Очищений поліпептид, що містить антиген вірусу гепатиту с, полінуклеотид, вектор, клітини, система експресії, моноклональне антитіло, препарат поліклональних антитіл, нуклеотидна проба, аналітичні набори, спосі

Область, к которой относится изобретение Настоящее изобретение касается материалов и способов регулирования распространения инфекции вируса гепатита не А и не В типа (NANBH). В частности, оно касается полинуклеотидов, образованных от генома этиологического агента NANBH, вируса гепатита С (НСV), кодированных в нем полипептидов, и антител к этим полипепдидам. Эти реагенты используются как просеивающие агенты для НСV и вызванного им инфекционного заражения, и как защитные агенты от данного заболевания. Barr et al. (1986), Biotechniques 4 : 423. Botstein (1979), Gene 8 : 17. Brinton, M.A. (1986) in THE VIRUSES: THE TOGAVIRIDAE AND FLAVIVIRIDAE (Series eds. FraenkelConrat and Wagnar, vol eds. Schlesinger and Schlesinger, Plenum Press), p. 327 - 374. Broach (1981) in: Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces, Vol. 1, p.445, Cold Spring Harbor Press. Broach et al. (1983), Meth. Enz. 101 : 307. Chang et al. (1977), Nature 198:1056. Chirgwin et al. (1979), Biochemistry 18 : 5294. Chomczynski and Sacchi (1987), Analytical Biochemistry 162 : 156. Clewell et al. (1969), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 62 : 1159. Clewell (1972), J. Bacteriol. 110 : 667. Cohen (1972), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69 : 2110. Cousens et al. (1987), gene 61 : 265. De Boer et al. (1983), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 292 : 128. Dreesman et al. (1985), J. Infect. Disease 151 : 761. Feinstone, S.M. and Hoofnagle, J.H. (1984), New Engl. J. Med. 311:185. Fields & Knipe (1986), FUNDAMENTAL VIROLOGY (Raven Press, N.Y.). Fiers et al. (1978), Nature 273 : 113. Gerety, R.J. et al., in VIRAL HEPATITIS AND LIVER DISEASE (Vyas, B.N., Dienstag, J.L., and Hoofnagle, J.H., eds, Grune and Stratton, Inc., 1984) pp 23 - 47. Goeddel et al. (1980), Nucleic Acids Res. 8 : 4057. Graham and Van der Eb (1978), Virology 52 : 546. Grunstein and Hogness (1975), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73 : 3961. Grych et al. (1985), Nature 316 : 74. Gubler and Hoffman (1983), Gene 25 : 263. Hahn (1988) Virology 162 : 167. Hammerling et al. (1981), MONOCLONAL ANTIBODIES AND T-CELL HYBRIDOMAS. Han (1987), Biochemistry 26 : 1617. Helfman (1983), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80 : 31. Hess et al. (1968), J. Adv. Enzyme Reg 7 : 149. Hinnen et al. (1978), Proc. Natl. Acad. Sci. 75 : 1929. Hitzeman et al. (1980), J. Biol. Chem. 255 : 2073. Holland et al. (1978), Biochemistry 17 : 4900. Holland (1981), J. Biol. Chem. 256 : 1385. Houghton et al. (1981), Nucleic Acids Res. 9 : 247 Hunyh, T.V. et al. (1985) in DNA CLONING TECHNIQUES; A PRACTICAL APPROACH (D. Glover, Ed., IRL Press, Oxford, U.K.) pp. 49 - 78. Immun. Rev. (1982) 62 : 185. Iwarson (1987), British Medical J. 295 : 946. Kennett et al. (1980) MONOCLONAL ANTIBODIES. Kyte and Doolittle (1982), J. Мої. Biol. 157 : 105 - 132. Laemmli (1970), Nature 227, 680. Lee et al. (1988), Science 239 : 1288. Maniatis, Т., et al. (1982) MOLECULAR CLONING; A LABORATORY MANUAL (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.). Mayer and Walker, eds. (1987), IMMUNOCHEMICAL METHODS IN CELL AND MOLECULAR BIOLOGY (Academic Press, London). Maxam et al. (1980), Methods in Enzymology 65 : 499. MacNamara et al. (1984), Science 226 : 1325. Messing et al. (1981), Nucleic Acids Res. 9 : 309. Messing (1983), Methods in Enzymology 101 : 20 - 37. METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press). Michelle et al., Int. Symposium on Viral Hepatitis. Monath (1986) in THE VIRUSES: THE TOGAVIRADAE AND FLAVIVIRIDAE (Series eds. Fraenkel-Conrat and Wagner, vol. eds. Schlesinger and Schlesinger, Plenum Press), p.375 - 440. Nagahuma et al. (1984), Anal. Biochem. 141 : 74. Neurath et al. (1984), Science 224 : 392. Nisonoff et al. (1981), Clin. Immunol. Immunopathol. 21 : 397 - 406. Overby, L.R. (1985), Curr. Hepatol. 5 : 49. Overby, L.R. (1986), Curr. Hepatol. 6 : 65. Overby, L.R. (1987), Curr. Hepatol. 7 : 35. Peleg (1969), Nature 221 : 193. Pfefferkorn and Shapiro (1974), in COMPREHENSIVE VIROLOGY, Vol. 2 (Fraenkel-Conrat & Wagner, eds., Plenum, N.Y.) pp. 171 - 230. Prince, A.M. (1983), Annu. Rev. Microbiol. 37 : 217. Rice et al. (1985), Science 229 : 726. Rice et al. (1986) in THE VIRUSES: THE TOGAVIRIDAE AND FLAVIVIRIDAE (Series eds. Fraenkel-Conrat and Wagner, vol. eds. Schlesinger and Schlesinger, Plenum Press), p.279 - 328. Roehrig (1986) in THE VIRUSES: THE TOGAVIRIDAE AND FLAVIVIRIDAE (Series eds. Fraenkel-Conrat and Wagner, vol. eds. Schlesinger and Schlesinger, Plenum Press) Sadler et al. (1980), Gene 8, 279. Saiki et al. (1986), Nature 324 : 163. Saiki et al. (1988), Science 239 : 487. Sanger et al. (1977), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74 : 5463. Schlesinger et al. (1986), J. Virol. 60 : 1153. Schreier, M., et al. (1980) HYBRIDOMA TECHNIQUES Scopes (1984), PROTEIN PURIFICATION, PRINCIPLES AND PRACTICE, SECOND EDITION (SpringerVerlag, N.Y.). Shimatake et al. (1981), Nature 292 : 128. Sippel (1973), Eur. J. Biochem. .37 : 31. Steimer et al. (1986), J. Virol. 58 : 9. Stollar (1980), in THE TOGAVIRUSES (R.W. Schlesinger, ed., Academic Press, N.Y.), pp. 584 - 622. Sumiyoshi et al. (1987), Virology 161 : 497. Taylor et al. (1976), Biochem. Biophys. Acta 442 : 324. Towbin et al. (1979), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 4350. Tsu and Herzenberg (1980), in SELECTED METHODS IN CELLULAR IMMUNOLOGY (W.H. Freeman and Co.) pp. 373 - 391. Vytdehaag et al. (1985), J. Immunol. 134 : 1225. Valenzuela, P., et al. (1982), Nature 298 : 344. Valenzuela, P., et al. (1984), in HEPATITIS В (Millman, I., et al., ed, Plenum Press) pp. 225 - 236. Warner (1984), DNA 3 : 401. Wu and Grossman (1987), Methods in Enzymology Vol. 154, RECOMBINANT DNA, Part E. Wu (1987), Methods in Enzymology vol 155, RECOMBINANT DNA, part F. Zoller (1982), Nucleic Acids Res. 10 : 6487. Противопоставленные патенты: ЕРО Публикация № 318216 РСТ Публикация № wo/89/04669 США, Патент № 4341761 США, Патент № 4399121 США, Патент № 4427783 США, Патент № 4444887 США, Патент № 4466917 США, Патент № 4472500 США, Патент № 4491632 США, Патент У 4492890 Предпосылки для создания изобретения Гепатит не А и не В типа (ΝΑΝΒΗ) ямяется транмиссивным заболеванием или семействам заболеваний, которые индуцируются вирусом, которые отличаются от других форм ассоциированных с вирусом заболеваний печени, включая заболевание, вызванное известными вирусами гепатита, а именно вирусом гепатита А (НАV), вирусом гепатита В (НВV) и вирусом гепатита дельта (НДV), а также гепатит, индуцированный цмтомегаловирусом (СМV) или вирусом Энштейн-Барра (ЕВV). NANBH впервые был идентифицирован у пациентов, подвергнутых внутривенному переливанию. Передача от человека к шимпанзе и последовательная передача у шимпанзе показали, что NANBH обусловлен агентам или агентами трансмиссивной инфекции. Эпидемиологическое проявление является подтверждением того, что могут быть три типа NANBH: эпидемический тип водного зарождения; тип, ассоциированный с кровяным зарождением или с иглоукалыванием (пункцией); и тип спорадического (или случайного) происхождения. Однако, число агентов, которые могут быть причиной NANBH, неизвестно. Клинический диагноз и идентификация NANBH первоначально осуществлялись путем исключения других вирусных маркеров. А числу методов, используемых для обнаружения путативных агентов NANBH и антиле, можно отнести агаро-гелевую диффузию, противоиммуноэлектрофорез, иммунофлюоресцентную микроскопию, иммунную электронную микроскопию, радиоиммуноанализ и ферментно-свяэанный иммуносорбентный анализ. Однако, ни один из этих методов анализа на является достаточно чувтвительным, специфическим и воспроизводимым здя использования как диагностическое испытание на NANBH. Раньие не было ни ясности, ни соглашения в отношении идентификации или специфически систем антитала антигена, ассоциированных с агентами NANBH. Это обусловлено, по меньшей мере, частично, предшественником или соинфекцией НBV с NANBH у пациентов, и известной комплектностью растворимых и порошкообразных антигенов, ассоциированных с НВV, а также интеграцией НВV ДHК в геном клеток печени. Кроме того, имеется вероятность того, что NANBH вызывается более чем одним инфекционным агентом, а также возможность того, что NANBH не был диагностирован. Более того, неясно, что обнаруживает серологический анализ в сыворотке пациентов с NANBH. Было примято, что агаро-гелевая диффузия и противоиммуноэлектрофоретический анализ обнаруживают аутоммунные реакции или неспецифические белковые взаимодействия, которые иногда происходят между образцами сыворотки, и что они не отражают специфических реакций NANBH антигенантитело. Иммумофлюоресцентный анализ, ферментмо-связанный иммуносорбентный анализ и радиоиммуноанализ обнаруживают низкие дозы материала типа ревматоидного фактора, который часто присутствует в сыворотке пациентов с NANBH, а также у пациентов с другими гепатитовыми и негепатитовыми заболеваниями. Часть обнаруживаемой активности может представлять антитело к обнаруживаемым у хозяина цитоплазмическим антигеном. Существовали ряд кандидатов NANBV. Смотри, например, обзорную работу Рrince (1983), Feinstone и Hoofnagle (1984г.) и Overby (1985, 1986, 1987) и статью Iwarson (1987). Однако, нет никакого доказательства, что любой из этих кандидатов представляет собой этиологический агент NANBH. Существует очень большая потребность в чувствительных специфических способах просеивания и дентификации носителей NANBV и загрязненных NANBV крови или кровяных продуктов. Посттрансфузионньй гепатит (РТН) наблюдается примерно у 10% пациентов, подвергшихся переливанию крови, и NANBH является причиной 90% этих заболеваний. Основная проблема, связанная с этим заболеванием - частое прогрессированке вплоть до хронического заболевания печени (25 - 58%). Уход за бальными, а также предотвращение трансмиссии NANBH кровью и кровяными продуктами или близким контактом лиц, требуют надежного просеивания, диагностических и прогностических средств для обнаружения нуклеиновых кислот, антигенов и антител, связанных с NANBH. Кроме того, существует необходимость в эффективных вакцинах и иммунотерапевтичеоких лекарственных средствах для профилактики и/или лечения заболевания. Заявитель обнаружил новый вирус, вирус гепатита С (HСV), который является основным этиологическим агентом зарождаемого кровью NANBH (ВВ-NANBH). Первая работа данного заявителя, включающая частичную геномную последовательность изолята прототипа HCV, СДС/НСVІ (называется также HCVI) описана в ЕРО Публикация № 318216 (опубликовано 31 мая 1989 года) и в РСТ Публикации № WO 89/04669 (опубликовано 1 июня 1989 года). Описания этих патентных заявок, а также любой соответствующей национальной патентной заявки дается как ссылочный материал. В этих патентных заявках описываются методы рекомбинантной ДНК для клонирования и выражения последовательностей НСV, полипептидов HСV, иммунодиагностические методы анализа НСV, метод диагностической пробы на НСV, анти-НСV антитела, и методы выделения новых HСV последовательностей, включая последовательности новых НСV изолятов. Настоящее изобретение основано отчасти на новых последовательностях VHС и полипептидах, которые не были описаны в Публикации ЕРО № 318216, или в публикации PCТ № WO 89/04669. Настоящее изобретение охватывает применение этих новых последовательностей и полипептидов в иммунодиагностике, в диагностике с использованием пробы, в продуцировании анти-НСV антитела, в технологии PCР и в технологии рекомбинантной ДНК. Кроме того, настоящее изобретение охватывает новый способ иммуноанализа, основанный на иммуногенности полипептидов НСV, описанных в данной заявке.Этот новый заявленный предмет изобретения, разработанный с использованием способа, описанного например, в публикации ЕРО № 318216, имеет дату приоритета, которая предшествует указанной публикации, или является его неотъемлемой частью. Так, настоящее изобретение охватывает новые композиции и способы, используемые для просеивающих образцов для НСV антигенов и антител, и используемые для лечения инфекционных заражений НСV. Одним из аспектов данного изобретения является рекомбинантный полинуклеотид, включающий последовательность, образованную от НСV сДНК, в котором НСV сДНК находится в клоне 13’ или в клоно 26i, или в клоне 59а, или в клоне 84а или в клоне СА156e или в клоне 167в, или в клоне pi 14a, или в клоне СА216а, или в клоне СА290а, или в клоне ад30а, или в клоне 205а, или в клоне 18g, или в клоне 16jh, или в котором HСV с ДНК является последовательностью, определяемую номерами нуклеотида - 319 - 1358 или 8659 – 8866, см. фиг.17. Другим аспектом данного изобретения является очищенный полипептид, включающий эпитоп, кодированный в пределах HСV ОДНИ, в котором НСУ сДНК является последовательностью, определяемой номерами цуклеотидов - 319 - 1348 или 8659 - 8866, см. фиг.17. Следующим аспектом данного изобретения является иммуногенный полипептид, продуцированный клеткой, трансформированной вектором рекомбинантного выражения, включающий ORF от ДНК, образованный от НСV сДНК, в котором НСV сДНК состоит из последовательности, образованной от последовательности НСV сДНК в клоне СА279, или в клоне СА74а, или в клона 13i, или в клоне СА290а, иди в клоне 33С, или в клоне 40в, или в клоне 33в, иди в клоне 25с, или в клоне 14с, или в клоне 8f , или в клоне 33f, или в клоне 33g, или в клоне 39с, или в клоне 15е, и в котором ОRF операбельно связана последовательностью, совместимой с желаемым хозяином. Следующим аспектом данного изобретения является пептид, включающий эпитоп НСV, в котором указанный пептид имеет формулу ААх - ААу, в которой х и у обозначают аминокислотные номера, как показано на фиг.17; и в котором пептид выбран из группы,включающей: AA2850-AA2865, AA2885-AA2905, AA2900-AA2950, AA2910-AA2930, AA2925-AA2950, AA2945- конец (С' терминальный). Следующим аспектом данного изобретения является моноклональное антитело, направленное против эпитопа, кодированного в НСV сДНК, в котором НСV сДНК является последовательностью, определяемой нукдеоткдными номерами -319 - 1348 или 8659 - 8866, см. фиг.17, или является последовательностью, присутствующей в клоне 13i , или в клоне 26j, или в клоне 59а, или в клоке 84а, или в клоне СА156а, или в клоне 167в, или в клоне pi 14а, или в клоне СА216а, или в клоне СА290, или в клоне аg 30с, или в клоне 205а, или в клоне 18g, или в клоне 16h. Следующим аспектом данного изобретения является подучение очищенных поликлональных антител, направленных против полипептида, состоящего из эпитопа, кодированного в пределах НСV сДНК, в котором НСV сДНК является последовательностью, определяемой нуклеотидными номерами - 319 - 1348 или 8659 - 8866, см.фиг.17, или является последовательностью, присутствующей в клоне 13i, или в клоне 26j, или в клоне 59а, или в клоне 84а, иди в клона СА156е, или в клоне 167в, или в клоне рi 14а, или в клоне СА216а, или в клоне СА290а, иди в клоне fg 30а, или в клоне 205а, или в клоне 18g, или и клоне 16jh. Следующим аспектом данного изобретения является полинуклеотидная проба на НСV, где указанная проба состоит из последовательности НСV, образованней от последовательности НСV сДНК, определяемой нуклеотидными номерами - 319 - 1348 или 8659 - 8866, см. фиг.17, или от комплемента последовательности НСV сДНК. Следующим аспектом данного изобретения является набор средств для анализа образцов на присутствие полинуклеотидов от НСV, который включает полинуклеотидную пробу, содержащую нуклеотидную последовательность примерно из 8 или более нуклеотидов, где указанная нуклеотидная последовательность образована от НСV сДНК, которая представляет собой последовательность, определяемую нуклеотидными номерами - 319 - 1348 или 8659 - 8866, см. фиг.17, где нуклеотидная проба находится в подходящем приемнике. Следующим аспектом данного изобретения является набор средств для анализа образцов на присутствие антигена НСV, включающих антитело, которое иммунологически реагирует с антигеном НСV, где антиген содержит эпитоп, кодированный в пределах НСV сДНК, которая представляет собой последовательность, определяемую нуклеотидными номерами - 319 - 1348 иди 8659 -8866, см.фиг.17, или где НСV сДНК находится в клоне 13i, или в клоне 26j, или в клоне 59а, или в клоне 84а, или в клоне СА156е, или в клоне 167в, или в клоне pi 14a, или в клоне СА216a, или в клоне СА290а, или в клоне аg 30а, или в клоне 205а, или в клоне 18g, или в клоне 16jh. Следующим аспектом данного изобретения является набор средств для анализа образцов на присутствие антитела НСV, включающих антигенний полипептид, содержащий эпитоп НСV, кодированный в пределах НСV сДНК, который является последовательностью, определяемой нуклеотидными номерами 319 - 1348 или 8659 - 8866 на фиг.17, или находится в клоне 13i, или в клоне 26j, или в клоне 59а, или в клоне 84а, или в клоне СА156е, или в клоне 167в, или в клоне рі 14а, или в клоне СА216а, или в клоне СА290а, или в клоне аg 30а, или в клоне 205а, иди в клоне 18g или в клоне 16jh. Следующим аспектом данного изобретения является набор средств для анализа образцов на присутствие антитела НСV, которые включают антигенный полипептид, выраженный от НСV сДНК в клоне СА279а, или в клоне СА74а, или в клоне 13i, или в клоне СА290а, или в клоне 33С, или в клоне 40в, или в клоне 33в, или в клоне 25с, или в клоне 14с, или в клоне 8f, или в клоне 33f, или в клоне 33g, или в клоне 39с, или в клоне 15е, где антигенный полипептид присутствует в подходящем приемнике. Следующим аспектом данного изобретения является способ обнаружения нуклеиновых кислот НСV в образце, включающий: а) реакцию нуклеиновых кислот образца с полинуклеотидной пробой на НСV, где указанная проба состоит из последовательности НСV, образованной от последовательности НСV сДНК, которая является последовательностью, определяемой нуклеотидными номерами - 319 - 1348 или 8659 - 8866, на фиг.17, и где реакция осуществляется в условиях, обеспечивающих образование полинуклеотидного дуплекса между пробой и нуклеиновой кислотой НСV от образца; и в) обнаружение полинуклеотидного дуплекса, который содержит эту пробу, образуемого (дуплекса) в этапе а). Следующим аспектом настоящего изобретения является иммуноанализ на обнаружение антигена НСV, включающий: а) инкубацию образца, который, как предполагается, содержит антиген НСV, с антителом, направленным против эпитопа НСV, кодированного а НСV сДНК, где НСV сДНК является последовательностью, определяемой нуклеотидными номерами - 319 - 1348 или 8659 - 8866, на фиг.17, или является последовательностью, присутствующей а клоне 13i, или в клоне 26j, или в клоне 59а, или в клоне 84а, или а клоне СА156е, или в клоне 167в, или в клоне рі 14а, или а клоне СА216а, яли в клоне СА290а, или в клоне аg 30а, или в клоне 205а, или в клоне 18g, или в клоне 16jh, и где инкубация осуществляется в условиях, обеспечивающих образование комплекса антиген-антитело; и в) обнаружение комплекса антитело-антиген, образуемого в этапе (а), который содержит антитело. Следующим аспектом настоящего изобретения является иммуноаналиэ на обнаружение антител, направленных против антигена НСV, включающий: а) инкубацию образца, который, как предполагается, содержит анти-НСV антитела с антигенным полипептидом, содержащим эпитоп, кодированный в НСV сДНК, или НСV сДНК является последовательностью, определяемой нуклеотидными номерами - 319 – 1348 или 8659 - 8866 на фиг.17, или является последовательностью, (присутствующей в клоне 13i, или в клоне 26j, или в клоне 59а, или в клоне 84а, или в клоне СА156е, или в клоне 167в, или в клоне рі 14а, или в клоне СА216а, или в клоне СА290а, или в клоне аg 30а, или в клоне 205а, или в клоне 18g, или в клоне 16jh, и где инкубация осуществляется в условиях, которые обеспечивают образование комплекса антиген-антитело и обнаружение комплекса антитело-антиген, образуемого в этапе (а), который содержит антигенный полипептид. Следующим аспектом данного изобретения является вакцина для лечения от инфекционного заражения НСV, включающая иммуногенный полипептид, содержащий зпитоп НСV, кодированный в НСV сДНК, где НСV сДНК является последовательностью, определяемой нуклеотидными номерами - 319 - 1348 или 8659 - 8866 на фиг.17, или является последовательностью, присутствующей в клоне 13i, или а клоне 26j, или в клоне 59а, или в клоне 84а, или в клоне СА156е, или в клоне 167в, или в клоне рі 14а, или в клоне СА216а, или в клоне СА290а, или в клоне аg 30a, или в клоне 205a, или в клоне 18g, или в клоне 16jh, и где иммуногенный полипептид присутствует в фармакологически эффективной дозе в фармакологически пригодном эксципиенте. Согласно следующему аспекту данного изобретения предусматривается способ продуцирования антител к НСV, включающий ввод в отдельного пациента выделенного иммуногенного полипептида, содержащего эпитоп НСV, кодированный в НСV сДНК, где НСV сДНК является последовательностью, определяемой нуклеотидными номерами - 319 - 1348 или 8659 - 8866 на фиг.17, или является последовательностью, присутствующей в клоне СА279а, или в клоне СА74а, или в клоне 13i, или в клоне СА290а, или в клоне 33С, или в клоне 40в, или а клоне 33в, или в клоне 25c или в клоне 14с, или в клоне 8f, или в клони 33f, или в клоне 33g, или в клоне 39с, или в клоне 15е, и где иммуногенный полипептид присутствует в фармакологически эффективной дозе в фармакологически пригодном экспециенте. Следующим аспектом данного изобретения является античувствительный полинуклеотид, образованный от НСV сДНК, в котором НСV сДНК появляется последовательностью, показанной на фиг.17. Следующим аспектом данного изобретения является способ получения очищенного полипептида слияния С100-3, включающий: а) предусмотрение сырого клеточного лизата, содержащего полипептид С100-3, в) обработку сырого клеточного лизата таким количеством ацетона, которое приводит к осаждению полипептида, с) выделение и солюбилизацию осажденного материала, d) выделение полипептида C100-3 методом анионообменной хроматографии, и e) дальнейшее выделение полипептида С100-3 этапа (d) методом гель-фильтрации. Краткое описание рисунков Фиг.1 показывает последовательность НСV сДНК в клоне 12f, и кодированные в ней аминокислоты. Фиг.2 показывает последовательность НСV сДНК в клоне К9-1, и кодированные в ней аминокислоты. Фиг.3 показывает последовательность клона 15е и кодированные в ней аминокислоты. Фиг.4 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне 13i, кодированные в ней аминокислоты, и последовательность, которая перекрывается клоном 12f. Фиг.5 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне 26j, кодированные в ней аминокислоты, и последовательности, который перекрываются клонам 13i. Фиг.6 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне СА59а, кодированные в ней аминокислоты и последовательности, которые перекрываются клонами 26j и К9-1. Фиг.7 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне СА84а, кодированные в ней аминокислоты, и последовательности, которые перекрываются клоном СА59а. Фиг.8 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне СА156е, кодированные в ней аминокислоты, и последовательности, которые перекрываются СА84а. Фиг.9 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК а клоне СА167в, кодированные в ней аминокислоту, и последовательности, которые перекрывают СА156е. Фиг.10 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне СА216а, кодированные в ней аминокислоту, и перекрытие клоном СА167в. Фиг.11 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне СА290а, кодированные в ней аминокислоты, и перекрытие клоном СА216.а Фиг.12 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне ag 30а, и перекрытие клоном СА290a. Фиг.13 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне СА205а, и перекрытие последовательностью НСV сДНК в клоне СА290а. Фиг.14 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне 18g, и перекрытие последовательностью НСV сДНК в клоне аg 30а. Фиг.15 показывает нуклеотидную последовательность НСV сДНК в клоне 16jh, кодированные в ней аминокислоты и перекрытие нуклеотидов последовательностью НСV сДНК в клоне 15а. Фиг.16 показывает ОRF последовательности НСV сДНК, образованной от клонов p 14a, СА167в, СА156е, СА84а, СА59а, К9-1, 12f, 14і , 11в, 7f , 7е, 8h, 33с. 40в, 37в, 35, 36, 81, 32, 33в, 25с, 14с, 8f, 33f , 33g, 39c, 35f, 19g и 15e. На фиг.17 показана чувствительная нить компилированной последовательности НСV сДНК, образованной от описанных выше клонов, и компилированная последовательность НСV сДНК, опубликованная в патенте ЕРО № 318216. Клоны, от которых образована данная последовательность представляют собой: в114а, 18g, fg 30а, CA205a, СА290a. СА216а, рі 14а, СА167в, СА156е, СА84а, СА59а, К9-1 (называемый также К9-I),26j, 13i, 12f, 14i, 11в, 7f, 7e, 8h, 33с, 40в, 37в, 35, 36, 81, 32, 33в, 25с, 14с, 8f, 33f, 33g, 39с, 35f, 19g, 26g, 15e, в5a и 16jh. На этом рисунке три обозначения над последовательностью показывают положение путативного инициирующего метионинового кодона. Кроме того, на данном рисунке показана аминокислотная последовательность путативного полибелка, кодированного в композите НСV сДНК. Фиг.18 представляет собой схематическое изображение метода отсева иммунологической колонии, используемого в изучении антигенной карты. Фиг.19 показывает профили гидрофобности полибелков, кодированных в НСV и в вирусах West Nile. Фиг.20 представляет собой линию профиля гидрофильности/гидрофобности и антигенного индекса путативного полибелка НСV.) Фиг.21 показывает сохраняемые солинейные пептиды в НСV и Флавивирусах. Способы осуществления данного изобретения Дмфиниции Термин "вирус гепатита С" принят специалистами в данной области для неизвестного ранее этиологического агента NANBH. В соответствии с этим используемый в данном описании термин "вирус гепатита С” (НСV) относится к агенту, вызывающему NANBH, который ранее относился к NANBV и/или ВВ NANBV. Термины НСV, NANBV и ВВ-NANBV в данном описании могут быть взаимозаменяемы. В продолжение толкования этой терминологии следует сказать, что заболевание, вызванное НСV, ранее называемое гепатитом NANB (NANBH), называется гепатитом С. Термины NANBH и гепатит С в данном описании могут использоваться как вэаимозаменяемые. Термин "НСV", используемый в данном описании, означает визы вируса, патогенные штаммы которых вызывают NANBH, и образованные от него ослабленные штаммы или дефектные интерферирующие частицы. Геном НСV состоит из РНК. Известно, что содержащие РНК вирусы имеют относительно высокие степени спонтанной мутации, то есть порядка 10-3 – 10-4 на введенный нуклеотид (Fields и Knipe, 1986г.). Следовательно, существуют многие штаммы, которые могут быть вирулентными или авирулентными в пределах разновидностей НСV, описанных здесь. Описанные здесь композиции и способы обеспечивают возможность распространения, идентификации, обнаружения и выделения различных НСV штаммов или изолятов Более того, данное описание обеспечивает возможность приготовления и диагностики вакцин для различных штаммов, а также композиций и способов, которые находят применение для отбора процедур получения aнтивирycных агентов для фармакологического использования, например агентов, которые ингибируют репликацию НСV. Изложенная здесь информация, хотя и с описанием производного от штамма прототипа или иэолята НСV, который далее будет называться СДС/НСVI (а также называется НСVI), вполне достаточна для того, чтобы позволить таксономисту по вирусам идентифицировать другие штаммы, которые охватываются данными видами. Приведенная здесь информация позволяет полагать, что НСV является вирусом типа Флави. Морфология и состав Флавивирусных частиц уже известны и обсуждаются в публикации Brinton (1986). Что касается морфологии, то обычно Флавивирусы содержат центральный нуклеокапсид, окруженный двойным слоем липида. Вирусы имеют сферическую форму, и диаметр их составляет примерно 25 - 30мм. Вдоль наружной поверхности вирионовой оболочки имеются выступы длиной примерно 5 - 10мм с концевыми утолщениями диаметром примерно 2нм. Различные штаммы или изоляты НСV имеют различные отклонения аминокислотных и нуклеоновокислотных звеньев при сравнении их с изолятом прототипа НСVI. Многие изоляты показывают значительную, (то есть более чем примерно 40%) гомологию в общей аминокислотной последовательности по сравнению с НСVІ. Однако, может быть также найдено, что другие НСV изоляты имеют меньшую гомологию. Они определены как НСV штаммы согласно различным критериям, таким как ОRF с содержанием примерно от 9000 нуклеотидов до примерно 12000 нуклеотидов, кодирующий полибелок аналогичный по своим размерам НСVI, кодированный полибелок аналогичного гидрофобного и антигенного характера с НСVI, и присутствие солинейных пептидных последовательностей, которые сохраняются с НСVI. Кроме того, данный геном будет являться положительно вытянутой РНК. НСV кодирует по меньшей мере один эпитоп, который иммунологически тождественен эпитопу в геноме НСV, от которого образованы описанные здесь сДНК-авм. Этот зпитоп предпочтительно заключает в себе описанную здесь аминокислотную последовательность. Этот эпитоп уникален для НСV по сравнению с другими известными Флавивирусами. Уникальность данного эпитопа межет быть определена по его иммунологической активности с анти-НСV антителами, и по отсутствию иммунологической реакции с антителами к другим видам Флавивирусов. Способы определения иммунологической активности уже известны в данной области; например это радиоиммуноанализ, иммуноферметный анализ (ELISА), гемагглютинация, и здесь дается ряд примеров подходящих приемов анализа. Кроме указанных выше, могут быть применимы следующие параметры нуклеинэвокислотной гомрлогми и аминокислотной гомологии, либо индивидуально, либо в сочетании, для идентификации штамма или изолята, такого как НСV. Поскольку НСV штаммы и изоляты находятся в биологически эволюционной связи друг с другом, то можно полагать, что общая гомология этих геномов на нуклеотидном уровне составит примерно 40% или более, вероятно 60% или более, и даже еще более вероятно примерно 80% или более; и кроме того, можно полагать, что это будут соответствующие смежные последовательности, заключающие в себе не менее чем примерно 13 нуклеотидов. Соответствие между геномной последовательностью путативного НСV штамма и последовательностью СДС/НСVI сДНК может быть определено уже известными в данной области способами. Так, например, оно может быть определено путем прямого сравнения информации последовательности полинуклеотида от путативной НСV, и описанной (или описанных) здесь последовательности (последовательностей) НСVУ сДНК. Так, например, оно может быть определено также путем гибридизации полинуклеотидов в условиях, которые образуют устойчивые дуплексы между гомологическими областями (например такие, которые будут использоваться до S, гидролитического разложения) с последующим гидролитическим разложением однониточной специфической нуклеаэой (или нуклеазами), с последующим определением размеров гидролитически разложенных фрагментов. Ввиду биологически эволюционной связи штаммов или изолятов HCV, путативные штаммы НСV или иэолятм идентифицируемы за счет их гомологии на уровне полипептида. Обычно HCV штаммы или изоляты гомологичны более чем на 40%, более вероятно гомологичны более чем на 70%, и даже еще более вероятно более чем на примерно 80%, и некоторые из них могут быть гомологичны даже более чем на примерно 90% на полипептидном уровне. Способы определения гомологии аминокислотной последовательности уже известны. Так, например, аминокислотная последовательность может быть определена прямым путем и сопоставлена с описанной здесь последовательностью. Как возможный вариант может быть определена нуклеотидная последовательность геномного материала путативного HCV (обычно посредством промежуточной сДНК), может быть определена кодированная аминокислотная последовательность, и соответствующие области сравниваются друг с другом. Под используемым здесь понятием "полинуклеотид, образованный от обозначенной последовательности" имеет в виду полинуклеотидная последовательность, которая состоит из последовательности, заключающей в себе не менее чем примерно 6 нуклеотидов, предпочтительно не менее примерно 8 нуклеотидов, более предпочтительно не менее чем примерно 10 - 12 нуклеотидов, и еще более предпочтительно не менее, чем примерно 15 - 30 нуклеотидов, соответствующая области обозначенной нуклеотидной последовательности. Понятие "соответствующая" означает гомологичная или комплементарная обозначенной последовательности. Последовательность области, от которой образован полинуклеотид, предпочтительно гомологичная или комплементарная последовательности, которая уникальна для НСV генома. Независимо от того, уникальна ли последовательность для НСV генома, она может быть определена способами известными для специалистов в данной области. Так, например, данная последовательность может быть сравнена с последовательностью банка данных, например генного банка, для определения, того, присутствует ли она в незараженном хозяине или других организмах. Данная последовательность может быть также сопоставлена с известными последовательностями других вирусных агентов, включая агенты, которые индуцируют гепатит, например, НАV, HBУ и HДУ, и с другими членами семейства Flaviviridae. Соответствие или несоответствие образованной последовательности с другими последовательностями также может быть определено путем гибридизации в подходящих условиях вытягивания. Способы гибридизации для определения комплементарности нуклеиновокислотных последовательностей уже известны в данной области и обсуждаются здесь. Смотри также, например, публикацию Maniatis и др.,1982. Кроме того, несоответствие дуплексных полинуклеотидов, образованных путем гибридизации, мажет быть определено уже известными способами, включающими, например, гидролитическое разложение нуклеазой, такой как SI, которая специфически ферментно разлагает однониточные области в дуплексных палинуклеотидах. Области, от которых могут быть образованы типичный последовательности ДНК, включают, например (но не ограничиваются ими) области, кодирующие специфические эпитопы, а также нетранскрибированные и/или нетранслированные зоны. Образованный полинуклеотид не является обязательно физически образованным от нуклеотидной последовательности, он может быть обрадован любым путем, включал, например, химический синтез или ДНК репликацию или обратимую транскрипцию или транскрипцию. Кроме того, комбинации зон, соответствующих зоне обозначенной последовательности, могут быть модифицированы уже известным в данной области образом, определяемым конечным использованием. Аналогично, полипептидная или аминокислотная последовательность, "образованная от обозначенной нуклеиновокислотной последовательности, относится к полипепдиту, имеющему аминокислотную последовательность, идентичную последовательности полипептида, кодированного в этой последовательности, или его участок, где указанный участок состоит из менее чем из 3 - 8 аминокислот, более предпочтительно не менее чем из 8 - 10 аминокислот, и еще более предпочтительно не менее чем из 11 – 15 и аминокислот, или который иммунологически идентичен полипептиду, кодированному в данной последовательности. Рекомбинантный или образованный полипептид не является обязательно транслированным от обозначенной нуклеиновокислотной последовательности, например последовательности НСV сДНК, описанной в данной заявке, или от HCV генома; он может быть образован любым способом, включая, например, химический синтез или выражение рекомбинантной выраженной системы, или изоляцию из мутированного HCV. Рекомбинантный или образованный полипептид может включать один дли несколько аналогов аминокислот или аминокислот неестественного происхождения в своей последовательности. Способы вставки аналогов аминокислот в последовательность уже известны в данной области. Они могут осуществляться с использованием одной или нескольких меток, которые уже известны для специалистов в данной области. Под понятием "рекомбинантный полинуклеотид" в данном описании имеется в виду полинуклеотид геномного, сДНК, полусинтетического или синтетического происхождения, который благодаря его происхождению или обработке: (I) не ассоциируется со всем полинуклеотидом или с частью полинуклеотида, с которым он ассоциирован по своей природе; (2) связывается с полинуклеотидом отличным от того, с которым он связан по своей природе; или (3) не встречается в природе. Под понятием "полинуклеотид" в описании данной заявки имеется в виду полимерная форма нуклеотидов любой формы, либо рибонуклеотидов, либо деоксирибонуклеотидов. Этот термин охватывает лишь основную (или первичную) структуру молекулы. Так, этот термин включает двух- и однониточные ДНК, а также двух- и однониточные РНК. Он охватывает также известные типы модификаций, например, метки, которые уже известны в данной области, метилирование, "кэп”-группировки, замещение одного или нескольких нуклеотидов естественного происхождения аналогом, модификации интернуклеотидов, например модификации интернуклеотидов с незаряженными связями (например метилфосфонаты, сложные трифосфорэфиры, фосфоамидаты, карбаматы и т.д.) и с заряженными связями (например фосфоротиоаты, фосфородитиоаты, и т.д.), модификации, содержащие ответвленные группы, такие как балки (включая, например, нуклеаэы, токсины, антитела, сигнальные пептиды, поли-L - дизин и т.д.), модификации с интеркаляторами (например акридин, псоралелен и т.д,), модификации, содержащие хелатообразующие агенты (например, металлы, радиоактивные металлы, бор, окислительные металлы, и т.д.), модификации, содержащие алкилирующие агенты, модификации с использованием модифицирующих связей (например, альфа-аиомерные нуклеиновые кислоты и т.д.), а также немодифицированные формы полинуклеотида. Понятие "очищенный вирусный полинуклеотид" относится к геному HCV или его фрагменту, который в основном свободен, то ость содержит менее чем примерно 50%, предпочтительно менее чем примерно 70% и даже еще более предпочтительно менее чем примерно 90% полипептидов, с которыми ассоциирован естественным образом вирусный полинуклеотид. Способы очистки вирусных полинуклеотидов от вирусных частиц уже известны в данной области, и включают, например, разрыв частиц с хаотропическим агентом, дифференциальную экстракцию и отделение полинуклеотида (полинуклеотидов) и полипептидов методами ионнообменной хроматографии, хроматографии сродства и седиментации, в соответствии с плотностью. Понятие "очищенный” вирусный полипептид" относится к полипептиду HCV или его фрагменту, который в основном свободен, то есть содержит менее чем примерно 50%, предпочтительно менее чем примерно 70% и еще более предпочтительно менее чем примерно 90% клеточных компонентов, с которыми естественно ассоциирован вирусный полипептид. Способы очистки вирусных полипептидов уже известны, и примеры этих способов описываются здесь. Под понятием "очищенный вирусный полинуклеотид" имеется в виду геном HCV или его фрагмент, который фактически свободен, то есть содержит менее чем примерно 20%, предпочтительно менее чем примерно 50%, и еще более предпочтительно менее чем примерно 70% полипептидов, с которыми естественно связан вирусный полинуклеотид. Способы очистки вирусных полинуклеотидов от вирусных частиц уже известны, и они включают, например, разрыв частицы с хаотропным агентом и отделение полинуклеотида (полинуклеотидов) и полипептидов способами ионообменной хроматографии, хроматографии сродства и седиментации в соответствии с плотностью, Термины "рекомбинантные клетки хозяина", "клетки хозяина", "клетки", "клеточные линии", "клеточные культуры" и другие такие термины, охватывающие микроорганизмы или высшие эйкариотические клеточные линии, культивированные как единые клеточные элементы, относятся к клеткам, которые могут быть или были использованы как реципиенты для рекомбинантного вектора или другой переносимой ДНК, и включают потомство исходной клетки, которая была трансфектирована. Совершенно понятно, что потомство единственной родительской клетки может быть необязательно полностью идентично по своей морфологии или в отношении геномного или общего ДНК комплемента как основного родителя за счет естественной, случайной или заранее намеченной мутации. "Репликон" является любым генетическим элементом, например, плазмидой, хромосомам, вирусом, космидом и т.д., который ведет себя как автономная единица подинуклеотидной репликации в пределах клетки, то есть который способен к репликации под его собственным контролем. "Вектор" представляет собой репликон, в котором связан другой полинуклеотидный сегмент таким образом, что происходит репликация и/или выражение присоединенного сегмента. "Контрольная последовательность" относится к полипептидным последовательностям, которые обязательно воздействуют на выражение кодирующих последовательностей, с которыми они сжиты. Природа таких контрольных последовательностей различна в зависимости от организма хозяина; в др прокариотах такие контрольные последовательности обычно включают промотор, рибосомную связывающую точку и терминаторы; в эйкариотах обычно такие контрольные последовательности включают промоторы, торминаторы и в некоторых случаях усилители. Термин, “контрольные последовательности" включают, как минимум, все компоненты, присутствие которых необходимо для выражения, и может включать также дополнительные компоненты, присутствие которых желательно, например ведущие последовательности. Термин "операбельно связанный" относится к сопоставленной последовательности, в которой указанные компоненты находятся в такой взаимосвязи, которая позволяет им функционировать желаемым образом. Контрольная последовательность, "операбельно связанная" с кодирующей последовательностью, сшита таким образом, что выражение этой кодирующей последовательности достигается в условиях сопоставимых с контрольными последовательностями. Под понятием "открытая рамка очитки" (ORF) имеется в виду область полинуклеотидной последовательности, которая кодирует полипептид; эта область может представлять собой часть кодирующей последовательности или общую кодирующую последовательность. "Кодирующая последовательность* является полинуклеотидной последовательностью, которая транскрибируется в мРНК и/или транслируется в полипептид при размещении ее под контролем соответствующих регуляторных последовательностей. Границы кодирующей последовательности определяются трансляционным начальным кодоном у 5'-конца и трансляционным стоп кодоном у 3’ конца. Кодирующая последовательность может включать мРНК, сДНК и рекомбинантные полинуклеотидные последовательности, но не ограничиваться ими. "Иммунологически идентифицируемый с/ка" относится к присутствию эпитопа (эпитопов) и полипептида (полипептидов), обычно белков HCV. Иммунологическая идентичность может быть определена путем связывания антитела и/или конкуренции при связывании; эти способы уже известны для специалистов в данной области, и также иллюстрируются ниже. Под используемым здесь понятием "эпитоп" имеется в виду антигенная детерминанта полипептида; эпитоп может включать три аминокислоты в пространственной конформации, которая идентична данному эпитопу, и обычно эпитоп состоит не менее чем из пяти аминокислот, и еще чаще он состоит не менее чем из 8 - 10 таких аминокислот. Способы определения пространственной конформации аминокислот уже известны, и включают, например, рентгеновскую кристаллографию и 2-двумерный ЯМР. Полипептид является "иммунологически активным" с антителом, когда он связывается с антителом за счет распознавания антителом специфического эпитопа, содержащегося в полипептиде. Иммунологическая активность может быть определена связыванием антитела; в частности, кинетикой связывания антитела; и/или путем конкуренции при связывании с использованием в качестве компетитора (компетиторов) известного полипептида (полипептидов), содержащего эпитоп, против которого направлено антитело. Способы определения того, является ли полипептид иммунологически активным с антителом, уже известим в данной области. Под понятием "иммуногенный полипептид" имеется в виду полипептид, который обнаруживает клеточную и/или гуморральную реакцию, независимо от того, один он или связан с носителем в присутствии или в отсутствии адьюванта. Под понятием "полипептида имеется в виду полимер аминокислот и не имеется в виду специфическая длина продукта; так, в определение полипептиды включены пептиды, олинопептиды и белки. Этот термин не охватывает также или исключает модификации вторичного выражения полипептида, например гликозилирования, ацетилирования, фосфорилирования и т.д. В это понятие включены, например, полипептиды, содержащие одни или несколько аналогов аминокислоты (включая, например, аминокислоты неестественного типа и т.д.), полипептиды с замещенными связями, и другие модификации, уже известные в данной области, как естественного, так и неестественного происхождения. Под используемым здесь понятием "трансформация" имеется в виду вставка экзогенного полкнуклеотида в клетку хозяина, независимо от используемого способа вставки, например прямое поглощение, трансдукция, f-спаривание или эдектропорация. Экзогенный полинуклеотид может сохраняться в виде неинтегрированного вектора, например в виде плазмиды, или как другой возможный вариант, может интегрирование связываться с геномом хозяином. Термин "обработка" относятся к профилактике и/или клиническому лечению. Под "индивидуумами” имеются в виду позвоночным животные, в частности млекопитающие животные, и она включают, но не ограничиваются ими, домашних животных, диких животных, и приматов, в том числе человека. Понятие "чувствительная нить" нуклеиновой кислоты охватывает последовательность, которая имеет гомологию с последовательностью мРНК. Понятие "анти-чувствительная нить" охватывает последовательность, которая дополняет последовательность "чувствительной нити". Под понятием "положительный ниточный геном" вируса имеется в виду геном, независимо от того РНК или ДНК, который является однониточным и который кодирует вирусный полипептид (полмпептиды). Примеры положительных ниточных вирусов РНК включают Togavidae, Coronaviridae, Picornaviridae и Caleviridae. Сюда относятся также Flaviridae которые первоначально классифицировались как Togavidae. Смотри публикацию, Fields и Rnihe, 1986г. Понятие "содержащий антитело компонент организма охватывает компонент организма индивидуума, который является источником представляющих интерес антител. Содержащие антитело компоненты организма уже известны в данной области, и включают (но не ограничиваются ими), например, плазму, сыворотку, цереброспинальную жидкость, лимфатическую жидкость, наружные части дыхательных органов, кишечника и половых путей, слезу, слюну, молоко, белые кровяные клетки и миеломные клетки. Под термином "очищенный HCV” имеется в виду препарат HCV, который был выделен из клеточных компонентов, с которыми обычно ассоциируется вирус, и из других типов вирусов, которые могут присутствовать в инфекционно зараженной ткани. Способы выделения вирусов уже известны для специалистов в данной области и включают, например, центрифугирование и хроматографию методом средства; ниже подробно описывается способ получения очищенного HCV. Используемое здесь понятие "частицы HCV" включает полный вирион, а также частицы, которые являются промежуточными при образовании вириона. Частицы HCV обычно имеют один или несколько белков HCV, ассоциированных с нуклеиновой кислотой HCV. Под термином "проба" имеется в виду полинуклеотид, который образует гибридную структуру с последовательностью в конечной желаемой области за счет комплементарности по меньшей мере одной последовательности в этой пробе с последовательностью в конечной желаемой области. Однако эта проба не содержит последовательность комплементарную последовательности (или последовательностям), используемой для затравки реакции полимеразной цепи. Под термином "конечная желаемая область" имеется в виду область нуклеиновой кислоты, которая должна быть усилена и/или обнаружена. Под термином "вирусная РНК", которая включает HCV РНК, имеются в виду РНК от вирусного генома, ее фрагменты, ее транскрипты, и образованные от нее мутантные последовательности. Под понятием "биологический образец" имеется в виду образец ткани или жидкости, выделенный из индивидуума; который включает (но не ограничивается ими), например, плазму, сыворотку, церебральноспинальную жидкость, лимфатическую жидкость, наружные части кожи, дыхательных путей, кишечника и половых путей, слезу, слюну, молоко, кровяные клетки, опухоли, органы, а также образцы составляющих клеточных культур "ин витро" (включающие, но не ограничивающиеся ими, кондиционированную среду, подученную в результате роста клеток в среде клеточного разведения, путативно вирусно зараженные клетки, рекомбинантные клетки и клеточные компоненты). II. Описание изобретения В настоящем изобретении используются обычные (если не указаны другие) способы молекулярной биологии, микробиологии, рекомбинантной ДНК и иммунологии, которые известны для специалистов в данной области. Такие способы подробно разъясняются в литературе. Смотри, например, публикацию Maniatis, Fitsch и Sainbrook. Молекулярная генетика; Лабораторное руководство, 1982г.; Клонирование ДНК, тома I и II (D. N. Glover, ред. 1985г.); Синтез олигонуклеотидов (M.J. Gait, ред. 1984); Гибридизация нуклеиновых кислот (B.D. Hames и S.J. Higgins, ред. 1984); Транскрипция и трансляция (B.D. Hames и S.J. Higgins, ред. 1984); Клеточная культура животных (R.J. Freshney, ред.1985); Иммобилизированные клетки и ферменты (J.R.L Press 1986), B. Perbal. Практическое руководство по молекулярному клонированию (1984); серии "Методы в энзимологии (_Academic Press Une. Векторы генного переноса клеток млекопитающих животных (J.H. Miller и M.P. Calos, ред. 1987г. Cold Spring Harbor Laboratory). Методы в энзимологии, том 154 и 155 (Wu и Grossman и Wu, ред, соответственно); Mayer и Walker, ред.1987г.. Иммунологические методы в клеточной и молекулярной биологии (Academic Press, London), Scopes 1987г. Очистка белков: Принципы и практика. Второе издание ( Springer-Verlag и Справочник по экспериментальной иммунологии, т.т.I-IУ (D.M. Weir и C.C. Blackwell, ред. 1986г.). Все патенты, патентные заявки и публикации, приведенные в данном описании, ниже и выше, даются как противопоставленные материалы. Используемые материалы и осуществляемые способы согласно данному изобретению возможны благодаря применения семейства нуклеотидных последовательностей, взятых из библиотек ДНК, которые включают HCV сДНК последовательности. Эти сДНК библиотеки составлены из нуклеиновокислотных последовательностей, присутствующих в плазме инфекционно зараженных HCV шимпанзе. Составление одной из этих библиотек (АТСС № 40394), "с" библиотеки, сообщается в публикации ЕРО № 318216. В ней сообщаются несколько клонов, содержащих HCV сДНК, которые получены из "с” библиотеки. Хотя другие сообщаемые здесь клоны получаются из других библиотек HCV сДНК, присутствие клонов, содержащих тайные последовательности в библиотеке "с" подтверждается. Как обсуждается в публикации ЕРО № 318216, семейство последовательностей HCV сДНК, взятых из “с" библиотеки не имеет природу происхождения от человека или шимпанзе, и не обнаруживает гомологию с последовательностями, содержащимися в геноме НВУ. Доступность HCV сДНК-аз, описанных здесь, позволяет построить нуклеотидные пробы, которые являются реагентами, используемыми для обнаружения вирусных полинуклеотидов в биологических образцах, включая донорскую кровь. Так например, из данных последовательностей возможно синтезировать ДНК олигомеры примерно из 8 - 10 нуклеотидов иди больше, которые служат в качестве проб гибридизации для обнаружения присутствия HCV ДНК, например, в донорской крови, сыворотке субъектов, у которых предполагается наличие вируса, или в системах клеточной культуры, в которых вирус является воспроизводящимся. Кроме того, данные последовательности сДНК позволяют также построить и продуцировать специфические полипептиды HCV, которые используются как диагностические реагенты на присутствие антител, образующихся при заражении HCV. Антитела к очищенным полипептидам, образованные от сДНК-аз, могут использоваться также зля обнаружения вирусных антигенов в биологических образцах, включающих, например, образцы донорской крови, сыворотку от пациентов, зараженных NANBH, и в системах тканевой культуры, используемых для репликации HCV. Кроме того, описанные здесь иммуногенные полипептиды, которые кодируются частях ORF от HCV cДНК, как показано на фиг.17, также используются для отсева HCV, диагноза и лечения, и для образования антител, которые служат для этих целей. Кроме того, описанные здесь новые последовательности сДНК дают возможность дополнительно характеризовать геном HCV. Полинуклеотидные пробы и затравки, образованные от этих последовательностей, могут быть использованы для усиления последовательностей, присутствующих в сДНК библиотеках, и/или для отбора библиотек сДНК для дополнительного перекрытия последовательностей сДНК, которые, в свою очередь, могут быть использованы для получения более перекрывающихся последовательностей. Как указано ниже, а также в публикации ЕРО № 318216, геном HCV обнаруживает РНК, состоящий в основном на большой открытой рамки считки (ОRF), которая кодирует большой полибелок. Описанные здесь последовательности HCV сДНК, полипептиды, образованные от этих последовательностей, и описанные здесь иммунологенные полипептиды, а также антитела, направленные против этих полипептидов, используются также для извлечения и идентификации зарожденных кровью агентов NAВУ(ВВ-NANВУ). Так например, антитела, направленные против эпитопов HCV, содержащихся в полипептидах, образованных от сДНК-аз, могут быть использованы в процессах, основанных на хроматографии сродства для извлечения данного вируса. Как возможный вариант, антитела могут быть использованы для идентификации вирусных частиц, выделенных другими способами. Далее вирусные антигены и геномный материал в выделанных вирусных частицах могут быть охарактеризованы . Наряду с указанным выше, представленная ниже информация позволяет идентифицировать дополнительные штаммы или иэоляты HCV. Изоляция и характеризация дополнительных штампов HCV или иэолятов мажет сопровождаться изоляцией нуклеиновых кислот из компонентов организма, содержащих вирусные частицы и/или вирусные РНК, созданием библиотеки сДНК с использованием полинуклеотидных проб, основанных на описанных ниже пробах HCV сДНК, отбором библиотек на клоны, содержащие описанные ниже последовательности HCV сДНК, и сопоставлением HCV сДНК-аз от новых иэолятов с описанными ниже сДНК-азами. Полипептиды, кодированные в них или в вирусном геноме, могут быть отобраны на иммунологическую перекрестную активность с использованием полипептидов и описанных выше антител. Штаммы или изоляты, которые соответствуют диапазону параметров НСУ, как указано в разделе "Дефиниции”, выше, легко идентифицируемы. Для специалистов в данной области могут быть известим другие способы идентификации штаммов HCV на основе изложенной здесь информации. Выделение последовательностей HCV сДНК Новые последовательности HCV сДНК, описанные ниже, продлевают последовательность сДНК до генома HCV, описанного в публикации ЕРО № 318216. Последовательности, которые присутствуют в клонах в114а, 18g, аg 30а, СА205а, СА290а, СА216а, pi 14а, СА167в, СА156е, СА84а и СА59а, находятся перед указанной последовательностью и при дополнении ее они дают нуклеотиды №№ от - 319 до 1348 составной последовательности HCV сДНК. (Отрицательное число у нуклеотида указывает, что он находится выше того нуклеотида который является началом путативного инициирующего кодона МЕТ). Последовательности, которые присутствуют в клонах a5a и 16jh, находятся за указанной последовательностью и дают нуклеотиды №№ 8659 - 8866 составной последовательности. Составная последовательность HCV сДНК, которая включает последовательность указанных выше клонов, показана на фиг.17. Новые HCV сДНК-азы, описанные здесь, выделяются из ряда библиотек HCV сДНК, включая "с” библиотеку, присутствующую в лямбда gt II (АТСС № 40394). Библиотеки HCV сДНК построены с использованием собранной сыворотки от шимпанзе с хроническим инфекционным заражением HCV и с высоким содержанием вируса, например не менее чем 106 инфекционных доз шимпанзе на мл (СІД/мд). Собранная сыворотка используется для выделения вирусных частиц; нуклеиновые кислоты, выделенные из этих частиц, используются как кодирующая нить ДНК в построении библиотек сДНК до вирусного генома. Процедуры выделения путативных частиц НСУ и построение библиотеки "с" НСУ сДНК описываются в публикации ЕРО № 318216. В данной области известны и другие способы построения HCV сДНК библиотек, и некоторые из этих способов описываются ниже, в примерах. Выделение данных последовательностей осуществляется путем отсева библиотек с использованием синтетических полинуклеотидных проб, последовательности которых образованы от 5'-областм и 3'-области известной последовательности HCV сДНК. Описание способа построения последовательности сДНК представляет собой главным образом исторический интерес. Здесь предусматриваются подученные последовательности (и их комплементы), и эти последовательности или их часть могут быть получены с использованием способов синтеза или путем комбинации способов синтеза с извлечением неполных последовательностей способами аналогичными описанным в данной заявке. Приготовление вирусных полипептидов и фрагментов Доступность последовательностей HCV сДНК или образованных от них нуклеотидных последовательностей (включал сегменты и модификации последовательности) позволяет построить векторы выражения, кодирующие антигенне активные области полипептида, кодированного в любой нити. Эти антигенна активные участки могут быть образованы от покрытия или оболочкового антигена или от сердцевинного антигена, или от антигенов, которые не являются структурным включением, например таких как связывающие полинуклеотид белки, полинуклеотидополимераза (или полимеразы) и другие вирусные белки, необходимые для репликации и/или создания вирусной частицы. Фрагменты, кодирующие желаемые полипептидам, образованы от клонов сДНК с использованием обычного ограничительного ферментного разложения или способами синтеза, и они сживаются в векторы, которые, например, могут содержать участки слитых последовательностей, таких как бета-галактозидаза или высший оксиддимутаза (SOD), предпочтительно SOD Способы и векторы, используемые для продуцирования полипептидов, которые содержат слитые последовательности SOD, описываются в публикации ЕРО № 0196056, опубликованной 1 октября 1986 года. Векторы выражения полипептидов слияния SOD и полипептидов НС , кодированных в ряде клонов HCV, описываются ниже, в примерах. Любой желаемый участок HCV сДНК, содержащий открытую рамку считая в любой чувствительной нити, может быть подучен как рекомбинантный полипептид, такой как созревший или слитый белок; как возможный вариант, полипептид, кодированный в сДНК, может быть получен путем химического синтеза. ДНК, кодирующая желаемый полипептид, независимо от того в слитой или созревшей или не в слитой и не в созревшей форме, который содержит сигнальную последовательность, обеспечивающую секрецию, может быть сшита в векторы выражения, пригодные для любого подходящего хозяина. В настоящее время используются как эйкариотические, так и прокариотические системы хозяев для образования рекомбинантных полипептидов и ниже дается краткая характеристика некоторых более общих контрольных систем и клеточных линий хозяев. Затем полипептид извлекается из лизированных клеток или их среды разведения и очищается в такой степеки, какая необходима для его конечного использования. Очистка может осуществляться уже известными в данной области способами, такими как дифференциальная экстракция, соленое фракционирование, хроматография на ионообменной смоле, хроматография сродства, центрифугирование и т.д. Смотри, например, "Методы в энзимологии", где описываются различные типы способов очистки белков. Такие полипептиды могут использоваться как диагностики или те полипептиды, которые дают нейтрализующие антитела, могут быть приготовлены как вакцины. Антитела, действующие против этих полипептидов, могут быть использованы также как диагностики или для пассивной иммунотерапии. Кроме того, как описывается ниже, антитела к этим полипептидам служат для изоляции и идентификации частиц HCV. Приготовление антигенных полипептидов и конъюгирование с носителем Антигенный участок полипептида обычно относительно небольной - обычно 0 - 10 аминокислот или менее по длине цепи. Фрагменты, составляющие лить 5 аминокислот, могут характеризовать антигенний участок. Эти сегменты могут соответствовать участкам антигена HCV. Согласно этому, при использовании сДНК-аз HCV как основы, ДНК-азы, кодирующие короткие сегменты полипептидов HCV, могут быть выражены рекомбинантно либо как белки слияния, либо как изолированные полипептиды. Кроме того, короткие аминокислотные последовательности могут быть успешно получены путем химического синтеза. В тех случаях, где синтезированный полипептид имеет точную конфигурацию, обеспечивающую точный эпитоп, но слишком мал, чтобы быть иммуногенным, этот полипептид мажет быть связан с соответствующим носителем. Известен целый ряд способов получения такого связывания, включая образование дисульфидных связей с использованием N-сукциниимидил-3-(2-пиридилтио)пропионата (SPOP) и сукциимидил-4-(Nмалеимидоматил)циклогексан-1-карбоксилата (SNCC), полученных от фирмы "Pierce Company”, Рокфорд, Иллинойс (если этот пептид не содержит сульфогидрильную группу, она может быть подучена путем ввода цистеиновой группы). Эти реагенты образуют дисульфидную связь между ними и пептидодистеиновыми группами, на одном белке, и имидную связь через эпсилонамино на лизине или другую свободную аминогруппу, на другом белке. Известен ряд таких дисульфидо/амидо-образующих агентов. Смотри, например, Jmmun. Rev, 1982г., 62, 185. Другие бифункциональные сопрягавшие агенты образуют простой тиоэфир, а не дисульфидную связь. Многие из этих образующих простой тиоэфир агентов являются промышленно доступными и включают активные сложные эфиры 6-малеимидокапроновой кислоты, 2бромуксусной кислоты, 2-иодоуксусной кислоты, 4-(N-малеимидометил)цикдогексан-I-карбоновой кислоты, и т.д. Карбоксильные группы могут быть активированы путем связывания их с сукцинимидом или натриевой солью 1-окси-2-нитро-4-сульфокислоты. В других способах сопряжения антигенов используются система ретравирус "связывающий пептид", как описано в публикации ЕРО № 259149, публикация, которая приведена здесь как противопоставленный материал, Приведенный выше перечень не является исчерпывающим, и могут быть использованы модификации указанных соединений. Может быть использован любой носитель, который сам по себе не вызывает продуцирования антител, вредных для хозяина. Пригодные для этого носители, обычно большие медленно метаболизируемые макромолекулы, такие как белки; полисахариды, такие как функционализированная латексом сефароза, агароза, целлюлоза, целлюлозные шарики и т.д.; полимерные аминокислоты, такие как полиглютаминовая кислота, полилизин и т.д.; аминокислотные сополимеры и неактивные вирусные частицы. Особенно полезными белковыми субстратами являются сывороточные альбумины, гемоцианин Kcynole limpet иммуноглобулиновые молекулы, тироглобулин, овальбумин, тетанусотоксоид и другие белки хорошо известные для специалистов в данной области. Кроме вирусных белков полной длины полезными иммунологическими реагентами являются полипептиды, включающие усеченные аминокислотные последовательности HCV, кодирующие по меньшей мере один вирусный эпитоп. Так, например, полипептиды, включающие такие усеченные последовательности, могут использоваться в качества реагентов в иммуноаналиэе. Эти полипептиды являются также кандидатками субъединичными антигенами в композициях продуцирования антисыворотки или в вакцинах. Хотя эти усеченные последовательности могут быть продуцированы путем различных известных обработок естественного вирусного белка, обычно желательно получать синтетические или рекомбинатные полипептиды, заключающие в себе последовательность HCV. Полипептиды, заключающие в себе эти усеченные HCV последовательности, могут состоять полностью из последовательностей HCV (один или несколько эпитопов либо контактирующих, либо не контактирующих друг с другом), или последовательностей HCV и гетерологических последовательностей в слитом белке. Пригодные для данной цели гетерологические последовательности, которые обеспечивают секрецию из рекомбинантного хозяина, усиливают иммунологическую активность эпитопа (или эпитопов) HCV, или ускоряют сопряженное связывание полипептида с основой иммунопробы или с носителем вакцины. Смотри, например, публикацию ЕРО № 116201, Патент США № 4722840, Публикацию ЕРО № 259149,Патент США № 4629783, описания, которые даны здесь как противопоставленные публикации. Размер полипептидов, включающих усеченные HCV последовательности, может изменяться в широких пределах, причем минимальный размер последовательности является достаточным для эпитопа HCV, в то время как максимальный размер не является критической величиной. Для удобства максимальный размер обычно не намного бальне, чем требуется для желаемых эпитопов и функции (функций) HCV гетерологической последовательности. Обычно усеченная аминокислотная последовательность HCV находится в диапазоне примерно от 5 до 100 аминокислот по длине. Еще более характерно, последовательность HCV будет иметь максимум примерно 50 аминокислот по длине, еще предпочтительней максимум примерно 30 аминокислот. Обычно желательно выбирать последовательности HCV по меньшей мере примерно 10, 12 или 15 аминокислот, максимум вплоть до примерно 20 или 25 аминокислот. Усеченные аминокислотные последовательности HCV, заключающие в себе эпитоп, могут быть идентифицированы различными путями. Так, например, полная вирусная белковая последовательность может быть отсеяна путем приготовления серий коротких пептидов, которые вместе охватывают всю последовательность белка. Пример антигенного отсева участков HCV полибелка дается ниже. Кроме того, используя в качестве исходного, например, 100-мерные полипептиды, можно общепринятым путем испытать каждый полипептид на присутствие эпитопа (эпитопов), проявляющего желаемую активность, и затем испытать значительно меньше и перекрывающие фрагменты от идентифицированного 100-мира на карте представляющего интерес эпитопа. Отсев таких пептидов в процессе иммуноанализа известен для специалистов в данной области. Известно также проведение компьютерного анализа последовательности белка для идентификации белковых эпитопов и последующее приготовление олигопептидов, включающих идентифицированные участки просева. Такой компьютерный анализ аминокислотной последовательности HCV показан на фиг.20, где над антигенным индексом указывается гидрофильный/гидрофобный характер. Аминокислоты нумеруются от начального МЕТ (приложение I), как показано на фиг.17. АА2910-АА2930; АА2925-АА2950; АА2945- конец С' терминальный). Для специалистов в данной области должно быть ясно, что такой компьютерный анализ антигенности не всегда идентифицирует эпитоп, который фактически существует, и может также неправильно идентифицировать участок белка, как содержащего эпитоп. Примерами аминокислотных последовательностей HCV, которые могут использоваться, которые выражены от векторов выражения, включающих клоны 5-1-1, 81, СА74а, 35f, 279a, C36, С33в, СА290а, С8f, c12f, 14с, 15е, С25с, С33а, С33f, 33g, С39с, С40в, СА167в, описываются ниже. Приводятся м другие примеры аминокислотных последовательностей HCV, которые могут использоваться как описано здесь. Следует иметь в виду, что эти пептиды необязательно являются точной картой одного эпитопа, и они могут заключать в себе также последовательность HCV, которая не является иммуногенной. Эти неимунногенные участки данной последовательности могут быть определены как описано выше, с использованием обычных способов и могут быть удалены из описанных последовательностей. Кроме того, могут быть идентифицированы, как описано выше, дополнительные усеченные аминокислотные последовательности HCV, которые заключают в себе эпитоп, или которые являются иммуногенными. Даются указанные ниже последовательности с указанием аминокислотного номера (то есть "ААп"), где п является аминокислотным номером, как показано на фигуре 17: АА2910-АА2930; ААА2925-АА2950; ААА2945- конец (С' терминальный). Указанные выше аминокислотные последовательности HCV могут быть получены как дискретные пептиды или вставлены в более крупный полилептид, и могут найти использование, как описано здесь. Дополнительные полипептиды, включающие усеченные последовательности HCV, описываются в примерах. Наблюдаемая связь между путативными полибелками HCV и Флавивирусами позволяет предсказать путативные домены "неструктурный" (NS) белков HCV. Расположения отдельных белков (NS) в исходном путативном Флавивирусном белке довольно хорошо известно. Кроме того, они совпадают также с наблюдаемыми общими флуктуациямм в профиле гидрофобности полибелка. Установлено, что NS5 Флавивирусов кодирует вирионовую полимеразу, и что NSІ соответствует комплементному фиксационному антигену, который, как было показано, является эффективной вакциной для животных. Недавно было обнаружено, что функция флавивирусной протеазы заключается в NS3. Ввиду наблюдаемого сходства между HCV и Флавивирусами, описанными ниже, могут быть сделаны выводы относительно примерных расположений соответствующих белковых доменов и функций в полибелке HCV. Выражение полипептидов, содержащих эти домены в различных видах рекомбинантных клеток хозяев, включая, например, бактерии, дрожжи, вредные насекомые и клетки позвоночных животных, позволит обеспечить очень важные иммунологические реагенты, которые могут быть использованы для диагноза, обнаружения и вакцин. Хотя неструктурные белковые участки потативных полибелков изолята HCV, описанного здесь, и Флавивирусов имеют некоторое сходство, между путативнымм структурными участками, которые направлены к N-терминалу, сходство меньше. На этом участке имеет место более высокое расхождение последовательности, и, кроме того, гидрофобный профиль этих двух участков показывает меньшее сходство. Это "расхождение" начинается у N-терминальной зоны путативного NSI домена в HCV, и проходят к предполагаемому N-терминалу. Тем не менее, еще вероятно возможно предсказать примерные расположения путативного нуклеокапсида (N-терминальный основной домен) и Е (обычно гидрофобных) доменов в полибелке HCV. В примерах эти предсказания основываются на наблюдаемых изменениях профиля гидрофобности полибелка HCV, и на знания положения и характера флавивирусных белков. На основе этих предсказаний можно идентифицировать апроксимированные участкам полибелка НСV, который может соответствовать иммунологическим реагентам. Так например, Е и NSI белки Флавивирусов как уже известно, эффективны как защитные вакцины. Эти участки, а также те участки, которые являются антигенными в иэоляте HCV, описанном здесь, например, те, которме находятся в пределах путативного NS3, С и NS5, и т.д., также обеспечивают диагностические реагенты. Кроме того, расположение и выражение вирусно кодированных ферментов может позволить оценить анти-вирусные ферментные ингибиторы, например ингибиторы, которые исключают активность фермента, или вещества, которые могут предотвратить выражение форманта (например, анти-ф чувствительная РНК или другие лекарства, которые препятствуют выражению). Приготовление гибридных иммуногенов в форме частиц, содержащих эпитопы HCV. Иммуногенность эпитопов HCV также может быть усилена путем приготовления их в системах органов млекопитающих и дрожжей, которые связаны или агрегированы с образующими частицы белками, например, таких, которые ассоциированы с поверхностным антигеном В гепатита. Структуры, в которых эпитоп NANBV связан непосредственно с образующими частицу белковыми кодирующими последовательностями, продуцируют гибриды, которые являются иммуногенными по отношению к эпитопу HCV. Кроме того, все из получаемых векторов включают эпитопы специфические для HBV, имеющие различные степени иммуногенности, такие как Пре-S-пептид. Так, частицы, составленные из образующую частицу белка, который включает последовательности HCV, иммуногенны по отношению к HCV и HBV. Поверхностный антиген гепатита (НВSАg) образован и ассимилирован в частицы в S, cerevisiae (Valenzuela и др.,1982), а также, например, в клетки млекопитающих Valenzuela и др. 1984). Было показано, что образования таких частиц усиливает иммуногенность мономерной субъединицы. Данные структуры могут включать также иммунодоминантный эпитоп HBSAg, включающий 55 аминокислот предповерхностной (пре-S) зоны. Neurath и др. (1984). Структуры частицы пре-S-HBSAg, выраженные в дрожжах, описываются в патенте ЕРО 174444, опубликованном 19 марта 1986 года, гибриды, включающие гетерологические вирусные последовательности выражения дрожжей, описываются в публикации ЕРО 175261, опубликованной 26 марта 1966 года. Эти структуры могут быть также выражены в клетках млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомячка (СНО) с использованием вектора гидрофолятредуктаэы (Michelle и др., 1984г.) Кроме того, части последовательности, кодирующей образующую частицу белок, могут быть заменены кодоном, кодирующим эпитоп НСV. В этой замене, участки, которые не требуются для агтрегации указанных единичных элементов, образующих иммуногенные частицы в дрожжах или органах млекопитающих, могут быть аннулированы, с освобождением вследствие этого дополнительных антигенных точек НBV от конкуренции с эпитопом НСV. Приготовление вакцин Вакцины могут быть приготовлены из одного или нескольких /ммуногенных полипептидов, образованных от НСV сДНК, включая последовательности сДНК, описанные в примерах. Наблюдаемая гомология между НСV и Флавивирусами дает информацию относительно лолипептидов, которые могут быть наиболее эффективны в качестве вакцин, а также участком генома, в которых они кодируются. Общая структура Флавивирусного генома обсуждается в работе Rice и др.,1986г. Флавивирусная геномная РНК является единственной вирусно-специфической разновидностью РНК, и она транслируется в трехвирусные структурные белки, то есть С, Μ я Е, а также в два крупных неструктурных белка NS4 и NS5 и комплекс, созданный из менее крупных неструктурных белков. Известно, что основные нейтрализующие эпитопы для Флавивирусных звеньев находятся в Ε (оболочка) белка (Roehrig, 1985г.). Так, например, вакцины могут быть образованы из рекомбинантных полипептидов, содержащих эпитоп НСV Е. Эти поллпептиды могут быть выражены в бактериях, дрожжах, или клетках органов млекопитающих, и как возможный вариант, они могут быть выделены из вирусных препаратов. Можно полагать также, что другие структурные белки также могут содержать зпитопы, которые приводят к образованию защитных анти-НСV антител, Так, пептиды содержащие эпитопы Е, С и М, также могут использоваться в вакцинах НСV, как индивидуально, так и в комбинации. Кроме изложенного выше, показано, что иммунизация NSI (неструктурный белок I) приводит в результате в защита от желтой лихорадки (Schlesinger и др., 1986г.). Это действительно, даже если иммунизация не приводит к нейтрализующим антителам. Так, поскольку данный белок из числа флавивирусав имеет высокую степень сохраняемости, то по всей вероятности НСV NSI также будет защищен от инфекционного заражения НСV. Более того, он показывает также, что неструктурные белки могут обеспечивать защиту от вирусной патогенности, даже если они не вызывают продуцирования нейтрализующих антител. Информация, изложенная в примерах, касающаяся иммуногенности полипептидов, выраженных от клонированных НС сДНК-аэ, которые схватывают различные участки НСV ORF, также позволяет сделать предсказания, касающиеся их использования в вакцинах. Из изложенного выю можно сделать вывод, что многовалентные вакцины против НСV могут состоять из одного или нескольких эпитопов от одного или нескольких структурных белков, и/или одного или нескольких эпитопов от одного или нескольких неструктурных белков. Эти вакцины могут состоять, например, из рекомбинантных полипептидов НСV и/иди полипептидов, выделенных из вариантов. В частности, вакцины включают один или несколько указанных ниже белков НСV, или образованных от них субъединичных антигенов: Е, NS1 С, NS2, NS3, NS4 и NS5. Особенно предпочтительными являются вакцины, включающие Ε и/или NS1, или их субъединицы. Приготовление вакцин, который содержат иммуногенный полипептид (полипептиды) в качестве активных ингредиентов, уже известно. Обычно, такие вакцины приготавливаются как инъекционно вводимые препарат, в форме либо жидких растворов, либо суспензий; могут быть приготовлены также твердые формы пригодные для раствора или для суспензии, которые переводятся в жидкое состояние перед инъекцией. Данный препарат может быть также эмульгирован, или может бить белком, инкапсулированным в липосомы. Активные иммуногенные ингредиенты часто смешиваются с эксципиентами, которые фармацевтически пригодны и совместимы с активным ингредиентом. Пригодными эксципиентамм, являются, например, вода, солевой раствор, декстроза, глицерин, этанол, и т.д. и их комбинации. Кроме того, при желании вакцина может содержать незначительные количества вспомогательных средств, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты, регулирующие рН буферизующие агенты, и/или адъюванты, которые усиливают эффективность вакцины. Примерами адъювантов, которые могут быть эффективны, являются следующие (которые, однако, не следует рассматривать как ограниченный перечень): гидроокись алюминия, N-ацетил-мурамил-L-треонил-Dизоглютамин (thr – MDP), N-ацетил-нор-мурамил-L-аланил-D-изоглютамин (CGP 11637, рассматривается как нор-М Р), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-иэоглютаминил-L-аданин-2-(1'- 2'- дипальмитоил-sp -глицеро-3гкдроксифосфорилокси)-этиламин (СGР 19835А, рассматривается как МТР-РE), и RIBI, который включает три компонента, экстрагированные из бактерий, монофосфорилолипид А, трехалозодимиколят и скелет клеточной стенки (MPL + ТДМ + CWS) в 2%-ной эмульсии сквален/Твин 80. Эффективность адъюванта может быть определена путем измерения количества антител, направленных против иммуногенного полипептида, содержащего антигенную последовательность НСV, образующуюся в результате ввода этого полипептида в вакцины, которые также состоят из различных адъювантов. Данные вакцины обычно вводятся парентерально, путем инъекции, на пример либо подкожно, либо внутримышечно. Дополнительные рецептуры, которые пригодны для других способов ввода, включают свечи и в некоторых случаях вводимые орально препараты. Используемые для свечей традиционные связующие и носители могут включать, например, полиалкиленгликоли или триглицериды; такие свечи могут быть приготовлены из смесей, содержащих активный ингредиент в количестве в пределах от 0,5% до 10%, предпочтительно от 1 до 2%. Вводимые орально препараты включают такие обычно используемые эксципиенты, как, например, фармацевтические типы маннита, лактозы, крахмала, стеарат магния, натрийсахарин, целлюлозу, карбонат магния и т.д. Эти композиции имеют форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, препаратов постепенного выделения лекарства, или порожков, и они содержат 10% - 95% активного ингредиента, предпочтительно 25% - 70%. Белки могут быть приготовлены в ферме вакцины, как нейтральной, так и в форме солей. фармацевтически пригодные соли включают кислотно аддитивные соли (образованные со свободными аминогруппами пептида), которые образуются с неорганическими кислотами, такими как соляная или фосфорная кислоты, или с органическими кислотами, такими как уксусная, щавелевая, винная малеиновая и другие кислоты. Соли, образуемые со свободными карбоксильными группами, могут быть образованы также от неорганических оснований, таких как, например, гидрат окиси натрия, калия, аммония, кальция или железа, или от органических оснований, таких как изопропимламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, проками и т.д. Дозирование и введение вакцин Вакцины вводятся в организм в соответствии с дозированной рецептурой и в таком количестве, которое должно быть фитотоксически и/или терапевтически эффективно. Вводимое количество, которое обычно находится в пределах от 5 микрограммов до 250 микрограммов антигена на дозу, зависит от подвергаемого обработке субъекта, способности иммунной системы субъекта к синтезу антител и от степени желаемой защиты. Точные количества активного ингредиента, который должен вводиться, зависят от практической оценки и специфичны для каждого субъекта. Вакцина может быть дана в виде единичной дозированной формы или предпочтительно в виде многократных доз. Вакцинация мажет осуществляться в виде 1 - 10 отдельных доз, с последующим вводом других доз в последующие интервалы времени, необходимые для сохранения или вторичного усиления иммунной реакции, например с интервалом 1 - 4 месяце для второй дозы, и если необходимо последующей дозы (или доз) через несколько месяцев. Дозированный ражим, по крайней мирз частично, может быть определен для каждого индивидууме, и зависит от врача-практика. Кроме того, вакцина, содержащая иммуногенный антиген (антигены) НСV, может вводиться в сочетании с другими иммунорегуляторными агентами, например иммуноглобулином. Приготовление антител против эпитопов НСV. Иммуногенные полипептиды, полученные как описано выше, используются для продуцирования антител, как поликлональных, так и моноклональных. Если желательны поликлональные антитела, то выбранное млекопитающее животное (например, мышь, кролик, коза, лошадь и т.д.) иммунизируется иммуногенным полипептидом, несущим эпитоп (эпитопы) ПСУ. Сыворотка от иммунизированного животного собирается и обрабатывается согласно известным процедурам. Если сыворотка, содержащая поликлональные антитела к эпитопу НСV, содержит антитела к другим антигенам, то поликлональные антитела могут быть очищены методом хроматографии иммуносродства. Способы продуцирования и обработки поликлональных антисывороток уже известны, смотри, например, публикацию Mayer и Walker 1987г. Как возможный вариант, поликлональные антитела могут быть выделены из организме млекопитающих, которые предварительно инфекционно заражались НСV. Пример способа очистки антител к эпитопам НСV из сыворотки от инфекционно зараженного индивидуума, который (способ) основам на хроматографии сродства с использованием полипептида слияния 0 и полипептида, кодированного в клоне сДНК 5-1-1, описывается в публикации ЕРО № 318216. Моноклональные антитела против эпитопов HCV также мажут быть легко получены специалистами в данной области, Общая методика излучения моноклональных антител посредством гибридомаэы уже хорошо известна. Нелетальные продуцирующие антитело клеточные линии могут быть созданы путем клеточного слияния, а также другими способами, такими как направленная трансформация В лимфоцитов онкоогенной ДНК или трансфекции вирусом Энштейна-Варра. Смотри, например, публикаций Sehreir и др., 1980г., Hammerling и др., 1981г., Kennett и др.. 1980г. Смотри также патенти США № 4341761, 4399121, 4427783, 4444887, 4466917, 4472500, 4491632, 4493890. Перечень продуцированных моноклональных антител против эпитопов НСУ могут быть отобраны по различным свойствам: например по изотипу, эпитопному сродству, и т.д. Антитела, как моноклональные, так и поликлональные, которые направлены против эпитопов НСУ, особенно полезны в диагностике, и те, которые являются нейтрализующими, полезны в пассивной иммунотерапии. В частности, моноклональные антитела могут быть использованы для образования антииндиотипических антител. Анти-идиотипические антитела представляют собой иммуно-глобулмны, которые несут "внутреннее изображение” антигена инфекционного агента, против которого желательна защита. Смотри, например, публикацию Nisonoff A. и др., 1981г., и Dreesman и др., 1985г. Способи образования анти-идиотипических антител уже известны. Смотри, например, Grych (1985г.) MacNamara и др.(1984г.) и Uytdehaag и др. (1985г.) Эти анти-идиотипическме антитела могут быть также полезны для лечения и/или диагноза ΝΑΝΒΗ, а также для выявления иммуногенных участков антигенов НСv. Специалистам в данной области должно быть ясно также, что могут быть продуцированы различные типы антител, направленные претив эпигонов НСV. Используемый здесь термин "антитело" относится к полипептиду или группе полипептидов, которые состоят по меньшей мере из одной комбинирующей антитело точки. "Комбинирующая антитело точка” или "связывающий домен” образуется из складчатости различных доменов молекулы (молекул) антитеза, которые образуют трехмерные связывающие пространства с внутренней поверхностной формой, распределение заряда, комплементарное к признакам эпитопа антигена, который допускает иммунологическую реакцию с антигеном. Комбинирующая антитело точка может быть образована из домена тяжелой и/или легкой цепи (соответственно VH и VL ). которые, образуют сверхизменчивые петли, которые влияют на связывание антигена. Термин "антитело" охватывает, например, антитела позвоночных животных, гибридные антитела, химерные антитела, изменяющиеся антитела, антитела единой валентности, балки FaD и одиночно доменные антитела. "Одиночно доменное антитело” (dAB) представляет собой антитело, которое состоит из VH домена, который иммунологически реагирует с обозначенным антигеном, dAB не содержит VL домен, но может содержать другие связывающие антиген домены, которые, как известно, находятся в антителах, например домены каппа и лямбда. Способы приготовления dАВS уже известны. Смотри например, Ward и др., 1989г. Антитела могут состоять также из доменов VН к VL, а также из других известных связывающих антиген доменов. Примеры этих типов антител и способов их получения уже известны (смотри, например, патент США № 4816467, который рассматривается здесь как противопоставленная публикация), и включают следующие. Так например, антитела позвоночных животных относятся к антителам, который представляют собой тетрамеры или их агрегаты, содержащие легкие и тяжелые цепи, которые обычно аггрегируются в "У" конфигураций, и которые могут или не могут иметь ковалентные связи между цепями. 3 антителах позвоночных животных аминокислотные последовательности вех цепей определенного антитела гомологичны цепям, имеющимся в одном антителе, продуцируемом лимфоцитом, который образует это антитело непосредственно в данном процессе, или в условиях "ин витро” (например, в гибридомазах) Антитела позвоночных животных обычно включают естественные антитела, например очищенные поликлональные антитела и моноклональные антитела. Примеры способов получения этих антител описываются ниже . “Гибридные антитела" - это антитела, в которых одна пара тяжелой и легкой цепей гомологична указанной паре в первом антителе, в то время как другая пара тяжелой и легкой цепей гомологична указанной паре в отличающемся втором антителе. Обычно каждая из этих двух пар будет связывать различные зпитопы, особенно на различных антигенах. Это приводит в результате к "двухвалентности", то есть к способности связывать два антигена одновременно. Такие гибриды могут быть образованы также с использованием химерных цепей, как изложено ниже. "Химерные антитела” - это антитела, в которых тяжелые и/или легкие цепи представляют собой белки слияния. Обычно постоянный домен этих цепей состоит из одного специфического видам/или класса и изменяющиеся домены состоят из различных видов и/или классов. К ним же относится любое антитело, в котором любая тяжелая или легкая цепь или обе эти цепи состоят из комбинаций последовательностей, которые имитируют последовательности в антителах от других источников, независимо от того, являются ли эти источники происхождения от различных классов или различных видов и независима от того, находится ли точка слияния на непостоянно/ или постоянной границе. Таким образом, возможно продуцирование антител, в которых ни постоянная, ни переменная область не имитирует известные последовательности антитела. В таком случае, возможно, например, построение антител, у которых переменная область имеет более высокое специфическое средство для определенного антигена, или постоянная область которых может обнаружить повышенную фиксацию комплемента или привести к другим усовершенствованиям свойств, которыми обладает определенная постоянная область антигена, Другим примером являются "Измененные антитела", которые относятся к антителам, з которых аминокислотная последовательность естественного происхождения в антителе позвоночного животного изменена. Используя способи рекомбинантной ДНК, антитела могут быть повторно построены до получения желаемых характеристик. Может быть много различных вариантов в пределах от изменения одной или нескольких аминокислот до полной перестройки данной области, например постоянной области. Обычно изменения постоянной области приводит к желаемым характеристикам клеточного процесса, например изменений закрепления комплемента, взаимодействий с мембранами и других функций эффективности. Изменения в переменной области могут привести к изменению характеристик антигенного связывания. Антитело может быть переработано таким образом, чтобы обеспечивался специфический перенос молекулы или вещества в специфическую клетку или в специфическую точку ткани. Желаемые видиоизменения могут быть осуществлены способами известными и области молекулярной биологии, например рекомбинантными способами, способами точечно-направленного мутагенеза и т.д. Следующим примером являются антитела "одинаковой валентности", которые представляют собой агрегати, состоящие из димера тяжелая цепь/легкая цепь, связанного с областью Fc (то есть константой) второй тяжелой цепи. Этот тип антитела исключает антигенную модуляцию. Смотри публикацию glerinie и др., 1982г. В понятие "антитела" включены также фрагменты "Fаb" антител. Область "Fаb" относится к тем участкам тяжелой и легкой цепей, которые в первом приближении эквивалентны или аналогичны последовательностям, которые заключают в себе ответвленный участок тяжелой и легкой пепси, и которые обнаруживают иммунологичсскоо связывание со специфическим антигеном, но которые лишены участка эффектора Fс. "Fаb" включает агрегаты одной тяжелой и одной легкой цепи (общеизвестные как "Fab"), а также тетрамеры, содержащие цепи 2Н и 2L (рассматриваемые как С (ав)2), которые способны избирательно реагировать с обозначенным антигеном или семейством антигенов. Антитела "Fab" могут быть разделены на подгруппы, аналогичны, тем, которые описаны выше, то есть "Fab” “позвоночных”, "Гибридные Fab", "Химерный Fab" и "видоизмененные Fab". Способы продуцирования "Fаb" фрагментов антител уже известны, и они включают, например, протеолиз и синтез ракомбинантиыми методами. II Н. Диагностические олигонуклиотидные пробы и наборы средств. Используя описанные участки выделенных HCV сДНК-аз как основы, можно получать олигомеры примерно из 8 нуклеотидов или более, либо путем эксцизии, либо путем синтеза, которые гибрцдизируются с HCV геномом и используются для идентификации вирусного агента агентов, дальнейшей характеризации вирусного генома (геномов), а также для обнаружения вируса (вирусов) у заболевших индивидуумов. Пробы на полинуклеотиды HCV (естественные или подученные) имеют такую злину, которая позволяет обнаруживать уникальные вирусные последовательности путем гибридизации. Хотя рабочую длину могут составлять 6 - 8 нуклеотидов, предпочтительными являются последовательности из 10 - 12 нуклеотидов, и оптимальными - последовательности примерно из 20 нуклеотидов. Эти последовательности предпочтительно образуются от участков, которые но имеют гетерогенности. Эти пробы могут быть получены с использованием обычных способов, включая автоматизированные способы синтеза олигонуклеотидов. К числу применяемых проб относятся, например, такие, которые образованы от вновь выделенных клонов, описанных в данной заявке, а также различный олигомеры, применяемые в генетическом анализе библиотек ДНК, как описано ниже. Вполне удовлетворителен комплемент к любой уникальной части генома HCV. Для использования в качестве проб желательна полная комплементарность, хотя она макет не потребоваться, по мере того как длима фрагмента, увеличивается. Для использования таких проб в качестве диагностиков, подвергаемый анализу биологический образец, такой как образец крови или сыворотки, может быть обработан по желанию таким образам, чтобы извлечь содержащиеся в нем нуклеиновые кислоты. Полученная нуклеиновая кислоты из дюнной пробы может быть подвергнута гель електрофорезу или другим способам разделения по размеру; как возможный вариант, образец нуклеиновой кислоты может быть точечно блотированн без разделения по размеру. Затем пробы метятся. Метки и способы мечения проб уже известны, и включают, например, радиоактивные метки, вводимые методами ник трансляции или кинаэирования, биотин, флюоресцентные пробы и хемилюмимесцентные пробы. Нуклеиновые кислоты; абстрагированные из образца, затем обрабатываются меченой пробой в условиях гибридизации соответствующих волокнистостей, и обнаруживаются полинуклеотидные дуплексы, содержащие пробу. Могут быть приготовлены пробы полностью комплементарные с геномом HCV. Таким образом, для предотвращения ошибочных позитивностей обычно желательным условия высокой волокнистости. Однако, условия высокой волокнистости должны использоваться лишь в том случае, если пробы комплементарны участкам вирусного генома, которые не имеют гетерогенности. Волокнистость гибридизации определяется рядом факторов в процессе гибридизации и в ходе процедуры промывки, которые включают температуру, ионную силу, продолжительность временя и концентрацию формамида. Эти факторы приводятся, например,в работе Maniatis 1982г. Обычно считают, что последовательности HCV генома должны присутствовать в сыворотке иифекционно зараженных индивидуумов в относительно низких дозах, например примерно 102 – 103 инфекционных доз шимпанзе (СID) на мл. Такая доза может потребовать применения способов усиления при анализе гибридизации. Такие способы уже известны. Так например, сметема "Биомостика” Enzo Biochemical Corhoration требует использования терминальной деоксинуклеотидотрансферазы для ввода немодифицрованных З'-полм-dT-отростков в пробу ДНК. Проба с поли-dT-отростком гибридиэируется до конечной нуклеотидной последовательности и затем до модифицированного биотипом поли-А. Патентная заявка РСТ 84/03520 и патент ЕРА 124221 описывают анализ гибридизации ДНК, в котором: (I) аналит гибридизируется с однониточной пробой ДНК, которая комплементарна к меченому ферментом олигонуклеотиду; и (2) полученный ответвленный дуплекс гибридизируется с меченым ферментом олигонуклеотидом. Б патенте ЕРА 204510 описывается анализ гибридизации ДНК, в котором аналит ДНК контактирует с пробой, которая имеет ответвление, такое как роли-dT-ответвленме, нитью усилителя, которая имеет последовательность, которая гибридизируется с ответвлением пробы, например поли-n последовательность, и которая способна к связыванию множества меченых нитей. Особенно желательный способ может включать прежде всего усиление конечных желаемых последовательностей НСУ в сыворотке с примерно 10000 складчатостей, то есть примерно до 106 последовательностей/мл. Это может осуществляться, например, способами цепных реакций полимеразы (РСR) описанными Sairi и др., 1986г., Mullis, Патент США № 4683195, и Mullis и др., Патент США № 4683202. Усиленная последовательность (или последовательности) может быть обнаружена путем анализа гибридизации, который описывается в патенте ЕР 317077, опубликованном 24 мая 1989 года. Эти анализы гибридизации, которые должны обнаруживать последовательности при дозе 106/мл, используют нуклеиновокислотные мультимеры, которые связываются с однониточной аналитной нуклеионовой кислотой, и которые также связываются с множеством однониточных меченых олигоцуклеотидов. Подходящий анализ в фазе раствора с использованием пробы сэндвич, в котором могут применяться меченые полинуклеотидные пробы, и способы получения проб описываются в патенте ЕРО 225807, опубликованном 16 июня 1987 года. Данные пробы могут быть упакованы в набор диагностических средств. Набор диагностических средств включает пробу ДНК, которая может быть мечена; как возможный вариант, проба ДНК может быть немеченной, и ингредиенты для мочения могут быть включены в данный набор средств в отдельных упаковках. Этот набор средств может содержать также другие соответствующим образом упакованное реагенты и материалы необходимые зля осуществления гибридизации, например стандарты и инструкции, описывающие проведение испытания. Иммуноанализ и набор диагностических средств Как полипептиды, которые иммунологически реагируют с сывороткой, содержащей антитела HCV, например такие, которые обнаруживаются описанным ниже методом антигенного просеивания, как описано в примерах, так и полипептиды, который образованы от или кодированы ж пределах изолированных клонов, описанных в этих примерах, и их композиции, и антитела, действующие против специфических эпитопов HCV в этих полипептидах, используются в или иммуноаналиэах для обнаружения присутствия антител HCV, или присутствия вируса и/или вирусных антигенов, в биологических образцах. Методика иммуноанализа может иметь много разновидностей, которые уже известны. Как например, иммуноанализ может использовать один вирусный эпитоп; как возможный вариант, иммуноанализ может использовать комбинацию вирусных эпитопов, образованных от этих источников; эти эпитопы могут быть образованы от одинаковых или от различных вирусных полипептидов, и могут быть в раздельных рекомбинантных или естественных полипептидах или вместе в одинаковых рекомбинантных полипептидах. Он может использовать, например, моноклональное антитело, направленное к вирусному эпитопу (эпитопам), комбинацию моноклональных антител, направленных к эпитопам одного вирусного антигена, моноклональные антитела, направленные к эпитопам различных вирусных антигенов, поликлональные антитела, направленные к одинаковому вирусному антигену, или поликлональные антитела, направленные к различным вирусным антигенам. Проведение испытания может быть основано, например, на конкурирующей или на прямой реакции, или анализах типа сэндвич. Анализы могут осуществляться с использованием, например, твердых носителей, или путем иммуноосаждения. Большинство анализов включает использование меченного антитела или полмпептида. Метки могут представлять собой, например, флуоресцентные, хемилюминесцентные, радиоактивные или окрикивающие молекулы. Осуществление анализов, которые усиливают сигналы от пробы, также уже известны примерами являются анализы, в которых используются биотин и авидин, и ферментно меченные и медиатированные иммуноаналиэы, такие как иммуноферментный анализ (ЕL ISA). Некоторые антигенные участки путавивного полибелка нанесены на карту и идентифицированы путем отсева антигенности продуктов бактериального выражения HCV сДНК-азы, которые кодируют участки полибелка. Смотри примеры. Другие антигенные участки HCV могут быть обнаружены по выражение участков HCV сДНК-азы в других выраженных системах, включающих системы дрожжей и клеточные системы, образованные от вредных насекомых и позвоночных животных. Кроме того, исследования, позволяющие найти индекс антигенности и профиль гидрофобности/гидрофильности, дают информацию, касающуюся вероятности антигенности участка. Исследование антигенной карты путем выражения HCV сДИК-аз показало, что ряд клонов, содержащих эти выраженные полипептиды сДНК-азы, иммунологически активны с сывороткой от индивидуумов с NANBH. Ни один одиночный полипептид не является иммунологически активным со всей сывороткой. Пять из этих полипептидов очень иммуногенных в этих антителах к HCV эпитопам в этих полипептидах, обнаружены во многих сыворотках различных пациентов, хотя перекрытие при обнаружении не является полным. Так, результаты определения иммуногенности полипептидов, кодированных в различных клонах, подтверждают, что эффективная система обнаружения может включать использование ряда эпитопов. Эти эпитопы могут быть построены в виде одиночного или многониточных полипептидов. Набор средств для иммунодиагноаа, содержащий подходящие меченые реагенты, составляет путем упаковки подходящих материалов, включающих палипептиды, отвечающие настоящему изобретению, содержащие эпитопы HCV или антитела, направленные против эпитопов HCV в соответствующих упаковках, а также остальные материалы и реагенты, необходимые для проведения анализа, а также комплект инструкций для анализа. Дополнительная характеризация HCV, вирионов и вирусных агентов с применением проб, образованных от сДНК, на вирусный геном. Информация о последовательности HCV сДНК в свежеизолированных клонах, представленная в примерах, может быть использована для получения дополнительной информации о последовательности генома HCV, и для идентификации и выделения агента HCV, и таким образом, она будет использована для характеризации типа генома, структуры вирусной частицы, и типа антигенов, из которых он состоит. Эта информация, в свою очередь, может привести к дополнительным полинуклеотидным пробам, полипептидам, образованным от генома HCV, и антителам к эпитопам HCV, которые могут быть полезны для диагноза и/или обработки HCV, вызванного NANBH. Информация о последовательности сДНК в указанных выше кланах используется для приготовления проб для извлечения дополнительных последовательностей сДНК, которые образованы от еще неиндентифицированных участков генома (геномов) HCV, от которого образованы сДНК-азы в клонах, описанных здесь и в патенте ЕР 0316218. Так, например, меченые пробы, содержащие последовательность примерно из 8 или более нуклеотидов, и предпочтительно из 20 или более нуклеотидов, которые образованы от участков близких к 5’-терминалу или 3’-терминалу составной последовательности HCV сДНК, показанной на рисунке 17 могут быть использованы для выделения перекрывающихся последовательностей сДНК из библиотек HCV зДНК. Как возможный вариваит, характеризация геномных сегментов может быть осуществлена от вирусного генама (геномов) выделенного из очищенных частиц HCV. Способы очистки частиц HCV и их обнаружения в ходе процедуры очистки описываются ниже. Процедуры выделения полинуклеотидных геномов из вирусных частиц уже хорошо известны, и одна такая процедура, которая мажет быть использована, описывается в патенте ЕР 0218316. Затем выделенные геномные сегменты могут быть клонированы и построены в последовательность. Пример такого способа, в котором используется усиление подвергаемых клонированию последовательностей, приводится ниже, и получается клон 16jh. Способы построения библиотек сДНК уже известны и описываются выше и ниже; способ построения библиотек HCV сДНК в лямбда-gt II обсуждается в патенте ЕРО № 318216. Однако, библиотоки сДНК, которые служат для отсева нуклеиновокислотными пробами, могут быть построены также в других уже известных а данной области векторах, например лямбипа-gt 10 (Hyynh и дp., 1985г.). Отсев на анти-вирусные агенты для HCV. Доступность клеточной культуры и модельных систем животных для HCV допускает возможность отсева (или отбора) на антивирусные агенты, которые ингибируют репликацию HCV, и особенно на те агенты, которые допускают предпочтительный рост клеток и размножение при одновременном ингибировании вирусной реплизации. Эти методы отсева уже известим в данной области. Обычно антивирусные агенты испытываются при различии их концентраций, на их влияние на предотвращение вирусной репликации в системах клеточных культур, которые поддерживают вирусную репликацию, и затем на их ингибирующее действие на инфекционность или вирусную патогенность (при низких значениях токсичности) в модельной системе животных. Рассматриваемые здесь способы и композиции для обнаружения антигенов HCV и полинуклеотидов HCV используются для отсева антивирусных агентов, поскольку они являются альтернативным и вероятно более чувствительным средством вживления данного агента на вирусную репликацию, чем клеточный точечный анализ или анализ LD50. Так, например, описанные здесь HCV-полинуклеотидные пробы могут использоваться для определения количества вирусной нуклеиновой кислоты, продуцируемой в клеточной культуре. Это может осуществляться, например, путем гибридизации или конкурентной гибридизации инфекционно зараженных клеточных нуклеионовых кислот меченой HCV-полинуклеотидной пробой. Так, например, для идентификации и количественного определения антигенов HCV в клеточной культура могут быть также использованы анти-HCV антитела, с применением для описанного здесь иммуноанализа. Кроме того, поскольку может быть желательным количественное определение антигенов HCV в зараженной клеточной культуре методом конкурентного анализа, то в этих конкурентных анализах используются полипептиды, кодированные в описанных здесь HCV ДНК-азах. Обычно рекомбинантный полипептид HCV, образованный от HCV сДНК, будет подвергнут мечению, и будет осуществляться контроль ингибирования связывания этого меченого полипептида с полипептидом НС за счет антигена, продуцируемого в системе клеточный культуры. Кроме того, эти способы находят особенно полезное применение в тех случаях, где HCV может быть способен к репликации в клеточной линии, исключающей умерщвление клеток. Антивирусные агенты, которые могут быть испытаны на эффективность указанными способами, уже иэвестны, и включают, например, те агенты, которые взаимодействуют с варионовыми компонентами и/или клеточными компонентами, которые необходимы для связывания и/или репликации вируса. Типичные антивирусные агенты могут включить, например, ингибиторы вирионовой полимераэы и/или протеазы (протеаз), которые необходимы для расщепления исходных полипептидов. Другие антивирусные агенты могут включать такие, которые действуют с нуклеиновыми кислотами, предотвращая вирусную репликацию, например античувствительные полинуклеотиды, и т.д. Античувствительные полинуклеотидные молекулы состоят из комплементарно нуклеотидной последовательности, которая позволяет им специфически гибридизироваться до обозначенных участков геномов или РНК-аз. Античувствительные полинуклеотиды могут включать, например, молекулы, которые будут блокировать белковую трансляцию путем связывания с мРНК, или могут быть молекулами, έ которые предотвращают репликацию вирусной РНК транскриптазой. Они могут включать также молекулы, которые несут агенты (нековалентно или ковалентно связанные), которые вызывают инактивацию вирусной РНК за счет, например, расщепления в вирусной РНК. Они могут также связываться с клеточными полинуклеотидами, κοторые усиливают вирусную инфекционность, способность к репликации или хроничность, или необходимы для них. Античувствительные молекулы, которые способны гибридизироваться с образованной от ПСУ РНК-азой, могут быть построены исходя из информации о последовательности образуемых НСV сДНК-аз. Могут быть образованы антивирусные агенты, основанные на античувствительных полинуклеотидах для НСV, которые связаны с высокой специфичностью, имеют повышенную растворимость, сойки и имеют низкую токсичность. Следовательно, они могут поставляться в специализированных системах, например, в липасомах, или способами генной терапии. Кроме того, они могут включать аналоги, связанные белки, замененное или видоизмененное связывание между основаниями и т.д. Другие типа лекарств могут быть основаны на полинуклеотидах, которые "имитируют" важные контрольные участки генома НСV, и которые могут быть терапевтическими за счет их взаимодействий с основными компонентами системы, ответственными за инфекционность или репликацию. Общие способы. Общие способы, используемые в процессах извлечения генома из вируса, приготовление и отбор библиотеки сДНК, построение последовательностей клонов, построение векторов выражения, трансформация клеток, осуществление иммунологических анализов, таких как радиоиммуноанализы и анализы EL ISA роста клеток в культуре разведения и т.д., уже известны, и имеются лабораторные руководства, описывающие эти способы. Однако, для общего руководства ниже приводятся некоторые существующие источники, пригодные для таких процедур и для материалов, используемых для осуществления этих процедур. Для выражения желаемых кодирующих последовательностей, когда используются соответствующие контрольные последовательности, которые совместимы с желаемым хозяином, могут использоваться как пракариотические, так и эйкариотические клетки с хозяина. Из числа прокариотических хозяев наиболее часто используется E.co Li. Выраженные контрольные последовательности прокариотов включают промоторы, при желании содержащие участки оператора, и рибосомные связывающие точки. Векторы переноса, совместимые с прокариотическими хозяевами, обычно образованы, например, от плазмиды РВR322, содержащей опероны, придающие стойкость к ампициллину и тетрациклину, и различных векторов pUC, которые также содержат последовательности, придающие антибиотическую стойкость маркеров. Эти маркеры могут использоваться для успешного получения трансформант путем отбора. Обычно используемые прокариотические контрольные последовательности включают бета-лактамазу (пенициллиназу) и систему лактоэного промотора (Chang и др.,1977г.), систему триптофанового промотора (trp) (goeddel и др., 1980г.), и образованный от лямбда промотор FL, и N-генную точку рибосомного связывания (Shimatake и др.,1981г.), и гибридный промоторе tac (Deboer и др. 1983г.), образованный от последовательностей промоторов trp и bac UV5. Указанные ниже системы наиболее совместимы с E.co li; при желании могут быть использованы другие прокариотические хозяева, такие как штаммы Bacillus или Pseudomonas, с соответствующими контрольными последовательностями. Эйкариотическме хозяева включают дрожжи и клетки млекопитающих в системах разведения культуры. Saccharomyces ceruisiac и Saccharomyces carlsbergensis являются наиболее общеизвестными используемыми дрожжевыми хозяевами и представляют собой наиболее желаемые грибковый хозяева. Совместимые с дрожжами векторы несут маркеры, которые дают возможность выбора успешных трансформант за счет придания протографии к ауксотропным мутантам или придают стойкость к тяжелым металлом на штаммах дикого типа. Совместимые с дрожжами векторы могут использовать 2 микронный источник репликации (Broach и др., 1983г.), комбинацию СЕN3 и ARSI или других средств, гарантирующих репликацию, таких как последовательности, которым приводят к вводу подходящего фрагмента в клеточный геном хозяина. Контрольные последовательности дрожжевых векторов уже известны, и включают промоторы синтеза гликолитических ферментов (Hess и др., 1980, Holland и др.1978, включая промотор 3фосфоглицератокиназы (Hitzeman 1980г.). Могут быть включены также терминаторы, например такие, которые образованы от эмолазного гена (Holland 1981г.). Особенно полезными контрольными системами являются такие, которые включают промотор глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу (CAPDH) или регуляторний промотор спиртовую дегидрогеназу (ADH), терминаторы, такие образованные от CAPDH, и если желательна секреция, ведущую последовательность от дрожжевого альфа фактора. Кроме того, транскриционная регуляторная область и транскрипционная инициирующая область, которые операбельно связаны, могут быть такими, что они не связываются естественным образам с организмом естественного типа. Эти системы подробно описываются в патентах ЕРО № 120551, опубликованном 3 октября 1984 года, ЕРО № 116201, опубликованном 22 августа 1984 года и ЕРО 164556, опубликованном 18 декабря 1985 года, все эти патенты принадлежат одному патентовладельцу, и даются здесь как противопоставленные материалы. Клеточные линии млекопитающих животных доступные как хозяева для выражения, уже известны и включают многие оживленные клеточные линии, взятые из Коллекции Культур Американского типа (АТСС), включал клетки Hela, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки почки детеныша хомячка, и ряд других клеточных линий. Пригодные для данной цели промоторы для клеток млекопитающих животных также уже известны, и включают вирусные промоторы, например от вируса Simian 40 (SV 40) (Fiers, 1978г.), вируса саркомы Rous (РSУ), аденовируса (АDУ), и вируса папилломы быка (ВРУ). Клетки млекопитающих животных могут требовать также терминаторные последовательности и аддитивные поли А последовательности; они могут включать также усиливающие последовательности , которые увеличивают выражение, и последовательности, которые вызывают амплификацию гема, также могут быть желательны. Эти последовательности являются уже известными. Векторы пригодные для репликации в клетках млекопитающих животных, могут включіть вирусные репликоны, или последовательности, которые обеспечивают интеграцию соответствующих последовательностей, кодирующих эпитопы NANBV в геном хозяина. Трансформация может осуществляться любым известным способом ввода полинуклеотидов в клетку хозяина, включая, например, упаковку полинуклеотида в вирус и трансдукцию клетки хозяина этим вирусом, и путем прямого ввода полинуклеотида. Осуществляемая процедура трансформации зависит от трансформируемого хозяина. Так например, трансформация клеток хозяина F. coli последовательностями ВВ-NANBV, содержащими лямбда-gt II, обсуждается ниже в раздале "Примеры". Бактериальная трансформация путем прямого ввода обычно осуществляется с обработкой хлоридом кальция или рубидия (Cohcu 1972г.,Maniatis 1982г.). Дрожжевал трансформация путем прямого ввода может осуществляться методом Hinneu и др., 1978г. Трансформация млекопитающих путем прямого ввода может осуществляться с использованием метода осаждения фосфатом кальция graham и Van der Eb (1978), или с использованием различных известных модификаций этого метода. Построение вектора осуществляется уже известными способами. Точечно-специфическое расщепление ДНК осуществляется путем обработки соответствующими ограничительными ферментами в условиях, которые обычно определяются изготовителем этих промышленно доступных ферментов. Обычно примерно 1 микрограмм плазмиды или последовательности ДНК расщепляется 1 единицей фермента примерно в 20мкл буферного раствора путем инкубации в течение 1 - 2 часов при температуре 37°С. После инкубации с ограничительным ферментом белок удаляется путем экстракции фенилом/хлороформом, и ДНК извлекается путем осаждения этанолом. Ρасщепленные фрагменты могут быть отделены путем электрофореза на полиакриламиде или на агарозном геле согласно общепринятом процедурам, описанным в публикации помещенной в Methods in Enzymology 1980, 65, 499 – 560. Фрагменты расщепления с клейкими концами могут иметь срезанные концы в результате обработки полимеразой 1 (Кленова) Ε. coli ДНК в присутствии подходящих деоксинуклеотидотрифосфатов (dNTPs) присутствующих в смеси. Может использоваться также обработка нуклеазой SI, приводящая в результате к гидролизу однониточных участков ДНК. Осуществляются сшивки с использованием стандартных буфера и температурных условий и с использованием Т4 ДНК лигазы и АТР; сшивки клейких концов требуют меньше АТР и меньше лигазы, чем сшивки срезанных концов. При использовании векторных фрагментов как части смеси сшивки, векторный фрагмент часто обрабатывается бактериальной щелочной фосфатазой (ВАР) или килечной щелочной фосфатазой теленка для удаления 5'-фосфата, что предотвращает, таким образом, повторную сшивку вектора; как возможный вариант, для предотвращения сшивки может осуществляться повторное ограничительно ферментное разложение нежелательных фрагментов. Смеси сшивки трансформируются в соответствующие клонирующие хозяева, такие как Ε. coli, и удачные трансформанты отбираются, например, по антибиотической стойкости, и отсеиваются на правильное построение. Синтетические олигонуклеотиды могут быть приготовлены с использованием автоматизированного олигонуклеотидного синтезатора, лак описано Warner (1984). При желании синтетические нити могут быть мечены 32Р путем обработки полинуклеотидокиназой в присутствии 32Р-ATP с использованием стандартных условий реакции. Последовательности ДНК, включающие те, которые выделены из библиотек сДНК, могут быть модифицированы известными способами, включающими, например, точечно направленный мутагенез, как описано Zoller (1982г.). Подвергаемая модификации ДНК включается в фаг в виде однониточной последовательности и превращается в двухниточную ДНК полимераэу с использованием в качестве затравки синтетического олмгонулеотида комплементарного тому участку ДНК, который должен быть модифицирован, и имеющего желаемую модификацию в его собственной последовательности. Полученная в результате двухниточная ДНК трансформируется в поддерживающую фаг бактерию хозяина. Культуры трансформированных бактерий, которые содержат репликации каждой нити фага, высеваются в агаре для получения колоний. Теоретически 50% новых колоний содержат фаг, имеющий мутированную последовательность, и остальные 50% имеют первоначальную последовательность. Репликаты этих новых колоний гибридизируются с меченой синтетической пробой при температурах и в условиях, которые обеспечивают гибридизацию с нужной нитью, но не с немодифицированной последовательностью. Последовательности, которые не были идентифицированы путем гибридизации, извлекаются и клонируются. Библиотеки ДНК могут быть отобраны с использованием процедуры Grunstein и Hogness (1975г.). В этой процедуре, подвергаемая отбору на пробу ДНК иммобилизируется на нитроцеллюлозных фильтрах, денатурируется и предгибри д изируется буфером, содержащим 0-50% формамида, 0,75 Мол. HаСІ, 75 мМол. цитрата натрия, 0,02% (вес/об) бычьего сывороточного альбумина, поливинилпирролитон и Фиколя, 50 мМол. фосфата натрия (рН = 6,5), 0,1% SDS и 100мкг/мл денатурированной носителем ДНК. Процент формамида в буфере, а также время и температурные условия предгибридизации и последующих этапов гибридизации зависят от требуемой волокнистости. Олигомерные пробы, которые требуют условий меньшей волокнистости, обычно используются с более низким процентом формамида, при более низкой температуре и при более длительном времени гибридизации. Пробы, содержащие более чем 30 или 40 нуклеотидов, например пробы, образованные от СДНК или от геномных последовательностей, обычно используют более высокие температуры, например около 40 – 42°С, и высокий процент, например 50%, формамида. Поеле предгибридизации 5'-32Р-меченаля олигонуклеотидная проба вводится в буфер, и фильтранты инкубируются в данной смеси в условиях гибридизации. После промывки образованные фильтры подвергаются ауторадиографии, чтобы показать локализацию гибридизированной пробы; ДНК в соответствующих положениях на чайках с исходным агаром используется как источник желаемой ДНК. Для обычных векторных построений смеси сшивки трансформируются в штамм Ε. coli HBI0I или в другой подходящий хозяин, и отбираются уеденные трансформанты по антибиотической стойкости или другим маркерам. Затем приготавливаются плазмиды от этих трансформант согласно способу (Clewell и др.(1969г.) обычно после хлорамфениколового усиления (Clewell 1972г.) ДНК выделяется и анализируется, обычно путем анализа ограничительного фермента и/или секвенсирования. Секвенсирование может осуществляться дидєокси методом согласно Sanger и др.,1977г., как затем описывалось Messing и др., 1981г., или способом Maxain и др.,1980г. Проблемы сокращения шага между соседними зонами, которые иногда имеют место в обогащенных GC зонах, разрешаются за счет использования Т-деазогуанозина согласно Barr и др.,1986г. Для измерения концентраций как антигена, так и антитела может быть использован ферментно связанный иммуносорбентный анализ (EL IGA). Осуществление этого способа зависит от конъюгации фермента как с антигеном, так и с антителом, и в качестве количественной метки в нем используется связывающая фермент активность. Для измерения концентрации антитела известный антиген фиксируется с твердой фазой (например, микропластина или пластмассовая чашка), инкубируется с испытываемыми разбавленными растворами сыворотки, промывается, инкубируется с антииммуноглобулином, меченным ферментом, и снова промывается. Ферменты, пригодные для мечения, уже известны и включают, например, пероксидазу конской редьки. Активность фермента, связанного с твердой фазой, измеряется путем ввода специфического субстрата, и определения образования продукта иди субстрата с использованием колориметрического метода. Связывание активности фермента непосредственно зависит от количества связанного антитела. Для измерения концентрации антигена известное специфическое антитело фиксируется с твердой фазой и вводится испытываемый материал, содержащий антиген, после инкубации твердая фаза промывается и вводится второе меченое ферментом антитело. После промывки вводится субстрат, и определяется активность фермента калориметрическим методом, которая соотносится с концентрацией антигена. Примеры. Ниже описываются примеры согласно настоящему изобретению, которые даются лишь для иллюстрации, но не имеют целью ограничение объема данного изобретения. В свете данного описания ряд аспектов, охватываемых объемом описания и формулой изобретения, должны быть ясны для специалистов в данной области. Извлечение и последовательность перекрывающих HCV с ДНК клонов 13i, 26j, CA59a, CA84a, CA156e и CA167в, Клоны 13i, 26j, CA59a, CA84a, CA156e и CA167в, извлекаются из библиотеки лямбда- gt II, которая содержит HCV с ДНК (АТСС № 40394), приготовление которого описывается в патенте ЕРО № 318216 (опубликован 31 мая 1989 года) к WО 89/04669 (опубликован 1 июня 1989 года). Отсев библиотеки осуществляется пробой, описанной ниже, с использованием метода, описанного Huynh (1985г.). Частоты, с которыми обнаруживаются положительные клоны в соответствующих пробах, составляют примерно 1 в 50000. Извлечение клона 13i осуществляется с использованием синтетической пробы, образованной от последовательности клона 12f. Последовательность этой пробы указана ниже: 5’ GAA CGT TGC GAT CTG GAA GAC AGG GAC AGG3’. Извлечение клона 26j осуществляется с использованием пробы, образованной от 5'-области клона К9І. Последовательность этой пробы указана ниже: 5’ TAT CAG TTA TGC CAA CGG AAG CGG CCC CGA 3’. Процедуры выделения клона 12f и клона К9-1 (называемого также К9-1) описываются в патенте ЕРО № 318216, и их последовательности представлены на фиг.1 и 2, соответственно, последовательности HCV сДНК клонов 13i и 26j показаны на фиг.4 и 5, соответственно. Показаны также кодированные аминокислоты, а также перекрытие клона 13i клоном 12f, и перекрытие клона 26j клоном 13i. Последовательности этих клонов подтверждаюсь последовательность клона К9-1. Клон К9-1 выделен из другой библиотеки НСУ зДНК (смотри патент ЕР 0 218316). Клон СА59а выделен с использованием пробы, основанной на последовательности 5'-зонм клона 26j. Последовательность этой пробы указана ниже: 5’ CTG GTT AGC AGG GCT TTT CTA TCA CCA CAA 3’. Проба, образованная от последовательности клона СА59а, используется для выделения клона СА84. Последовательность пробы, используемой в этом выделении приведена ниже: 5’ AAG GTC CTG GTA GAG CTG CTG CTA TTT GCC 3’. Клон СА156е выделен с использованием пробы, образованной от последовательности клона СА84а. Последовательность этой пробы приведена ниже: 5’ FTC GGA CGA CGC AAG GTT GCA ATT GCT CTA 3’. Клон СА167в выделен с использованием пробы, образованной от последовательности клона СА156е. Последовательность этой пробы приведена ниже: 5’ TTC GAC GTC ACA TCG ATC TGC TTG TCG GGA 3’. Нуклеотидные последовательности НСУ сДНК-аз в клонах СА59а, СА84а, СА156е и СА167в, приведены соответственно на рисунках фиг.6, 7, 8 и 9. Кодированные в них аминокислоты, а также перекрытие данными последовательностями соответствующих клонов также показаны на рисунках. Создание библиотеки "pi" НСV сДНК библиотека НСV сДНК "pi" библиотека, составлена из той же партии плазмы инфекционных шимпанзе, что использовалась зля построения библиотеки лямбда-gt II НСУ сДНК (АТСС № 40394): описанной в патенте ЕРО № 318 216, и с использованием тех же способов. Однако, построение pi библиотеки осуществляется с использованием метода вытягивания затравки, где затравка обратной транскритазы основана на последовательности клона СА59а. Последовательность эатражки приведем* ниже: 5’ GGT GAC GTG GGT TTC 3’. Извлечение и последовательность клоа р 14а Отсев "pi" НСV сДНК библиотеки, описанной выше, пробой, используемой для выделения клона СА167в (смотри выше), дает клон pi 14a. Этот клон содержит примерно 800 основных пар сДНК ,которая перекрывает клоны СА167в,-СА156е, СА84а и СА59а, которые выделяются из библиотеки лямбда-gt II НСУ сДНК (АТСС № 40394). Кроме того, pi 14a содержит также примерно 250 основных пар ДНК, которые находятся перед НСУ сДНК в клоне СА167в. Извлечение и последовательность клонов СА126а, СА290а и аg 30а На основе последовательности клона СА167в приготавливается синтетическая проба, имеющая указанную ниже последовательность: 5’ GGC TTT ACC ACG TCA CCA ATG ATT GCC CTA 3’. Указанная выше проба используется для отсева, что дает клон СА216а, последовательности НСУ которого показаны на рисунке фиг.10. Другая проба основана на последовательности клона CA216a, имеющего указанную ниже последовательность: 5’ TTT GGG TAA GGT CAT CGA TAC CCT TAC GTC 3’. Отсев библиотеки лямбда-gt II (АТСС № 40394) данной пробой дает клон СА290а, в котором последовательность НСУ показана на рисунке фиг.11. В параллельном приближении осуществляется затравочное вытягивание библиотеки сДНК с использованием нуклеиновой кислоты, экстрагированной из той же инфекционно зараженной плазмы, что используется в исходной библиотеке лямбда-gt II сДНК, описанной више. Используемая затравка основана на последовательности клонов СА216а и СА290а: 5’ GAA GCC GCA CGT AAG 3’. Библиотека сДНК приготавливается с использованием методов, аналогичных методам, описанным ранее зля библиотек, используемых для извлечения клонов рi 14а и К9-1. Проба, используемая для отсева этой библиотеки, основана на последовательности клона СА290а: 5’ CCG GCG TAG GTC GCG CAA TTT GGG TAA 3’. Клон аg 30а выделяется из новой библиотеки указанной выше пробой, и содержит примерно 670 основных пар последовательности НСУ. Смотри фиг.12. Часть этой последовательности перекрывает последовательность НСУ клонов СА216а и СА290а. Примерно 300 основных пар последовательности ag 30а, однако, находится перед последовательностью от клона СА290а. Неперекрывающая последовательность показывает начальный кодон (x) и стоп кодоны, которые могут показывать начала НСУ OPF. Кроме того, на фиг.12 показаны путативные небольшие кодированные пептцды (#), которые могут играть роль в регуляции трансляции, а также путативная первая аминокислота путативного полипептида (/) и кодированные находящиеся за ней аминокислоты. Извлечение последовательности клона СА205а Клон СА205а извлекается из исходной библиотеки лямбда-gt II (АТСС № 40394) с использованием синтетической пробы, образованой от последовательности НСУ в клоне СА290а (фиг.11). Последовательность этой пробы приведена ниже: 5’ TCA GAT CGT TGG TGG AGT TTA CTT GTT GCC 3’. Последовательность НСУ сДНК и СА205а, показанная на фиг.13, перекрывается последовательностями сДНК в обоих клонах ag 30а и СА290а. Перекрытие данной последовательности последовательностью СА290а показано пунктирной линией на данной последовательностью (на данном рисунке показаны также путативные аминокислоты, кодированные в этом фрагменте). Как видно из последовательностей НСУ сДНК в клонах CA205a и ag 30а, путативный полибелок НСУ начинает появляться у начального кодона АТС; НСУ последовательности в обоих клонах coдержат сорок два нуклеотида во внутрирамочном смежном двойном стоп кодоне (ТGАТАG) до этого АТС. НСУ ОRF начинает появляться после этих стоп кодонов, и простирается не менее чем на 8907 нуклеотидов (смотри композит НСУ сДНК, показанный на фиг.17). Извлечение и последовательность клона 18g На основе последовательности клона ag 30а (смотри фиг.12) и перекрывающего клона от исходной библиотеки лямбда gt-II (АТСС № 40394), приготавливается СА230а, синтетическая проба, имеющая указанную ниже последовательность: 5’ CCA TAG TGG TCT GCG GAA CCG GTG AGT ACA 3’. Отсев исходной библиотеки лямбда gt-II НСУ сДНК данной пробой дает клон 18g, НСУ сДНК последовательность которого показана на рисунке фиг.14. На рисунке показаны также перекрытие клоном аg 30а и путативные полипептиды, кодированные в НСУ сДНК сДНК в клоне 18g (С18g или 18g) перекрывает сДНК в клонах аg 30а и СА205а, описанных выше. Последовательность С18g также содержит область двойного стоп кодона, наблюдаемую в клоне ag 30а. Область полинуклеотида перед этими стоп кодонами, по всей вероятности, представляет собой часть области 5’ генома НСУ, которая может содержать короткие ОRF, и которая может быть подтверждена прямой последовательностью очищенного генома НСУ. Эти небольшие путативные кодированные пептиды могут играть роль регулятора в трансляции. Область генома HCV перед последовательностью, представленной С18g, может быть изолирована для анализа последовательности с использованием способа, описанного в патенте ЕРО № 318216, зля выделения последовательностей сДНК перед последовательностью НСУ сДНК в клоне 12f. Синтезируются в основном небольшие синтетические олигонуклеотидные затравки обратной транскриптазы, которые основаны на последовательности С18g, и они используются для связывания с соответствующей последовательностью в геномной РНК НСУ. Последовательности затравки близки к известному 5'-терминалу С18g, но находятся за ним так, что обеспечивают расположение последовательностей пробы до последовательностей затравки. Используются известные стандартные способы инициации и клонирования. Подученные сДНК библиотеки отсеиваются последовательностями находящимися перед инициирующими точками (что устанавливается по обнаруженной последовательности С18g). Геномная РНК НСУ получается из образцов либо плазмы, либо печени индивидуумов с NANEH. Поскольку НСУ является типом Флавивируса, то 5’-терминал генома может быть модифицирован структурой "кэп" группировки. Известно, что Флавивирусные геномы содержат 5'-терминальные "кэп" структуры. (Вирус желтой лихорадки, Rice и др. (1988г.). Вирус лихорадки Денге, Hahn и др. (1988г.). Вирус японского энцефалита (1987г.) Извлечение и последовательность клонов из библиотеки бета-НСV сДНК Клоны, содержащие типичные сДНК 3'-терминальной области генома НСV, извлекаются из библиотеки сДНК, составленной из совокупности исходной плазмы инфекционно зараженных шимпанзе, которая была использована для создания библиотеки лямбда gt-II HCV сДНК (АТСС У 40394), описанной в ЕРО № 318216. Для того, чтобы создать библиотеку ДНК, к РНК, экстрагированной из этой плазмы, подсоединяется ответвление поли чА, с использованием поли (чА) полимеразы, и сДНК синтезируется с использованием олиго (dT)12,18, как затравки обратной транскриптазы. полученный гибрид РНК: сДНК гидролитически расщепляется РHK-азой H, и превращается в двухниточную HCV сДНК. Подученная HCV сДНК клонируется в лямбда – gt10 с использованием способа, описаного Huynh (1985г.), и в результате получается библиотека бета (или в) HCV сДНК. Осуществляется следующая процедура. Аликвота (12мл) плазмы обрабатывается протеиназой К и экстрагируется раднмм объемом фенола, насыщенного 0,05 Мол Трис-СI, рН = 7,5, 0,05% (об/об) бета-меркаптоэтанолом, 0.1% (вес/об) оксихиноломом и 1мМол ЕДТА. Полученная водная фаза повторно экстрагируется фекальной смесью, с последующим тремя экстракциями смеси (1 : 1), содержащей фенол и хлороформ: изоамиловый спирт (24 : 1), с последующими двумя экстракциями смесью хлороформа и изоамидового спирта (1 : 1). После доведения концентрации NаCI в водной фазе до 200мМол, нуклеиновые кислоты в этой водной фазе осаждаются в течение ночи при температуре –20°С 2,5 объемами холодного абсолютного этанола. Выпавшие осадки извлекаются путем центрифугирования при работе центрифуги со скоростью 10000об/мин в течение 40 минут, промываются 70% этанолом, содержащим 20мМол NаСІ и 100% холодным этанолом, высушиваются в течение пяти минут в экстраторе и растворяются в воде. В выделенные нуклеиновые кислоты от скоплений плазмы инфекционно зараженных шимпанзе вводится ответвление поли чА с использованием поли-Α полимеразы в присутствии полинуклеазного ингибитора человеческой плаценты (HPRI) (поставляется из "Amershoem Corp.) с использованием МS2 РНК в качестве носителя, стеленные нуклеиновые кислоты эквивалентные нуклеиновым кислотам в 2мл плазмы инкубируются в растворе, содержащем ТMN (50мМл. Трис HCV, рН = 7,9, 10 мМол МgСl2, 250 мМол NaCl, 2,5мМол MnCI2, 2мМол дитиотреитола (ДТТ), 40 микромолярную альфа-[32P] ATP, 20 ед НРRI (Amersham Corp.) и примерно 9 - 10ед. свободной от РНК-азы поли-А-полимеразы (BRL). Инкубация продолжается в течение 10 минут при 38°C, и реакции прекращаются посредством ЕДТА (конечная концентрация примерно 250мМол). Раствор экстрагируется разным объемом фенола-хлороформа и равним объемом хлороформа, и нуклеиновые кислоты осаждаются в течение ночи при –20°С 2,5 объемами этанола в присутствии 200мМод. NaCl. Извлечение клона в5a Библиотека HCV сДНК отсеивается путем гибридизации с использованием синтетической пробы, которая имеет последовательность, основанную на последовательности HCV сДНК в клоне 15е. Извлечение клона 15е описывается в патенте ЕРО й 318216, и его последовательность показана на фиг 3. Последовательность этой синтетической пробы приведена ниже (фиг.3). Отсев библиотеки дает клон бета-5а (в5а), который содержит область HCV сДНК примерно на 1000 основных пар. 5-‘ область этой сДНК перекрывает клоны 35f, 19g, 26g и 15e (эти клоны описаны выше). Область между З'-терминальной поли-Α-последовательности и З'-последовательностью, которая перекрывает клон 15е, включает примерно 200 основных пар. Эτοτ клон позволяет идентифицировать область З'-терминальной последовательности HCV генома. Последовательность в5а находится внутри последовательности HCV сДНК в клоне 16jh (описанного ниже), Более того, эта последовательность присутствует также в СС34а, выделенном из исходной библиотеки лямбда gt-II (АТСС № 40394). (Исходная лямбда gt-II библиотека рассматривается здесь как "С" библиотека). Извлечение и последовательность клонов, образуемых путем РСR усиления 3’-области генома HCV Излучаются многониточные клоны сДНК, которые содержат нуклеотидные последовательности, образованные от 3'-области генома HCV. Это осуществляется путем усиления нужной области генома путем реакции полимеразной цепи, как описало Saiki и др. (1986г.) и Saiki и др. (1988г.), которая модифицирована как описано ниже. НС РНК, которая была усилена, получается из скопления исходной плазмы инфекционно зараженного шимпанзе, которая использовалась для создания библиотеки лямбда-gt II HCV сДНК (АТСС № 40394), как описано в патенте ЕРО № 318216. Извлечение HCV РНК осуществляется как описано выше. В выделенную РНК вводится ответвление у 3’ конца в виде ATP посредством Е. coli поли-А полимераэы, как описано Sippel (1973г.), с той разницей, что нуклеиновокислотный субстрат заменен нуклеиновыми кислотами, выделенными из сыворотки шимпанзе. Эта РНК с ответвлением затем обратимо транскрибируется в сДНК посредством обратной транскриптаэы с использованием адаптора dТзатравки, как описано Han (1987г.), с той разницей, что компоненты и последовательность затравкиадаптора имеют следующую форму: Затравка ЗаполнительNotl Р6 Промотор AATTG GCGGCCGCCATACGATTTAGG-T15 TGACACTATAGAA Полученная сДНК подвергается усилению посредством РСР с использованием двух затравок: ЗатравкаПоследовательность JH32 (30mer) ATAGCGGCCGCCCTCGATTGCGAGATCTAC JH11 (20mer) AATTCGGGCGGCCGCCATACGA Затравка JH32 содержит 20 нуклеотидных последовательностей, гибридизируемых с 5'-концом нужной области в сДНК с установленной Тm = 66°С. JH11 образован от части адаптера одиго-dТ-затравки, таким образом, она специфична для 3'-конца сДНК с Тm = 64°С. Обе затравки имеют распознавательную точку для ограничительного фермента, Notl, у 5'-конца, для использования в последующем клонировании усиленной НСУ зДНК. Реакция PCR осуществляется путем суспензирования сДНК и затравок в 100 мrл реакционной смеси, содержащей четыре деоксинуклеозидотрифосфата, буферные соли и металлические ионы, и термостабильнув ДНК полимеразу, извлеченную из Thermus aquaticus (Та q полимераза), которые находятся в системе средств Perkin Elmer Cetus PCR (№ 801 - 043 или 801 - 0055). Реакция РСР Осуществляется в виде 35 циклов в термическом циклизаторе ДНК Perkin Elmer Cetus. Каждый цикл заключает в себе 1,5 минутный этап денатурирования при 94°C, этап гибридизирования при 60°C в течение 2 минут, и этап удлинения затравки при 72°С в течение 3 минут. Продукты PCF подвергаются точечному анализу Southern с использованием 30 нуклиотидной пробы, jh34, последовательность которой основана на последовательности З'-терминальной области клона 15е. последовательность jh34 приведена ниже: 5' CTT GAT CTA CCT CCA ATC ATT CAA AGA CTC 3’. Продукты PCR обнаруживаемые НСV сДНК пробой, распределяются по размеру примерно от 50 до 400 основных пар. Для того чтобы клонировать усиленную НСУ сДНК продукты РСR расщепляются Notl, и отбирается размер путем электрофореза на полиакриламидном геле. ДНК размером более чем 300 основных пар клонируется в Notl точку вектора рUС18. Вектор рUС18 образуется путем включения полилинкера Notl, клонированного между точками EcoRI и Sal1 вектора рUС18. Эти клоны отбираются на HCV сДНК с использованием пробы IН34. Получается ряд положительных клонов, которые секвенсируются. Нуклеотидная последовательность вставки HCV сДНК водном из этих клонов, 16jh, и кодированные в них аминокислоты показана на фиг.15. На этом рисунке показана нуклеотидная гетерогенность, обнаруживаемая в последовательности HCV зДНК в клоне 16jh в сопоставлении с другим клоном данной области. Компилированные последовательности HCV сДНК Последовательность HCV сДНК компилируется из серий перекрывающих клонов от различных библиотек HCV сДНК, описанных выше. В данной последовательности компилированная последовательность HCV сДНК, полученная из клонов в114а, 18g, аg30а, CA205a, СА290а, СА216а, pi14а, СА167в. СА156а, СА84а и СА59а, находится перед компилированной последовательностью HCV сДНК, опубликованной в ЕРО № 318216, которая показана на фиг.16. Компилированная последовательность HCV сДНК, полученная от клонов s5a и I6jh за компилированной последовательностью HCV сДНК, которая опубликована в ЕРО № 318216. Нa фиг.17 показана компилированная последовательность HCV сДНК от описанных выше клонов и компилированная последовательность HCV сДНК, опубликованная в ЕРО № 318216. Клонами, от которых образована данная последовательность, являются: в114а, 18g, аg 30а, СА205а, СА290а, СА216а, pi14a, СА167в, СА156е, СА84a, СА59a. К9-1 (называется такжж к9-1), 18і , 26j. 12f, 14i , 11в, 7f, 7е, 8h, 33с, 40в, 37в, 35, 36, 81, 32, 33в, 25с, 14с, 8f, 33f, 33g, 39с, 35f, 19g, 26g, 15е, в5а, и 16jhі. На фиг.3 обозначения над последовательностью показывают положение путативного инициирующего метионинового кодона. Клон в114а получается с использованием процедуры клонирования, описанной для клона в5а, выше, с той разностью, что проба представляет собой синтетическую пробу, используемую тля обнаружения клона 18g, смотри выше. Клон в114а перекрывается клонами 18g, аg 30а и СА205а, с той разницей, что клон 114а, заключает в себе дополнительно два цуклеотида ю данной последовательности в клоне 16 9 (то есть 5'-СА). Эти дополнительные два нуклеотида включены в НСV геномную последовательность, показанную на фиг.17. Следует отметить, что хотя некоторые из описанных выше клонов были получены из библиотек иных чем исходная библиотека НСV сДНК лямбда - gt ll (АТСС № 40394), эти клоны содержат последовательности НСV сДНК, которые перекрывают последовательности НСV сДНК в исходной библиотеке. Таким образом, почти вся последовательность НСV образована от исходной библиотеки лямбда - gt ll С (АТСС № 40394), которая используется для выделения первого клона НСУ сДНК (5 - 1 - 1). Выделение клона 5 - 1 - 1 описывается в патенте ЕРО № 318216. Очистка белка слияния С103-3 (альтернативный метод) Белок слияния, С100-3 (называемый также НСV с 100-3 и альтернативно с 100-3) состоит из высшего оксида дисмутазы (SOD) у N-терминала в рамке полипептида С100 НСУ у С-терминала. Способ получения полипептида путем выражения в дрожках и дифференциальная экстракция нерастворимой фракции экстрагированных дрожжевых клеток хозяина, описываются в патенте ЕРО № 318216. Альтернативный способ получения этого белка слияния описывается ниже. При осуществлении данного способа антиген осаждается из сырого клеточного лизата ацетоном; осажденный ацетоном антиген затем подвергается ионономенной хроматографии и далее очищается путем гель-фильтрации. Белок слияния, С100-3 (НСV с100-3) выражается в дрожжевом штамме JSС (308 (АТСС № 20879), трансформированном рАВ24С 100-3 (АТСС № 67976); трансформированные дрожжи выращиваются в условиях, которые позволяют осуществление выражения (например за счет роста в УЕР, содержащей 1% глюкозы). (Смотри патент ЕРО № 318216) .Клеточный лизат приготавливается путем суспензирования клеток в Буфере А (20мМол Трис НСl, рН = 8,0, 1мМол ЕДТА,1мМол. РМSC. Клетки разбиваются путем измельчения стеклянными шариками в гомогенизаторе типа Dynomill или эквивалентном устройстве. Степень разбивки клеток определяется по подсчету клеток под микроскопом посредством фазовой оптики. Разбитые клетки обнаруживаются в темном цвете, в то время как живые клетки обнаруживаются в светлом цвете. Определяется процент разбитых клеток. Когда процент разбитых клеток составляет примерно 90% или более, разбитые клеточные осколки отделяются от стеклянных шариков путем центрифугирования, и стеклянные шарики промываются Буфером А. После смешивания промывок и гомогената получается нерастворимый материал в лизате путем центрифугирования. Данный материал в грануле промывается для удаления растворимых белков путем суспензирования в Буфере В (50мМал глицина, рН - 12,0, 1мМол. ДТТ, 500мМол. NаСl). Нерастворимый материал извлекается путем центрифугирования и солюбилизируется путем суспенамрования в Буфере С, содержащем SDS. Раствор экстракта может быть нагрет в присутствии бетамеркаптоэтанола и концентрируется путем ультрафильтрации. НСV с100-3 в экстракте осаждается холодным ацетонам. При желании осадок может выдерживаться при температуре около или ниже -15°C. До ионообменной хроматографии осажденный ацетоном материал извлекается путем центрифугирования и может быть высушен в азоте. Осадок суспензируется в Буфере Д (50мМол глицина, рH - 10,00, 1мМол ДТТ, 7 Мол. мочевины) и центрифугируется до гранулированного нерастворенного продукта. Поверхностный слой материала вводится, в анионообменную колонку предварительно уравновешенную Буфером Д. Фракции собираются и анализируются путем ультрафиолетового поглощения или галь-электрофореза на полиакриламидных гелях SDS. Фракции, которые содержат HCV с100-3 полипептид, собираются. Для того чтобы очистить HCV с100-3 полипептид путем гель фильтрации, собранные фракции из ионообменной колонки нагреваются в присутствии бета-меркаптоэтанола и SDS и элюат концентрируется путем ультрафильтрации. Концентрат ввозится в колонну гель-фильтрации, предварительно уравновешенную Буфером Ε (20мМол Трис НСl, рH = 7,0, 1мМол ДТТ, 0,1% SDS). Присутствие НСУ с100-3 в элюированных фракциях, а также присутствие примесей определяется путем гель электрофореза на полиакриламидных гелях в присутствии SDS и визуализации полипептида. Эти фракции, содержащие очищенный HCV c100-3, собираются. Фракции с высоким содержанием HCV c100-3 могут быть дополнительно очищены путем повторного процессе гель-фильтрации. Если желательно удаление определенного материала, то этот материал, содержащий HCV с100-3, мажет быть отфильтрован через 0,22 микронный фильтр. Выважение и антигенность полипептидов, кодированных HCV сДНК. Полипептиды, выражанные в Е.coli. Полипептиды, кодированные в ряде HCV сДНК-аз, которые проходят по геномной ORF HCV выражаются в E.coli и испытываются на их антигенность с использованием сыворотки, полученной от различных индивидуумов с NANBH. Выраженные векторы, содержащие клонированную HCV ДНК-азу, составляют от рSODcf І (Steimer и др.,1986г.). Для уверенности в том, что будет получена правильная рамка считки, образуются отдельные выраженные векторы, pc flAB, pc flCD и pc flEF, путем сшивки любым из трех сжижающих агентов АВ, СD и ЕС, с фрагментом ВаmНІ-ЕсоRІ, образованный путем гидролитического расщепления до дополнения вектора pSODcfl фрагментами EcoRI и ВаmНІ, с последующей обработкой щелочной фосфатазой. Связывающие линкеры образуются из шести олигомеров А, В, С, Д, Е и С. Каждый олигомер фосфорилируется путем обработки киназой в присутствии АТР зо гибридизации с его комплиментарным олигомером. Последовательности этих синтетических связывающих линкеров указаны ниже: Название ДНК Последовательность (5’ – 3’) A GATC CTG AAT TCC TGA TAA B GAC TTA AGG ACT ATT TTA A C GATC CGA ATT CTG TGA TAA D GCT TAA GAC ACT ATT TTA A E GATC CCG GAA TTC TGA TAA F GAC CTT AAG ACT ATT TTA A Каждый из трех связывающих линкеров разрушает исходную точку ЕсоRІ и создает новую точку ЕсоRІ в пределах данного связывающего линкера, но ужа в пределах другой рамки считки. Следовательно, фрагменты ЕсоRІ НСV сДНК, выделенные из слонов при вставке в выраженный вектор, находятся в трех различных рамках считки. Фрагменты НСV сДНК в обозначенных лямбда gt II клонах, иссекаются путем гидролитического расщепления EcoRI; каждый фраг вставляется в рс fІАВ, pcflCD и pcflEF. Эти выраженные построения затем трансформируются в клетки D1210 E.coli; трансформанты клонируются, и рекомбинантные бактерии от каждого клона индуцируются для выражения полипептидов слияния путем роста бактерий в присутствии IРТG. Выраженные продукты указанной НСV ДНК-азы испытываются на антигенность путем прямого иммунологического отсева колоний, с использованием модификации метода, описанного Helfman и др., 1963г. Как показано на фиг.18, бактерии высеваются на нитроцеллюлозных фильтрах, нанесенных на ампициллиновые пластины, так чтобы получалось примерно 1000 колоний на фильтр. Колонии высеваются в виде реплик на нитроцеллюлозных фильтрах, и реплики повторно выращиваются в течение ночи в присутствии 2мМол IPTG и ампициллина. бактериальные колонии лизируются путем суспензирования нитроцеллюлозных фильтров в течение примерно 18 - 20 минут в атмосфере, насыщенной парами СНСІ3. Затем каждый фильтр помещается в отдельную чайку Петри (100мл), содержащую 10мл 50мМол.Трис. НСl, рН = 7,5, 150мМол. NaСІ, 5мМол. MqCI2, 3% (вес/об) BSA, 40 мкг/мл лизозима, и 0,1мкг/мл ДНазы. Содержимое чашек осторожно перемешивается в течение на менее чем 8 часов при комнатной температуре. Фильтры промываются в ТВSТ (33мМол. Трис.НСІ, pH = 8,0, 150мМол NaCI, 0,005% Твина 20). После инкубации клеточные остатки промываются и инкубируются вТВS(ТВsТ без Твина), содержащем 10% овечьей сыворотки. Инкубации осуществляется в течение 1 часа. Затем фильтры инкубируются осажденной сывороткой в ТBS от индивидуумов с NANBH, который включают: 3 шимпанзе, 8 пациентов с хроническим NANBH, сыворотки которых положительны по отношению к антителам к полипептиду НСУ с100-3 (описано также в патенте ЕРО № 318216 и см.выше) (называется также С100), 8 пациентов с хроническим NANBH, сыворотки которых отрицательны для анти-С100 антител; выздоравливающий пациент, сыворотка которого отрицательна для анти С100 антител; и 6 пациентов с общим, приобретенным NANBH, включая одного пациента, сыворотка которого явно положительна по отношению к анти-С100 антителам, и одного пациента сыворотка которого предельно положительна по отношению к анти-С100 антителам. Эти сыворотки, разбавленные в TBS , предварительно обрабатываются путем предабсорбции h SOD. Инкубация данных фильтров с сывороткой осуществляется в течение не менее чем два часа. После инкубации фильтры промываются двукратно в течение 30 минут TBST. Мечение выраженных белков, с которыми связываются антитела в сыворотке, осуществляется путам инкубации в течение 2 часов с меченым 125I овечьим анти-человеческим антителом. После промывки фильтры двукратно промываются в течение 30 минут TBST, высуживаются и подвергаются ауторадиографии. Ряд клонов (смотри ниже) выражают полипептцды, содержащие НСУ эпитопы, которые иммунологически активны к сыворотке от индивидуумов с NANBH. Пять этих полипептидов очень иммуногенны, поскольку антитела к НСУ эпитопам в этих полипептидах обнаруживаются во многих сыворотках различных пациентов. Клоны, кодирующие эти полипептиды, и расположение полипептида в путативном HCV полибелка (в котором аминокислотные номера начинаются с путативного инициирующего кодона) следующие: клон 5-1-1, аминокислоты 1694 - 1735; клон С100, аминокислоты 1569 - 1931; клон 33с, аминокислоты 1192 - 1457; клон СА279а, аминокислоты 1 - 84; и клон СА290а, аминокислоты 9 - 177. Расположение иммуногенных полипептидовв путативном НСУ полибелке приводится ниже. Клоны, кодирующие полипептиды доказанной реактивности с сывороткой от пациентов с NANBH Клон Расположение в полибелке НСУ (аминокислотный номер начинается с путативного инициирующего метионина) СА279а 1 - 84 СА74а 437 - 582 13i 511 - 690 СА290а 9 - 177 33с 1192 - 1457 40в 1266 - 1428 5-1-1 1694 - 1735 81 1689 - 1805 33в 1916 – 2021 25с 1949 - 2124 14с 2054 - 2223