з карбокси-кінцевої послідовності людського хоріонічного гонадотропіну.

15. Кон'югат за п. 13, де згаданий глікопротеїн має послідовність, яку вибирають з групи, до складу якої входять:

(a) послідовність людського еритропоетину та послідовність, представлена в SEQ ID NO:3 на карбокси-кінцевій ділянці згаданої послідовності людського еритропоетину;

(b) послідовність (а), модифікована Ser87Asn88Thr90 та

(c) послідовність (а), модифікована Asn30Thr32Val87Asn88Thr90.

16. Кон'югат за будь-яким з пп. 1-7, де згаданий глікопротеїн має послідовність людського еритропоетину, модифіковану перегрупуванням як мінімум одного сайту глікозилування.

17. Кон'югат за п. 16, де згадане перегрупування включає делецію будь-яких N-зв'язаних сайтів глікозилування людського еритропоетину та додання N-зв'язаного сайту глікозилування у положенні 88 послідовності людського еритропоетину.

18. Кон'югат за п. 17, де згаданий глікопротеїн має послідовність людського еритропоетину, модифіковану модифікацією, яку вибирають з групи, до складу якої входять:

Gln24Ser87Asn88Thr90,

 Gln38Ser87Asn88Thr90   та

Gln83Ser87Asn88Thr90.

19. Композиція, до складу якої входять кон'югати, причому кожен зі згаданих кон'югатів включає глікопротеїн еритропоетину, який має як мінімум одну вільну аміногрупу та біологічнуактивність in vivo, яка полягає у тому, що згаданий глікопротеїн примушує клітини кісткового мозку до підвищення продукування ретикулоцитів та еритроцитів, і його вибирають з групи, до складу якої входять людський еритропоетин та його аналоги, які мають послідовність людського еритропоетину, модифіковану доданням від 1 сайту до 6 сайтів глікозилування або перегрупуванням як мінімум одного сайту глікозилування, при цьому згаданий глікопротеїн у кожному згаданому кон'югаті є ковалентно зв'язаним з "n" полі(етиленглікольними) групами формули -CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, де -CO кожної полі(етиленглікольної) групи утворює амідний зв'язок з однією зі згаданих аміногруп, де у кожного зі згаданих кон'югатів R - нижчий алкіл, х дорівнює 2 або 3, m становить від приблизно 450 до приблизно 900, n дорівнює 1-3, та n та m вибирають таким чином, що молекулярна маса кожного кон'югату без врахування глікопротеїн еритропоетину становить від 20 кілодальтонів до 100 кілодальтонів; відсоток кон'югатів, де n - 1, дорівнює як мінімум дев'яноста відсоткам.

20. Композиція, до складу якої входять кон'югати  за будь-яким з пп. 1-18, де відсоток кон'югатів, у яких n - 1, дорівнює як мінімум дев'яноста відсоткам.

21. Композиція за пп. 19 або 20, де відсоток кон'югатів, у яких n - 1, дорівнює як мінімум дев'яноста двом відсоткам.

22. Композиція за п. 21, де відсоток кон'югатів, у яких n - 1, дорівнює як мінімум дев'яноста шести відсоткам.

23. Композиція за пп. 19 або 20, де відсоток кон'югатів, у яких n - 1, становить від дев'яноста відсотків до дев'яноста шести відсотків.

24. Фармацевтична композиція, до складу якої входить кон'югат або композиція за будь-яким з пп. 1-23 та фармацевтично прийнятний носій.

25. Використання кон'югату або композиції за будь-яким з пп. 1-23 для одержання медикаментів для лікування або профілактики хвороб, пов'язаних з анемією у пацієнтів з хронічною нирковою недостатністю (CRF), СНІДу та для лікування хворих на рак, які піддаються хіміотерапевтичним заходам.

26. Спосіб профілактики та/або терапевтичного лікування хвороб, включаючи анемію у пацієнтів з хронічною нирковою недостатністю (CRF), СНІДу та хворих на рак, які піддаються хіміотерапевтичним заходам, який включає етап введення пацієнту композиції за будь-яким з пп. 1-23.

27. Спосіб одержання сполук за будь-яким з пп. 1-23, який включає конденсування сполуки формули ІІ

(ІІ)

з глікопротеїном еритропоетину, де R, m та х відповідають визначенню за будь-яким з пп. 1-6.

28. Сполуки за будь-яким з пп. 1-3, одержані за допомогою способу за п. 27.

29. Сполуки за будь-яким з пп. 1-23 для лікування хвороб, пов'язаних з анемією у пацієнтів з хронічною нирковою недостатністю (CRF), СНІДу та хворих на рак, які піддаються хіміотерапевтичним заходам.