12-імідазоліл-1-додеканол та його застосування у виготовленні фармацевтичних композицій

1. Застосування 12-імідазоліл-1-додеканолу або його фармацевтично прийнятної солі для виготовлення фармацевтичної композиції. C2 2 (19) 1 3 93709 4 зу печінки, який у подальшому може розвитись у який на кінці має реактивний центр з гемокільцем гепатит і, на пізнішій стадії, у цироз. При цьому на центральному атомі заліза. ризик і рівень пошкодження печінки безпосередньо Вважають, що хіміотерапевтичні засоби, які залежать від кількості і тривалості вживання алкозастосовують при лікуванні раку, також діють чеголю, причому ризик залежить від індивідуальних рез пригнічененя Р450-ензиму. особливостей. Алкогольне запалення печінки (алУ ранішніх дослідженнях (Jiang et al., когольний гепатит) є, у деяких випадках, небезпеCytochrome P450 2J2 Promotes the Neoplastic чним для життя захворюванням, яке може супроPhenotype of Carcinoma Cells and Is Up-regulated in воджуватись лихоманкою, жовтухою і зростанням Human Tumors, Cancer Res. 2005, 65:4707-4715) рівня лейкоцитів. Таке алкогольне запалення печівперше було показано, що цитохром Р450 навіть є нки лікують повним утриманням від алкоголю і канцерогеном. видаленням цирозних рубців. Було показано, що експресія гену цитохрому Схожими з цим викликаним алкоголем так Р450 2J2 у пухлинах людини підвищується. Цитозваним гепатитом ожиріння або алкогольним стеахромом Р450 2J2 активується епоксигеназа, яка тогепатитом (ASH) є гепатити, які виникають у переводить субстратну арахідонову кислоту у чоосіб, що помірно вживають алкоголь або не вжитири різні ізомерні епоксиейкосатрієноїдні кислоти вають його взагалі. Такі гепатити викликаються, (ЕЕТ). Дослідженнями було також показано, що дія наприклад, отруєнням, наприклад, при роботі з ЕЕТ стримує апоптоз, оскільки захищає пухлинні лаками і/або медикаментами. клітини від дії факторів некрозу пухлини, і, таким Відомо, що процес окислення в обміні речовин чином, продовжує життя ракових клітин. Крім того, здійснюється за допомогою цитохромів, тобто рявона сприяє мітозу і проліферації клітин пухлини. ду різних ензимів, в яких активний центр має гемоПоказано також, що ангіогенезна дія ЕЕТ, тобструктуру. Через каталіз реакцій окислення і гідрото сприяння утворенню нових кровеносних судин, ксилювання вони сприяють перенесенню а це грає важливу роль у розвитку пухлин (Pozzi A. електронів на акцептор. et al., Characterization of 5,6-and 8,9Важливу роль грають, наприклад, цитохроми Epoxyeicosatrienoic Acids (5,6- and 8,9-EET) as родини Р450 (CYP-450). Тут йдеться про дуже поPotent in "Vivo Angiogenic Lipids", J. Biol. Chem. ширені монооксигенази, які належать до дуже ва280:27138-27146, 2005). жливих ензимів метаболізму гідрофобних сторонУ Schattenberg et al., Hepatocyte CYP2E1 ніх речовин і модифікації гідрофобних гормонів і overexpression and steatohepatitis lead to impaired стероїдів. hepatic insulin signalling, J. Biol. Chem. 2005; 280: Головною функцією цитохром-Р450-ензиму є 9887-9894 вперше було відзначено надекспресію солюбілізація сторонніх речовин гідроксилюванцитохрому Р450 у сполученні з діабетом. ням, яка призводить до їх ренальної екскреції. ОтУ Müller-Enoch et al., 2. Naturforsch. (2001) 56c, же, цитохром-Р450-ензим грає важливу роль у Seite 1082-1090 описано пригнічення цитохромудетоксикації. Р450 2В1 у щурів дією лізофосфатиділхолінів, ліЦінним є те, що приблизно половина всіх сузофосфатиділінозитолу, а також арахідонових і часних ліків гідроксилюється цитохром-Р450олеїнових кислот через моноацилгліцеролен, моензимом печінки. Тривалість перебування баганоолеїлгліцеролен і монопальмітоїлгліцеролен. тьох ліків у тілі суттєво зменшується активністю У Т. Haehner, D. Müller-Enoch et al., Z. цитохром-Р450-ензимів. У ссавців переважна кільNaturforschung (2004) 59c, Seite 599-605 описано кість цитохрому Р450 знаходиться у печінці, осківплив одноланцюгових ліпідних молекул на активльки вона є центральним органом детоксикації. ність цитохромної ізоформи Р450 2В1 у щурів. Цитохром Р450 звичайно знаходиться на мембрані Задачею винаходу є створення фармацевтичендоплазматичного ретикулума у зв'язаній формі. ної композиції для профілактики або лікування Цитохром-Р450-ензими грають вирішальну ракових захворювань, патологічних наслідків злороль як посередники стійкості комах до інсектицивживання алкоголем, вірусного гепатиту, стеатогедів і рослин до гербіцидів. патиту, гострого і хронічного панкреатиту, токсичУ його субструктурі цитохром Р450 має шесних ниркових захворювань, гепатичної інсулінової тиразово координовану гемогрупу, на якій каталірезистентності при цукровому діабеті, пошкоджень печінки при хворобі Вільсона і сидерозі, ішемічних зується реакція RH + О2 + 2Н+ + 2е-  ROH + Н2О. реперфузійних пошкоджень, для застосування як При цьому обидва необхідні для реакції елекантидоту проти зовнішньої отрути і медикаментозтрони забезпечуються, наприклад, NАDРНних інтоксикацій, для подовження перебування цитохром-Р450-редуктазою, асоційованою з ензимедикаментів в організмі, або для пригнічення мним комплексом. Таким чином, на Р450, проміж побічної токсичної дії хіміотерапевтичних препараіншим, виникають цитотоксичні реактивні оксигенні тів. сполуки (ROS). Цю задачу вирішено засобами, визначеними у Відомо, що як при алкогольному, так і неалкоп. п. Формули винаходу. гольному жировому гепатиті, а також при панкреаБуло несподівано виявлено, що згадані вище титі активується синтез цитохрому Р450-2Е1. Фунзахворювання можна лікувати сполуками такого кція і механізм дії цих цитохромів сильно типу. Ці сполуки затримують утворення реактиввідрізняються від інших ізоформ (див., наприклад, них оксигенних сполук (ROS), зокрема, таких оксиМ. Н. Wang et al., Archives of Biochemistry and генних радикалів, як аніон перекису (О2*-), а також Biophysics, (1995) Vol. 317, Seite 299 - 304). До того перекису гідрогену (Н2О2), які не витрачаються у ж цей ензим має канал довжиною приблизно 15 А, прямих реакціях відновлення на цитохромі Р450, 5 93709 6 зокрема, на ізоформах генної родини 2, а саме, рупами, SH, а також амінокислотою або поліспир2Е1 і 2J2. том, карнітином (-N-триіметиламіно--гідроксиБуло також встановлено, що ця сполука замасляна кислота), сфінгозиновою головкою (1,3тримує перетворення арахідонової кислоти в ізодигідрокси -2-амінопропіловий залишок). Якщо А є мерні епоксиейкосатрієноїдні кислоти. Була також гідрогеном, то, хоча А не є гідрофільним кінцем, показана можливість затримання гідроксилювання така сполука, однак, може бути використана у фасторонніх речовин належними дозами такої сполурмацевтичних композиціях згідно з винаходом. ки. Бажані амінокислоти мають, зокрема, позитивно Винахід стосується застосування сполук форабо негативно заряджені залишки. Прикладами є мули лізин, аргінін, гістидин, аспарагінова кислота, глюA-R-X тамінова кислота, глютамін, аспарагін, гомоцистеабо їх фармацевтично прийнятних солей, де їн, серин, гомосерин і/або цитрулін. Бажаним поліR - аліфатичний або ароматичний вуглеводнеспиртом є, зокрема, гліцерин. Як гліцерин, так і вий залишок з 6 - 40 атомами карбону, який, зокцукор можуть бути у деяких випадках заміщеними. рема, має гідрофільний або гідрогенний кінцевий Бажаним заміщенням є, наприклад, заміщення залишок А, і залишок X, який має щонайменше ОН-групи аміно- або SH-групи, відповідно, фосфапару карбонових або гетероелектронів і/або nтною або сульфатною групою. У найбільш бажаелектронів. Залишок R є ліпофільним. ному заміщенні А є гліцериновим залишком форЗвичайно залишок R є алкільним залишком і мули тому може бути лінійним або розгалуженим і заміщеним, з простими, подвійними або потрійними зв'язками. Звичайно він має аліфатичну основу з 6 - 26, зокрема, з 8 - 22 атомами карбону. Бажано, щоб вуглеводневі ланцюги основи мали 10 - 15, де щонайменше один з залишків R2 - R4 є викраще 10-13 атомів карбону. Якщо R є аліциклічзначеним вище залишком RX, а В є оксигеном, ним або ароматичним вуглеводневим залишком, сульфуром, селеном або селенатом, аміногрупою, замісник може бути конденсованим і/або ліпофільфосфатною або сульфатною групою. В іншому ним, і тому він звичайно має щонайменше 5, 6 і втіленні винаходу залишок R2 - R4 є фосфатидилщонайбільше 40, бажано, 25 атомів карбону. коліновим залишком, фосфатидилетаноламіновим Бажано, щоб його мінімальна довжина станозалишком, фосфатидилсериновим залишком або вила 7, 8 атомів С, а максимальна - 20 -22 атомів фосфатидилінситоловим залишком. Придатними С. залишками також можуть бути, наприклад, згадані Бажано, щоб залишки X були гетероциклами, вище амінокислотні, зокрема, позитивно або негаа також алкінільними залишками. Гетероцикли є, тивно заряджені залишки. зокрема, нітрогенними, оксигенними і/або сульфуУ випадку застосування похідних 1,2-діацилровими і можуть бути ароматичними і/або неароsn-гліцерин-3-фосфорної кислоти основна струкматичними і мати звичайно 5 або 6 кільцевих атотура кефаліну, цераміду, лецитину і відповідного мів. У придатних для застосування випадках X фосфоліпіду має згаданий вище кінець X. може також бути конденсованим гетероциклом. Нерозгалужений, насичений і не заміщений Прикладами таких гетероциклів є імідазол, пірол, замісник X-R або BR2-4 має, наприклад, такі форпіразол, піридин, піразин, індол, ізоіндол, індазол. мули: Бажані гетероцикли є 6-, краще 5-атомними кільa) алканольний залишок: НО-СН2-(СН2)а-Х цями, з 2 - 3 гетероатомами. Придатними гетероb) алкілсульфатний залишок: O3SO-CH2циклами є також тіазол, тріазол, фуран. (CH2)a-X Бажано, щоб алкін мав структуру -COCR12, де c) алкіл-СоА-залишок: CoA-S-CO-(CH2)a-X R12 є гідрогеном або, у деяких випадках, заміщеd) алканокислотний залишок: НООС-(СН2)а-Х ним С1-С15-, бажано, максимум С10-алкільним заде бажане мінімальне значення а становить лишком, який за деяких умов може мати подвійні щонайменше 6, зокрема, 7. Більш бажане мінімаабо потрійні зв'язки. R12 звичайно має максимум 5, льне значення а становить 8, найкраще - 9. Бажазокрема, 3 атомів С В інших втіленнях винаходу не максимальне значення а становить 40, зокрезалишком X, наприклад, є ма, 26, більш бажано, 22, зокрема, 12, найкраще - первинний, вторинний і третинний аміни, 11 і 10. - заміщена і не заміщена діазольні функції, наВідповідні формули розгалужених, не заміщеприклад, гідразин і гідразон, них або заміщених замісників є добре відомими - нітрил, ізонітрил, фахівцям і не потребують подальших пояснень. - сульфуровмісні функціональні групи, наприІншими прикладами аліфатичного залишку R є клад, тіо- і ізотіоціанати, алкілсульфіди, сульфокдодеканокислотний залишок, октадеканокислотсиди, тіольні групи, метилендіоксифункція, ний залишок, ундеканілсульфатний залишок, па- алкільний етер і алкільний тіоетер. льмітил-СоА-залишок або лауринокислотний заЗалишки X є, бажано, залишками, координолишок. ваними з простетичною гемогрупою. В іншому втіленні винаходу n-електрони заГідрофільні кінці А придатних для застосуванлишку X, зокрема, в олефінових, зокрема ацетиня згідно з винаходом молекул, можуть бути будьленових подвійних і потрійних зв'язках, звичайно є якими фармацевтично придатними гідрофільними кінцевими. Зокрема, бажаним залишком є приєдфункціями, зокрема, групами -ОН, -СООН, фосфананий через атом нітрогену імідазольний залишок тними, фосфатоестерними, сульфатними і аміногабо етинільний залишок (-С=С-). 7 93709 8 Слід відзначити, що застосування визначених ми. "Упакування" етинілованих або імідазольовавище сполук згідно з винаходом, зокрема, таких, них аліфатів у формі ліполіпідів також уможливде X є імідазольованою або етинілованою жирною лює цілеспрямоване перенесення їх у зазначені кислотою, як, наприклад, 17-октадециніл-1патогенні тканини. кислота, яка показала високу активність in vitro, При застосуванні згідно з винаходом ці сполуможе суттєво подовжувати час перебування багаки виявляють активність при терапії раку, гальмутьох речовин у крові, оскільки карбокситермінал ючи, проміж іншим, перетворення арахідонової таких молекул діє через сульфатний залишок, або кислоти у епоксиейкосатріеноїдні кислоти, які розташовані поблизу карбокситерміналу 1 - 3 атосприяють діленню клітин і проліферації і затримуми Се (у α,β,γ-положеннях) аліфатичної основи ють апоптоз клітин пухлини. У тій же мірі застосучерез додання 2 метильних груп або заміщення вання такої сполуки гальмує гідроксилювання хіміаліфатичного або ароматичного кільця. Цим підотерапевтичних препаратів, яке зрештою вищується активність in-vivo, що відповідає активпризводить до їх екскреції інактивації. Така сполуності in-vitro. ка може бути застосована як в основній, так і у Отже, 2,2-диметил-11-додецинілова кислота і допоміжній пухлинотерапії. Отже, зазначене вище 10-ундецинілсульфат in vitro показують однакове втілення винаходу є багатообіцяючим засобом пригнічення активності цитохрому-Р450, але 10цілеспрямованого транспортування у патогенні ундецинілова кислота виявляє значно більшу актканини. тивність in vivo. Винахід також включає фармацевтичну компоБажано, щоб довжина аліфатичної основи зицію, яка містить сполуку згідно з винаходом у становила, 6 - 26, зокрема, 9 - 20, найкраще 19, фармацевтично прийнятному носії. атомів карбону, коли вона грає роль імідазольного Можливими показаннями для застосування залишку при R1. Замісником цієї бажаної групи сполуки винаходу, що входить у склад фармацевможе бути, наприклад, 12-імідазоліл-додеканол тичної композиції, є лікування наслідків зловжиабо 1-імідазоліл-додекан. Структурні формули цих вання алкоголем. Такими наслідками є, зокрема, і інших сполук наведено у супроводжуючих кресхвороби печінки або інший алкогольний запалюваленнях. льний процес. Окрім чисто алкогольних пошкоЗгідно з іншим втіленням винаходу, довжина джень печінки можуть виникати також хвороби, аліфатичної основи становить 6-26 атомів карбопов'язані з харчуванням і ендокринними факторану, коли вона грає роль етинільного залишку при ми, наприклад, ожиріння, а також цукровий діабет і R1. Замісником цієї групи є 17-октадециніл-1-ова гіперліпідемія, не пов'язані з вживанням алкоголю, кислота. які через жировий гепатит (неалкогольний стеатоЗгідно з ще одним втіленням винаходу, довгепатит - NASH), можуть перейти у цироз печінки. жина аліфатичної основи становить 9-13 атомів Такі алкогольні і неалкогольні хвороби печінки чакарбону, коли вона грає роль етинільного залишку сто супроводжуються вірусною інфекцією печінки. при R1. Замісником цієї групи може бути 2,2Це значно прискорює розвиток хвороби. Було видиметил-11-додецинільна кислота, 10-ундецинілявлено, що сполуки згідно з винаходом можуть сульфат, 10-ундецинільна кислота або 10бути використані у лікуванні зазначених захворюундецинол. вань і, відповідно, їх причин і наслідків. Ці сполуки мають ряд переваг. По-перше, вони Було також виявлено, що ці сполуки можуть не є безпосередньо доступними для ензиму βбути корисними у лікуванні запалень підшлункової оксидативного обміну речовин і тому не метаболізалози. Такі запалення, зокрема, панкреатиди мозуються негайно. жуть викликатись не лише зловживанням алкогоФосфогліцериди, а також тригліцериди, визналем, але й отруєннями, зокрема, зовнішніми, начені вище, заміщені у двох позиціях гліцеринового приклад, професійними або медикаментозними. залишку залишком формули -R-X, наприклад, етиВикликати запалення підшлункової залози можуть нілованим або імідазольованим аліфатичним затакож вірусні інфекції або метаболічно-ендокринні лишком, після ресорбції у кишечнику спочатку гідфактори, причому в усіх випадках у виникненні і ролізуються, і, таким чином, один з двох розвитку хвороби важливу роль грають реактивні аліфатичних залишків відщеплюється. Внаслідок оксигенні сполуки. цього утворюється етинілований або імідазольоБула також показана придатність фармацевваний моногліцерид, який завдяки цій втраті може тичних препаратів згідно з винаходом для лікуванрозглядатись як лізоліпоїд і за допомогою ліпопроня цукрового діабету, як типу 1, так і типу 2. теїнів, а також нековалентних агрегатів ліпідів і Лікувальні засоби згідно з винаходом можуть протеїнів утворюють міцелоподібні частки, які слубути використані також у лікуванні токсичних ниргують для транспортування водонерозчинних ліпікових захворювань, а також інших захворювань, дів у крові. викликаних побічною дією препаратів хіміотерапії, У решті етиніловані або імідазольовані моногзокрема, таких цитотоксинів, як металеві комплекліцериди відповідають визначеним вище. си, наприклад, цисплатин, карбоплатин, титаноцеОскільки патогенним тканинам, як, наприклад, ндихлорид або комплекси золота. При цьому було, пухлинам, властивий підвищений енергообмін, зокрема, виявлено, що може бути послаблена внаслідок вимкнення факторів росту (VEGF, органотоксичність металевих комплексів або інших PDGF) підсилюється власне судиноутворення, і у токсичних засобів, наприклад, галогенованих вугці тканини у потоці крові відбувається надходженлеводнів, зокрема, як моно-, так і полігалогенованя ліпопротеїнів, навантажених зазначеними етиних вуглеводнів, і м'яких наркотиків типу галотану, нілованими або імідазольованими моногліцеридаа також відповідних ароматичних вуглеводнів, ніт 9 93709 10 розаміну, акриламіду або таких лікувальних засо(Cytochrome P450 mediales tissue damaging бів, як парацетамол, метотрексат, ізоніацид або hydroxyl radical formation during reoxygenation of the аміноглюкоридні антибіотики, або рентгенівські kidney, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1994; 91:7002контрастні засоби. Отже, лікувальні засоби згідно з 7006) і Chapoutot et al., Liver iron excess in patients винаходом можуть бути застосовані у лікуванні with hepato-tocellular Carcinoma developed on viral органотоксичності зовнішніх отрут, зокрема, як С cirrhosis, Gut 2000; 46:711-714). антидот для таких органів, як печінка, нирки, Було доведено, що сполуки згідно з винахоцентральна нервова система, підшлункова залоза дом є інгібіторами людських ізоформ родини генів тощо. 2 цитохрому Р450, зокрема, ізоформ 2Е1 і 2J2, Вони уможливлюють підвищення доз цитоставикликаних ними захворювань. тичних засобів у протираковій терапії, і можуть В найбільш раціональному втіленні винаходу створювати фон як допоміжну терапію, покращуюпередбачено, що фармацевтична композиція зачи перспективи хіміотерапії. лишається у первісному місці у ліпосомах. ФактаБуло доведено, що вони можуть відвертати ми підтверджено, що сполуки, що лежать в основі враження органів, викликані реперфузією біологічкомпозиції мають довгі аліфатичні залишки, а їх них тканин, наприклад, після інфарктів органів, зв'язування у ліпосомах має придатну для цього зокрема, серця, а також після інсульту. Експериформу для застосування. Такі ліпосоми є придатментами на тваринах було показано, що можуть ними для внутрішньовенного, внутрішньом'язовобути зменшені реперфузійні враження, які призвого, абдомінального, черезшкірного або пероральдять до 60 - 80%-го руйнування тканини і є фактоного введення пацієнту, а також для застосування ром поширення відмирання тканини. Давно відоу формі аерозолю. мо, що головною причиною реперфузійних Сполуки згідно з винаходом придатні також пошкоджень є оксигенні радикали, які утворюютьдля безпосереднього введення, зазначеними вися при ішемії. ще способами. Лікувальні засоби згідно з винаходом є також Синтез придатними для профілактики реперфузійних поДалі розглядаються шляхи синтезу різних спошкоджень при трансплантації органів. Такі органи лук винаходу. перед трансплантацією у тіло реципієнта трима1. Синтез 12-імідазоліл-1-додеканової кислоти ють в охолодженому живильному розчині. Після a) 12-імідазоліл-1-додеканову кислоту можна трансплантації вони після приєднання до кровеносинтезувати способом, описаним у Alterman et al., сної системи реципієнта просочуються рідинами Fatty acid discrimination and omega-hydroxylation by тіла, що веде до реперфузійних пошкоджень. Заcytochrome P450 4A1 and a cytochrome стосування засобів згідно з винаходом перед і під P4504A1/NADPH-P450 reductase fusion protein, час укладання, а також короткочасно перед імArchives of Biochemistry and Biophysics, 1995, плантацією в організм реципієнта може вирішити 320:289-296). цю складну трансплантаційну проблему. Для цього 12-бром-1-додеканол реагентом Накопичення надлишку заліза (відповідно, міді Джонса окислюють до 12-бром-1-додеканової кисза М. Вільсоном) створює потенційну загрозу вилоти. Білу тверду кислоту після цього діазометакликаних цитохромом Р450 оксидативних пошконом перетворюють у відповідний метил-естер, джень. Відомо, що перевантаження залізом у при який безпосередньо заміщують імідазолом і при сидерозі і при ішемічних реперфузійних пошко80°С за 5 год. перетворюють у метил-естер 12дженнях веде до помітного підвищення внутрішімідазоліл-1-додекановою кислоти. Отриману густу ньоклітинної концентрації вільного заліза. Підвимасу розподіляють між водою і ДХМ, органічну щення внутрішньоклітинної концентрації вільного фазу сушать над Na2SO4 і випарюють. Маслянисзаліза може бути викликане також токсичними тий залишок очищають хроматографією на силікасполуками, наприклад, цисплатином або галогегелі і потім розчиняють у суміші метанолу і ТГФ нованим вуглеводнем, або вірусними гепатитида(3:4), додають LiOНН2О і суміш гріють під зворотми. Це стосується, у першу чергу, печінки, але ним холодильником 2 год. Після випарювання розтакож (у випадку нейтралізації цисплатину) і нирок. чинника білий залишок розчиняють у воді, екстраБіохімічна основа оксидативних пошкоджень, вигують у ДХМ, підкислюють до рН 5-6 і екстрагують кликаних надлишком заліза (міді, за М. Вільсоном) етилацетатом. Етилацетатний екстракт сушать визначається реакцією Фентона: над Na2SO4, фільтрують і випарюють. Білий тверН2О2 + Fe2+  Fe3+ + НО* + НОдий залишок кристалізують з метанол/етеру і Н2О2 (відновлювальний потенціал +0,32 Bt), отримують 12-імідазоліл-1-додеканову кислоту. яка утворюється у реакційному циклі цитохрому b) 12-імідазоліл-1-додеканол і 1Р450, переноситься при цьому у значно сильніший імідазолілдодекан синтезують згідно з Lu et al., окислювач, а саме, гідроксильний радикал НО* Heme-coordinating analogs of lauric acid as Inhibitors (відновлювальний потенціал +2,31 В). of fatty acid w-hydroxylation", Archives of Підвищення концентрації вільного заліза при Biochemistry and Biophysics 1997,337:1-7. застосуванні цисплатину у лікуванні нефропатій Для цього 12-бром-1-додеканол і імідазол у описано, наприклад, у роботі Baliga et al., Role of молярному співвідношенні 1:3 гріють 5 год. при cytochrome P450 as a source of catalytic iron in 80°С. Сирий продукт розділяють між водою і ДХМ. cisplatin-induced nephrotoxicity, Kidney Int., 1998; Органічну фазу сушать над Na2SO4 і випарюють 54:1562-1569). Підвищення вмісту заліза при іше12-імілазоліл-1-додеканол кристалізують з бенмічних реперфузійних пошкодженнях або при вірузол/n-гексану. сному гепатиті описано, наприклад, у Paller et al., 11 93709 12 с) 1-імідазолілдодекан отримують з 1Додають розчинений у ТГФ тріетиламін, крапбромдодекану і імідазолу у молярному відношенні лями додають розчинений у ТГФ брометанол і 1:3 з перемішуванням і нагріванням при 85°С. Сипідвищують температуру до 25°С. При цьому рий продукт розчиняють у ДХМ і тричі промивають утворюється, головним чином 1,2-дипальмітоїл-snводою. Органічну фазу сушать над Na2SO4, фільтгліцерид-3-фосфорил-брометилестер-монохлорид рують і випарюють. Маслянистий залишок кристаі невелика кількість побічного продукту - відповідлізують з n-гексан і отримують 1ного ди-брометилестеру. імідазолілдодекан. Суміш очищають, охолоджують, змішують з 2. Синтез 12-імідазоліл-1-фосфатидилхоліну карбонатом натрію і гексаном і струшують. При Фосфатидилхолін у кислотному середовищі у цьому гідролізується зв'язок між фосфатним заприсутності дициклогексилкарбодііміду перетволишком і хлоридом і утворюється натрієва сіль рюють у О-фосфорилізомочевину. До реакційної 1,2-дипальмітоїл-sn-гліцерид-3-фосфорилсуміші додають 12-імідазоліл-1-додеканол, робляброметил-естеру. чи нуклеофільною фосфорильну групу і створююУ подібний спосіб приготовляють натрієву сіль чи естерний зв'язок, і отримують 12-імідазоліл-11,2-дипальмітоїл-sn-гліцерид-3-фосфорил-(Nфосфатидилхолін. При цьому осаджується дицикбутоксикарбоніл)-етаноламін-естеру, а також 1,2логексилмочевина. Для цієї реакції потрібно задипальмітоїл-sn-гліцерид-3-фосфорил-(Nстосовувати 4-діетиламінопіридин як каталізатор. бутоксикарбоніл)-трет-бутилсерин-естеру. Механізм цієї реакції нагадує естеризацію 3d. Гідроліз 1,2-дипальмітоїл-sn-гліцерид-3Штегліха, у якій здійснюється перетворення дицифосфоалкіл-естеру клогексилкарбодііміду в органічну кислоту спир1,2-дипальмітоїл-sn-гліцерид-3-фосфорилтом. брометил-естер або зазначений фосфоалкіл3. Синтез 1 -пальмітоїл-2-імідазоліл-гліцеро-3естер розчиняють у суміші діетилетеру і дистильофосфатидилхоліну ваної води, що містить СаСІ22Н2О. Синтез фосфатидилхолін-дигліцеридів отриДоданням буферу Паліцша доводять рН до 7,5 мують з немодифікованої жирної кислоти, а також і додають ензим фосфоліпазу А2 і перемішують з етилінованої або імідазольованої жирної кислопротягом 60 хвил. при 35°С. Це викликає гідроліз ти, як це описано у Eibl et al., Synthesis of labeled естерного зв'язку у позиції 2 гліцеринового залишphospholipids in high yield, Methods Enzymol. 1983; ку і утворення відповідного 1-пальмітоїл-sn98:623-32). гліцерид-3-фосфоалкіл-естеру, який у позиції 2 3а. Синтез 1,2-дипальмітоїл-3-бензилмає групу ОН, а також вільної жирної кислоти. гліцериду Отримана молекула може бути у позиції 2 глі1,2-ізопропіліден-sn-гліцерин розчиняють у рцеринового залишку естеризована, наприклад, ксилені і з перемішуванням додають трет-бутилат імідазольованою або етинілованою жирною кислокалію і бензилхлорид. Після закінчення реакції тою. Фосфоалкіл-естер у позиції 3 може бути есдодають рівними порціями воду і діізопропілетер і теризований належним спиртом, наприклад, холіфази розділяють. 3-бензил-sn-гліцерин, що місном, серином, етаноламіном або інозитолом. титься у верхній фазі, отримують випарюванням і 3е. Естеризація імідазольованою або етинілопіддають подальшому очищенню. ваною жирною кислотою у позиції 2 Очищений 3-бензил-sn-гліцерин з жирною киОтриманий 1-пальмітоїл-sn-гліцерид-3слотою, наприклад, пальмітатом, розчиняють у фосфоалкіл-естер розчиняють у ТГФ і додають тетрахлоркарбоні. Додання 4-діетиламінопіридину імідазольовану або етиніловану жирну кислоту і і дициклогексилкарбо-дііміду викликає утворення суміш перемішують. естерних зв'язків між спиртовими групами 3Цією жирною кислотою може бути, наприклад, бензил-sn-гліцеринів і карбоксильними групами 17-октадецинова кислота від Sigma Aldrich або 12жирних кислот, з осадженням дициклогексилімідазоліл-1-додеканова кислота, синтез якої (п. 1) мочевини. Цей механізм реакції також називають описано вище. естеризацією Штегліха. Після цього проводять естеризацію Штегліха, Осаджену дициклогексилмочевину видаляють, додаючи для цього суміш 4-діетиламінопіридину і розчинник випарюють і після очищення отримують дициклогексилкарбодііміду. При цьому утворюєть1,2-дипальмітоїл-3-бензил-sn-гліцерид. ся естерний зв'язок між групою ОН на гліцерино3b. Синтез 1,2-дипальмітоїл-sn-гліцериду вому залишку і карбоксильною групою імідазольо1,2-дипальмітоїл-3-бензил-sn-гліцерид розчиваної або етинілованої жирної кислоти. няють у ТГФ і гідрогенують елементарним гідрогеОсаджену дициклогексилмочевину видаляють ном у присутності каталізатора (10% Pd/C). При і розчинник випарюють. Процедура очищення дає цьому бензильний залишок заміщується через 1 -пальмітоїл-2-ацил-sn-гліцерид-3атом гідрогену і утворюється 1,2-дипальмітоїл-snфосфоалкілестер. гліцерид. 3f. Естеризація фосфоалкілестеру у позиції 3 3с. Фосфорилізація 1,2-дипальмітоїлу-snгліцеринового залишку гліцериду 1-пальмітоїл-2-ацил-sn-гліцерид-3-фосфорилФосфорилтрихлорид змішують з розчиненим у брометилестер розчиняють у хлороформі і додаТГФ тріетиламіном і охолоджують на льоді і потім ють 2-пропанол-триметиламін. Реакційну посудину додають краплями розчинений у ТГФ 1,2інкубують при 50°С, після чого розчинник випарюдипальмітоїл-sn-гліцерид, отримуючи 1,2ють з нітрогеном. Продукт реакції очищають і дипальмітоїл -sn-гліцерид-3-фосфорилдихлорид. отримують імідазольований або етинілований 1 13 93709 14 пальмітоїл-2-ацил-sn-гліцерид-3Раnс-1 (клітини підшлункової залози) - 500 фосфатидилхолін. мкМ Для отримання 1-пальмітот-2-ацил-snПорівняння напівмаксимальної цитотоксичносгліцерид-3-фосфатидилсерину, описаний вище і ті (500 мкМ) з константою напівмаксимального приготовлений 1-пальмітоїл-2-ацил-sn-гліцерид-3пригнічення (ІК50=50 нМ для Раnс-1 дає коефіцієнт фосфорил-(N-бутоксикарбоніл)-етаноламін-естер диференціації 10000. Це показує, що 12розчиняють у СН2СІ2 і додають трифлуороцтову імідазоліл-1-додеканол є високоефективним інгібікислоту і перхлорну кислоту. Суміш перемішують у тором проліферації ракових клітин з низькою цитохолоді і промивають водою і метанолом. Після токсичністю. розділення фаз нижню фазу екстрагують Na2CO3 і Отже, сполуки згідно з винаходом мають шивипарюють. Після додання метанолу утворюються роке терапевтичне вікно. кристалічний 1-пальмітоїл-2-ацил-sn-гліцерид-3Зниження рухомості клітин HepG2 12фосфатидил-етаноламін. імідазоліл-1-додеканолом Подібним чином отримують 1-пальмітоїл-2Умови тесту на міграцію: Ракові клітини HepG2 ацил-sn-гліцерид-3-фосфатидил серин. Вихідним були розміщені у колагеновій матриці. 30 окремих матеріалом у цьому випадку є виготовлений раніклітин безперервно контролювали фотографуванше 1-пальмітоїл-2-ацил-sn-гліцерид-3-фосфорилням протягом 900 хвил. і визначали процентну (N-бутоксикарбоніл)-трет-бутилсерин-естер. кількість клітин, що мігрували. Токсичність Результат 1: Необроблені контрольні клітини Гостру токсичність 12-імідазоліл-1-додеканолу HepG2 виявили 15%-ну середню міграційну актив(Речовина 1) і 12-(1)-імідазоліл-додекану (Речовиність. Додання 1 мкМ і 10 мкМ 12-імідазоліл-1на 2) визначали на самцях щура CD, яким було додеканолу у середовище матриці знизило мігравведено 1000 мг/кг 12-імідазоліл-1-додеканолу ційну активність клітин на 50% і, відповідно, на 75 (LD50, 14-й день, b.w., p.o.) і 1000 мг/кг 12-(1)%. імідазоліл-додекану (LD50, 14-й день, b.w., p.o.) Результат 2: Оскільки клітини HepG2 виявляПерша реакція інтолерантності: речовина ють сильну експресію інсулінового рецептора, був 1:1000 мг/кг, b.w., p.o. визначений вплив інсуліну на міграційну активність речовина 2: 500 з доданням і без додання 12-імідазоліл-1 мг/кг, b.w., p.o. додеканолу. Відсутність дії при дозах: речовина 1: 500 мг/кг, b.w., p.o. Середня Клітини HepG2 речовина 2: 250 мг/кг, міграційна активність b.w., p.o. Контроль 15% Визначення антинеопластичної дії 12З інсуліном 38% імідазоліл-1-додеканолу З інсуліном і 12-імідазоліл15% Чотири лінії ракових клітин були засіяні у 241-додеканолом коміркових планшетах і витримані 24 год. для росту. Після цього до суспензії клітин були додані різІнсулін підвищує міграційну активність у 2,5 ні концентрації тест-сполуки - 12-імідазоліл-1рази. Робоча речовина повністю блокує це підвидодеканолу, розчиненого у ДМСО. Концентрація щення через 450 хвил. часу спостереження (перДМСО у клітинному середовищі становила 0,1%. У ша половина цього часу). Через 900 хвил. (друга контрольних експериментах була виявлена нетокполовина часу спостереження) зростання стає сичність такої концентрації ДМСО, як це показав негативним. Середня міграційна активність -13%, відлік клітин після чотириденної інкубації. В усіх тобто нижче контрольної. випадках було відзначене сильне пригнічення Таблиці проліферації ракових клітин. У супроводжуючих таблицях наведено окремі Були отримані такі значення максимальної приклади сполук згідно з винаходом. концентрації напівпригнічення (ІК50) для 12Таблиці 1 - 3 містять сполуки формули A-R-X імідазол іл-1 -додеканолу: за п. 1 Формули винаходу. HepG2 (клітини печінки) - 50 нМ Фахівцю зрозуміло, що зазначені п. п. ФормуРаnс-1 (клітини підшлункової залози) - 50 нМ ли визначають багато подальших сполук. Так, РС-3 (клітини простати) - 50 нМ аліфатичні залишки можуть бути лінійними або SW620 (клітини товстої кишки) -100 нМ розгалуженими, з простими, подвійними або потВ усіх лініях ракових клітин була виявлена сирійними зв'язками, бути заміщеними і мати аліфальна антинеопластична дія інгібітору. тичну основу з 9 -19 атомами карбону. ВуглеводОцінка цитотоксичності 12-імідазол іл-1 нева основа може бути утворена аліциклічними додеканолу і/або ароматичними вуглеводнями, і при цьому Напівмаксимальна цитотоксичність 12кільцева структура має містити 40 атомів карбону. імідазоліл-1-додеканолу була визначена у LDHЯк гідрофільні залишки можуть слугувати інші тесті на цитотоксичність. Були отримані такі знаспирти, наприклад, інозитол або етаноламін і, відчення: повідно, їх гліцериди. MRC-5 (легеневі клітини фібробласту) - 500 мкМ 15 93709 16 17 93709 18 19 Комп’ютерна верстка Л. Купенко 93709 Підписне 20 Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601