Спосіб виявлення штамоспецифічних протигрипозних антитіл

Спосіб виявлення штамоспецифічних протигрипозних антитіл, який містить імунологічну реакцію гальмування гемаглютинації з використанням антигенних діагностикумів, який відрізняється тим, що як антиген використовують живий вірус грипу Винахід відноситься до області медичної імунологи і може використовуватись для встановлення етіологічного діагнозу та визначення етану протигрипозного імунітету у хворих та вакцинованих Відомий спосіб виявлення протигрипозних антитіл / 1 / в сироватках крові методом кольорової проби з використанням вторинної культури ниркового епітелію мавп Але спосіб складний, забирає багато часу, потребує спеціальних навиків та обладнання для культивування ниркового епітелію і недостатньо ефективний Відомий спосіб виявлення протигрипозних антитіл /2/, що включає імунологічну реакцію гальмування гемаглютинації"! з використанням діагностикуму, що являє собою висушену вакуумом алантоісну рідину курячих ембріонів, інфікованих вірусом грипу Діагностикуми, що готуються окремо для кожного типу вірусів, під час вакуумної процедури втрачають важливі антигенні властивості і тому втрачають специфічність В основу винаходу поставлене завдання створити систему технічних прийомів по виявленню штамоспецифічних протигрипозних антитіл на основі імунологічних реакцій антитіл з живим вірусом грипа і за рахунок цього збільшити чутливість визначення антитіл та забезпечити визначення їх штамоспецифічності Поставлене завдання вирішують шляхом використання в реакції гальмування гемаглютинації живих віру сів грипу Приклад 1 Визначення штамоспецифічних антитіл до вірусів грипу А/Шангдонг/9/93 /H3N2/ і В/Панама/45/90 в сироватці крові хворої 25 років Сироватку крові хворої обробляють нейрамшідазою нехолерних вібріонів /RDE/ Для цього в пробірку з 0,1 мл сироватки вносять 0,5 мл, нейрамінідази, розведеної в співвідношенні 1 50 і витримують 18 годин в термостаті при 37°С Потім 1 годину прогрівають сироватку на водяній бані при 56°С і добавляють 0,4 мл фізіологічного розчину, одержуючи таким чином розведення сироватки 110 для постановки реакції гальмування гемаглютинації В реакції використовують живий вірус грипу Для чого вірус грипу відомого штаму пасирують на 9 - 11 - денних курячих ембріонах В планшет для імунологічних реакцій з круглим дном у 8 лунок /2 ряди/ вносять по 50 мкл забуференого фізіологічного розчину і розводять в них сироватку від співвідношення 1 20 до 1 2560 В лунки одного ряду вносять антиген - живий вірус грипу А/Шангдонг/9/93/НЗМ2 в робочій дозі 4 ГАО та об'ємі 50 мкл У 8 лунок другого ряду вносять антиген - живий вірус грипу В/Панама/45/90 в такому ж об'ємі і витримують 20 хвилин планшет у термостаті при 24°С Після цього в кожну лунку планшету вносять по 100 мкл 1% суспензії курячих еритроцитів, витримують 20 хвилин у термостаті при 24°С і враховують результат Проведеним аналізом встановлено, що сироватка крові хворої В містить антитіла до вірусу грипу А/Шангдонг/9/93 в титрі 1 20, а до штаму В/Панама/45/90 - в титрі 1 160, що дає можливість зробити висновок про перенесене захворювання грипом, визване штамом вірусу В/Панама/45/90 О со ю о 20534 Приклад 2 Визначення ефективності способу Для визначення ефективності запропонованого способу по описаній методиці проводять дослідження вмісту штамоспецифічних антитіл до вірусу грипу В/Леншград/90/86 з живим вірусом цього штаму та відомим способом з використанням комерційного ліофілізованого діагностикуму Результати визначення приведені в таблиці 1 Із приведених даних видно, що використання запропонованого способу більш ефективне, дає можливість точніше визначити вміст штамоспецифічних антитіл в досліджуваному матеріалі, ніж відомим способом Таблиця 1 Титри антитіл до вірусу В/Леншград/90/86 в „імуноглобуліні людини нормальному", визначені відомим і запропонованим способом Імуноглобулін рік, місяць 1990V VI VII 1991 V VI VII КІЛЬКІСТЬ серій Запропонований спосіб 1 1 1 1 1 1 9 14 7 10 4 7 Співставлення одержаних запропонованим способом даних з епідемічною ситуацією, що мала місце в 1990 - 1991 р р більш точно визначає етіологічну характеристику захворювань Використана література 1 Константинов В К , Лябина Л М , Лузянина Т Я Титрование вируса гриппа и противогриппоз 42,0 60,4 26,3 71,6 86,3 57,9 Відомий спосіб 1 34,4 1 35,9 1,21,1 1 44,3 1 45,0 1 47,9 ных антител методом цветной пробы /методическое письмо/ в сб Механизмы противогриппозного иммунитета, Л , 1972, с 143 -156 2 Діагностикум грипозний сухий, затверджений до застосування заступником міністра охорони здоров'я Дугасовим П Н 14 серпня 1979р ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24