Штам гриба аsреrgіullus оснrасеus 740-продуцент охратоксину а

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма микромицета, который может быть использован для получения микотоксина охратоксина, необходимого как стандарта-свидетеля при определении содержания микотоксина методом тонкослойной, газожидкостной хроматографии и др. в кормах, пищевых продуктах, органах и тканях животных и биологических жидкостях в культурах грибов с целью диагностики и профилактики микотоксической нефропатии сельскохозяйственных животных. Известно использование штамма A.ochraceus методом культивирования на твердой рисовой питательной среде с добавлением 2% дрожжевого экстракта и 1% фенилаланина. Однако, этот штамм не обладает высокой токсиносбразующей активностью, при этом количество образуемого охратоксина А составляет 385608 мг/кг. Задача изобретения - получение нового штамма микромицета, обладающего повышенной продуктивностью микотоксина охратоксина А. Для решения этой задачи предлагается штамм гриба Aspergillus ochraceus 740, депонирован в коллекции грибов ВНИИ антибиотиков Минмедпрома СССР под номером 337А. Штамм выделен из корма используемого для животных. Видовая принадлежность определена по классификации Билай В.И., Коваль Э.М. Полученный штамм Aspergillus ochraceus Welhelm 740 имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики: На агаре Чапека колонии растут медленно и ограничено, 3,0-4,5см в диам., плоские, более или менее зональные. Базальный мицелий жесткий, погруженный, но в центре колонии приподнимающийся, пепёльножелто-оранжевый. Конидиальные головки при формировании шаровидные, но при старении распадаются на две-три компактные колонии, 750-800 мкм в диам., светло-охристо-коричневые, темно-желтые, желтокоричневые. Конидиеносцы 1-1,5мм дл., 10-14 мкм толщ., окрашенные в тускло-желтый бледно-коричневый цвет, с толстой до 2 мкм грубошероховатой оболочкой; апикальное расширение шаровидное, с тонкой оболочкой, бесцветное, обычно 30-50 мкм в диам. Стеригмы двухъярусные: базальные - обычно 15-20 х 5-6, иногда до 2,5 мкм, другого яруса - 7-11 х 2-3,2 мкм, плотно покрывающие апикальную часть. Конидии более или менее шаровидные, 2,5-3 мкм, мелкошероховатые, иногда кажутся гладкими. Склероции сначала белые до бледно-розовых, потом лавандовые до винно-пурпурного цвета при созревании, шаровидные до 1мм в диам., одиночные, группами, сливаются участками в сплошную массу, придавая колонии характерный вид. Реверзум желтый, зеленовато-коричневый. Экссудат бесцветный, прозрачный в небольшом количестве. Запах слабый, грибной. Хорошо растет на агаре Чапека и сусло агаре, естественных зерновых субстратах - пшенице, ржи, овсе, ячмене, кукурузе и др. На жидкой среде Чапека. Оптимальный рост гриба продуцента при температуре 30°-31°С, растет и при более высоких 42°С и низких температурах до 10°С. В качестве источников углерода хорошо усваивает глюкозу и сахарозу. Пример. Культивирование гриба с целью накопления охратоксина А. В матрацы емкостью 1000 см3 помещают по 100 г пшеницы, добавляют 80 см3 водопроводной воды, закрывают ватно-марлевой пробкой, обвязывают пергаментной бумагой и стерилизуют в автоклаве при 1 атм. 1 час. В качестве инокулюма используют 7-ми суточную культуру гриба Aspergillus ochraceus, штамм 740, выращенного при 30°С на агаре Чапека. Затем добавляют в пробирку 5 см стерильной водопроводной воды и пипеткой соскабливают мицелий с поверхности культуры, при этом тщательно перемешивая с водой элементы гриба. Полученную водную взвесь вносят в матрац со стерильной пшеницей, тщательно встряхивают и помещают в термостат при 30°С на 15 суток. По окончании культивирования нативную культуру обеззараживают автоклавированием в течение 20 мин при 0,5 атм. Содержание охратоксина А в нативной культуре определяют согласно "Методическим рекомендациям по определению охратоксина А и стеригматоцистина в зернофураже, продуктах его переработки и комбикормах" (Н.В.Волков, 1984). В пятнадцатисуточной культуре продуцент образовывая охратоксин А в количестве 1,5-2,1 г/кг.