Спосіб термічної обробки металевої стрічки

1. Спосіб термічної обробки металевої стрічки всередині камери термічної обробки, яка має у своїй внутрішній порожнині тиск, що перевищує атмосферний тиск, який включає: - пропускання стрічки через принаймні одну зону нагрівання в камері, - проходження стрічки через принаймні одну зону охолодження в камері, - встановлення першої атмосфери захисного газу, що має у своєму складі азот і перший вміст водню і/або гелію в камері, крім принаймні, одної зони охолодження, в якій створена друга атмосфера захисного газу, що має у своєму складі азот і другий вміст водню і/або гелію, що перевищує згаданий перший вміст, який відрізняється тим, що - принаймні разово вводять азот в камеру, - принаймні разово закачують захисний газ, що має у своєму складі третій вміст водню і/або гелію, що перевищує згаданий другий вміст цих газів, у згадану принаймні одну зону охолодження, що має згадану другу газову атмосферу, - проводять газообмін між принаймні одною зоною камери, що представляє згадану першу захисну газову атмосферу, і згаданою принаймні одною зоною охолодження, що представляє згадану другу газову атмосферу, - контролюють витрати вказаного принаймні одного введення і вказаного принаймні одного закачування залежно від газового обміну між зонами тиску в камері та рівнів вмісту водню і/або гелію, що 2 (19) 1 3 77574 4 також тим, що витрати газу, що рециркулює, в ролю витрат цей спосіб включає у згаданій при1000-5000 разів перевищує витрати газу створеннаймні одній зоні охолодження, що представляє ня атмосфери, що закачують і вводять. згадану другу газову атмосферу, підтримання тис12. Спосіб за будь-яким з пп.1-11, який відрізняку, що перевищує тиск у решті камери печі, що ється тим, що за допомогою вищезгаданого контрозташовується за межами цієї зони охолодження. Винахід стосується певних нових похідних (2S)-3-(4-{2-[аміно]-2-оксоетокси}феніл)-2етоксипропанової кислоти, способів отримання таких сполук, їх використання у лікуванні клінічних станів, включаючи ліпідні розлади (дисліпідемії), пов'язані або ні з резистентністю до інсуліну і іншими проявами метаболічного синдрому, способів їх терапевтичного використання і фармацевтичних композицій, що їх містять. Метаболічним синдромом, що охоплює цукровий діабет типу 2, називають прояви, що включають резистентність до інсуліну із супроводжуючими гіперінсулінемією, можливо, цукровим діабетом типу 2, артеріальною гіпертензією, центральним (вісцеральним ожирінням), дисліпідемією, що спостерігається як порушення рівнів ліпопротеїну і характеризується підвищеними концентраціями ЛДНГ (ліпопротеїни дуже низької густини), частинок низької густини (ЧНГ) і зниженням концентрації ліпопротеїну високої густини і зниженим фібринолізом. Сучасні епідеміологічні дослідження показали, що особам з резистентністю до інсуліну властивий високий ризик серцево-судинної захворюваності і смерті, зокрема, виникнення інфаркту міокарду і інсульту. Стани, пов'язані з атеросклерозом, викликаним цукровим діабетом типу 2, спричиняють до 80% всіх смертей. У клінічній медицині усвідомлюють необхідність підвищувати чутливість до інсуліну у пацієнтів з метаболічним синдромом і цим коригувати дисліпідемію, яку вважають причиною прискореного прогресування атеросклерозу. Однак, зараз це не є загальноприйнятим діагнозом з добре визначеними фармакотерапічними показаннями. Було виявлено, що S-енантіомер сполуки формули С: тобто 2-етокси-3-[4-(2-{4метансульфонілоксифеніл}етокси)феніл]пропанова кислота, [описана у Публікації РСТ WO 99/62872], є модулятором активованих пероксизомним проліфератором рецепторів [АППР, огляд яких можна знайти у T.M.Willson et al., J Med Chem 2000, Vol 43,527] і має комбіновану агоністичну активність стосовно АППР /АППР [Structure, 2001, Vol 9699, P.Cronet et al.]. Ця сполука є ефективною при лікуванні станів, пов'язаних з резистентністю до інсуліну. Несподівано була винайдена серія сполук, які є потужними модуляторами АППР. Винахід стосується S-енантіомеру сполуки формули І у якій п дорівнює 1 або 2, і її фармацевтично прийнятних солей, сольватів, кристалічних форм і проліків. Термін "проліки" у цьому документі охоплює похідні карбоксильної групи, які у ссавці, зокрема, у людині перетворюються у карбоксильну групу або її сіль або кон'югат. Хоча це не пов'язано з теорією, вважають, що більша частина активності, пов'язаної з проліками, зумовлюється активністю сполуки формули І, в яку перетворюються ці проліки. Проліки можна отримувати звичайними способами, добре відомими фахівцям. Відомими є різні карбокси-проліки, наприклад, див.: a) Design of prodrugs, ed. by Η. Bundgaard, (Elsevier, 1985) і Methods in Enzymology. 42:309396, ed. by K. Widder, et al. (Academic Press, 1985); b) Textbook of Drug Design and Development, ed. by Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5 "Design and Application of Prodrugs", by H. Bundgaard, pp.113-191 (1991); c) Н. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8:1-38 (1992); d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmac. Sciences, 77:285 (1988); і e) N. Kakeya, et al., Chem Pharm Bull, 32:692 (1984). Зазначені документи включено посиланням. Розщеплюванні in vivo естери є лише одним типом проліків вихідної молекули. Гідролізованою in vivo (або розщеплюванню) естерною сполукою формули (І), яка містить карбоксигрупу, є, наприклад, фармацевтично прийнятний естер, який у людині або у тварині гідролізується з утворенням вихідної кислоти. Фармацевтично прийнятні естери для карбоксигрупи включають С1-6апкоксиметилов! естери, наприклад, метоксиметиловий; С1-6-алканоїлоксиметилові естери, наприклад, півалоїлоксиметиловий; фталідилові естери; С3-8-циклоалкоксикарбонілоксиС1-6алкілові естери, наприклад, 1циклогексилкарбонілоксіетиловий; 1,3-діоксолен2-онілметилові естери, наприклад, 5-метил-1,3діоксолен-2-онілметиловий; і С1-6алкоксикарбонілоксіетилові естери, наприклад, 1метоксикарбонілоксіетиловий; і можуть бути утворені на будь-якій карбоксигрупі у сполуках винаходу. Сполуки формули І мають активність як медикаменти. Зокрема, сполуки формули І є потужними агоністами АППР . Крім того, сполуки формули І є також агоністами ΑΠΠΡ . Термін "агоністи" тут охоплює часткові агоністи. 5 77574 6 Окремими сполуками винаходу є: (2S)-3-(4-{2-[бензил(гексил)аміно]-2оксоетокси}феніл)-2-етокси-пропанова кислота; і (2S)-2-етокси-3-(4-{2-[гексил(2фенілетил)аміно]-2-оксоетокси}феніл)пропанова де R1 визначено вище, у інертному розчині, кислота; наприклад, ДХМ, у присутності засобу сполучені їх фармацевтично прийнятні солі, сольвати і ня, наприклад, карбодііміду, наприклад, 1-(3кристалічні форми. диметиламінопропіл)-3-етилкарбодііміду, і, як У цьому документі вираз "фармацевтично варіант, у присутності каталізатору, наприклад, прийнятні солі" стосується (але без обмеження) основного каталізатору, наприклад, 4солей основ, наприклад, солей лужних металів, диметиламінопіридину, при температурі від -25°С солей лужноземельних металів, солей амонію, до 150сС. солей, утворених з основними амінокислотами, і Сполуки формул III і IV можна отримувати солей, утворених з органічними амінами. способами, описаними у Прикладах або подібниЗрозуміло, що певні сполуки винаходу моми способами, відомими фахівцям. жуть існувати у сольватованих, наприклад, гідраСполуки формул II і III можуть бути кориснитованих, а також у несольватованих формах. ми як інтермедіати при отриманні сполуки форЗрозуміло також, що винахід охоплює всі такі мули І, вважаються новими і розглядаються як сольватовані форми. Деякі сполуки винаходу ще один аспект винаходу. Бажаними є Sможуть існувати як таутомери. Винахід також енантіомери сполуки формул II і III. Сполуки виохоплює всі такі таутомери. находу можуть бути виділені з реакційних суміСпособи отримання шей звичайними способами. Сполуки винаходу можна отримувати, як це Для фахівця зрозуміло, що для одержання описано нижче. Винахід, однак, не обмежується сполуки винаходу в інший, а у деяких випадках цими способами. Сполуки можна також отримубільш зручний спосіб, описані вище окремі етапи вати, як це описано для відомих структурно блипроцесу отримання можуть бути виконані у іншозьких сполук. Реакції можна проводити стандартму порядку і/або окремі реакції можуть бути проними способами або так, як це описано у розділі, ведені на інших етапах процесу (тобто хімічні присвяченому експериментам. перетворення можуть бути проведені з інтермеСполуки формули І можна отримувати реакдіатами, відмінними від зазначених вище для цієї цією S-енантіомеру сполуки формули II реакції). Вираз "інертний розчинник" стосується розчину, який не реагує з вихідними матеріалами, реагентами, інтермедіатами або продуктами, що може шкідливо вплинути на вихід бажаного продукту. у якій n визначено вище, a R є захисною груФармацевтичні препарати пою для карбоксильної гідроксигрупи, як це опиСполуки винаходу вводять пацієнту перорасано у стандартному документі "Protective Groups льно, парентерально, внутрішньовенно, внутрішin Organic Synthesis (Захисні групи у органічному ньом'язово, підшкірно або іншим шляхом ін'єкції, синтезі)", 2nd Edition (1991) by Greene and Wuts, букально, ректально, вагінально, трансдермальіз засобом позбавлення захисту. Захисна група но і/або через ніс, і/або інгаляцією, у формі фарможе бути також смолою, наприклад, смолою мацевтичної композиції, яка містить активний Ванга або 2-хлортритилхлоридною смолою. Заінгредієнт у вигляді вільної кислоти або фармахисні групи можуть бути видалені способами, цевтично прийнятної органічної або неорганічної добре відомими фахівцям. В одній з таких захисосновно-адитивної солі у фармацевтично прийнних груп R2 є С1-6-алкоксигрупою або арилалкокятній дозованій формі. Композиції можна вводити сигрупою, наприклад, бензилоксигрупою, у якій у змінних дозах залежно від розладу і пацієнта, 2 COR представляє естер. Такі естери можуть що одержує лікування. бути введені у реакцію із засобом позбавлення Придатні денні дози сполуки винаходу при захисту, наприклад, гідролізувальним засобом, терапевтичному лікуванні людини становлять наприклад, гідроксидом літію у суміші ТГФ і води, приблизно 0,0001-100мг/кг маси тіла, бажано при температурі 0-100°С, з одержанням сполуки 0,001-10мг/кг маси тіла. формули І. Бажаними пероральними формами є, зокреСполуки формули II можна отримувати реакма, таблетки або капсули, які можуть бути вигоцією S-енантіомеру сполуки формули III товлені відомими способами і містять дози активної сполуки у межах від 0,5мг до 500мг, наприклад, 1мг, 3мг, 5мг, 10мг, 25мг, 50мг, 100мг і 250мг. Подальшим об'єктом винаходу є фармацевIII тичні композиції, що включають будь-які сполуки 2 де R визначено вище, з сполукою формувинаходу або їх фармацевтично прийнятні похідли IV. ні, у суміші з фармацевтично прийнятними ад'ювантами, розріджувачами і/або носіями. Фармацевтичні властивості Сполуки формули (І) можуть бути використані 7 77574 8 для профілактики і/або лікування клінічних станів, (зокрема, людині), що потребує цього. пов'язаних з природною або набутою зниженою Згідно з іншим аспектом, винахід охоплює чутливістю до інсуліну (резистентність до інсулісполуки формули І як медикамент. ну) і асоційованими метаболічними розладами Згідно з подальшим аспектом, винахід охоп(відомими також як метаболічний синдром). Ці лює використання сполуки формули І у виготовклінічні стани включають (але без обмеження) ленні медикаменту для лікування резистентності загальне ожиріння, абдомінальне ожиріння, ардо інсуліну і/або метаболічних розладів. теріальну гіпертензію, гіперінсулінемію, гіпергліКомбінована терапія кемію, діабет типу 2 і дисліпідемію, яка звичайно Сполуки винаходу можна комбінувати з інсупроводжує резистентність до інсуліну. Ця дисшими терапевтичними засобами, корисними для ліпідемія, відома також як атер-генний ліпопротелікування розладів пов'язаних виникненням і пеїновий профіль, характеризується помірним підребігом атеросклерозу, наприклад, гіпертензії, вищенням рівня неестерифі-кованих жирних гіперліпідемії, дисліпідемії, діабету і ожиріння. кислот, багатих на тригліцерид часток ліпопротеСполуки винаходу можна комбінувати з іншими їну дуже низької густини (ЛДНГ), високими рівнятерапевтичними засобами, які знижують відноми Аро В, низькими рівнями ліпопротеїну високої шення ЧНГ/ЧВГ або з засобами, що викликають густини, пов'язаними з низькими рівнями частизниження рівнів циркуляції ЧНГ-холестеролу. Для нок ароАІ, і високими рівнями Аро В у присутності пацієнтів з цукровим діабетом сполуки винаходу невеликих компактних частинок ліпопротеїнів можна також комбінувати з терапевтичними занизької густини, фенотипу В. собами, призначеними для лікування ускладнень, Сполуки винаходу, як вважають, можуть випов'язаних з мікроангіопатіями. користовуватись для лікування пацієнтів з комбіСполуки винаходу можна використовувати нованими або змішаними гіперліпідеміями або разом з іншими терапіями для лікування метаборізними рівнями гіпертригліцеридемії і післяобідлічного синдрому або діабету типу 2 і пов'язаних ньої дисліпідемії, і з іншими проявами метаболічз ним ускладнень, включаючи бігуанідні ліки, наного синдрому або без них. приклад, метморфін, фенморфін і буформін, інМожна сподіватись, що застосування сполук сулін (синтетичні аналоги інсуліну, амілін) і оравинаходу знизить серцево-судинну захворювальні антигіперглікеміки (їх розділяють на ність і смертність, пов'язані з атеросклерозом, регулятори обідньої глюкози і інгібітори альфазавдяки їх антидисліпідемічним і протизапальним глюкозидази). Прикладами інгібітору альфавластивостям. Серцево-судинні хворобливі стани глюкозидази є акарбоза або воглібоза, або мігивключають макроангіопатії різних внутрішніх ортол. Прикладом регуляторів обідньої глюкози є ганів, які є причиною інфаркту міокарду, застійної репаглінід або натеглінід. серцевої недостатності, цереброваскулярної Згідно з іншим аспектом винаходу, сполуку хвороби і периферійної артеріальної недостатноформули І, або її фармацевтично прийнятну сіль, сті кінцівок. Вважається також, що завдяки підсольват, сольват такої солі або проліки можна вищенню чутливості до інсуліну сполуками форвводити разом з іншим модулятором АППР, мули І ці сполуки відвернуть або затримають включаючи (без обмеження) агоністи АППР розвиток діабету типу 2 з метаболічного синдроі/або ΑΠΠΡ , або з їх фармацевтично прийнятниму і діабету вагітності. Отже, можна сподіватись ми солями, сольватами, сольватами таких солей на затримання розвитку довготривалих ускладабо їх проліками. Фахівцям добре відомі придатні нень, пов'язаних з хронічною гіперглікемією при агоністи АППР і/або ΑΠΠΡ , їх фармацевтично цукровому діабеті, наприклад, мікроангіопатій, які прийнятні солі, сольвати, сольвати таких солей викликають ниркові захворювання, пошкодження або проліки. Прикладами є сполуки, [описані у сітківки і захворювання периферійних судин нижWO 01/12187, WO 01/12612, WO 99/62870, WO ніх кінцівок. Крім того, ці сполуки можуть бути 99/62872, WO 99/62871, WO 98/57941, WO корисними при лікуванні різних станів, не пов'я01/40170, J Med Chem, 1996,39, 665, Expert Opiзаних з серцево-судинною системою або з резисnion on Therapeutic Patents, 10 (5), 623-634 (зоктентністю до інсуліну, як-то полікистозний яєчнирема заявки на cтop.634) і J Med Chem, 2000, 43, ковий синдром, ожиріння, рак і запальні хвороби, 527], включені посиланням. Зокрема, агоністами включаючи нейродегенеративні розлади, наприАППР і/або ΑΠΠΡ є MN622/Ragaglitazar, BMS клад, помірне порушення розпізнавальної здат298585, WY-14643, клофібрат, фенофібрат, безності, хворобу Альцгеймера, хворобу Паркінсона афібрат, гемфіброзилі і ципрофібрат; GW 9578, і множинний склероз. циглітазон, троглітазон, піоглітазон, розиглітазон, Можна сподіватись, що сполуки винаходу еглітазон, проглітазон, BRL-49634, KRP-297, JTTможуть бути корисними для контролю рівнів глю501, SB 213068, GW 1929, GW 7845, GW 0207, Lкози у пацієнтів, що страждають від діабету 796449, L-165041 і GW 2433. Зокрема, агоністами типу 2. АППР і/або ΑΠΠΡ є (S)-2-етокси-3-[4-(2-{4Винахід охоплює спосіб лікування і профілакметансульфонілоксифеніл}етокси)-феніл]тики дисліпідемій, синдрому резистентності до пропанова кислота і її фармацевтично прийнятні інсуліну і/або метаболічних розладів (згаданих солі. вище), який полягає в уведенні сполуки формули Згідно з винаходом, комбіноване лікування І ссавцю (зокрема, людині), що потребує цього. можна проводити у сполученні з сульфонілВинахід охоплює спосіб лікування або профімочевиною, наприклад, глімепіридом, глібенклалактики діабету типу 2, який полягає в уведенні мідом (глібуридом), гліклазидом, гліпізидом, гліхіефективної кількості сполуки формули І ссавцю доном, хлорпропамідом, толбутамідом, асетогек 9 77574 10 самідом, глікопірамідом, карбутамідом, глібони02/32428, WO 02/50051, ЕР 864 582, ЕР 489423, ридом, глізоксеридом, глібутіазолом, глібузолом, ЕР 549967, ЕР 573848, ЕР 624593, ЕР 624594, ЕР глігексамідом, глімідином, гліпінамідом, фенбу624595 і ЕР 624596]. Зміст цих заявок включено тамідом, толциламідом і толазамідом. Бажаною посиланням. сульфонілмочевиною є глімепірид або глібенкЗокрема, класами інгібіторів ТЖККК, придатламід (глібурид). Найкражою сульфонілмочевиними для використання згідно з винаходом є бенною є глімепірид. Отже, винахід охоплює застозотієпіни і сполуки, описані у Формулі винаходу, сування сполуки винаходу разом з однією, двома зокрема, у п.1 Формули [WO 00/01687, WO або більше терапій, зазначених вище. Дозування 96/08484 і WO 97/33882], включених посиланням. для інших існуючих терапій для лікування діабету Іншими придатними класами інгібіторів ТЖККК є типу 2 і пов'язаних з ним ускладненнями є відо1,2-бензотіазепіни, 1,4-бензотіазепіни і 1,5мим фахівцям і схвалюється регулюючими оргабензотіазепіни. Придатними класами інгібіторів нами, наприклад, FDA і можуть бути знайдені у ТЖККК є також 1,2,5-бензотіадіазепіни. Orange Book від FDA. Перевагою комбінованого Конкретними сполуками-інгібіторами лікування є можливість застосовувати менші доТЖККК є: зи. Винахід охоплює також сполуку винаходу у (3R,5R)-3-бутил-3-eтил-1,1-діоксид-5-фенілкомбінації з знищуючими холестерол засобами, 2,3,4,5-тетрагідро-1,4-бензотіазепін-8-іл β-Dякі включають (без обмеження) інгібітори HMGглюкопіранозидуронова кислота (ЕР 864 582). CoA-редуктази (редуктази співферменту 3Іншими інгібіторами ТЖККК є: гідрокси-3-метилглютарилу). Прикладом інгібіто1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8ру HMG-CoA-редуктази є статин, вибраний з груN-{(R)-1'-феніл-[N'-(карбоксиметил)пи, яку складають аторвастатин, бервастатин, карбамоіл]метил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5церивастатин, дальвастатин, флувастатин, ітатетрагідро-1,5-бензотіазепін; вастатин, ловастатин, мевастатин, нікостатин, 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8нівастатин, провастатин і симвастатин, або їх (N-{(R)- -[N'-(карбоксиметил)карбамоїл]-4фармацевтично прийнятні солі, зокрема, солі гідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5натрію і кальцію, або їх сольвати, або сольвати тетрагідро-1,5-бензотіазепін; таких солей. Зокрема, статином є аторвастатин 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8або його фармацевтично прийнятна сіль, соль(N-{(R)-1'-феніл-1'-[N'-(2ват, сольват такої солі або відповідні проліки. сульфоеБажаним статином є аторвастатинова сіль кальтил)карбамоїл]метил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5цію, найкращим же статином є сполука (Е)-7-[4тетрагідро-1,5-бензотіазепін; (4-флуорфеніл)-6-ізопропіл-21,1-діоксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7-метилтіо[метил(метилсульфоніл)-аміно]-піримщин-58-(N-{(R)-1'-феніл-1'-[N'-(2іл](3R,5S)-3,5-дигідроксигепт-6-енойна кислота, сульфое[відома також як (Е)-7-[4-(4-флуорфеніл)-6тил)карбамоїл]метил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5ізопропіл-2-[N-метил-N-(метилсульфоніл)-аміно]тетрагідро-1,5-бензотіазепін; піримідин-5-іл](3R,5S)-3,5-дигідроксигепт-61,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8енойна кислота] або її фармацевтично прийнятна (N-{(R)- -[N'-(2-сульфоетил)карбамоїл]-4сіль або сольват, або сольват такої солі. (Е)-7-[4гідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5(4-флуорфеніл)-6-ізопропіл-2-[метилтетрагідро-1,5-бензотіазепін; (метилсульфоніл)-аміно]-піримідин-5-іл](3R,5S)1,1-діоксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7-метилтіо3,5-дигідроксигепт-6-енойну кислоту, і її кальцієву 8-(N-{(R)- -[N'-(2-сульфоетил)карбамоїл]-4і натрієву солі [описано у Європейській заявці ЕРгідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5А-0521471, і у Bioorganic and Medicinal Chemistry, тетрагідро-1,5-бензотіазепін; (1997), 5(2), 437-444]. Останній статин відомий 1,1-діоксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7-метилтіотакож як розувастатин. 8-(N-{(R)- -[N'-(2-карбоксіетил)-карбамоїл]У цій заявці термін "засіб, що знижує рівень бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5-тетрагідро-1,5холестерину" охоплює також хімічні модифікації бензотіазепін; інгібіторів HMG-CoA-редуктази, наприклад, есте1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8ри, проліки і метаболіти, активні або неактивні. (N-{(R)-а-[N'-(2-карбоксіетил)карбамоїл]-4Винахід також охоплює сполуку винаходу у гідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5комбінації з інгібітором транспортної системи тетрагідро-1,5-бензотіазепін; жовчної кислоти клубової кишки (інгібітор 1,1-д1оксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7ТЖККК). метилтіо-8-(N-{(R)- -[N'-(5-карбоксипентил)Сполуки-інгібітори ІВАТ були описані; [див., карбамоїл]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5наприклад, WO 93/16055, WO 94/18183, WO тетрагідро-1,5-бензотіазепін; 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-896/16051, WO 97/33882, WO 98/07449, WO (N-{(R)- -[N'-(2-карбоксіетил)98/03818, WO 98/38182, WO 99/32478, WO карбамоїл]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,599/35135, WO 98/40375, WO 99/35153, WO тетрагідро-1,5-бензотіазепін; 99/64409, WO 99/64410, WO 00/01687, WO 1,1-діоксо-3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8-(N00/47568, WO 00/61568, WO 00/62810, WO { -[N-(2-сульфоетил)карбамоїл]-201/68906, DE 19825804, WO 00/38725, WO флуорбензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,500/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO тетрагідро-1,5-бензотіазепін; 00/38729, WO 01/68906, WO 01/66533, WO 1,1-діоксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7-метилтіо 11 77574 12 метилпропіл)карбамоїл]-48-(N-{(R)- -[N'-(R)-(2-гідрокси-1гідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5карбоксіететрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; тил)карбамоїл]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,51,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8тетрагідро-1,5-бензотіазепін; (N-{(R)- -[N-((R)-1-карбоксибутил)карбамоїл]-41,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8гідроксибензил}карбамоілметокси)-2,3,4,5(N-{(R)- -[N'-(R)-(2-гідрокси-1тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; карбоксіе1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8тил)карбамот]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5тетрагідро-1,5-бензотіазепін; (N-{(R)- -[N-((R)-1-карбоксипропіл)карбамоїл]1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5-тетрагідро1,2,5-бензотіадіазепін; {N-[(R)- -(N'-{(R)-1-[N"-(R)-(2-гідрокси-11,1-діоксо-3,3-дибутил-5-фент-7-метилтіо-8карбоксіетил)карбамот]-2гідроксіетил}карбамоїл)бензил](N-{(R)- -[N-((R)-1-карбоксіетил)карбамоїл]карбамоїлметокси}-2,3,4,5-тетрагідро-1,5бензил}карбамоїпметокси)-2,3,4,5-тетрагідробензотіазепін; 1,2,5-бензотіадіазепін; 1,1-діоксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7-метилтіо1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-88-(N-{ -[N'-(карбоксиметил)-карбамоїл](N-{(R)- -[N-((R)-1-карбокси-2-(R)бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5-тетрагідро-1,5гідроксипробензотіазепін; піл)карбамоїл]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,51,1-діоксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7-метилтіотетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-88-(N-{ -[N'-((етокси)-(метил)фосфорилме(N-{(R)- -[N-(2-сульфоетил)карбамоїл]-4тил)карбамоїл]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5гідроксибензил}карбамоїлметокси)-213,4,5тетрагідро-1,5-бензотіазепін; тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; 1,1-діоксо-3-бутил-3-етил-5-феніл-7-метилтіо1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-88-{N-[(R)- -(N'-{2-[(гідрокси)(метил)(N-{(R)- -[N-((R)-1-карбоксіетил)карбамоїл]-4фосфогідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5рил]етил}карбамоїл)бензил]карбамоїлметокси}тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; 2,3,4,5-тетрагідро-1,5-бензотіазепін; 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-81,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8(N-{(R)- -[N-((R)-1-карбокси-2(N-{(R)- -(N'-(2-метилтіо-1метилтіоекарбоксіетил)карбамот]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5тил)карбамоїл]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; тетрагідро-1,5-бензотіазепін; 1,1-діоксо-3,3-(дибутил-5-феніл-7-метилтіо-81,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8(N-{(R)- -[N-{(R)-1-[N-((R)-2-гідрокси-1{N-[(R)- -(N'-{2-[(метил)-(етил)фосфорил]карбоксіеетил}карбамоїл)-4тил)карбамоїл]пропіл}карбамоїл]бензил)карбамої гідроксибензил]карбамоїлметокси}-2,3,4,5лметокси)-2,3,4,5-тетрагідро-1,2,5тетрагідро-1,5-бензотіазепін; бензотіадіазепін; 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-81,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8{N-[(R)-L-(N'-{2-[(метил)(гідрокси)(N-{(R)- -[N-((R)-1-карбокси-2фосфорил]етил}карбамоїл)-4-гідроксибензил]метилпрокарбамоїлметокси}-2,3,4,5-тетрагідро-1,5піл)карбамоїп]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5бензотіазепін; тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; 1,1-(діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-81,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8(N-{(R)- -[(R)-N'-(2-метилсульфініл-1(N-{(R)- -[N-((R)-1-карбоксипропіл)карбамоїл]-4карбоксіегідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5тил)карбамоїл]бензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; тетрагідро-1,5-бензотіазепін; 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-81,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метокси-8[N-((R)- -{N-[1-(R)-2-(S)-1-гідрокси-1-(3,4[N-{(R)- -[N'-(2-сульфоетил)карбамоїл]-4дигідроксифеніл)проп-2-іл]карбамоїл}-4гідроксибензил}карбамоїлметокси]-2,3,4,5гідроксибензил)-карбамоїлметокси]-2>3,4,5тетрагідро-1,5-бензотіазепін; тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-81,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8(N-{(R)- -[N-((R)-1-карбокси-2-метилтіо[N-{(R)- -[N-(2-(R)-3-(R)-4-(R)-5-(R)-2,3,4,5,6етил)карбамоїл]-4пентагідроксигексил)карбамоїл]-4гідроксибензил}карбамоїлметокси)-2,3,4,5гідроксибензил}карбамоїл-метокси)-2,3,4,5тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; і 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-81,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8(N-{(R)- -[N-((R)-1-карбокси-2-(R)(N{(R)- -[N-(2-(R)-3-(R)-4-(R)-5-(R)-2,3,4,5,6гідроксипропіл)карбамоїл]-4-гідроксибензил}пентагідроксигеккарбамоїлметокси)-2,3,4,5-тетрагідро-1,2,5сил)карбамоїл]бензил}карбамоїл-метокси)бензотіадіазепін; 2,3,4,5-тетрагідро-1,2,5-бензотіадіазепін; 1,1-діоксо-3,3-дибутил-5-феніл-7-метилтіо-8або їх фармацевтично прийнятні сіль, сольN-{(R)- -[N-((R)-1-карбокси-2ват, сольват такої солі або проліки. 13 77574 14 Згідно з ще одним аспектом, в рамки винахоіндолаприлат, лібензаприл, лізиноприл, ліціумін ду входить комбіноване лікування, яке полягає в А, ліціумін В, міксанприл, моекзиприл, моекзипуведенні ефективної кількості сполуки формули І рилат, мовелтиприл, мурацеїн А, мурацеїн В, або її фармацевтично прийнятної солі, сольвату, мурацеїн С, пентоприл, периндоприл, периндопсольвату такої солі або проліків, як варіант, рарилат, півалоприл, півоприл, хінаприл, хінаприлзом з фармацевтично прийнятним розріджувачем гідрохлорид, хінаприлат, раміприл, раміприлат, або носієм, з одночасним, послідовним або окреспіраприл, спіраприлгідрохлорид, спіраприлат, мим введенням одного або більше засобів, вибспіроприл, спіроприлгідрохлорид, темокаприл, раних з групи, яку складають: темокаприлгідрохлорид, тепротид, трандолапінгібітор БПХЕ (білок переносу холестеринорил, трандолаприлат, утабаприл, забіциприл, вого естеру), наприклад, згаданий і [описаний у забіциприлат, зофеноприлі і зофеноприлат. Бадокументі WO 00/38725 стор.7 ряд.22 - cтop.10, жаними інгібіторами ΚΕΑ згідно з винаходом є ряд.17], включеному посиланням; раміприл, раміприлат, лізиноприл, еналаприл і антагоніст абсорбції холестеролу, наприклад, еналаприлат. Найкращими інгібіторами ΚΕΑ є ацетидинони, наприклад, SCH 58235 і [описані у раміприл і раміприлат. документі US 5 767 115], включеному посиланБажані антагоністи ангіотензину II, їх фарманям; цевтично прийнятні солі, сольвати, сольват таких інгібітор БМП (білок мікросомного переносу), солей або проліки, придатні для комбінування з наприклад, [описаний у Science, 282, 751сполуками формули І, включають (але без обме54,1998], включеній посиланням; ження) такі сполуки: кандезартан, кандезартанціпохідне нікотинової кислоти, включаючи пролексетил, лосартан, вальзартан, ірбезартан, тадукти з уповільненим вивільненням і комбіновані зозартан, тельмізартан і епрозартан. Більш продукти, наприклад, нікотинова кислота (ніацин), бажаними антагоністами ангіотензину І або їх ацимпокс і ніцеритрол; фармацевтично прийнятними похідними, згідно з фітостерольна сполука, наприклад, етаноли; винаходом, є кандезартан і кандезартанцілексепробукол; тил. сполука проти ожиріння, наприклад, орлістат Отже, винахід охоплює також спосіб лікуван[ЕР 129748] і сибутрамін [GB 2 184 122 і US 4 929 ня діабету типу 2 і пов'язаних з ним ускладнень у 629]; теплокровної тварини, наприклад, людини, що антигіпертензивна сполука, наприклад, інгібіпотребують такого лікування, який полягає в уветор ферменту перетворення ангіотензину(КЕА), денні зазначеній тварині ефективної кількості антагоніст рецептору ангіотензину, андренергічсполуки формули І або її фармацевтично прийняний блокатор, альфа-андренергічний блокатор, тної солі, сольвату, сольвату такої солі або пролібета-андренергічний блокатор, змішаний альків з одночасним, послідовним або роздільним фа/бета андренергічний блокатор, андренергічзастосуванням з ефективною кількістю одної інний стимулятор, блокатор каналу кальцію, блокашої сполуки, описаної у цьому розділі, або її фатор АТ-1, салуретик, діуретик або рмацевтично прийнятної солі, сольвату, сольвату судинорозширювальний засіб; такої солі або проліків. антагоніст або інверсний антагоніст СВ1, наВинахід охоплює також спосіб лікування гіпеприклад, [описаний у WO01/70700 і ЕР 65635]; рліпідемічних станів у теплокровної тварини, наантагоніст гормону концентрування меланіну приклад, людини, що потребують такого лікуван(ГКМ); ня, який полягає в уведенні зазначеній тварині інгібітор PDK; або ефективної кількості сполуки формули І або її модулятори ядерних рецепторів, наприклад, фармацевтично прийнятної солі, сольвату, сольLXR, FXR, RXR, і ROR-альфа; або їх фармацеввату такої солі або проліків з одночасним, послітично прийнятні солі, сольвати, сольвати таких довним або роздільним застосуванням з ефектисолей або проліки, як варіант, разом з фармацеввною кількістю іншої сполуки, описаної у цьому тично прийнятним розріджувачем або носієм, розділі, або її фармацевтично прийнятної солі, теплокровній тварині, наприклад, людині, що посольвату, сольвату такої солі або проліків. требує такого терапевтичного лікування. Іншим аспектом винаходу є фармацеватична Інгібітори ΚΕΑ або їх фармацевтично прийнякомпозиція, яка містить сполуку формули І або її тні солі, сольвати, сольвати таких солей або профармацевтично прийнятну сіль, сольват, сольват ліки, включаючи активні метаболіти, які можна такої солі або проліки, і одну з інших сполук, опивикористовувати у комбінації з сполуками форсаних у цьому розділі, або її фармацевтично примули І, включають (без обмеження) такі сполуки: йнятної солі, сольвату, сольвату такої солі або алацеприл, алатриоприл, алтіоприл кальцію, анпроліків разом з фармацевтично прийнятним роковенін, беназеприл, беназеприлгідрохлорид, зріджувачем або носієм. беназеприлат, бензоїлкаптоприл, каптоприл, еаЗгідно з ще одним аспектом, в рамки винахоптоприл-цистеїн, капртприл-глютатіон, церанапду входить комплект, який містить сполуку форрил, цераноприл, цернаприл, цилізаприл, циламули І або фармацевтично прийнятну сіль, сользаприлат, делаприл, делаприл-дикислота, ват, сольват такої солі або проліки, і одну з інших еналаприл, еналаприлат, енаприл, епікаптоприл, сполук, описаних у цьому розділі, або її фармафороксимітин, фостеноприл, фосеноприл, фосецевтично прийнятної солі, сольвату, сольвату ноприл натрію, фосиноприл, фосиноприл натрію, такої солі або проліків. фосиноприлат, фосиноприлова кислота, глікопЗгідно з подальшим аспектом, в рамки винарил, геморфін-4, ідраприл, імідаприл, індолаприл, ходу входить комплект, який містить: 15 77574 16 a) сполуку формули І або фармацевтично ДМСО - диметилсульфоксид прийнятну сіль, сольват, сольват такої солі або ТГФ - тетрагідрофуран проліки, у першій одиничній дозованій формі; Pd/C - паладій на вугіллі b) одну з інших сполук, описаних у цьому роДМАП - диметиламінопіридин зділі, або її проліки у другій одиничній дозованій t триплет формі; і s синглет c) контейнерний засіб для зберігання зазнаd дублет чених першої і другої одиничних дозованих q квартет форм. m мультиплет Згідно з іншим аспектом, в рамки винаходу bs широкий синглет входить комплект, який містить: dm дублет мультиплету a) сполуку формули І або її фармацевтично bt широкий триплет прийнятну сіль, сольват, сольват такої солі або dd дублет дублету проліки, разом з фармацевтично прийнятним Приклад 1 розріджувачем або носієм, у першій одиничній (2S)-3-(4-{2-[бензил(гексил)аміно1-2дозованій формі; оксоетокси}феніл)-2-етоксипропанова кислота b) одну з інших сполук, описаних у цьому ро(і) Етил (2S)-3-{4-[2-(бензилокси)-2зділі, або її проліки у другій одиничній дозованій оксоетокси]феніл}-2-етоксипропаноат формі; і До розчину етил (2S)-2-етокси-3-(4c) контейнерний засіб для зберігання зазнагідроксифеніл)пропаноату (23,8г, 100ммоль, чених першої і другої одиничних дозованих отриманого [згідно з WO 99/62872]) у ацетонітриформ. лі (200мл) додають безводний карбонат калію Винахід охоплює також використання сполуки (31,9г, 231ммоль) і потім бензилбромацетат формули І або її фармацевтично прийнятної солі, (17,4мл, 110ммоль) і реакційну суміш витримують сольватів, сольватів такої солі або проліків, і одпід зворотним холодильником протягом ночі. Ренієї з інших сполук, описаних у цьому розділі, або акційну суміш залишають охолонути до кімнатної її фармацевтично прийнятної солі, сольвату, сотемператури, нерозчинні солі відфільтровують і львату такої солі або проліків, у виготовленні мерозчин концентрують у вакуумі. Залишок вносять дикаменту, призначеного для лікування метабоу етилацетат (300мл), і органічну фазу промивалічного синдрому або діабету типу 2 і пов'язаних ють водним натрій гідрокарбонатом (3 100мл) і з ним ускладнень у теплокровної тварини, наприрозсолом (100мл), сушать безводним магній суклад, людини. льфатом і концентрують у вакуумі. Очищення на Згідно з іншим аспектом, винахід охоплює висилікагелі метиленхлоридом як елюентом і збикористання сполуки формули І або її фармацеврання чистих фракцій дають 22,4г (58%) жовтого тично прийнятної солі, сольватів, сольватів такої масла. 1 солі або проліків, і однієї з інших сполук, описаН ЯМР (400МГц, CDCI3): δ 1,16 (t, 3Н), 1,22 них у цьому розділі, або її фармацевтично при(t, 3Н), 2,93-2,97 (m, 2H), 3,35 (m, 1H), 3,60 (m, йнятної солі, сольвату, сольвату такої солі або 1H), 3,97 (m, 1H), 4,16 (q, 2H), 4,64 (s, 2H), 5,23 (s, проліків, у виготовленні медикаменту, призначе2H), 6,82 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 7,32-7,39 (m, 5H). 13 ного для лікування гіперліпідемічних станів у тепC ЯМР (100МГц, CDCI3): δ 14,3, 15,2, 38,6, локровної тварини, наприклад, людини. 60,9, 65,6, 66,3, 67,0, 80,4, 114,6, 128,5, 128,6, Згідно з ще одним аспектом, винахід охоплює 128,7, 130,6, 135,3, 156,7, 169,0, 172,6. комбіноване лікування, яке полягає в уведенні (іі) {4-[(2S)-2,3-діетокси-3ефективної кількості сполуки формули І або її оксопропіл]фенокси}оцтова кислота фармацевтично прийнятної солі, сольвату, сольДо розчину етил (2S)-3-{4-[2-(бензилокси)-2вату такої солі або проліків, як варіант, разом з оксоетокси]феніл}-2-етоксипропаноату (22,33г, фармацевтично прийнятним розріджувачем або 57,8ммоль) у щойно дистильованому ТГФ носієм, з одночасним, послідовним або розділь(290мл) додають Pd/C (10%, 3,1г) і реакційну суним застосуванням ефективної кількості іншої міш гідрогенують під атмосферним тиском при сполуки, описаної у цьому розділі, або її фармакімнатній температурі протягом ночі. Суміш фільцевтично прийнятної солі, сольвату, сольвату трують через броунмілерит і фільтрат конценттакої солі або проліків, як варіант, разом з фаррують у вакуумі, одержуючи 16,6г (97%) світломацевтично прийнятним розріджувачем або носіжовтого масла. 1 єм, теплокровній тварині, наприклад, людині, що Н ЯМР (400МГц, CDCI3): δ 1,15 (t, 3Н), 1,21 потребує такого лікування. (t, 3Н), 2,93-2,98 (m, 2H), 3,35 (m, 1H), 3,60 (m, Приклади 1H), 3,97 (m, 1H), 4,16 (q, 2H), 4,65 (s, 2H), 6,84 (d, Вимірювання 1Н ЯМР і 13С ЯМР виконано на 2H), 7,17 (d, 2H), 8,48 (bs, 1H) 13 спектрометрах Varian Mercury 300 або Varian UNC ЯМР (100МГц, CDCI3): δ 14,3, 15,1, 38,5, ITY plus 400, 500 або 600, на частотах 1Н 300, 61,0, 65,1, 66,4, 80,3, 114,6, 130,7, 130,9, 156,4, 13 400, 500 і 600МГц, відповідно, і на частотах С 172,7, 173,7 75,100,125 і 150МГц, відповідно. Вимірювання (ііі) Етил (2S)-3-(4-{2-[бензил(гексил)аміно]-2були проведені на дельта-шкалі (δ). оксоетокси}феніл)-2-етоксипропаноат Якщо не визначено інше, хімічні зсуви навеДо розчину {4-[(2S)-2,3-діетокси-3дено умлн~1 відносно розчиннику як внутрішнього оксопропіл]фенокси}оцтової кислоти (0,110г, стандарту. 0,37моль) у метиленхлориді (3,7мл) додають NАбревіатури гексилбензиламін (0,079г, 0,41ммоль) і ДМАП 17 77574 18 (0,045г, 0,37ммоль) і потім гідрохлорид 1-етил-3міш розбавляють метиленхлоридом (25мл), і ор(3-диметил-амінопропіл)карбодііміду (0,071г, ганічну фазу промивають 5%-ю НСІ (3 25мл), 0,37ммоль) і реакційну суміш перемішують при водним натрій гідрокарбонатом (25мл) і розсолом кімнатній температурі протягом ночі. Суміш роз(25мл), сушать натрій сульфатом і концентрують бавляють метиленхлоридом (25мл), і органічну у вакуумі. Очищення на пакетній колонці силікафазу промивають 5%-ю НСІ (3 25мл), водним гелю (Ізоlutе® SPE Column, 5г Si/25мл) з метанонатрій гідрокарбонатом (25мл) і розсолом (25мл), лом (0-1% градієнт) у метиленхлориді як елюенсушать натрій сульфатом і концентрують у вакутом дає 0,125г (70%) безбарвного масла. 1 умі. Очищення на пакетній колонці силікагелю Н ЯМР (400МГц, CDCI3): δ 0,82-0,92 (m, 3Н), (Ізolute® SPE Column, 5г Si/25мл) з метанолом (01,16 (t, 3Н), 1,19-1,33 (m, 9H), 1,45-1,65 (m, 2H), 1% градієнт) у метиленхлориді як елюентом дає 2,82-2,90 (m, 2H), 2,91-2,98 (m, 2H), 3,12-3,21 і 0,139г (80%) безбарвного масла. 3,29-3,42 (2m, 3Н, ротамери) 3,50-3,65 (m, 3Н), 1 Н ЯМР (400МГц, CDCI3): δ 0,81-0,90 (m, 3Н), 3,95 (m,IH), 4,16 (q, 2Н), 4,39 і 4,65 (2s, 2H, рота1,11-1,32 (m, 12Н), 1,46-1,62 (m, 2H), 2,88-3,00 (m, мери), 6,75 і 6,86 (2d, 2H, ротамери), 7,10-7,34 (m, 2H), 3,21-3,29 і 3,29-3,40 (2m, 3Н, ротамери), 3,59 7H). 13 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,10419 (m, 2Н), 4,60 і 4,61 С ЯМР (100МГц, CDCI3): δ 14,0, 14,1, 14,3, (2s, 2Н, ротамери), 4,65 і 4,73 (2s, 2H, фікс), 6,77 і 15,1, 22,6, 26,5, 26,7, 27,4, 29,0, 31,5, 31,6, 33,9, 6,87 (2d, 2H, ротамери), 7,07-7,37 (m, 7H). 35,3, 3,8,5, 45,9, 48,1, 48,3, 48,9, 60,8, 66,2, 67,5, 13 С ЯМР (100МГц, CDCI3): δ 13,9, 14,2, 15,1, 80,4, 114,5, 126,4, 126,9, 128,5, 128,9, 130,1, 22,5, 26,5, 27,1, 28,4, 31,4, 31,5, 38,4, 46,3, 46,5, 130,2, 130,5, 130,5, 138,3, 139,2, 156,9, 157,0, 48,2, 50,5, 60,7, 66,1, 67,5, 67,8, 80,3, 114,4, 114,5, 167,6, 167,8, 172,5 (Кількість піків перевищує кі126,6, 127,3, 127,6, 128,0, 128,5, 128,8, 130,2, лькість атомів карбону внаслідок ротамерів). 130,2, 130,4, 130,5, 136,6, 137,2, 156,8, 156,9, (іі) (2S)-2-етокси-3-(4-{2-[гексил(2168,0, 168,1, 172,4. (Кількість піків перевищує фенілетил)аміно]-2-оксоетокси}феніл)-пропанова кількість атомів карбону внаслідок ротамерів) кислота (іv) (2S)-3-(4-{2-[бензил(гексил)аміно]-2До розчину етил (2S)-2-етокси-3-(4-{2оксоетокси}феніл)-2-етоксипропанова кислота [гексил(2-фенілетил)аміно]-2-оксоетокси}-феніл)До розчину етил (2S)-3-(4-{2пропаноату (0,081г, 0,17ммоль) у ТГФ (8,6мл) [бензил(гексил)аміно]-2-оксоетокси}феніл)-2додають 4,3мл 0,10М розчину LiOH і реакційну етокси-пропаноату (0,080г, 0,17ммоль) у ТГФ суміш перемішують при кімнатній температурі (8,6мл) додають 4,3мл 0,10М розчину LiOH і реапротягом ночі. Реакційну суміш підкислюють 2М кційну суміш перемішують при кімнатній темпераНСІ і екстрагують етилацетатом (3 25мл). Об'єдтурі протягом ночі. Реакційну суміш підкислюють нану органічну фазу промивають розсолом 2М НСІ і екстрагують етилацетатом (3 25мл). (25мл), сушать натрій сульфатом і концентрують Об'єднану органічну фазу промивають розсолом у вакуумі, одержуючи 0,073г (96%) безбарвного (25мл), сушать натрій сульфатом, і концентрують масла. 1 у вакуумі, одержуючи 0,068г (90%) безбарвного Н ЯМР (400МГц, CDCI3): δ 0,82-0,93 (m, 3Н), масла. 1,15 (t, 3Н), 1,20-1,35 (m, 6H), 1,47-1,62 (m, 2H), 1 Н ЯМР (400МГц, CDCI3): δ 0,80-0,92 (m, 3Н), 2,80-2,99 (m, 3Н), 3,00-3,09 (m, 1H), 3,11-3,21 і 1,11-1,18 (m, 3Н), 1,18-1,33 (m, 6H), 1,46-1,63 (m, 3,31-3,44 (2m, 3Н, ретейнери), 3,50-3,67 (m, 3Н), 2H), 2,87-3,11 (m, 2H), 3,20-3,30 і 3,32-3,45 (2m, 4,01 (m, 1Н), 4,40 і 4,66 (2s, 2H, ротамери), 6,75 і 3Н, ротамери), 3,61 (m, 1Н), 4,01 (гл, 1Н), 4,61 і 6,85 (2d, 2H, ротамери), 7,10-7,35 (m, 7H), 8,86 4,63 (2s, 2Н, ротамери), 4,67 і 4,75 (2s, 2H, рота(bs, 1H). 13 мери), 6,77 і 6,88 (2d, 2H, ротамери), 7,10-7,40 (m, С ЯМР (100МГц, CDC3): δ 14,0, 14,1, 15,1, 7H), 8,79 (bs, 1H). 22,6, 22,6, 26,6, 26,7, 27,3, 28,9, 31,5, 31,6, 33,8, 13 С ЯМР (100МГц, CDC13): δ 14,0, 15,1, 22,6, 35,2, 38,1, 46,1, 48,3, 48,4, 49,0, 66,7, 67,4, 79,9, 26,6, 27,1, 28,4, 31,5, 31,5, 31,6, 38,1, 46,5, 46,6, 114,6, 126,4, 127,0, 128,6, 128,9, 130,0, 130,1, 48,5, 50,7, 66,7, 67,4, 67,7, 79,9, 114,6, 114,7, 130,6, 130,7, 138,2, 139,1, 156,9, 157,0, 168,1, 126,7, 127,5, 127,8, 128,2, 128,7, 129,0, 130,1, 168,2, 175,6 (Кількість піків перевищує кількість 130,1, 130,6, 130,7, 136,5, 137,0, 156,9, 157,0, атомів карбону внаслідок ротамерів). 168,5, 168,6, 175,6. (Кількість піків перевищує Біологічна активність кількість атомів карбону внаслідок ротамерів) Композиції Приклад 2 Сполуки були розчинені у ДМСО для одер(2S)-2-етокси-3-(4-{2-{гексил(2жання 16мМ маточних розчинів. Перед аналізом фенілетил)аміно]-2-оксоетокси}-феніл)маточні розчини розбавляли ДМСО і середовипропанова кислота щами культури. (і) Етил (2S)-2-етокси-3-(4-{2-[гексил(2Загальні хімікати і реагенти фенілетиламіно]-2-оксоетокси}феніл)пропаноат Реагент для люциферазного аналізу був До розчину {4-[(2S)-2,3-діетокси-3придбаний від Packard, USA. Рестрикційні фероксопропіл]фенокси}оцтової кислоти (0,110г, менти - від Boehringer and Vent, полімераза - від 0,37ммоль) у метиленхлориді (3,7мл) додають NNew England Biolabs. гексил-2-фенілетиламін (0,080г, 0,39ммоль) і Клітинні лінії і умови для культур клітин ДМАП (0,045г, 0,37ммоль) і потім 1-етил-3-(3U2-OS (остеогенна саркома людини) була диметиламінопропіл)-карбодіімідгідрохлорид придбана від АТСС, USA, клітини були розширені (0,071г, 0,37ммоль), і реакційну суміш перемішуі повторно заморожені порціями з проходу 6. Кують при кімнатній температурі протягом ночі. Сультуру клітин вирощували у модифікованому се 19 77574 20 редовищі Dulbecco's Eagle (DMEM) з 25мМ глюПісля електропорації клітини були розбавлені кози, 2мМ глютаміну або 4мМ L-аланіл-Lдо концентрації 320'000клітин/мл у DMEM без глютаміну, 10% сироватки зародка теляти при 5% фенольного червоного, і у 96-коміркових планшеСО2. Використовували буферований фосфатом тах були посіяні приблизно 25'000клітин/комірку. розсіл (PBS) без додання кальцію або магнію. Всі Для відновлення клітин засіяні планшети були реагенти для культури клітин - від Gibco (USA) і інкубовані при 37°С протягом 3-4год. перед до96-коміркові планшети для культур - від Wallach. данням тест-сполуки. У аналізах для ΑΠΠΡ кліПлазмідні констракти для гетерологічної екстинне середовище доповнюють десорбованою зі пресії смоли-вугілля сироваткою зародка теляти (СЗТ), Була застосована стандартна процедура рещоб уникнути фонового активування компоненкомбінантної ДНК, описана у Ausubel (7). Репортами жирних кислот СЗТ. Цю СЗТ одержували терний вектор люциферази, pGLSUAS (клон таким чином: на 500мл активованої нагріванням складається з 5 копій зв'язуючої послідовності СЗТ додають 10г вугілля і 25г Bio-Rad Analytical GAM ДНК, 5'Grade Anion Exchange Resin 200-400 mesh і розCGACGGAGTACTGTCCTCCGAGCT-3') був клочин витримують з магнітним перемішуванням при нованої у сайти Sacl/Xhol pGL3-Promoter (Promeкімнатній температурі протягом ночі. Наступного ga). Фрагмент Sacl/Xhol, що несе сайти UAS, був дня СЗТ центрифугують і повторюють процедуру конструктований з використанням гібридизованих обробки протягом 4-6 годин. Після другої обробки олігонуклеотидів, що перекриваються. Вектори СЗТ центрифугують і фільтрують через стерильекспресії базуються на pSG5 (Stratagene). Всі ний фільтр, щоб видалити залишки вугілля та вектори містять фрагмент EcoRI/Nhel, який кодує смоли. зв'язуючий домен ДНК GAL4 (кодує позиції 1-145 Процедура аналізу амінокислот з номером входу бази даних Р04386) Маточні розчини сполуки у ДМСО розбавляз подальшим злиттям у рамці з фрагментом, що ють до належної концентрації у основних планкодує ядерну локалізаційну послідовність від аншетах. Сполуки з основних планшетів розбавлятигену Τ Polyoma Virus. Ця послідовність конструють у середовищі культури для отримання ктована з використанням гібридизованих охолорозчину тест-сполуки для кінцевих доз. дженням олігонуклеотидів, що перекриваються, і Після корекції кількості клітинного середовистворює клейкі кінці Nhel/Kpnl (5'ща до 75мкл у кожній комірці додають 50мкл розCTAGCGCTCCTAGAAGAAACGCAAGGTTGGTAC чину тест-сполуки. Тимчасово трансфіковані клі-3'). Зв'язуючі ліганд домени від АППР людини і тини піддають дії сполуки протягом приблизно 24год. перед проведенням аналізу виявлення миші і ΑΠΠΡ людини і миші були PCRлюциферази. Для цього аналізу додають 100мкл ампліфіковані як фрагменти Kpnl/BamHI і кпоноаналітичного реагенту до кожного комірки і планвані у рамці у домен, що зв'язує GAL4 ДНК і ядешети залишають приблизно на 20хвил. для зарну локалізаційну послідовність. Послідовність безпечення лізису клітин. Після лізису виміряють всіх плазмідних констрактів була підтверджена активність люциферази лічильником 1420 Multiсеквенсуванням. Для перехідних трансфекцій well counter, Victor, від Wallach. були використані такі вектори експресії. Еталонні сполуки Субтип кодованої Для активування ΑΠΠΡ як людини, так і миВектор Тип послідовності 1 АППР ші, як еталонну речовину використовували TZDpSGGALhPPa ΑΠΠΡ людини S74349,nt 625-1530 піоглітазон. Для активування АППР людини і pSGGALmPPa ΑΠΠΡ миші X57638,nt 668-1573 миші як еталонну речовину використовували 5, 8, 11, 14-ейкозатетраіонову кислот (ЕТІK). pSGGALhPPg ΑΠΠΡ людини U63415,nt 613-1518 Обчислення і аналіз pSGGALmPPg ΑΠΠΡ миші U09138,nt 652-1577 Для обчислення значень ЕС50 була побудо1 вана крива залежності "концентрація-відгук". Ненуклеотидні позиції входів бази даних, використані для вираження домену, що зв'язує ліганди. обхідні значення одержували усередненням двох-трьох незалежних вимірювань (після віднімання середнього фонового значення) і репрезеПерехідні транзакції нтували як процент від максимального активуЗаморожені групи клітин з прогону шість були вання еталонною сполукою. Значення наносили розморожені і розширені до прогону 8 перед трана графік як функцію логарифма концентрації нсфекцією. Злиті клітини були трипсинізовані, тест-сполуки. Значення EC50 оцінювали лінійною промиті і гранульовані у центрифузі при 270хg інтерполяцією між точками даних і обчисленням протягом 2хвил. Клітинні гранули були ресуспенконцентрації, потрібної для одержання 50% макдовані у холодному БФФР (буферованому фоссимального активування еталонною сполукою. фатом фізіологічному розчині) до концентрації Сполуки формули І мають EC50 нижче клітин приблизно 18 106клітин/мл. Після дода0,5мкмоль/л, а бажані сполуки - нижче вання ДНК суспензію інкубували на льоду протя0,05мкмоль/л для АППР . Сполуки формули І є гом приблизно 5хвил. перед електропорацією при обраною групою сполук, які виявляють більш по230В, 960пкФ у Biorad's Gene Pulser™ у 0,5мл тужну дію на АППР , ніж на ΑΠΠΡ . Вважається, зразках. До кожного зразка були додані 50мкг що таке співвідношення є важливим, оскільки ДНК, включаючи 2,5мкг вектору експресії, 25мкг характеризує фармакологічну активність сполук і репортерного вектора і 22,5мкг неспецифічної їх терапевтичний профіль. ДНК (pBluescript, Stratagene). Крім того, сполуки винаходу мають поліпшені 21 77574 22 якості щодо метаболізму ліків і фармакокінетики, цію на дозу in vivo. Сполуки також мають багатонаприклад, вони виявляють поліпшену метаболіобіцяючий токсикологічний профіль. чну стабільність in vitro, а також сприятливу реак Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601