(1r,4ar,8ar)-1,2,3,4,5,6,7,8-пергідроізохінолін-1- карбоніл-(l)-пролініл- (l)-аргінін альдегід для використання як антитромбового препарату і фармацевтична композиція на його основі

1. (1R, 4aR, 8аР)-1,2,3,4,5,6,7 ,8-пергидроизОхинолин-1 -карбонил-(1_)-пролинил-(1.)-аргинин аль дегид формулы О "и И Ш 3. Соединение по любому из пп. 1 и 2, предназначенное для использования в качестве антитромбового препарата 4 Фармацевтическая композиция, содержащая один или более фармацевтически приемлемых носителей, эксипиентов или разбавителей и активный ингредиент, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента содержит соединение формулы и I CH (СН?) N—с—NH, н где А представляет собой СМ О где А представляет собой Н CfA и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты. 2. Сое динение по п. 1 , я вля ющееся его суль фатом. н Н или его фармацевти чески приемлемые соли и сольваты, в количестве от 0,1 до 20,0 мг/кг. 5 Фармацевтическая композиция по п 4, отличающаяся тем, что в качестве акти вного ин гредиента содержит суль фат упомянутого соединения. со ю ю см со оГ Изобретение касается ингибиторов тромбина, которые являются антикоагулянтами у человека и животных. В частности, оно касается производных дипептида Ьпролин-Ьаргинин-альдегида, обладающих высокой антитромбовой активностью Ингибирование тромбина в настоящее время достигается введением гепаринов и кумаринов Ме ханизм дей ствия эти х препаратов из учае тся. Гепарины вводятся только парентерально и уровни их должны точно контролироваться Кумарины действуют блокированием или ингибированием образования протромбина и требуют некоторого времени для достижения максимальной эффективности. Хо тя и гепари ны . и к ум ар ины я вляются эффек ти вными ан тикоак улян тами , суще ствуе т 32556 необходимость в энтитромбовых препаратах, которые быстро предотвращают образование тромбов, и которые не мешают действию плазмина по растворению существующих тромбов. Настоящ ее изобретение неожиданно обнаруживает, что соединение нас тоящего изобретения является значительно более сильным ингибитором тромбина, чем соответствующий 4aS, 8aS энантиомер. Соответственно, основной целью настоящего изобретения является (1R, 4aR, 8aR)1,2,3,4,5,6,7,8-пергидроизохинолин-1-карбонил(1.)-пролинил-(1-.)-аргинин альдегид, его фармацевтически приемлемые соли и сольваты, которые являются неожиданно более сильными ин* гибиторами тромбина и пригодны в качестве антикоагулянтов и препаратов против тромбоза с эмболией. Предложенное этим изобретением соединение выражается следующей формулой 1 НО Н ^ /^-C—A— CH—(СН2)з~N—с—NHa N =0 н V/ где А представляет собой и его фармацевтически приемлемые нетоксичные соли и сольваты. Пептид, выраженный формулой 1, пригоден как антитромбовый препарат и может быть использован как вспомогательный препарат для активатора плазминогена ткани (tPA), стрептокиназа или урокиназа терапии. Соединение получают обычными методами получения, как описано в патентах: ЕР 0479489А2; США № 6250660; США № 5152566. Например, при взаимодействии Cbz-1,2,3,4,5, 6,7,8-пергидро-1-изохинолинкарбоновой кислоты с эфиром L-пролина образуется эфир Cbz1,2,3,4,5,6,7,8-пергидроизохинолин-1-карбонилРго, Эфирную группу удаляют и Cbz-1,2,3, 4,5,6,7,8-пергидроизохинолин-1-карбонил-Рго взаимодействует с лактамом 1-аргинина до образования СЬ2-1,2,3,4,5,6,7,8-пергидроизохинолин-1-карбонил-Рго-Агд лактама в защищенной по амино группе форме Агд лактамовое кольцо раскрывают восстановлением и снимают защитные группы с аргинин амино и пергидроизохинолинового азота и получают альдегид 1.2,3, 4,5,6,7,8-пергидроизохинолин-1-карбонил-РгоArg. Пептид превращают в подходящую соль, такую как ацетат и сульфат. 1,2,3,4,5,6,7,8-пергидро-1-иэохинолинкарбоновую кислоту легко получают гидрированием 1 -изохинолинкарбоновой кислоты в этаноле или другом пригодном спирте в присутствии 5N соляной кислоты или другой подходящей сильной неорганической кислоты над 5% Rh/АІгОз или на другом подходящем катализаторе при давлении 2 приблизительно от 500 до 1000 фунтов/дюйм и при температуре от приблизительно 30°С до приблизительно 80°С. Эта методика дает возможность получить (1R, 4aS, 8aS)- 1,2,3,4,5,6,7,8-пергидро-1-изохинолинкарбоновую кислоту и (IS, 4aR, 8aR)1,2,3,4,5,6,7,8-пергидро-1-изохинолинкарбоновую кислоту как рацемическую смесь. Индивидуальные энантиомеры могут быть получены разделением рацемата классическими методами. Такие методы включают образование солей с оптически активными кислотами и также разделение с помощью жидкостной хроматографии высокого давления рацемата на хиральной колонке. Термодинамические изомеры, (1R, 4aR, 8aR)-1,2,3,4,5,6,7,8-пергидро-1 -изохинолинкарбоновую кислоту и (1S, 4aS, 8aS)-1,2,3,4,5,6,7,8пергидро-1-изохинолинкарбоновую кислоту, выделяют получением эфиров рацемической смеси с помощью указанных выше методик и реакцией этих э фиров с этилатом натрия в этаноле и затем деэтерификацией результирующей рацемической смеси термодинамических изомеров. Иначе, рацемическая смесь изомеров и рацемическая смесь термодинамических изомеров, в качестве кислот, защищается по амино группе, взаимодействует с про л ином, защищенным по карбоксилу, с образованием дипептида. Диастереоизомеры, образующиеся при взаимодействии с L-пролином, разделяют кристаллизацией. Эфирную группу, защ {*'*ающую карбокси группу пролиновой части дипеыида, затем удаляют (деблокированием или деэтерификацией) и дипептид в форме свободной кислоты взаимодействует с лактамом аргинина. Данный продукт (лактам аргининовый продукт) реагирует с гидридным восстановителем, предпочтительно алюмогидрид лития или три-трет-бутоксиалюмогидрид лития, в инертном рас творителе или смеси растворителей, для восстановления лактамового кольца и получения трипептида в аргинин альдегидной форме. Затем удаляют защитные группы по известным методикам, таким как гидрирование на металлическом катализаторе. Изобретение также предлагает метод для предупреждения образования тромбов у млекопитающих и фармацевтические препараты, пригодные для использования в этом методе. Как показано в формуле 1, асимметрическим центром пролиновой и аргининовой частей является L. Пергидропроизводные, включающие D1,2,3,4,4а,5,6,7,8,8а-декагидроизохинолин-1 -карбонил(пергидроизохинолин-1-карбонил или 1-Piq) и D-1,2,3,4,4а, 5,6,7,8,8а-декагидроизохинолин-3-карбонил(пергидроизохинолин-3-карбонил или 3-Piq) производную Pro-Arg-H приведены ниже: 32556 C-LPro2 N-H N-H t - Pi q C-L-Pro~LArg-H О 3-Piq Пергидролроизводные могут существова ть как цис или транс стереоизомеры. Например, следующая пара стереоизомеров, идентифицируемая как цис-, может быть образована для D-пергидроизохинолин-1 -карбони л-1_-пролин-1_-аргинин альдегида: цис -Pro-ArgH -Pro-ArgH [4aR,8aR] [485,835] OProArg-H II О транс C-Pro-Arg-H О [4aS,8aR] [4aR,8aS] Фармацевтически приемлемые соли пептидов изобретения включают соли, образованные с неорганическими или карбоновыми кислотами. Примерами неорганических кислот, образующи х соли, включают галогенводородные кислоты, такие как соляная, бромистоводородная кислоты, фосфорная кислота, серная кислота. Соли карбо* новых кислот образуются с такими кислотами, как уксусная, пропионовая, малоновая, малеиновая, лимонная, янтарная, яблочная, бензойная, фумаровая и др угие подобные карбоно вые кисло ты Соли с кислотами получают обычными методами, например, с помощью нейтрализации соединения 1 в форме свободного основания с кисло той. Предпочтительными солями являются сульфат и гидрохлорид. Как указано выше, настоящее изобретение включает сольваты соединений этого изобретения и их фармацевтически приемлемые соли. Соединение настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемые соли могут образовывать сольваты с водой или обычными органическими 32556 растворителями Такие сольва ты включаются в область настоящего изобретения. Соединение, представленное формулой 1, получают известными методами пептидного синтеза. Согласно одному такому методу, кислота АСООН, где А имеет те же значения, что приведены для формулы 1, а атом азота защищен подходя щей за щи тно й гр уппой для амино гр уппы , взаимодействуе т с пролином, защищенным по карбокси, с образованием дипептид а. Эфирная группа, защи щающая карбоксигруппу пролиновой части продукта, удаляется, и дипептид в форме свободной кислоты взаимодействует с лактамной формой аргинина. Приведенная выше последовательность реакций иллюстрируется следующей схемой: соо АСООН + пролиновый эфир (а) эфир а) деэтери фикация А-{С*0)-Рго-ОН -► А-(С=О)=Рго-Агд(Р) (лактам) (с) Ь) где Р п редста вляе т собо й за щи тн ую гр упп у по амино группе. Полученный Агд(Р) пактам, продукт (с) восстанавливают алюмогидридом лития в инертном растворителе до расщепления лактамового кольца и получения трипептида в аргинин альдегидной форме формулы: BOCNH А(С=Ю)-Рго-Агд(Р)-Н где Arg(P)-H представляет собой защи щенный по амино группе аргинин альдегид Лактамную форму аргинина получают внутримолекулярным связыванием защищенного аргинина {Arg-OH]. Например, Boc-Arg(Cbz)OH , имеющий формулу Boc-NH-CH-(CH 2)3-NH-C(=NH)-NHCbz, I СООН снача ла превра щае тся в активн ую эфирн ую форм у, так ую как смешанны й ангидри д, с хлоро формиа тами , н апример , этилхлор фо рмиат до изоб ути лхло р формиа та . Образова ние эфира выполняется в присутствии тре тично го амина, такого как N-мети лмор фолин. Доба вление сильного тре ти чно го амина , как основания , такого как триэти ламин, осуще ствляет вн утр еннее аци лиро ван ие до получения лак тамной фо рмы диамин о за щи щенно го ар гинина , как показано ниже: C=NH NH-Cbz До проведения взаимодействия с А(С*О)~ Рго-ОН, как показано на приведенной выше схеме, Вое защитную групп у селективно удаляют с трифторуксусной кислотой до получения требуемой свободной амино группы. Связывание АСООН соединения с пролиновым эфиром выполняется после защиты амино группы аминокислоты. Для временной защиты или блокировки амино группы обычно используют стандартные защитные группы для амино групп. Примерами таких защитных групп являются алкокси, алкенилокси, циклоалкокси и арилоксикарбонил группы, такие как этоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил (Вое), циклогексилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, трихлорэтоксикарбонил, бенэилоксикарбонил (Cbz), дифенилметоксикарбонил и другое подобные группы. Эфирные группы, пригодные для защиты карбокси группы лролина при проведении реакции, могут быть любыми из обычно используемых, легко уда 32556 ляемых фупп, таких как трет-бутил, бензил, р-нитробензил, р-метоксибензил, дицЬенилметил, трихлорзтил, фенацил или триалкилсилил эфиры. При выполнении реакции взаимодействия используют такую эфирную фуппу для пролина, которая удаляется в условия, при которых защитная фуппа амино фуппы остается нетронутой. Защитная фуппа амино фуппы ацилирующей кислоты АСООН, таким образом, остается на месте для защиты амино фуппы при последующем превращении с аргинин лактамным соединением с образованием цЬормы с. Пергидро бицикло фуппы получают гидрированием или частично восстановленных или ненасыщенных кислот по обычным методикам Например, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1 -карбоновая кислота гидрируется над окисью платины в растворителе, таком как этанол или уксусная кислота, до образования пергидро(декагидро)изохинолин-1 -карбоновой кислоты Пергидрокислоты затем используются, как описано выше, при ацилировании пролинового эфира. Примеры таких пергидропроизводных, представленных 4>ормулой 1, представляют собой І\І-(О-декагидроизохинолин-1 -карбонил)^-пролил^-аргинин альдегид и М-(О-декагидроизохинолин-З-карбонил)-Lnponnn-L-apnyiHHH. Описанный выше процесс гидрирования приводит к образованию смеси цис и транс стереоизомеров, что обсуждалось выше здесь, причем цис стереоизомеры образуются в большом количестве Например, соединения включают D -1-(4aS, 8aS) H (L>-Arg -H, D-1 -(4a S, 8aR)-PKHL)-Pro-(L )-Arg-H, 8aS)-PicHL )-Pro-(L)-Arg-H , D-3-(4aS, D -3 -(4aR > 8a R)-Pi q-, D -3 -(4 aS, e a Rb PML b PKH L )-Arg-H и D-3-{4aR, 8aS)-Piq-