Мінеральне живильне середовище для культивування мікроконідій гриба trichophyton verrucosum

Мінеральне живильне середовище для культивування мікроконідій гриба Tnchophyton verrucosum, яке містить агар-агар, глюкозу, дистильовану воду, яке відрізняється тим, що середовище додатково містить пептон, калій Запропонований винахід відноситься до мікробіологи і стосується одержання нового живильного середовища для культивування Tnchophyton verrucosum, що може бути використано у ветеринарії та медицині для нагромадження мікроконідій гриба з метою створення імунізуючих препаратів проти трихофітозів тварин і людини Мінеральне живильне середовище використовують для культивування в лабораторних чи промислових умовах бактерій, грибів Усі середовища стерилізують у автоклаві Виробництво біологічних препаратів вимагає постійної уваги й удосконалювання Це стосується і засобів профілактики і лікування дерматомікозів тварин, у тому числі і трихофітм великої рогатої худоби, інших домашніх тварин Основою вакцин проти цього захворювання, що забезпечує и імуногенність, є живі мікроконідм Tnchophyton verrucosum Всі ІНШІ компоненти біомаси - міцелій, макроконідм, хламідоспори - не є носіями необхідної біологічної інформації Ефективність живих протитрихофітозних вакцин визначається вмістом мікроконідій Метою винаходу є збільшення КІЛЬКОСТІ життєздатних мікроконідій і підвищення специфічної імуногенної активності вакцини ДЛЯ КУЛЬТИВУВАННЯ видається під відповідальність власника патенту МІКРОКОНІДІИ ГРИБА фосфорнокислий одноосновний, калій хлористий, магній сірчанокислий, залізо сірчанокисле, марганець сірчанокислий, цинк сірчанокислий, при наступному співвідношенні компонентів, мас % глюкоза 18,0-20,0 пептон 2,0-5,0 калій фосфорнокислий одноосновний 2,0-4,0 калій хлористий 1,0-2,0 магній сірчанокислий 0,1-0,5 залізо сірчанокисле 0,1-0,5 марганець сірчанокислий 0,01-0,04 цинк сірчанокислий 0,01-0,03 агар-агар 0,01-0,03 дистильована вода решта до 100,0 Існує мінеральне середовище Чапека, що є загальновизнаним для культивування грибів Воно містить глюкозу, натрій азотнокислий, калій фосфорнокислий одноосновний, калій хлористий, магній сірчанокислий, залізо сірчанокисле, дистильовану воду ("Каталог сухих питательных сред, выпускаемых в СССР для медицинской бактериологии", М ,1980, в 1, с 14-15) Відоме також середовище Білай для культивування мікобактерій, що містить сахарозу, глюкозу, калій фосфорнокислий одноосновний, калій азотнокислий, калій хлористий, магній сірчанокислий, залізо сірчанокисле, крохмаль розчинний, дистильовану воду (Справлчник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования/Под ред МО Биргера, М Медицина, 1982, с 58 ) Формування на цих середовищах мікроконідій є дуже повільним, тому що відсутні в належній КІЛЬКОСТІ мінеральні речовини Недоліком цих середовищ, є те що, з погляду одержання достатньої КІЛЬКОСТІ мікроконідій при культивуванні Tnchophyton verrucosum на цих середовищах при глибинному способі вони значно уступають новому мінеральному живильному середовищу Крім того, при культивуванні Tnchophyton verrucosum на середовищах Чапека і (О (О ю 56647 новому мінеральному живильному середовищі дає можливість одержати більш 160млн мікроконідій у 3 см В основу винаходу, що передбачається, поставлено задачу розробити мінеральне живильне середовище що містить агар-агар, глюкозу шляхом додаткового введення пептона, калія фосфорнокислого одноосновного, калія хлористого, магнія сірчанокислого, заліза сірчанокислого, марганцю сірчанокислого, цинку сірчанокислого щоб забезпечити збільшенння мікроконідій та скоротити строки культивуваня гриба Tnchophyton verrucosum, 5 для підвищення ростових властивостей при використанні мінерального живильного середовища Склад мінерального живильного середовища для одержання мікроконідій Tnchophyton verrucosum глюкоза-18,0-20,0 пептон - 2-5 калій фосфорнокислий одноосновної - 2,0 - 4,0 калій хлористий -1 ,0 - 2,0 магній сірчанокислий - 0,1 - 0,5 залізо сірчанокисле - 0,1 - 0,5 марганець сірчанокислий - 0,01 - 0,04 Для готування живильного сусло-агарового цинк сірчанокислий - 0,01 - 0,03 середовища стерильне нехмільне пивне сусло агар-агар - 0,01 - -,03 розводять водопровідною або дистильованою дистильована вода -100,0 водою до змісту 7-8% вуглеводів по Баллингу, Стерилізацію середовища роблять при 0,5атм установлюють рН7,0-7,4, потім додають 2,5-3% протягом 40хв, рН - 6,8-7,0 мікробіологічного агар-агару, кип'ятять до Приклад 1 розчинення агару і фільтрують, потім разливают у Дослідження на нешкідливість нового стерильний посуд - матраці по ЗООмл мінерального живильного середовища на Стерилізують при 0,5-0,7атм 40хв Після лабораторних тваринах (табл) стерилізації значення рН сусла-агару повинне бути Великий вихід бакмассы дає можливість 6,8-7,0 використовувати и як основу для вакцини проти трихофітоза При впровадженні нового живильного середовища у технологію Приклад 2 виготовлення вакцин значно скорочується При введенні вихідного нового мінерального термін культивування гриба Tnchophyton живильного середовища культуральной рідини verrucosum (на 40-60%) після культивування гриба і суспензії мікроконідій в організм внутрибрюшинно і підшкірне білим Тривалість культивування Tnchophyton мишам у дозах 0,5, 1,0, 1,5см3, не виявлено verrucosum на новому мінеральному середовищі 5 помітних ознак їхнього захворювання і загибелі діб, у той час як культивування гриба на суслопротягом 15 діб У період спостереження всі агаровому середовищі відбувається 15 діб ДОСЛІДНІ тварини були активними, добре поїдали Спосіб глибинного культивування, в основі кормові раціони, фізіологічні відправлення в них не якого є нове мінеральне живильне середовище, є порушувалися, поведшкові реакції були більш контрольованим по відношенню фізичних і звичайними, у нормі, змін шерстного покриву не ХІМІЧНИХ параметрів, забезпечує замкнутість і відзначали асептичність умов на усіх етапах Якщо при поверхневому способі культивування гриба на Таким чином, використання мінерального твердому живильному сусло-агаровому живильного середовища на основі агар-агару середовищі в кращому випадку одержують у дозволяє одержати велике накопичення бакмаси гомогенаті міцелію від 6 до 12млн мікроконідій у за період культивування, підвищити імуногенну см3, то застосування глибинного способу активність і підвищити запас імуногенної МІЦНОСТІ культвирования Tnchophyton verrucosum на вакцини Билай поряд з мікроконідіями утворюється міцеліальна маса й ІНШІ репродуїсгивні органи гриба (макроконідм, хламідоспори) Найближчим за технічним рішенням, вибранним як прототип, є середовище сусло агар Суттєвим недоліком середовища сусло-агар є технологія, що використовується в даний час бюпредприємствами України, це - одержання росту гриба поверхневим способом на агаризованому живильному середовищі (суслоагарі), з наступним зняттям і гомогенізацією біомаси Вміст мікроконідій при цьому не тільки не досягає норми для виготовлення вакцин, але згодом стає набагато нижчим При культивуванні на сусло-агаровому живильному середовищі тріхофитозних вакцинних штамів часто відбуваються зміни плеоморфного характеру в морфолого-физиолопчних структурах Гриб перестає продукувати мікроконідм, що в імуногенному процесі є головними При цьому зменшується біомаса гриба за рахунок потончення гіф, збільшується КІЛЬКІСТЬ макроконідій, хламідоспор Сусле-агарове живильне середовище (АС СССР №1065475 А, кп C12N1/20, от 07 01 84, Бюл №1) не забезпечує одержання якісного біопрепарату 56647 Таблиця Середовище Мінеральне живильне середовище Спосіб введення Доза, см Підшкірно Підшкірно Суспензія мікроконідій КІЛЬКІСТЬ загиблих тварин 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,5* 1,0 1,5 0,1 1,0 1,5 0,1 1,0 1,5 0,1 1,0 1,5 Внутрішньочеревне Культуральна рідина 3 Підшкірно Кожну дозу середовища та суспензію мікроконідій випробували на 10 тваринах Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24 Термін загибелі