Моноклональне антитіло і суміш моноклональних антитіл для виявлення білка-пріона як показника трансмісивних губчастих енцефалопатій

1. Моноклональне антитіло, яке специфічно зв'язується з консервативним епітопом білків-пріонів, визначеним як Gln-Tyr-Gln-Arg-Glu-Ser і здатне до зв'язування білка PrP-Sc в фіксованій або нефіксованій тканині, яка була оброблена для того, щоб оголити вказаний прихований епітоп білка PrP-Sc і виключити відповідний епітоп РrР-клітинного.

2. Моноклональне антитіло за п. 1, де вказане моноклональне антитіло зв'язується з епітопом, до якого направлене моноклональне антитіло F99/97.6.1.

3. Моноклональне антитіло за п. 2, що позначається як F99/97.6.1.

4. Лінія клітин гібридоми АТСС НВ-12696, яка продукує і секретує моноклональне антитіло F99/97.6.1, яке специфічно зв'язується з консервативним епітопом білків-пріонів, визначеним як Gln-Tyr-Gln-Arg-Glu-Ser і зв'язується з білком PrP-Sc в фіксованій або нефіксованій тканині, яка була оброблена для того, щоб оголити вказаний прихований епітоп білка PrP-Sc і виключити відповідний епітоп РrР-клітинного.

5. Суміш моноклональних антитіл, яка містить перше моноклональне антитіло, що включає в себе моноклональне антитіло за п. 1, в комбінації з другим моноклональним антитілом, що включає в себе моноклональне антитіло, яке специфічно зв'язується з другим консервативним епітопом білків-пріонів, визначеним як Ile-His-Phe-Gly, і здатне до скріплення білка PrP-Sc в фіксованій або нефіксованій тканині, яка була оброблена для того, щоб оголити вказаний прихований епітоп білка PrP-Sc і виключити відповідний епітоп РrР-клітинного.

6. Суміш моноклональних антитіл за п. 5, де вказане перше моноклональне антитіло зв'язується з епітопом, до якого направлене моноклональне антитіло F99/97.6.1.

7. Суміш моноклональних антитіл за п. 5, де вказане друге моноклональне антитіло зв'язується з епітопом, до якого направлене моноклональне антитіло F89/160.1.5.

8. Суміш моноклональних антитіл за п. 5, де вказаним першим моноклональним антитілом є F99/97.6.1, а вказаним другим моноклональним антитілом є F89/160.1.5 або F89/193.1.5.

9. Спосіб імуноаналізу для виявлення білка PrP-Sc у тварини або людини, який включає в себе:

(1) отримання тканини тварини або людини, яка має бути тестованою;

(2) фіксування або заморожування вказаної тканини;

(3) обробку вказаної фіксованої або замороженої тканини для того, щоб оголити приховані епітопи PrP-Sc і усунути відповідний епітоп РrР-клітинного;

(4) контактування вказаної обробленої тканини з моноклональними антитілами, які складаються з (а) моноклональних антитіл за п. 1 або (b) суміші моноклональних антитіл за п. 5, в такій кількості і в таких умовах, при яких вказані антитіла зв'язують білок PrP-Sc, якщо вказаний білок присутній у вказаній тканині, і

(5) детекцію присутності вказаних зв'язаних антитіл.

10. Спосіб за п. 9, де вказаною тканиною є фіксована тканина, і вказана обробка вибрана з групи, що складається з (а) автоклавування гідратованого матеріалу; (b) обробки мурашиною кислотою з подальшим автоклавуванням гідратованого матеріалу або без нього, і (с) розщеплення трипсином.

11. Спосіб за п. 9, де вказаною тканиною є заморожена тканина, і вказана обробка включає в себе обробку протеїназою К, щоб виключити смугу РrР-С в 35кД і виявити характерні множинні смуги 28-32кД стійкого до протеїнази К PrP-Sc.

12. Спосіб за п. 9, де вказані моноклональні антитіла зв'язуються з епітопом, до якого направлене моноклональне антитіло F99/97.6.1.

13. Спосіб за п. 9, де вказаним моноклональним антитілом є F99/97.6.1.

14. Спосіб за п. 9, де вказана суміш моноклональних антитіл містить перше моноклональне антитіло, яке зв'язується з епітопом, до якого направлене моноклональне антитіло F99/97.6.1, і друге моноклональне антитіло зв'язується з епітопом, до якого направлене моноклональне антитіло F89/160.1.5.

15. Спосіб за п. 9, де вказаним першим моноклональним антитілом є F99/97.6.1, а вказаним другим моноклональним антитілом є F89/160.1.5 або F89/193.1.5.

16. Спосіб за п. 9, де вказана детекція включає в себе контактування вказаних антитіл з міченим реагентом, що виявляється, проти імуноглобуліну миші в таких умовах, при яких вказаний реагент зв'язується з вказаними антитілами, і детекцію вказаного пов'язаного реагенту.

17. Спосіб за п. 9, де вказана детекція включає в себе:

(a) контактування вказаних антитіл з міченим реагентом проти імуноглобуліну миші в таких умовах, при яких вказане антитіло реагенту зв'язується з вказаними антитілами;

(b) контактування вказаного реагенту з комплексом фермент-ліганд, так, що вказаний комплекс зв'язується з вказаною міткою на вказаному реагенті, і

(c) детектування вказаного комплексу фермент-ліганд за допомогою хромогенного субстрату.

18. Спосіб за п. 9, де вказана тварина вибрана з групи, що складається з жуйних домашніх тварин, кішок, норки і приматів, відмінних від людини.

19. Спосіб за п. 18, де вказана жуйна домашня тварина вибрана з групи, що складається з вівці, кози, великої рогатої худоби, гібридного оленя і лося.

20. Спосіб за п. 9, де вказаною тканиною є лімфоїдна тканина, асоційована з третьою повікою, тканина аутопсії головного мозку, тканина біопсії або аутопсії лімфатичного вузла або тканина біопсії або аутопсії селезінки.