Спосіб визначення оксигемоглобіну в еритроцитах

Изобретение относится к медицине, а именно, к гистохимическим методам исследования и может быть использовано в патоморфологии, гистохимии, кардиологии, токсикологии, судебной и космической медицине для диагностики анемий и нарушений кровообращения. Известен способ определения насыщения крови кислородом (см. В.С. Асатиани "Биохимическая фотометрия", М., 1957, с.679-684). заключающийся в спектрофотометрическом анализе исследуемой крови обработанной химическими веществами in vitro. Метод основан на последовательном спектрофотометрировании полученного из крови гемолизата, оксигемоглобина и восстановленного гемоглобина с последующим расчетом процента насыщения крови кислородом. Однако данный способ недостаточно информативен, т.к. невозможно определить уровень насыщения кислородом эритроцитов, находящи хся в сосудах того или иного участка органов и тканей. В основу изобретения поставлена задача создания способа определения оксигемоглобина в эритроцитах, в котором проводят цветную дифференцировку кислородсодержащих эритроцитов, находящихся в сосудистокапиллярном русле органов или биологических тканей на гистологических препаратах путем окрашивания гистологических срезов водным раствором цинковой соли триметинового реактива оксанольного класса химических соединений в кислой среде, в результате чего повышается информативность способа. Поставленная задача решается тем, что в способе определения оксигемоглобина в эритроцитах, заключающемся в обработке крови химическими веществами, проводят окраску гистологических срезов, фиксированных формалином в 0,05-0,7% водном растворе цинковой соли бис-{1-(4-сульфофенил)-3-карбоксипиразолон-5-триметиноксанина в присутствии соляной кислоты при pH=1-4 в течение 2-3 минут и при появлении красного окрашивания определяют наличие оксигемоглобина. Для осуществления способа готовят реактив содержащий следующие компоненты (мас.%). Цинковая соль бис-[1-(4-сульфофенил)-3-карбоксипиразолон-5]-триметиноксанина - 0,05-0,7; кислота соляная концентрированная - 0,5-0,7; вода дистиллированная -остальное. Криостатные или депарафинированные по общепринятым методикам срезы биологического материала инкубируют в приготовленном ранее средстве в течение 2-3 мин, затем дифференцируют в спиртах и заключают в канадский бальзам. На срезах четко определяются двояко окрашенные эритроциты, находящиеся в сосудистокапиллярном русле органов или тканей. Кислородосодержащие эритроциты приобретают красный цвет, а эритроциты не содержащие .кислород, связанный с гемоглобином, остаются естественно светло-желтого цвета. Способ иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Криостатные срезы толщиной 10 мм. полученные из биоптата легкого больного К, с подозрением на инфаркт -пневмонию в области Χ сегмента правого легкого инкубируют в средстве следующего соста ва, вес.%: в течение 2-х минут. При этом pH раствора был равен 1,2; затем срезы дифференцируют в спиртах и заключают в канадский бальзам по общепринятым методикам. В результате инкубации произошла гистохимическая реакция связывания оксигемоглобина в эритроцитах, что позволило установить диагноз сосудистой опухоли легкого. Таким образом, инфарктпневмония в области Χ сегмента легкого, подозреваемая клиницистами, подтверждена не была, так как в противном случае нами не обнаружилось бы кислородсодержащих эритроцитов зоны инфаркта. Пример 2. Депарафинированные срезы ткани легкого больной Н. с диагнозом дефект межжелудочковой перегородки с высокой легочной гипертензией инкубируют в средстве следующе го состава: в течение 3-х минут, при этом pH средства равен 1. Таким образом, предлагаемый способ может быть использован для: осуществления гистотопографической диагностики зон ишемии и инфарктов в паренхиматозных органах: сердце, легких, печени, почках, селезенке; в кардиологической патоморфологии для оценки аортокоронарного шунтирования и других хир ургических вмешательствах; в трансплантационной хирургии для оценки васкуляризации трансплантатов; в судебно-медицинской практике и токсикологии для диагностики отравлений цианидами, угарным газом и др. антиоксигемоглобиногенными веществами.