Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини

1 Композиция вакцины, содержащая антиген, QS21 и стерин, отличающаяся тем, что весовое соотношение QS21 и стерина составляет от 1 1 до 1 100 2 Композиция по п 1, отличающаяся тем, что весовое соотношение QS21 и стерина составляет от 1 1 до 1 5 3 Композиция по п 1, отличающаяся тем, что весовое соотношение QS21 и стерина составляет 1 2 4 Композиция по любому из пп 1-3, отличающаяся тем, что стерином является холестерин 5 Композиция по любому из пп 1-4, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит 3DMPL 6 Композиция по любому из пп 1-5, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит носитель 7 Композиция по п 6, отличающаяся тем, что носитель выбран из группы, включающей эмульсии масла в воде, квасцы, микросферы и инкапсулированные частицы антигена 8 Композиция по любому из пп 1-7, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген или антигенную композицию, производную QS21 ВІДНОСНО ГІДРОЛІЗУ любого человеческого вируса иммунодефицита, вируса иммунодефицита Фелине, вируса ветряной оспы, вируса простого герпеса типа 1, вируса простого герпеса типа 2, цитомегаловируса человека, гепатита А, В, С или Е, респираторносинцитиального вируса, вируса человеческой инфлюэнцы, Hib, вируса менингита, сальмонеллы, нейссерии, боррелии, хламид ии, бордетеллы, плазмодия итоксоплазмы 9 Композиция по любому из пп 1-7, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген, производный неоплазмы 10 Композиция вакцины, содержащая иммунологически активный сапонин и стерин, отличающаяся тем, что активирующая комбинация дополнительно содержит носитель или ЗДе-оацилированный монофосфолипид A (3D-MPL) 11 Композиция по п 10, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген или антигенную композицию, производную любого человеческого вируса иммунодефицита, вируса иммунодефицита Фелине, вируса ветряной оспы, вируса простого герпеса типа 1, вируса простого герпеса типа 2, цитомегаловируса человека, гепатита А, В, С или Е, респираторно-синцитиального вируса, вируса человеческой инфлюэнцы, Hib, вируса менингита, сальмонеллы, нейссерии, боррелии, хламидии, бордетеллы, плазмодия и токсоплазмы 12 Композиция по п 10, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген, производный неоплазмы 13 Композиция вакцины, содержащая стерин, чистый QS21 или чистый QS17 в липосомной структуре 14 Композиция по п 13, отличающаяся тем, что QS21 и QS17 имеют, по меньшей мере, 95 % чистоты 15 Композиция по п 13, отличающаяся тем, что QS21 и QS17 имеют, по меньшей мере, 98 % чистоты 16 Композиция по любому из пп 13-15, отличающаяся тем, что она дополнительно включает 3D-MPL, содержащийся внутри мембраны липосомы 17 Композиция по любому из пп 13-16, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит О ГО (О ю 56132 антиген или антигенную композицию, производную любого человеческого вируса иммунодефицита, вируса иммунодефицита Фелине, вируса ветряной оспы, вируса простого герпеса типа 1, вируса простого герпеса типа 2, цитомегаловируса человека, гепатита А, В, С или Е, респираторносинцитиального вируса, вируса человеческой инфлюэнцы, Hib, вируса менингита, сальмонеллы, нейссерии, боррелии, хламид ии, бордетеллы, плазмодия итоксоплазмы 18 Композиция по любому из пп 13-17, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген, производный неоплазмы 19 Способ стабилизации QS21 по отношению к гидролизу, вызванному основанием, в котором 4 проводят связывание QS21 и стерина, содержащего липосомы 20 Способ по п 19, отличающийся тем, что стерином является холестерин 21 Способ стабилизации QS21 по отношению к гидролизу, вызванному основанием, в котором проводят связывание QS21 и стерина в весовом соотношении от 1 1 до 1 100 22 Способ по п 21, отличающийся тем, что стерином является холестерин 23 Способ приготовления композиции вакцины по п 1, отличающийся тем, что готовят липидную суспензию, содержащую стерин, затем полученную липидную суспензию микрофлюид и руют до тех пор, пока размер липосом не уменьшится до 100 нм, и добавляют QS21. Настоящее изобретение касается рецептур новых вакцин, способов их изготовления и их использования в медицине В частности, настоящее изобретение касается вакцин, содержащих антиген, иммунологически активную фракцию, извлеченную из коры Quillaja Saponana Molina, такую как QS21, и стерин Иммунологически активные фракции сапонина, имеющие активирующую добавку, извлеченные из коры южно-американского дерева Quillaja Saponana Molina, известны специалистам в соответствующей области Например, QS21, также известная как QA21, очищенная при помощи жидкостной хроматографии высокого давления (Hplc) фракция из дерева Quillaja Saponana Molina, и способ ее извлечения, раскрыта (как QA21) в США, патент №5,057,540 Quillaja сапонин также раскрыт Скоттом (Scott et al, Int Archs Allergy Appl Immun , 1985, 77, 409) Однако, использование QS21, как активирующей добавки, ассоциировалось с определенным вредом Например, когда QS21 вводили животным в виде свободных молекул, наблюдался некроз (necrosis), т е локальное отмирание ткани в месте инъекции Как оказалось, некроза в месте инъекции можно избежать, если использовать рецептуры, содержащие комбинацию QS21 и стерина Предпочтение отдавалось стеринам, которые включали Іі-ситостерин, стигмастерин, эргостерин, эргокальциферол и холестерин Эти стерины хорошо известны специалистам соответствующей области, например, холестерин обнаружен (Merck Index, 11 t h Edn , page 341) в жире животных, как естественно появляющийся стерин Вследствие этого, в качестве первой характерной особенности настоящего изобретения предусматривается композиция вакцин, содержащая антиген, иммунологически активную фракцию сапонина и стерин Предпочтительно композиции, согласно изобретению, содержат иммунологически активную фракцию сапонина в действительно чистом, беспримесном виде Предпочтительно композиции, согласно изобретению, содержат QS21 в действительно чистом виде, т е QS21 является, по крайней мере на 90% чистой, предпоч тительно по крайней мере на 95% чистой и более предпочтительно по крайней мере на 98% чистой Другие иммунологически чистые фракции сапонина, пригодные для композиций, согласно изобретению, включают QA17/QS17 Композиции, согласно изобретению, содержащие QS21 и холестерин показывают уменьшенную реактогенность вакцины, в то время как в сравниваемых композициях, в которых холестерин отсутствовал, положительный эффект сохранялся В дополнение к этому известно, что у QS21 понижается эффективность при данных условиях, когда значение рН около 7 и выше Дополнительное преимущество от настоящих композиций в том, что устойчивость QS21 в гидролизе, в котором в качестве посредника выступает основание, в рецептурах, содержащих холестерин, повышена Предпочтительные композиции, согласно изобретению, образуют структуру липосомы (hposome) Композиции, где стерин/иммунологически активная фракция сапонина образуют ISCOM структуру, также является особенностью данного изобретения Обычно соотношение QS21 стерин имеет порядок от 1 100 до 1 1, по весу Предпочтительно присутствие избытка стерина, соотношение QS21 стерин должно, по крайней мере, иметь порядок 1 2, по весу Для введения человеку обычно в вакцине QS21 и стерин должны присутствовать в диапазоне приблизительно от 1 мкг до приблизительно ЮОмкг, предпочтительно в диапазоне от 10мкг до 50мкг на дозу Липосомы, предпочтительно, содержат нейтральный липид, например, фосфатидилхолин, который, предпочтительно, не кристаллизуется при комнатной температуре, например, фосфатидилхолин яичного желтка, фосфатидилхолин диолеоила или фосфатидилхолин дилаурила Липосомы могут также содержать заряженный липид, который повышает стабильность структуры липоCOM3-QS21 для липосом, составленных из насыщенных липидов В этих случаях количество заряженных липидов, предпочтительно, 1-20%, по весу, наиболее предпочтительно, 5-10% Соотношение стерина и фосфолипиду 1-50% (по молям), 56132 наиболее предпочтительно, 20-25% Предпочтительно композиции, согласно изобретению, содержат MPL (3-деацилированный монофосфорил липид А, известный также как 3DMPL) 3D-MPL известен из Патента Великобритании GB 2 220 211 (Риби), как смесь из 3-х типов Де-О-ацилированного монофосфорил липида А с 4, 5 или 6 эмулированными цепочками и произведены на Риби Иммунохем, Монтана Предпочтительней этот вид отражен в заявке на Международный Патент 92/116556 Соответствующие композиции, согласно изобретению, в виде липосом, первоначально готовили без MPL, a MPL затем добавляли, предпочтительно частицами, размером ЮОнм Таким образом, MPL не содержит внутри пузырьковую мембрану (известную как, внешняя MPL) Композиции, где MPL содержит внутри пузырьковую мембрану (известную как, внутреняя MPL) также составляют особенность данного изобретения Антиген может содержаться внутри пузырьковой мембраны или содержаться вне пузырьковой мембраны Предпочтительны растворимые антигены, которые являются внешними и гидрофобные вещества или липидные антигены, содержащиеся внутри или вне мембраны Часто вакцины, согласно изобретению, не требуют никаких специальных носителе и могут быть сформированы в водяном или другом, фармацевтически пригодном, буфере В некоторых случаях может быть выгодно, что вакцины, согласно данному изобретению, будут, кроме того, содержать квасцы или поданы в масляно-водной эмульсии или другом подходящем растворителе, таком, как, например, липосомы, микросферы или капсулированные частички антигена Предпочтительно рецептуры вакцины будут содержать антиген или антигенную композицию, способные вызывать реакцию иммунитета у людей или животных против возбудителей болезней Антиген или антигенные композиции, известные специалистам соответствующей области, могут быть использованы в композициях, согласно изобретению, включающих антигены полисахарида, антиген или антигенные композиции, выведенные из HIV-1 (таких как др120 или др160), любого из вирусов иммунодефицита Фелине, вирусов герпеса людей или животных, таких как gD или производных этого или протеина Immediate Early, таких как ICP27 из HSV1 или HSV2, вируса цитомегалии (особенно человеческого) (такого как дВ или производных этого), вируса ветряной оспы, опоясывающего лишая (Varicella Zoster virus), (таких как gpl, II или III), или из вируса гепатита, такого как вируса гепатита В, например, поверхностного антигена Гепатита В или производной этого, вируса гепатита А, вируса гепатита С, вируса гепатита Е или из других вирусных возбудителей болезней, таких как респираторного синцитиалыюго вируса (например, протеинов HSRV F и G или иммуногенные фрагменты, раскрыты в Патенте США US Patent 5,149,650 или полипептидов химерика, содержащего иммуногенные фрагменты из протеинов HSRV F и G, гликопротеина FG, раскрытого в Патенте США US Patent 5,194,595), антигенов, извлеченных из штаммов менингита, таких как менингит А, В, С, пневмонии стрептококковой, вируса человеческой папилломы, вируса инфлюэнцы, инфлюэнцы Haemophilus В (Hib), Epstein Barr Virus (EBV), или извлеченные из бактериальных возбудителей болезней, таких как сальмонелла, нейссерия, боррелия (например, OspA или OspB или производные их), или хламидия, или бордетелла, например, Р 69, РТ и FHA, или извлеченные из паразитов, таких как симпласт или токсоплазма HSV Гликопротеин D (gD) или производные этого являются предпочтительной вакциной антигена Он обнаружен на вирусной мембране, а также найден в цитоплазме инфицированных клеток (Eisenberg R J et al, J of Virol 1980 35 428-435) Он содержит в себе 393 аминокислоты, включая пептидную связь (signal peptide) и имеет молекулярный вес приблизительно 60kD Для всех HSV гликопротеинов такая оболочка, вероятно, наиболее характерна (Cohen et al J Virology 60 157-166) In vivo это, как известно, играет центральную роль в присоединении вируса на мембранах клетки Кроме того, гликопротеин D показан тем, что он способен извлекать нейтрализующие тела in vivo и защищать животных от летального исхода Усеченный вид молекулы gD, не имеющей в фиксированной зоне С окончания, может вырабатываться в клетках млекопитающих как растворимый протеин, который экспортируется в отстоявшуюся жидкость клетки данной культуры Такие растворимые формы gD предпочтительны Производство усеченных видов gD описана в Европейском Патенте ЕР 0 139 417 Предпочтительно gD выводили из HSV-2 Реализацией настоящего изобретения является усеченный HSV-2 гликопротеин D, состоящий из 308 аминокислот, который содержит в себе естественно появляющийся гликопротеин из аминокислот с 1-ой по 306-ую с добавлением аспарагина (Asparagine) и глютамина (Glutamme) на конце фиксированной зоны С окончания усеченного протеина, лишенного своей мембраны Этот вид протеина включает пептидную связь, которая расщепляется для того, чтобы выделить полностью растворимую 283 аминокислоту протеина из рецепиента клетки В качестве другой особенности настоящего изобретения поверхностный антиген Гепатита В является предпочтительным антигеном вакцины Использованное здесь выражение "поверхностный антиген Гепатита В" или "HBsAg" включает любой HBsAg антиген или его фрагмент, показывающие антигенность HBV поверхностного антигена Это понимают следующим образом в дополнение к последовательности из 226 аминокислот HBsAg антигена (смотри Tiollais et al, Nature, 317, 489 (1985) и ссылки на него), HBsAg как здесь описывается, если это требуется, содержит всю или часть pre-S последовательности, как описано в вышеуказанных документах и в Европейском Патенте ЕР-А- 0 278 940 В частности, HBsAg может содержать в себе полипептид, содержащий последовательность аминокислот, содержащих остатки 12-52, за которыми следуют остатки 133-145, за которыми, в свою очередь, следуют остатки 175-400 L-протеина HBsAg, относительно серотипа аденовируса (ad serotype) от 56132 8 соб лечения, заключающийся в назначении пациенту эффективного количества вакцины, согласно настоящего изобретения В частности, изобретение обеспечивает лечение вирусной, бактериальной, паразитической инфекций и злокачественной опухоли путем назначения пациенту эффективного количества вакцины, согласно настоящего изобретения Следующие примеры и данные иллюстрируют изобретение Примеры 1 1 Способ изготовления липосом Смесь липида (такого, как фосфатидилхолин из яичного желтка либо из синтетика) и холестерина в органическом растворителе сушат в вакууме (или, альтернативно, в потоке инертного газа) Обычно HBsAg существует в виде частиц Водяной раствор (такой, как фосфат, содержащий Частицы могут содержать в себе, например, один солевой раствор) затем добавляют и сосуд встряпротеин S или могут быть составными частицами, хивают до тех пор, пока все липиды не будут в например, (L*,S), где L*, определен выше, a S озвиде суспензии Эта суспензия затем микропсевначает S-протеин HBsAg Указанная частица надоожижается (microfluidisedj до тех пор пока разходится в особенной дрожжевой форме, которая меры липосомов не уменьшатся до ЮОнм, а затем выражена в дрожжах стерильно фильтруют сквозь 0 2мкм фильтр ВыИзготовление S-протеина поверхностного антеснение или разрушение клеточной взвеси ульттигена Гепатита В хорошо документировано развуком может заменить этот шаг Смотри, например, Harford et al (1983) in Develop Biol Standard 54, страница 125, Gregg at al Обычно соотношение холестерин фосфати(1987) in Biotechnology, 5, страница 479, Европейдилхолин 1 4 (по весу), а водный раствор добавские Патенты ЕР 0 226 846, ЕР 0 299 108 и наляют, давая конечную концентрацию холестерина стоящий документ от 5 до 50мг/мл Если MPL в органическом растворе добавляют к липиду в органическом раствоРецептуры в рамках настоящего изобретения ре, конечные липисомы содержат MPL в мембрамогут также содержать антиопухолевый антиген и не (упоминалось, как внутреняя MPL) Липосомы использоваться для иммунотерапевтического леимеют определенный размер ЮОнм и упоминаютчения злокачественных опухолей ся, как SUV (для маленьких однослойных пузырьПриготовление вакцины детально описано в ков) Если этот раствор повторно охладить и оттаНовых Направлениях и Разработках Вакцин, под ять, то пузырьки сплавятся в большие редакцией Voller et al, University Park Press, Балмногослойные структуры (MLV) размером колебтимор, Мериленд, США, 1978 Инкапсуляция в лющиеся от 500нм до 15мкм Липосомы сами по липосомы описана, например, Фуллертоном, Пасебе стабильны длительное время и не имеют тент США 4,235,877 Соединение протеинов в способности вызывать слияние клеток макромолекулы раскрыто, например, Ликхайтом, Патент США 4,372,945 и Армором и др , Патент 1 2 Процедура рецептуры США 4,474,757 S21 в водном растворе добавляется к липосомам Эта смесь добавляется затем к раствору Количество протеина в каждой дозе вакцины антигена, который может, если требуется, содервыбирается как количество, которое стимулирует жать MPL в виде частиц размером ЮОнм иммунозащитную реакцию без существенных, вредных побочных эффектов в типичных вакци1 3 Литическая активность QS21, сдержинах Это количество может отличаться в зависивающаяся линосомами, содержащими холестемости от специфики используемого иммуногена и рин того, как он применяется Обычно ожидается, что Когда QS21 добавляют к эритроцитам, они каждая доза вакцины будет содержать 1-1000мкг разрушают его, выделяя гемоглобин Эта литичепротеина, предпочтительно 2-100мкг, наиболее ская активность может быть также измерена испредпочтительно 4-40мкг Оптимальное количестпользуя липосомы, которые содержат холестерин во для части вакцин может быть установлено с в своей мембране и захваченный флюоресцент, помощью стандартных иссследований путем накарбофлюоресцеин - как липосомы, выделяют блюдения за характерными иммунными реакцияосвобожденную краску и ее можно наблюдать с ми субъектов при поражении болезнью После помощью флюоресцентной спектроскопии Если первоначальной вакцинации субъекты могут полуфлюоресцентные липосомы не содержат в своей чать один или несколько активаторов иммунизамембране холестерин, то разрушение липосом не ции адекватно промежутку времени наблюдается Если QS21 выращивается с липосомами, содержащими холестерин, до добавления Рецептуры, согласно настоящего изобретеее к эритроцитам, то разрушение эритроцитов ния, могут с успехом использоваться как для проуменьшается в зависимости от соотношения QS21 филактики, так и для терапии и холестерина Если используется соотношение Соответственно, к тому же особенностью изо1 1, то литическая активность не выявляется Есбретения является то, что оно обеспечивает исли липосомы не содержат холестерин, то подавпользование вакцины, согласно изобретению, для ление лизиса требует тысячекратного избытка лечения людей Изобретение обеспечивает спокрытой для чтения решетки вируса Гепатита В (этот полипептид обозначают как L*, смотри ЕР О 414 374) HBsAg в рамках настоящего изобретения может также включать полипептид pre-SIpreS2-S, описанный в Европейском Патенте ЕР О 198 474 (Endotromcs), или закрытые аналоги его, такие как описаны в Европейском Патенте ЕР О 304 578 (Me Cormick and Jones) HBsAg, как здесь описано, может также относиться к мутантам, например, "исчезающий мутант" (escape mutant), описанный в WO 91/14703 или в заявке на Европейский Патент под номером ЕР 0 511 855 AI, особенно HBsAg, в котором происходит замена аминокислоты глицина (glycme) в позиции 145 на аргинин (argmme) 56132 10 фосфолипидов над QS21 значении рН выше 7 Например, график снизу показывает, что при рН равном 9 и температуре С помощью подобных захватов, точно исполь37°С, 90%-ная QS21 гидролизуется в течении 16 зующих флюоресцентирующие липосомы, можно часов Если липосомы содержащие холестерин, измерить литическую активность На графике, добавляют к QS21 в соотношении 2 1 (холестерин приведенном ниже, литическая активность 4мкг QS21 по весу), при таких же условиях гидролиз QS21, рассматриваемая с липосомами без содерQS21 не выявляется Если соотношение 1 1, то жания холестерина (1 мкг лецитина яичного желтка 10%-ная QS21 расщепляется на мл) или содержащая холестерин (1 мкг лецитина, 500мкг холестерина на мл), была измерена с помощью флюоресценции Выращивание 20 мкг(Ш1 при наличие SUV, содержаще!о іолссгсрші ори рН равном 9,16 часов, Э7"С Сравнение ослабления QS2I для яиносоч, содержащих или 20 00-1 несодержатнж холестерин iSOUJ и _^——• j^-—-—~ 16 015 14 00 іточна! I О мкл лнппсом Данные показывают, что QS21 соединяется специальным способом с холестерином, вызывая, таким образом, разрушение (клеток или флюоресцентных липосом) Если QS21 соединяется вначале с холестерином в липосомах, это не является длительно лизирующим по отношению к клеткам или другим липосомам Это требует минимального соотношения 0 5 1 холестерин QS21 (по весу) Холестерин не является растворимым в водном растворе и не имеет формы стабильной суспензии В присуствии фосфолипидов холестерин находится внутри двухслойного (bilayer) фосфолипида и может иметь вид устойчивой суспензии из пузырьков, называемых липосомами Были сделаны попытки избежать необходимости добавлять к фосфолипидам растворимые производные Polyoxyethanylcholesterol sebacate растворили в воде при бОмг/мл, однако даже избыток, порядка в 2000 раз, (по весу) не выявил снижения литической активности QS21 1 4 Повышение стабильности QS21 в липосомах, содержащих холестерин QS21 очень чувствительна к гидролизу при Рецептура QS21+PBS QS21 + iMKrxon(SUV) QS21+5MKrxon(SUV) О.Э21+25мкгхол (SUV Один SUV Дигитонин (digitonm) PBS Литическая активность, мкг 5 4 0 0 0 5 0 Данные показывают, что когда литическая активность устраняется при добавлении липосом, содержащих холестерин, то ожидаемая токсичность QS21 также устраняется Данные показывают, что когда литическая ак / 12 00 10 00 . кто 6 00 4 00 2 00 0 00 / 4 I > 10 И 20 25 30 35 40 мкг присутствующего їолестерніія Сделаем вывод, что когда QS21 соединяется с липосомами, содержащими холестерин, становится намного менее чувствительным гидролиз, в котором в парентерально (минуя пищеварительный тракт), следовательно, вакцины, содержащая QS21, сформированные с рН, имеющим кислую реакцию, и сохраняемые при температуре 4°С, содержат полезную композицию С использованием липосом можно преодолеть это требование 1 5 Исследования реактогенности Мышам вводили в большеберцовую мышцу 5мкг QS21 (или дигитонина), добавленного для повышения количества липосом (выражая через мкг холестерина) Литическая активность выражается как эквивалент QS21, который означает, что количество QS21, требуемое, чтобы достигнуть одинакового гемолиза, такое же как стандартное Краснота, некроз и токсичность в месте инъекции оценены визуально после умерщвления мышей Краснота Некроз Токсичность ± ± ± тивность устраняется при добавлении липосом, содержащих холестерин, то ожидаемая токсичность QS21 также устраняется 1 6 Внутримышечная реактогенность кролей Числа в U I /L 11 Эксперимент Кролик № 1 Кролик № 2 Кролик № 3 Кролик № 4 Кролик № 5 Среднее Средне-квадратичное Эксперимент 56132 Рецептура QS21 50мкг Рецептура 12 ДеньО 1078 1116 660 592 3400 1369 1160 День 1 Гемолиз ± ДеньО 8650 4648 4819 5662 7528 6261 1757 Эксперимент Рецептура 596 540 611 521 1092 672 238 ДеньО Эксперимент Рецептура 332 831 464 528 1027 637 285 Эксперимент Рецептура 540 498 442 822 3182 1097 1175 ДеньО PBS 321 660 650 1395 429 691 419 Данные показывают, что добавление липосом, содержащих холестерин, к рецептуре значительно снижает повышение СРК (креатинфосфокиназа), вызванного SQ21 Поскольку повышение СРК является показателем мышечного повреждения, то это показывает уменьшение мышечного повреждения и подтверждается гистопатологией 1 7 Связывание комплекса липосома-О321 с квасцом QS21 выращивали с нейтральными липосомами, содержащими избыток холестерина, а также радиоактивный холестерин, а затем выра ДеньЗ 796 404 717 801 2410 1088 636 ± Гемолиз 745 471 (4535) 925 960 775 224 День 1 ± Гемолиз 387 694 519 614 849 613 175 Гемолиз Гемолиз Кролик №21 Кролик № 22 Кролик № 23 Кролик № 24 Кролик № 25 Среднее Средне-квадратичное А День 1 Гемолиз Кролик № 16 Кролик № 17 QS21 50мкг Кролик № 18 Холестерин в Кролик № 19 SUV 250мкг Кролик № 20 (15) Среднее Средне-квадратичное ДеньЗ Гемолиз 344 662 356 720 568 530 173 ДеньО Гемолиз 460 594 803 616 555 606 125 День 1 Гемолиз Кролик № 11 Кролик № 12 QS21 50мкг Кролик № 13 Холестерин в Кролик № 14 SUV150MKr Кролик № 15 (13) Среднее Средне-квадратичное ДеньЗ Гемолиз 1670 602 1873 507 787 1088 636 ± Гемолиз 1523 1435 684 684 1736 1212 495 День 1 Гемолиз Кролик № 6 Кролик № 7 QS21 50мкг Кролик № 8 Холестерин в Кролик № 9 SUV 50мкг Кролик № 10 (1 1) Среднее Средне-квадратичное ДеньЗ Гемолиз ДеньЗ Гемолиз 290 535 603 (3545) 323 438 155 (1527) (1692) (1059) (1396) Гемолиз 378 755 473 (5749) 263 467 210 (1523) (2369) щивали с квасцом АІ(ОН)3 в PBS Поодиночке ни нейтральные липосомы, ни QS21 не связывались с квасцом в PBS, но отрицательно заряженые липосомы связывались посредством QS21 Однако вместе QS21 и нейтральные липосомы связываются с квасцом Надосадочная жидкость не содержит ни QS21 (проведен тест orcmol) ни радиактивный холестерин Это отражает тот факт, что QS21 связана с липосомами и, допускается связь комбинации липосома-(5821 с квасцом Это происходит вследствие отрицательного заряда, наложенного на липосомы или вследствие экспозиции гидро 56132 14 13 ния-размораживания (freezethawing) SUV Зх до фобных областей на липосомы Результаты такдобавления антигена же подразумевают, что QS21HC выделяет холестерин из мембраны Для того, чтобы захватить антиген, антиген добавляли к SUV перед процедурой заморажиЭто отражает то, что композиции, согласно вания-размораживания, a QS21 добавляли после изобретению, могут быть использованы в вакцизамораживания-размораживания Инкапсуляция нах на основе квасцов антигена =5% внутренего, 95% внешнего Мышам 1 8 Сравнение липосомных QS21/MPL и сво(ваІЬ/с для gD, B10BR для RTSs) дважды ввели бодных QS21+MPL для антител и стимуляции вакцину в подушечку задней лапы клеточного иммунитета (CMI) gD является гликопротеином D, извлеченным SUV была приготовлена при помощи вытесиз вируса простого герпеса RTSs является понения (EYPC chol MPL 20 5 1) верхностным антигеном гепатита В (HBsAg), геДля внешних MPL липосомы готовили без нетически модифицированный так, что содержит MPL, a MPL добавляли в виде частиц, размером эпитоп, извлеченный из Plasmodiium falciparum ЮОнм QS21 раньше добавляли к антигену sporozoit Холестерин QS21=5 1 (по весам) MLV формировали при помощи замораживаAg=10MKrRTSs Рецептура SUV/QS+ (MPL out) MLV/QS+ (MPL out) MLV/QS/MPL(m) MLV/QS/MPL(m)/Ag(m) QS + MPL SUV/QS+ (MPL out) MLV/QS/MPL(m) ад=20мкг gD Рецептура SUV/QS + (MPLout) SUV/QS-+(MPLm) MLV/QS/MPL(out) MLV/QS/MPL(m) MLV/QS/MPL(m)/Ag(m) QS + MPL SUV/QS + (MPLout) +Ag MLV/QS/MPL(m) +Ag +Ag +Ag +Ag +Ag Ag +Ag +Ag +Ag +Ag +Ag +Ag +Ад Ад +Ад Данные показывают, что при помощи SUV/QS+MPL(out) легко индуцируются титры антител, по крайней мере, так хорошо, как при помощи QS21+MPL, в такой же мере включающая IL2, которая служит иммунным маркером для клетки, Рецептура антиген SUV/Qs21+MPLout SUV/Qs21/MPLm QS21+MPL SUV/Qs21+MPLout Qs21 SUV/Qs21 gD (5 мкг) gD (5 мкг) gD (5 мкг) без gD (5 мкг) gD (5 мкг) IgGI 1175 2247 969 1812 372