Спосіб лікування хвороби альцгеймера (варіанти), фармацевтична композиція фанхінону (варіанти) та набір

1 Спосіб лікування суб'єкта, включаючи людину, який має або підозрюється в тому, що він має хворобу Альцгеймера, при якому цьому суб'єкту вводять фанхінон у КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або запобігання хворобі Альцгеймера 2 Спосіб за п 1 , який відрізняється тим, що фанхінон вводять перорально, парентерально або штрадермально 3 Спосіб лікування суб'єкта, включаючи людину, який має або підозрюється в тому, що він має хворобу Альцгеймера, при якому цьому суб'єкту вводять фанхінон у КІЛЬКОСТІ, ефективній для збільшення розчинності амілоіду-бета (Ар) в цереброспінальній рідині цього суб'єкта 4 Спосіб лікування суб'єкта, включаючи людину, який має або підозрюється в тому, що він має хворобу Альцгеймера, при якому цьому суб'єкту вводять (a) фанхінон у КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або запобігання хворобі Альцгеймера, та (b) сполуку або суміш сполук, вибраних з групи, що містить антиоксиданти, підсилювачі ацетилхоліну, метали в слідових кількостях, простетичні групи та клюхінол 5 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що загальна КІЛЬКІСТЬ сполуки (сполук) в (Ь) є достатньою для збільшення ефекту запобігання або лікування хвороби Альцгеймера або для інгібування будь-якої шкідливої побічної дії введення клюхінолу 6 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ сполуки (сполук) в (Ь) дорівнює 5 мкг - 250 мг 7 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що антиоксидант є вибраним з групи, що складається з вітаміну С, вітаміну Е, Q-ю або їх комбінацій 8 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що підсилювач ацетилхоліну являє собою такрин або донезепіл 9 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що простетична група являє собою вітамін В-і2 10 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що (а) фанхінон і (Ь) сполука (сполуки) знаходяться в одній фармацевтичній композиції 11 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що (а) фанхінон і (Ь) сполуку (сполуки) вводять по суті водночас або послідовно 12 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що фанхінон вводять перорально, парентерально або штрадермально 13 Спосіб лікування суб'єкта, включаючи людину, який має або підозрюється в тому, що він має хворобу Альцгеймера, при якому цьому суб'єкту вводять (a) фанхінон у КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або запобігання хворобі Альцгеймера, та (b) суміші клюхінолута вітаміну Ві2, причому КІЛЬКІСТЬ клюхінолу є ефективною для лікування або запобігання хворобі Альцгеймера, а КІЛЬКІСТЬ вітаміну В-І2 є ефективною для інгібування шкідливої побічної дії введення клюхінолу 14 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ клюхінолу дорівнює 5 мг - 250 мг, переважно 10 мг - 50 мг 15 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ вітаміну В-і2 дорівнює 5 мкг - 2 мг, переважно 0,5 мг - 1 мг 16 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що (а) фанхінон і (Ь) сполука (сполуки) знаходяться в одній фармацевтичній композиції 17 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що клюхінол і вітамін В-і2 вводять послідовно, причому фанхінон вводять разом з клюхінолом, вітаміном В-І2 або окремо 18 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що на першому етапі вводять фанхінон та клюхінол, а на О 5 ю 59412 наступному, другому, етапі вводять фанхінон та вітамін В-І2 19 Спосіб за п 18, який відрізняється тим, що перший етап складає один-три тижні, а другий етап складає один-чотири тижні 20 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що фанхінон вводять перорально, парентерально або штрадермально 21 Фармацевтична композиція, яка містить (а) фанхінон у КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або запобігання хворобі Альцгеймера, і (Ь) сполуку або суміш сполук, вибраних з групи, що складається з антиоксидантів, підсилювачів ацетилхоліну, металів в слідових кількостях, простетичних груп і клюхінолу, та за умови, що, коли є вибраним клюхінол, фармацевтична композиція містить принаймні ще одну додаткову сполуку, вибрану з цієї групи 22 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що загальна КІЛЬКІСТЬ сполук (Ь) є достатньою для збільшення ефекту лікування хвороби Альцгеймера або для інгібування будь-якої шкідливої побічної дії 23 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ сполуки (сполук) (Ь) дорівнює 5 мкг - 250 мг 24 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що антиоксидант є вибраним з групи, що складається з вітаміну С, вітаміну Е, Q-ю або їх комбінацій 25 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що підсилювач ацетилхоліну являє собою такрин або донезепіл 26 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що простетична група являє собою вітамін В-І2 27 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ фанхінону дорівнює 5 мг 250 мг, переважно 10 мг - 50 мг 28 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що вона містить клюхінол у КІЛЬКОСТІ, ефективній для поліпшення лікування або запобігання хворобі Альцгеймера 29 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що вона містить вітамін В-і2 у КІЛЬКОСТІ, ефективній для інгібування шкідливої побічної дії введення клюхінолу 30 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ клюхінолу дорівнює 5 мг - 250 мг, переважно 10 мг - 50 мг 31 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що ця композиція приготована для парентерального введення, штрадермального введення або перорального введення 32 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що ця композиція приготована у вигляді таблетки 33 Фармацевтична композиція за п 21, яка відрізняється тим, що клюхінол і вітамін В-і2 приготовані в окремих фармацевтичних формах, причому фанхінон приготований разом з клюхінолом, вітаміном В-І2 або окремо 34 Фармацевтична композиція, що містить (а) фанхінон у КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або запобігання хворобі Альцгеймера, та (Ь) суміш клюхінолу та вітаміну В-і2 35 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ фанхінону дорівнює 5 мг - 250 мг, переважно 10 мг - 50 мг 36 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що вона містить клюхінол у КІЛЬКОСТІ, ефективній для поліпшення лікування або запобігання хворобі Альцгеймера 37 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що вона містить вітамін В-і2 у КІЛЬКОСТІ, ефективній для інгібування шкідливої побічної дії введення клюхінолу 38 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ клюхінолу дорівнює 5 мг - 250 мг, переважно 10 мг - 50 мг 39 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що КІЛЬКІСТЬ вітаміну В-і2 дорівнює 5 мкг - 2 мкг, переважно 0,5 мкг -1 мкг 40 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що ця композиція приготована для парентерального введення, штрадермального введення або перорального введення 41 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що ця композиція приготована у вигляді таблетки 42 Фармацевтична композиція за п 34, яка відрізняється тим, що клюхінол і вітамін В-і2 приготовані в окремих фармацевтичних формах, причому фанхінон приготований разом з клюхінолом, вітаміном В-І2 або окремо 43 Набір, який містить в одному або декількох контейнерах фанхінон та клюхінол у КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або запобігання хворобі Альцгеймера, та вітамін В-і2 у КІЛЬКОСТІ, ефективній для інгібування шкідливої побічної дії введення клюхінолу Даний винахід відноситься до застосування відомої сполуки для приготування фармацевтичної композиції для лікування або запобігання хвороби Альцгеймера Далі, цей винахід відноситься до фармацевтичної композиції для такого лікування або запобігання Даний винахід відноситься також до способів лікування або запобігання хвороби Альцгеймера Хвороба Альцгеймера (AD), яка є єдиною головною причиною деменції (недоумства) у дорос лих в індустріалізованих суспільствах, являє собою дегенеративний мозковий розлад, який характеризується КЛІНІЧНО прогресуючою втратою пам'яті, сплутаністю СВІДОМОСТІ, недоумством та наприкінці смертю Гістопатологічно хвороба Альцгеймера характеризується присутністю в неокортексі, зокрема, в ппокампі, двох мозкових пошкоджень нейрофібрилярних клубків (NFT) спарованих спіральних філаментів (PHF) у нейронах і невритичних (старечих) бляшок в позаклітин 59412 ному просторі Утворення старечих бляшок пов'язано з появою симптомів і ознак цього захворювання, в тому числі амнезії Після утворення старечої бляшки в тілах (перикарюнах) нейронів утворюються нейрофібрилярні клубки Утворення нейрофібрилярних клубків зв'язано з погіршенням амнезії та інших симптомів деменції Основним компонентом старечих бляшок є амілоідні відкладення Катаракта є захворюванням, яке часто зустрічається разом з хворобою Альцгеймера Вона локалізується в очах і також зумовлена відкладенням амілоїду Таким чином, лікування пацієнтів, що мають хворобу Альцгеймера, яке описано в даному описі винаходу і формулі винаходу, може бути рівним чином використано для лікування катаракти Отже, в застосуванні в даному описі та формулі винаходу, термін хвороба Альцгеймера включає в себе також катаракту Основним компонентом відкладень амілоїду є поліпептид, що називається тут Ар (амілоід-бета) Ар звичайно є розчинним компонентом цереброспінальної рідини, де він знаходиться в концентрації приблизно 3-5нМ Ар може мати 39-43 амінокислоти, звичайно 40 амінокислот, в стиглій формі і утворюється в якості продукту протеолітичного розщеплення з білка клітинної поверхні, що називається білком-попередником амілоїду (АРР) (Kangetal 1987, Nature 325 733-736) Багато досліджень показали, що Ар є токсичним in vitro при додаванні безпосередньо до культур нервових клітин (Yankner В А , Duffy L К , Kirschner D A , Science 1990, 250 (4978) 279-282, Koh J Y , Yang L L , Cotman C W , Brain Res 1990, 533 (2) 315-320, та Pike С J , Burdick D , Walencewicz A J , Glabe C G , Cotman C W , J Neurosci 1993, 13(4) 1676-1687) Було визначено, що нейротоксичність Ар локалізована в пептидній ПОСЛІДОВНОСТІ, між амінокислотними залишками 25 і 35 (Ар(25-35)) Ар(25-35) індукує смерть нервових клітин з такою ж силою, що і повно-розмірний Ap(l-40) (Yankner В А , Duffy L К , Kirschner D A , Science 1990, 250 (4978) 279282) Нормальна функція Ар В наш час невідома, але, може бути, вона полягає в утворенні катюнселективних каналів через КЛІТИННІ мембрани (Kawahara M et al , 1997, Biophysical Journal 73/1, 67-75) Було показано, що преципітація синтетичного Ар викликається декількома факторами зовнішнього середовища, в тому числі низьким рН, високою концентрацією солі та присутністю металів, наприклад, цинку, МІДІ І ртуті (Bush, A I et al , 1995, Science 268 1921-1923) Повідомлялося, що Ар сам специфічно і з насиченням зв'язує цинк з високою афінністю зв'язування (KD=107HM) при молярному співвідношенні 1 1 (цинк Ар) (Bush, A I et al , 1994, J Biol Chem 269 12152-12158) Це зв'язування має місце при фізіологічних концентраціях цинку (Bush, A I et al , 1994, Science 265 14641467) Існує сильне припущення, що вилучення амілоїдних відкладень у пацієнтів, що страждають на хворобу Альцгеймера, буде послаблювати симптоми хвороби Альцгеймера Таким чином, були вжиті декілька спроб приготування такого лікарсь кого засобу, бо ведуться наполегливі пошуки способів лікування хвороби Альцгеймера Міжнародна патентна заявка, публікація WO 93/10459, описує спосіб лікування хвороби Альцгеймера шляхом введення цинкзв'язувального агента В якості переважних сполук згадані фітинова кислота, дезферриоксимін, цитрат натрію, ЕДТА, 1,2-діетил-3-пдроксипіридин-4-он і 1пдроксиетил-3-пдрокси-2-метилпіридин-4-он Патентна заявка Германії DE 39 32 338 описує застосування агенту, який здатний хелатувати алюміній, такого як 8-пдроксихінолін, для лікування хвороби Альцгеймера Патент США № 5 373 021 описує застосування дисульфіраму та його солі та аналогів Згідно з цим патентом, описані сполуки можуть бути використані для зменшення неврологічного пошкодження, що викликається хворобою Альцгеймера Міжнародна патентна заявка, публікація WO 98/06403, описує застосування клюхінолу для приготування фармацевтичної композиції для лікування хвороби Альцгеймера ВІДОМІ ДОСІ сполуки, які пропонуються для лі кування хвороби Альцгеймера, мають декілька недоліків, які перешкоджають їх широкому застосуванню БІЛЬШІСТЬ ЦИХ сполук неспроможні проникати крізь гематоенцефалічний бар'єр і, отже, не можуть легко досягати зон, в яких відкладається амілоїд Дисульфірам, який може проникати крізь гематоенцефалічний бар'єр, має недолік, який полягає в тому, що при його комбінуванні пацієнтом з етиловим спиртом він викликає важкі побічні реакції, в тому числі головний біль, нудоту, блювоту, потовиділення, спрагу, слабість і низький кров'яний тиск КЛІХІНОЛ (5-хлор-7-йод-8пдроксихшолін), який також може проникати крізь гематоенцефалічний бар'єр, має викликаючу засудження історію, згідно з якою він викликає в якості побічного ефекту субгостру мієлооптиконевропатію (SMON) Фанхінон (4,7-фенантролш-5,6-дюн) використовували досі для лікування різноманітних розладів, таких як амебіаз Фанхінон продавався СІВАGEIGY під товарним знаком ENTOBEX В протилежність до клюхінолу, при -використанні фанхінону в нормальному діапазоні доз не були виявлені несприятливі побічні реакції В минулому антиамебний фармацевтичний препарат, що містить як клюхінол, так і фанхінон, продавався CIBA-GEIGY під товарним знаком Mexafor Однак, продаж цього препарату було зупинено, коли з'ясувалося, що клюхінол викликає SMON Задачею даного винаходу є забезпечення нового застосування відомої сполуки для лікування або запобігання хвороби Альцгеймера Іншою задачею даного винаходу є забезпечення збільшеного ефекту лікування хвороби Альцгеймера Наступною задачею даного винаходу є усунення будь-якого шкідливого побічного ефекту лікування або запобігання хвороби Альцгеймера Згідно З даним винаходом, забезпечено застосування фанхінону для приготування фармацевтичної композиції для лікування або запобігання хвороби Альцгеймера Фанхінон може вводитися в будь-якій КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або 59412 запобігання хвороби Альцгеймера Переважно, фанхінон може бути введений в КІЛЬКОСТІ 5МГ 250мг і більш переважно Юмг - 50мг, один-три рази на день Згідно З ОДНИМ варіантом винаходу сполука або суміш сполук, вибраних з групи, що складається з антиоксидантів, підсилювачів ацетилхоліну, слідових кількостей металів, простетичних груп і клюхінолу, вводять перед введенням, разом з введенням або після введення фанхінону Даний винахід відноситься також до фармацевтичної композиції, яка містить фанхінон та сполуку або суміш сполук, вибраних з групи, що складається з антиоксидантів, підсилювачів ацетилхоліну, металів в слідових кількостях, простетичених груп і клюхінолу, за умови, що, коли є вибраним клюхінол, принаймні ще одну додаткову сполуку вибирають з цієї-групи Антиоксидант являє собою переважно вітамін С, вітамін Е, Q10 або їх комбінацію Підсилювачі ацетилхоліну є переважно агоністами ці або антихолінестеразними інгібіторами (тобто речовинамишпбіторами ацетилхолінестерази) Переважними антихолінестеразними інгібіторами є такрин (товарний знак Cognex) і донепезил (товарний знак Апcept) Простетичною групою є переважно вітамін В-І2 В переважному варіанті даного винаходу фанхінон і клюхінол використовують для приготування фармацевтичної композиції для лікування або запобігання хвороби Альцгеймера Переважно, комбінацію фанхінону, клюхінолу та вітаміну В-і2 використовують для приготування цієї фармацевтичної композиції Фармацевтична композиція може бути приготована для перорального, парентерального або внутрішньошкірного (штрадермального) введення Далі, фармацевтична композиція може бути приготована у вигляді єдиної фармацевтичної композиції або у вигляді двох або більш окремих фармацевтичних форм для послідовного або по суті одночасного введення Даний винахід відноситься також до способу лікування суб'єкта, який має або підозрюється в тому, що він має хворобу Альцгеймера, яким передбачається введення цьому суб'єкту КІЛЬКОСТІ фанхінону, ефективної для лікування або запобігання хвороби Альцгеймера Фігура 1 показує дію фанхінону на ВІДПОВІДЬ В залежності від дози Ар(25-35) в клітинах РС12 Фігура 2 показує дію фанхінону на індуковану Ар(25-35) токсичність в клітинах РС12 Фігура 3 показує дію фанхінону та клюхінолу на індуковану Zn2+ агрегацію Ар Фігура 4 показує дію клюхінолу та фанхінону на індуковану Си 2+ агрегацію Ар Фігура 5 показує ЯМР-спектри трьох розчинів Розчин а містив вітамін В-і2 (пдроксикобаламш) в концентрації 2,6мМ Розчин b містив суміш 2,6мМ вітаміну В-І2 та ЮмМ глюкуроніду клюхінолу (молярне співвідношення приблизно 1 4) Розчин с містив ЮмМ глюкуронід клюхінолу Фігура 6 показує праву половину фігури 5, збільшену для полегшення порівняння позицій резонансів Фігура 7 показує ліву половину фігури 5, збі 8 льшену для полегшення порівняння позицій резонансів Існує потреба для введення на ринок лікарського засобу, який є ефективним в лікуванні або профілактиці хвороби Альцгеймера Згідно з цим винаходом, пропонується відомий лікарський засіб фанхінон В прикладах показано, що в клітинах РС12 Ар(25-35) оказує різко виражену дію на окисновідновну активність клітин В способі, що використовується в прикладі 2, окисно-відновна активність клітин, які зазнали дії 1мкМ Ар(25-35), зменшується до 60% від нормального рівня (дивіться фіг 2, СВІТЛІ кружки) Однак, при обробці оброблених Ар(25-35) клітин 1мкг/мл фанхінону або більшою концентрацією нормальна окисно-відновна активність відновлюється Це вказує на те, що фанхінон при введенні ссавцю, такому як людина, буде полегшувати ШКІДЛИВІ ефекти Ар Не претендуючи на обмеження винаходу будьяким специфічним механізмом дії, автори зараз вважають, що дія Ар на окисно-відновну активність клітин запобігається антиоксидантною дією фанхінону Антиоксидантна дія фанхінону може бути посилена спільним введенням додаткового антиоксиданту (антиоксидантів), таких як вітамін С, вітамін Е, вітамін Q10 або їх комбінацій Присутність старечих бляшок в позаклітинному просторі може запобігати або інгібувати трансмісію імпульсів в холшерпчній нервовій системі Функціонування цієї нервової системи залежить від медіатора ацетилхоліну Таким чином, сполуки, що підвищують рівень ацетилхоліну, такі як сполуки, що запобігають або інгібують нормальний гідроліз ацетилхоліну ацетилхолінестеразою, так звані антихолінестеразні інгібітори, можуть вводитися разом з фанхіноном для поліпшення дії Переважними антихолінестеразними інгібіторами є такрин і донепезил В дослідженні, повідомленому в прикладах, показано, що фанхінон може зменшувати агрегацію Ар(1 -40), індуковану Си 2+ і Zn 2 + Наступний запропонований механізм дії цього винаходу не призначений для обмежування винаходу цим механізмом Зараз заявник вважає, що фанхінон і Ар конкурентно хелатують цинк, мідь та ІНШІ важкі метали Фанхінон здатний проникати через гематоенцефалічний бар'єр При захопленні фанхіноном юну важкого металу в позаклітинному просторі він переміщується в кров і виводиться з тіла Коли агрегат або сіль Ар та юну важкого металу знаходиться в рівновазі з вільним Ар і вільним іоном важкого металу, фанхінон може продовжувати захоплювати іони вільного металу і переміщати іон важкого металу в кров доти, доки є присутнім агрегований Ар, тобто амілоїд Вільний Ар не може проникати крізь гематоенцефалічний бар'єр пасивною дифузією, скоріше він буде руйнуватися протеолітичними ферментами, нормально присутніми в позаклітинному просторі Таким чином, вільний Ар або його дегенеративна частина можуть потенційно пошкоджувати нервові клітини, перш ніж він розщепиться до нетоксичного стану Між тим, фанхінон буде відвертати або інгібувати потенційний цитотоксичний ефект Ар вна 59412 слідок його здібності протидіяти звичайно спричинюваному Ар зменшенню окисно-відновної активності Зменшення агрегації, яке викликається фанхі2+ 2+ ноном, складає 50-60% для Си і 10% для Zn Далі, показано, що клюхінол має протилежну тен2+ денцію Кпюхінол зменшує Zn індуковану агрега2+ цію Ар(1-40) більш ніж на 60%, тоді як Си - індукована агрегація була зменшена приблизно на 30% Іншими словами, фанхінон є кращим в зме2+ ншенні Си - індукованої агрегації Ар(1-40), а клю+ хінол є кращим в зменшенні Zn - індукованої агрегації 2+ 2+ Так як Си і Zn природно присутні в ТІЛІ пацієнта, який має хворобу Альцгеймера, або пацієнта, у відношенні якого є припущення, що він має хворобу Альцгеймера, то може бути бажаним зменшення або повторне розчинення агрегатів, індукованих обома іонами Таким чином, може бути бажаним введення кліохінолу до введення, разом з введенням або після введення фанхінону Однак, введення кліохінолу є проблематичним, бо клюхінол викликає в якості побічної дії SMON Колишні дослідження (дивіться WO 98/06403) показують можливий вплив кліохінолу на вітамін В-і2 Відомо, ЩО КЛЮХІНОЛ екскретується через нирки у вигляді глюкуронідних або сульфатних похідних (Kotaki H , et al Enterohepatic circulation of choqumol in the rat, J Pharmacolobiodyn 1984 June, 1(6) 420-5 та Junma M et al Metabolism of 14Clodochlorhydroxyqumolme in the dog and the rat, J Pharmacobiodyn 1984 March, 7(3) 164-70), наприклад, у вигляді сполуки метил(5-хлор-7-йодхшоліл2',3',4'-три-О-ацетилглюкопіранозид)уронату Для стислості ця сполука називається в подальшому глюкуронідом Детоксикація гідрофобних речовин, таких як клюхінол, в ТІЛІ здебільшого відбувається в печінці Таким чином, вважається, що кліренс кліохінолу відбувається наступним чином клюхінол перетворюється в глюкуронід кліохінолу в печінці Після його утворення водорозчинний глюкуронід кліохінолу секретується в жовч Жовч входить в кишечник, де основна КІЛЬКІСТЬ глюкуроніду кліохінолу видаляється випорожненням Деяка КІЛЬКІСТЬ глюкуроніду кліохінолу резорбується (всисається) з кишечнику в кров Глюкуронід кліохінолу фільтрується з крові в нирки та з'являється в сечі, що утворюється кінець кінцем Шляхом обробки мишей клюхінолом, а потім введення вітаміну Ві2, що містить радіоізотоп ([57Со]-ціанокобаламшу), в міжнародній патентній заявці, публікація WO 98/06403, показано, що концентрація вітаміну В-І2 в мозку і печінці оброблених клюхінолом мишей залишається на нормальному рівні, тоді як концентрація радіоізотопного вітаміну В-І2 зменшується в нирках таких мишей в порівнянні з нормальним рівнем Це відкриття припускає, що метаболізм вітаміну ВЬ залежить від кліохінолу Далі, це відкриття припускає, що нирки є органами-мішенями, в яких має місце кпюхінолзалежний метаболізм Для дослідження можливої взаємодії між глюкуронідом кліохінолу і вітаміном В-і2 був спланований експеримент, в якому глюкуронід кліохінолу і 10 вітамін В-І2 змішували у воді Цю суміш аналізува1 ли за допомогою Н-ЯМР Н-ЯМР-спектри, дивіться Фігури 5-7, показують, що деякі резонанси вітаміну В-І2 (ВІДПОВІДНІ бензимідазольній частині молекули) були зміщені, і те ж саме спостерігається для двох резонансів глюкуроніду кліохінолу (ВІДПОВІДНИХ ХІНОЛІНОВІЙ частині молекули) Заявник вважає, що подібні результати можна було б очікувати з використанням вільного кліохінолу, однак, клюхінол не може бути розчинений у водних розчинах для ЯМР-випробування Ці результати вказують на гідрофобну взаємодію між глюкуронідом кліохінолу та вітаміном В-І2, можливо, між бензимідазольною частиною вітаміну В-І2 і ХІНОЛІНОВОЮ частиною глюкуроніду кліохінолу Вітамін В-І2 в нормі активно резорбується з плазми нирок після його фільтрації Таким шляхом організм витягає більшу частину вітаміну В-і2, який в іншому випадку був би втрачений в сечі Нещодавно було продемонстровано, що резорбція вітаміну Ви опосередкована дією мембранного білка мегаліну (Moestrup S К et al Proc Natl Acad Sci 1996, 93(16) 8612-7) Показано, що мегалін має сильну афінність у відношенні зв'язування комплексу, утвореного вітаміном В-і2 і транспортним білком транскобаламіном На основі нового відкриття, повідомленого тут, що вітамін В-І2 зв'язується з глюкуронідом кліохінолу, заявник вважає, що вітамін В-і2 не зв'язується з білком мегаліном та/або транскобаламіном, коли він вже зв'язаний з глюкуронідом кліохінолу Таким чином, резорбція вітаміну В-і2 буде відсутня і організм буде страждати від недоліку вітаміну В-і2 після певного періоду введення кліохінолу, якщо він не постачається у вигляді достатньої КІЛЬКОСТІ НОВОГО вітаміну В-І2 при нормальному харчовому раціоні Єдиним джерелом надходження вітаміну ВІ2 в організм людини є їжа, бо людина не може його синтезувати Таким чином, дієти з низьким вмістом м'яса та/або мікроорганізмів будуть, очевидно, викликати недостатність вітаміну В-і2 Якщо особи забезпечуються дієтами з занадто низьким вмістом вітаміну В-І2, то введення кліохінолу буде погіршувати стан, бо резорбція вітаміну В,2 запобігається конкурентним зв'язуванням кліохінолу з мегаліном Той факт, що SMON спостерігали тільки в Японії та що харчовий раціон японців здебільшого складається з овочів і зернових, зокрема, рису, (Kromhout D, et al "Food consumption pattern in the 1960s in seven countries", Am J Chn Nutr 49 889-894, 1989) може пояснити, чому захворювання SMON обмежувалося Японією Для протидії побічним ефектам введення фанхінону та/або кліохінолу може бути бажаним спільне введення слідових кількостей металів, та/або простетичних груп Переважною простетичною групою є вітамін В-і2 (ціанокобаламш) В якості прикладу, але не обмеження, композиції, їх застосування і способи згідно з винаходом можуть бути показані для 1) пацієнтів з діагнозом хвороби Альцгеймера в будь-якій КЛІНІЧНІЙ стадії хвороби, 2) запобігання хвороби Альцгеймера у пацієнтів з ранніми або продромальними симптомами або ознаками та 3) затримки появи або розвитку або загострення симптомів і ознак хвороби 12 11 59412 Альцгеймера Способи та композиції цього винапередженні хвороби Альцгеймера, а КІЛЬКІСТЬ віходу будуть, наприклад, корисні для лікування таміну В-І2 переважно є ефективною для хвороби Альцгеймера, поліпшення або ослабленінгібування будь-якої шкідливої побічної дії ввеня будь-якого з симптомів і ознак хвороби Альцдення клюхінолу КІЛЬКІСТЬ клюхінолу та вітаміну геймера, поліпшення будь-яких патологічних або В-І2 дорівнює переважно 5мг - 250мг, більш перелабораторних відкриттів щодо хвороби Альцгейважно Юмг - 50мгта 5мкг - 2мг, найбільш перевамера, затримки появи будь-яких симптомів і ознак жно 0,5мг -1 мг, ВІДПОВІДНО хвороби Альцгеймера, запобігання появи хвороби КІЛЬКОСТІ фанхінону і необов'язкових додаткоАльцгеймера і відвернення появи будь-яких симпвих активних компонентів, таких як клюхінол і вітомів і ознак хвороби Альцгеймера або хвороби тамін В-І2, що фактично вводяться, можуть бути Паркінсона визначені лікарем, що лікує Якщо ця фармацевтична композиція, окрім фанхінону, містить додатСуб'єктом або пацієнтом є тварина, наприкові активні компоненти, вони можуть знаходитися клад, ссавець і, зокрема, людина, і їм може бути в тій же самій композиції для спільного введення в плід, дитина або доросла людина комбінації або в різноманітних композиціях для Доза фанхінону, оптимальна in vivo для повтовведення по суті водночас, але роздільно, або рної солюбілізацм АВ, може бути визначена лікапослідовно рем шляхом проведення рутинних експериментів Прикладом такого експерименту є моніторинг розТерапевтичні композиції включають в себе чинного АВ в цереброспінальніи (спинномозковій) композиції, придатні для парентерального (в тому рідині (CSF) (WO 93/10459, 26 травня 1993 року/ числі внутрішньом'язового і внутрішньовенного), Університет Мельбурна) Починаючи з відносно перорального, ректального або штрадермального низьких доз (10 - 25мг/день), лікар може спостері(внутрішньошкірного) введення, хоча переважним гати КІЛЬКІСТЬ солюбілізованого АВ у CSF пацієнта способом є пероральне введення Таким чином, Якщов ній немає збільшення солюбілізованого АВ фармацевтичні композиції можуть бути приготовау ВІДПОВІДЬ на введення фанхінону, що свідчить ні у вигляді таблеток, пілюль, сиропів, капсул, супро повторну солюбілізацію агрегатів Zn-AB, то позиторіїв, композицій для трансдермального введоза може бути підвищена доти, поки таке збільдення, порошків, зокрема, люфілізованих порошків шення не спостерігається Іншим прикладом є модля відновлення розчинів з носієм для внутрівенніторинг КЛІНІЧНИХ ознак і симптомів цієї хвороби з ного введення тощо використанням КЛІНІЧНИХ, поведшкових і психометТермін "носій" ВІДНОСИТЬСЯ ДО розріджувача, ричних спостережень і вимірювань ад'юванта, наповнювача або носія, з яким вводять терапевтичний засіб Носи в цій фармацевтичній Перед введенням людям ефективність перекомпозиції можуть містити в собі в'яжучу речовину, важно показують на тваринних моделях Може таку як мікрокристалічна целюлоза, полівшілпіробути використана будь-яка тваринна модель для лідон (ПОЛІВІДОН або повідон), трагакантову кахвороби Альцгеймера, що відома в даній галузі медь, желатин, крохмаль, лактозу або моногідрат Фармацевтичні композиції згідно з цим виналактози, дезштегруючий агент, такий як альпнова ходом переважно містять один або декілька фаркислота, кукурудзяний крохмаль тощо, змащувамацевтичне прийнятих носив і активний компонент льна речовина або поверхнево-активна речовина, (компоненти) Носій (НОСІЇ) ПОВИННІ бути "прийнятака як стеарат магнію або лаурилсульфат натрію, тими" в смислі їхньої сумісності з іншими інгредієковзна речовина, така як колоїдний дюксид кремнтами композиції і не шкідливими для їх реципієннію, підсолоджувач, такий як сахароза або сахатів В більш переважному варіанті фанхінон і рин, та/або агент, який покращує смак і запах, танеобов'язкові додаткові активні компоненти в цієї кий як перечна м'ята, метилсаліцилат або фармацевтичній композиції є очищеними апельсиновий ароматизатор Повинно бути зрозумілим, що КІЛЬКІСТЬ фанхі нону і необов'язкових додаткових активних компонентів, що вимагається для згаданого вище лікування або запобігання, будуть мінятися у ВІДПОВІДНОСТІ з шляхом введення, розладом, який підлягає лікуванню, станом, віком, анамнезом суб'єкта і прописаним складом фармацевтичної композиції, тощо При лікуванні пацієнта з діагнозом хвороби Альцгеймера КІЛЬКІСТЬ фанхінону є переважно ефективним для збільшення розчинності агрегатів АВ в цереброспінальніи рідині пацієнта Взагалі, підхожа терапевтичне ефективна КІЛЬКІСТЬ фанхінону в фармацевтичній композиції складає, наприклад, 5-250мг, переважно 10-50мг Підхожа КІЛЬКІСТЬ сполуки або суміші сполук, вибраних з групи, що складається з антиоксидантів, агоністів р і , антихолінестеразних інгібіторів, металів в слідових кількостях, простетичних груп і клюхінолу, в фармацевтичній композиції складає, наприклад, 5мкг 250мг, переважно 0,5 1мг Якщо вибрано клюхінол і вітамін Ві2, то КІЛЬКІСТЬ КЛІОХІнолу переважно є ефективною в лікуванні або по Терапевтичні композиції, придатні для перорального введення, наприклад, таблетки та ПІЛЮЛІ, можуть бути отримані пресуванням або формуванням необов'язково з одним або декількома допоміжними інгредієнтами Пресовані таблетки можуть бути приготовані змішуванням компоненту (компонентів) і пресуванням цієї суміші в підхожому пристрої в таблетки, що мають підхожий розмір Перед змішуванням фанхінон може бути змішаний зі в'яжучою речовиною, зволожувальним агентом, інертним розріджувачем та/або дезштегруючим агентом, а додаткові необов'язково присутні компоненти можуть бути змішані з розріджувачем, зволожувальним агентом та/або поверхневоактивною речовиною В переважному варіанті легко-сипкий порошок фанхінону змішують зі в'яжучою речовиною, такою як мікрокристалічна целюлоза, і поверхневоактивною речовиною, такою як лаурилсульфат натрію, до отримання гомогенної суміші Потім, іншу в'яжучу речовину, таку як ПОЛІВІДОН, перено 14 13 59412 сять в цю суміш при перемішуванні Після отриMed 321 574 (1984)) В іншому варіанті можуть мання однорідного розподілу додають водний розбути використані полімерні матеріали (дивіться чин вітаміну ВІ2 при постійному перемішуванні Цю Medical Applications of Controlled Release, Langer суміш пропускають через гранулювальні сита і and Wise (eds), CRC Pres , Boca Raton, Florida сушать зневодненням перед пресуванням в таб(1974), Controlled Drug Bioavailabihty, Drug Product летки в стандартному пресувальному пристрої Design and Performance, Smolen and Ball (eds), Wiley, New York (1984), Ranger and Peppas, J MacВ другому переважному варіанті легко-сипкий romol Sci Rev Macromol Chem 23 61 (1983), порошок фанхінону змішують з поверхневодивіться також Levy et al , Science 228 190(1985), активними речовинами та/або емульгуючими агенDuring etal , Ann Neurol 25 351 (1989), Howard et тами, такими як Sapamm® (N-(4'al , J Neurosurg 71 105(1989)) Ще в одному вастеароіламшофеніл)-триметиламонійметилсірчана ріанті система регульованого вивільнення може кислота) і моногідрат лактози, до отримання однобути поміщена поблизу від терапевтичної мішені, рідного розподілу компонентів Другий препарат, тобто центральної нервової системи, що вимагає в що містить дезштегруючий агент, такий як кукурурезультаті тільки частини системної дози (дивітьдзяний крохмаль, додають до суміші фанхінону ся, наприклад, Goodson, in Medical Applications of при безперервному перемішуванні Такий другий Controlled Release, вище, vol 2, pp 115-138 препарат може бути приготовано додаванням (1984)) надлишку киплячої води до кукурудзяного крохмалю, суспендованому в холодній воді Кінцеву суІнші системи регульованого вивільнення обгоміш гранулюють і сушать, як описано вище, і зміворюються в огляді Langer (Science 249 1527шують з кукурудзяним крохмалем і стеаратом 1533(1984)) магнію, і, нарешті, пресують в таблетки в стандарВ одному варіанті фармацевтичної композиції тному пристрої у ВІДПОВІДНОСТІ з цим винаходом, фанхінон і додаткові активні компоненти містяться у вигляді окреТаблетка може мати або може не мати помих фармацевтичних форм В якості прикладу, криття Непокрита таблетка може бути шорсткою одна форма може містити фанхінон і клюхінол, а Покрита таблетка може бути покрита цукром, шеінша форма може містити вітамін В-і2 Ці дві форми лаком, плівкою або іншими ентеросолюбільними можуть вводитися водночас або послідовно Наагентами приклад, форма, що містить фанхінон і клюхінол, Терапевтичні композиції, придатні для паренможе бути введена, з наступним введенням вітатерального введення, включають стерильні розчиміну В-І2 в межах дня, тижня або місяця після ввени або суспензії активних компонентів Може бути дення клюхінолу і фанхінону Якщо ці дві форми використаний водний або маслянистий носій Такі вводять послідовно, форму, що містить фанхінон і фармацевтичні носи можуть бути стерильними клюхінол, переважно вводять протягом одногорідинами, такими як вода або масла, в тому числі трьох тижнів з наступним періодом вимивання масла з нафти, масла тваринного, рослинного або тривалістю від одного до чотирьох тижнів, під час синтетичного походження, такі як арахісове масло, якого вводять форму, що містить вітамін В-І2, але соєве масло, мінеральне масло, кунжутне масло не форму, що містить клюхінол Після періоду витощо Композиції для парентерального введення мивання це лікування може бути повторено включають також люфілізований порошок, який містить фанхінон і необов'язково додаткові активні Даний винахід забезпечує також фармацевтикомпоненти, що повинен відновлюватися розчичну упаковку, або набір, що містить один або декіненням в фармацевтичне прийнятному носи, що лька контейнерів, наповнених одним або декільрозчиняє ці активні компоненти, наприклад, у водкома інгредієнтами фармацевтичної композиції ному розчині карбоксиметилцелюлози та лаурилцього винаходу Необов'язково зв'язане з такими сульфату натрію контейнерами, може бути присутнім повідомлення в формі, написаній державною установою, що реКоли фармацевтична композиція є капсулою, гулюює виготовлення, застосування або продаж вона може містити рідкий носій, такий як жирне фармацевтичних або біологічних продуктів, примасло, наприклад, масло какао чому це повідомлення повідомляє про схвалення ПІДХОЖІ фармацевтичні наповнювачі включацією установою приготування, застосування або ють крохмаль, глюкозу, лактозу, сахарозу, желапродажу для введення людині тин, солод, рис, борошно, крейду, силікагель, стеарат натрію, моностеарат гліцерину, тальк, хлорид Інші признаки і переваги цього винаходу бунатрію, сухе сепарироване молоко, гліцерин, продуть очевидними з нижче наведених прикладів, які пілен, гліколь, воду, етанол тощо в поєднанні з супровідними ілюстративними матеріалами пояснюють, в якості прикладу, принципи Ці КОМПОЗИЦІЇ можуть мати форму розчинів, суцього винаходу спензій, емульсій, таблеток, пілюль, капсул, порошків, препаратів для затриманого вивільнення ПРИКЛАДИ тощо Композиція може бути приготована у вигляді Приклад 1 супозиторія зі звичайними зв'язувальними речовиДія фанхінону на ВІДПОВІДЬ В залежності від нами і носіями, такими яктригліцериди дози Ар(25-35) в клітинах РС12 Ще в одному варіанті терапевтична сполука Ар(25-35) одержували з Bachem (Швейцарія) може доставлятися в системі регульованого вивіабо Sigma (США) і розчиняли в забуференому льнення В одному варіанті може бути використафосфатом сольовому розчині (ЗФР) при рН 7,4, за ний насос (дивіться Langer, вище, Sefton, CRC Grit 2 години перед застосуванням Нейротоксичність Ref Biomed Eng 14 201 (1987), Buchwald et al , Ар локалізована в ПОСЛІДОВНОСТІ МІЖ амінокислотSurgery 88 507 (1980), Saudek et al , N Engl J ними залишками 25 і 35 (Ар(25-35)), і декапептид, 16 15 59412 який містить в собі цю ділянку, індукує загибель концентрації фанхшону вище 0,1 мкг/мл призводинервових клітин так же сильно, як повно-розмірний ло до-різко зменшеного токсичного ефекту Ар(25Ар(1-40) (Yankner, Duffy L К , Kirschner D A Neuro35) При концентраціях фанхшону 1 мкг/мл і вище trophic and neurotoxic effects of amyloid p protein токсичний ефект Ар(25-35) повністю усувався reversal by tachykimn neuropeptides Science 1990, Приклад З 2+ 2+ 250(4978) 279-282) Дія фанхшону і кліохшолу на Zn - і Си шдуковану агрегацію Ар Клітини феохромоцитоми РС12 щурів вирощували в модифікованому по способу Дульбекко сеПочатковий розчин 5мг/мл Ар(1-40) (що постаредовищі Ігла (DMEM), що містить 1% пеніцилшвляється з Bachem (Швейцарія)) готували ще раз стрептоміцин, 5% фетальну телячу сироватку і перед кожним експериментом розчиненням люфі10% конячу сироватку, в зволоженому термостаті з лізованого пептиду в 0,01 М НСІ, з наступним по5% СО2 слідовним розведенням 1 1 0,01 М NaOH з отриманням нейтрального рН Аліквоти Ар(1-40) Клітини РС12 висівали на 9б-ямочкові мікротирозбавляли в ЗФР (рН 7,4) до ЮОмкМ і шкубували траційні планшети в ЮОмкл підхожого середовипри загальному об'ємі ЗОмкл протягом 24 годин ща Після 24 годин зазначені концентрації пептиду при кімнатній температурі Для експериментів з Ар(25-35) додавали окремо або разом з фанхінокошкубуванням додавали зазначені концентрації ном в зазначених концентраціях Інкубування проІОНІВ металів і/або аліквоту тест-сполук Тестдовжували протягом 24 годин Після інкубування сполуки додавали до кінцевої молярної концентвимірювали зменшення МТТ за допомогою комеррації 10 мкг/мл ційне доступного тест-набору у ВІДПОВІДНОСТІ З інструкціями виробника (Boehnnger Mannheim) Утворення амілоїду визначали КІЛЬКІСНО за доТест-величини, отримані тільки з носієм, приймали помогою флуорометричного аналізу з тіофлавіном за 100% Т Тюфлавш зв'язується специфічно з амілоїдом і це вносить зміщення в його спектр випромінюванМТТ є субстратом для внутрішньоклітинних ня, і утворюється флуоресцентний сигнал, пропооксидоредуктаз і оксидоредуктаз цитоплазматичрційний КІЛЬКОСТІ амілоїду Після інкубування Ар(1них мембран і він широко використовувався для 40) - пептиди додавали до ЗФР (рН 6,0) 13мкМ виміру зменшень окисно-відновної активності Бутюфлавшу Т в кінцевому об'ємі 1мл Флуоресценло виявлено, що зменшення окисно-відновної акцію постійно вимірювали при довжині хвилі збутивності є раннім індикатором опосередкованої Ар дження 454нм і довжині хвилі випромінювання смерті клітин (Shearman М S , Ragan С І , Iverson 482нм за допомогою флуорометра Флуороскан II L L Inhibition of PC12 cell redox activity is a specific, (Molecular devices, Великобританія) Проводили early indicator of the mechanism of p-amyloidтимчасове сканування флуоресценції і три велиmediated cell death, Proc Natl Acad Sci USA 1994, чини після затухання, що досягає плато (біля 5 91(4) 1470-1474) хвилин) , брали для розрахунку середньої величиДля аналізу дм фанхшону на індуковану Ар(25ни після віднімання флуоресценції фона ЗмкМ 35) токсичність в клітинах РС12, клітини РС12 витюфлавшу Т Для експериментів з кошкубуванням тримували з концентраціями пептиду Ар(25-35) в визначали флуоресценцію однієї тест-сполуки діапазоні від 0 до ЮмкМ У відсутність фанхшону Проби аналізували втрьох повторностях Середнє (тобто з додаванням тільки носія) Ар(25-35) викли±SD (стандартне відхилення) для типового експекав залежне від дози інгібування зменшення МТТ рименту показано на фігурах (фіг 3 і 4) (фіг 1, жирні кружки) Концентрації Ар(25-35), такі низькі як 0,01 мкМ, викликали значне зменшення, і при концентрації Ар(25-35) 0,1 мМ або вище зменшення МТТ знижувалося до максимального рівня приблизно 50% В присутності Юмкг фанхшону на мл токсична дія Ар(25-35) практично усувалася (фіг 1, СВІТЛІ кружки) Навіть при концентрації Ар, такої високої як 1мкМ, присутність фанхшону повністю нейтралізувала токсичну дію Ар Тільки при найвищій концентрації Ар (ЮмкМ) було невелике інгібування зменшення МТТ Ар Однак, це інгібування було помірним, тільки біля 10%, в порівнянні з приблизно 50% у відсутність фанхшону Приклад 2 Дія фанхшону на Ар(25-35) - індуковану токсичність в клітинах РС12 В цьому дослідженні використовували такі ж саме матеріали та способи, що і в прикладі 1, за винятком того, що клітини РС12 витримували з фіксованою концентрацією Ар 1мкМ, тоді як концентрацію фанхшону варіювали між 0 і 10 мкг/мл У відсутність фанхшону Ар(25-35) призводив до приблизно 40% інгібування зменшення МТТ (фіг 2, СВІТЛІ кружки) Це інгібування зберігалося в присутності до 0,1 мкг фанхшону на мл Збільшення Фанхшон і кліохшол тестували на їхню спроможність запобігати агрегації Ар(1-40) в амілоідні структури Кпіохшол являє собою ВІДОМІ сполуки в лікуванні хвороби Альцгеймера (дивіться Міжнародну публікацію за номером WO 98/06403) і його первісно тестували в цих експериментах з метою порівняння Досліджували, чи виявляли ці дві сполуки будь-яку дію на агрегацію Ар, що каталізується іоном металу, зокрема, агрегацію, що викликається Zn 2 + і Си 2 Результати цих експериментів показано на фіг 3 і 4 На фігурах 3 і 4 видно, що Си 2+ і Zn 2+ , в меншому ступені, збільшують агрегацію Ар в амілоідні структури відносно спонтанної агрегації В присутності фанхшону і кліохшолу в концентрації 10мкг/мл індукована іонами металів агрегація Ар була значно пониженою При випробуваних концентраціях 10мкг/мл фанхшон зменшував Си2+-шдуковану агрегацію на 50-60%, тоді як Zn 2 + - індукована агрегація була лише помірно інгібована приблизно на 10% Несподівано кліохшол виявив протилежну тенденцію Кпіохшол зменшував Zn 2 + - індуковану агрегацію Ар(1-40) більш ніж на 60%, тоді як агрегація, що 18 17 59412 2+ каталізується Cu , зменшувалася приблизно на ЯМР (400 МГЦ, CDCI3) 2,04 (с, ЗН, Ас), 2,09 (с, 30% Таким чином, фармацевтичні композиції, що ЗН, Ас), 2,13 (с, ЗН, Ас), 3,68 (с, ЗН, Me), 3,99 (д, містять фанхінон в комбінації з клюхінолом, мо1Н, 5'-Н), 5,40-5,52 (м, ЗН, 2',-3',-4'-Н), 6,29 (д, 1Н, жуть мати більшу корисність, ніж фармацевтичні Г-Н), 7,56 (м, 1Н, ЗН) , 7,99 (с, 1Н, 6-Н), 8,52 (д, композиції, що містить тільки одну з цих сполук 1Н, 4-Н), 8,93 (с, 1Н, 2-Н) Приклад 4 Ця сполука називається в подальшому глюкуронідом клюхінолу В цьому прикладі синтезували метаболіт клюхінолу Приклад 5 Відомо, ЩО КЛІОХІНОЛ екскретується через нирВзаємодію вітаміну Ві 2 з глюкуронідом клюхіки у вигляді глюкуронідних похідних клюхінолу нолу, отриманому в прикладі 4, досліджували з (Kotaki Н , et al "Enterohepatic circulation of choquiвикористанням спектроскопії ядерного магнітного nol in the rat", J Pharmacolobiodyn 1984 June, 7Ґ6) резонансу (ЯМР) 420-5 та Junma M et al Metabolism of CОскільки глюкуронід клюхінолу є розчинним у lodochlorhydroxyqumolme in the dog and the rat", J воді, дослідження проводили в забуференій воді 1 Pharmacobiodyn 1984 March, 7(3) 164-70) Перепри рН 6,5 Готували три різних розчина і їхні Нтворення клюхінолу у ВІДПОВІДНИЙ глюкуронід здоЯМР-спектри реєстрували в спектрофотометрі гадно відбувається в печінці Після утворення глюDRX 400МГц при 20°С Розчин а) містив вільний куроніду клюхінолу в печінці він кінець кінцем вітамін В-І2 (пдроксикобаламін) в концентрації переноситься в нирки для екскреції в сечу 2,6мМ Розчин Ь) містив суміш 2,6мМ вітаміну Ві 2 і ЮмМ глкжуроніду клюхінолу (молярне співвідноГлюкуронідне похідне клюхінолу в формі мешення приблизно 1 4) Розчин с) містив ЮмМ глютил-(5-хлор-7-йодхшоліл-2',3',4'-три-Окуроніду клюхінолу ацетилглікопіранозид)уронату одержують у ВІДПОВІДНОСТІ ЗІ наступною схемою реакцій На фіг 5 представлені-спектри цих трьох розчинів для ароматаїчної ділянки (5,5-9,8млн 1) Розбіжності є досить малими, але очевидними при збільшенні, показаному на фіг 6 і фіг 1, ВІДПОВІДНО Деякі з резонансів вітаміну Ві 2 (ВІДПОВІДНИХ ДО бензимідазольної частині молекули) були змішані (дивіться фіг 6), і теж саме спостерігається для двох резонансів глюкуроніду клюхінолу (ВІДПОВІДНИХ до хінолінової частині молекули) (дивіться фіг 7) Ці результати дають змогу припустити взаємодію між глюкуронідом клюхінолу і вітаміном В-І2, можливо, гідрофобної природи між бензимідазольною частиною молекули вітаміну Ві 2 і ХІНОЛІНОВОЮ частиною молекули глюкуроніду клюхінолу Заявник вважає, що гідрофобне зв'язування вітаміну В-І2 з глюкуронідом клюхінолу змушує вітамін В-І2 екскретуватися з тіла разом з глюкуронідом клюхінолу, запобігаючи таким чином резорбції вітаміну В-І2, що наприкінці призвело б до недостатності вітаміну В-І2 Таким чином, заявник вважає, N O s H2O 1N aH що недостатність вітаміну Ві 2 є, принаймні в деМЕОН якому ступені, причиною, що лежить в основі SMON Внаслідок цього, при будь-якому введенні клюхінолу повинна бути гарантія, що рівень вітаміну В-І2 в суб'єкті, що проходить лікування, є достатнім для запобігання його недостатності Це може досягатися спільним введенням клюхінолу і вітаміну В-І2 Суміш 5-хлор-8-пдрокси-7-йодхінолшу (50мг, Приклад 6 0,164ммоль), метил-1 -бром-1 -деокси-2,3,4-три-ООтримання фармацевтичної композиції, що ацетил-О-глюкопіранозидуронату (65мг, містить фанхінон 0,164ммоль}, CaSO4 НгО (35мг) і піридину (1,5мл) 250г фанхінону змішували з 200г Sapamm'y® перемішували при кімнатній температурі протягом (г\І-(4'-стеароіламінофеніл)20 хвилин Щойно виготовлений Ад2СОз (35мг) триметиламонійметилсірчаної кислоти) та 1025г додавали до реакційної суміші і суспензію перемімоногідрату лактози протягом періоду 5 хвилин шували при кімнатній температурі протягом 20 Додавали 300г киплячої води у вигляді однієї порхвилин в темряві Потім продукт реакції деацетиції до суміші 100г кукурудзяного крохмалю в 100г лювали 1N водним NaOH холодної води Суспензію кукурудзяного крохмаРеакційну суміш розбавляли СН2СІ2 (1 Омл), лю, охолоджену до 40°С, додавали до порошкоповідфільтрували і розчинник випарювали при понидібної суміші, що містить фанхінон при безперервженому тиску Згаданий вище продукт очищали ному перемішуванні Суміш гранулювали з флеш-хроматографією (ТШХ СН2СІ2/Ме0Н 99/1, використанням сита 2,5мм і зневоднювали протяелюент СН2СІ2/Ме0Н 99,5/0,5) гом 18 годин при 40°С Сухі гранули змішували з 20 19 59412 використанням сита 2,5 мм і зневоднювали протя400г кукурудзяного крохмалю і 20г стеарату маггом 18 годин при 40°С Сухі гранули змішували з нію Кінцеву суміш формували в таблетки, які ма400г кукурудзяного крохмалю і 20г стеарату магють діаметр 8,0мм і вагу 200мг нію Кінцеву суміш формували в таблетки, які маПриклад 7 ють діаметр 8,0мм і вагу 200мг Отримання фармацевтичної композиції, що містить фанхінон, клюхінол і вітамін В-і2 Щодо цитованих тут різноманітних публікацій, то їхні повні описи включені у цей опис винаходу 250г фанхінону і 250г клюхінолу змішували з шляхом посилання 200г Sapamin'y® (г\І-(4'-стеароіламшофеніл)триметиламонійметилсірчаної кислоти) і 1025г Після таким чином описаного даного винаходу моногідрату лактози протягом періоду 5 хвилин повинно бути очевидно, що те ж саме може варіюДодавали 300г киплячої води у вигляді однієї порватися численними шляхами Таке варіювання не ції до суміші 100г кукурудзяного крохмалю в 100 г повинно розглядатися як ВІДХІД ВІД ідеї та обсягу холодної води Суспензію кукурудзяного крохмацього винаходу, і всі такі модифікації, як повинно лю, охолоджену до 40°С, додавали до порошкопобути очевидно особі зі звичайною кваліфікацією 'в дібної суміші, що містить фанхінон і клюхінол, при даній галузі, входять в обсяг наступної формули безперервному перемішуванні Потім додавали винаходу водний розчин вітаміну В-і2 Суміш гранулювали з Л 133$ І - Носій • 10 тгімп фаниноку W' 10' D0O1 001 Єї 1 (АР(25-35)] / цМ 1 С НосШ 1 мч 20 0001 0,010 0,100 1,000 Концентрація фанхінону'мкгїмп ФІГ. 1 -т а 2 Фіг. 2 ^ 9 ж '.Ш-і ш 1 ш 1 _J І т щ і Ш щ ш щ ш Ш Щ Ш т щ Щ v Фіг. З Фіг, 4 ш 1Q.0CC 21 22 59412 Ь ~y J **^N*/ W4^-«^»w^ Vrt^rWW^ ^ i~ * *Ьч«Уя^!ЦЦ||*м**^^ рТ"" ЇЙ '~?j Fxff. F±g~ РТ"" Л х MV"?!! f'j w ?* "J ? '« Й« йй Є4 02 Л0 5Я j« 5 F i g . 6 Комп ютерна верстка М Клюкш 7 Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності Львівська площа 8 м Київ МСП 04655 Україна ТОВ Міжнародний науковий комітет вул Артема 77 м Київ 04050 Україна