Антитіла, що нейтралізують цитомегаловірус людини, та їх застосування

Реферат: Винахід стосується нейтралізуючих антитіл та фрагментів цих антитіл, які виявляють високу ефективність нейтралізації hCMV, де зазначені антитіла та фрагменти антитіл є специфічними по відношенню до одного або комбінації двох чи більше продуктів гена UL hCMV. Винахід також стосується композицій із вказаними антитілами, застосування даних антитіл при виготовленні лікарських засобів, способів інгібування інфекції hCMV. На додаток до цього, винахід стосується виділеної молекули нуклеїнової кислоти, вектору та виділеної клітини. UA 106354 C2 (12) UA 106354 C2 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Дана заявка претендує на пріоритет тимчасової заявки США № 61/081334, поданої 16 липня 2008 р., опис якої цілком включений сюди за посиланням. Відомий рівень техніки Цитомегаловірус людини (лЦМВ) є широко розповсюдженим патогеном, який може викликати важку патологію у дорослих людей із пригніченим імунітетом та при інфікуванні плода, і пов'язаний із хронічними захворюваннями, такими як атеросклероз. лЦМВ інфікує безліч типів клітин, включаючи фібробласти, ендотеліальні, епітеліальні та гематопоетичні клітини [1]. Ослаблені штами лЦМВ, що розводять in vitro, розроблювані як вакцини-кандидати, втратили тропізм до ендотеліальних клітин, зберігши здатність інфікувати фібробласти [2]. Вважається, що клітинний тропізм лЦМВ контролюють два вірусні глікопротеїнових комплекси. Комплекс глікопротеїнів, таких як gH, gL та gO, очевидно, є необхідним для інфікування фібробластів, в той час як комплекс gH, gL та білків, кодованих генами UL131-UL128, бере участь в інфікуванні ендотеліальних клітин, епітеліальних клітин та дендритних клітин [2-8]. Вже налагоджений промисловий випуск гіперімунних глобулінів для профілактики цитомегаловірусної хвороби людей (лЦМВ disease), асоційованої із трансплантацією, і одержані останнім часом дані вказують, що вони мають терапевтичний ефект для вагітних жінок [9]. Такий терапевтичний підхід обмежений низькою кількістю нейтралізуючого антитіла, що може бути перенесена, і тому було б дуже бажано одержати антитіла людини (такі як моноклональні антитіла людини) з високою нейтралізуючою здатністю. Хоча деякі антитіла до gH, gB та генних продуктів UL128 та UL130 продемонстрували in vitro нейтралізуючу активність [7, 10, 11], а антитіло до gH оцінювалося шляхом проведення клінічних випробувань (які були припинені через відсутність терапевтичних ефектів) нейтралізуюча здатність виділених дотепер антитіл є скромною. Нейтралізація цими антитілами спостерігалася при концентрації антитіл в інтервалі значень від 0,5 до 20 мкг/мл. Крім того, сучасні методи типово вимірюють нейтралізуючу здатність анти-лЦМВ антитіл з використанням фібробластів як клітин-мішеней. Однак відомо, що лЦМВ також викликає патологію шляхом інфікування інших типів клітин, таких як ендотеліальні, епітеліальні клітини та лейкоцити. Відомі антитіла до UL128 та UL130 виявляють дуже низьку здатність до нейтралізації інфікування ендотеліальних клітин [7] і, по-видимому, не існує ніяких моноклональних антитіл, здатних з високою ефективністю нейтралізувати інфікування не-фібробластних клітин-мішеней. Таким чином, існує потреба в антитілах, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, зокрема, інфекцію лЦМВ не-фібробластних клітин-мішеней з високою ефективністю, а також у виявленні мішені (мішеней), з якими зв'язуються такі антитіла. Суть винаходу Винахід оснований, частково, на відкритті нових антитіл, які нейтралізують інфекцію лЦМВ з високою ефективністю, а також нових епітопів, з якими зв'язуються антитіла за винаходом. Відповідно, в одному аспекті, винахід передбачає антитіло та його антигензв'язуючі фрагменти, що виявляють високу активність нейтралізації лЦМВ. В одному варіанті здійснення винаходу, винахід передбачає моноклональне антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом білка UL128 лЦМВ, причому антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом, утвореним білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, або білками UL130 та UL131A лЦМВ, причому антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, що містять щонайменше одну послідовність ділянки, яка визначає комплементарність ("CDR"), що має щонайменше 95 % ідентичності послідовності з будь-яким одним з SEQ ID NO: 188-193, 204, 205, 210, 174-177, 149, 178, 65-70, 81-86, 97-102, 129-134, 145-150, 113, 161-164, 1-6, 17-22, 33-38, 49-54, або 114-118, причому антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає CDR1 важкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 188, 174, 65, 81, 97, 129, 145, 113, 1, 17, 33 та 49; CDR2 важкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 189, 204, 175, 66, 82, 98, 130, 146, 161, 2, 2, 18, 34, 50 та 114; та CDR3 важкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 190, 205, 210, 176, 67, 83, 99, 131, 147, 162, 3, 19, 35, 51 та 115, причому антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, що містять CDR1 легкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 191, 177, 68, 84, 100, 132, 148, 163, 4, 20, 36, 52 та 116; CDR2 легкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 192, 149, 69, 85, 101, 133, 5, 21, 37, 53 та 117; та CDR3 легкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 193, 178, 70, 1 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 86, 102, 134, 150, 164, 6, 22, 38, 54 та 118, причому антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, де антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 200, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 201; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 200, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 213; або варіабельну ділянку важкої ланцюги, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 208, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 201; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 208, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 213; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 212, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 201; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 212, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 213; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 184, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 185; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 77, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 78; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 93, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 94; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 109, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 110; або варіабельну ділянку важкої ланцюги, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 141, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 142; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 157, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 158; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 170, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 171; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 13, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 14; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 29, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 30; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 45, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 46; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 61, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 62; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 125, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 126, і де антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У додатковому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які нейтралізують інфекцію ендотеліальних клітин, епітеліальних клітин, клітин сітківки, мієлоїдних клітин, дендритних клітин, фібробластів, або мезенхимних стромальних клітин клінічним ізолятом лЦМВ, де концентрація антитіла, необхідна для 90 % нейтралізації лЦМВ, становить 1,2 мкг/мл чи менше. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які нейтралізують інфекцію ендотеліальних клітин, епітеліальних клітин, клітин сітківки, мієлоїдних клітин, дендритних клітин, фібробластів, або мезенхимних стромальних клітин клінічним ізолятом лЦМВ, де концентрація антитіла, необхідна для 90 % нейтралізації лЦМВ, становить 10 мкг/мл чи менше, і де антитіло не є MSL109 або 8F9. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які містять щонайменше одну CDR послідовність, що має щонайменше 95 % ідентичності послідовності з будь-яким одним з SEQ ID NO: 216-221, 232-235, 149, 236, 246-251, 278-283, 296-301, 312, 316-321, 332, 336-341, 352, 360, 361 або 262-267, де антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які містять CDR1 важкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 216, 232, 246, 278, 296, 316, 336, 352, 360 та 262; CDR2 важкого ланцюга, вибраний з групи, що 2 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 складається з SEQ ID NO: 217, 233, 247, 279, 297, 312, 317, 337 та 263; та CDR3 важкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 218, 234, 248, 280, 298, 318, 332, 338 та 264, де антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які містять CDR1 легкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 219, 235, 249, 281, 299, 319, 339 та 265; CDR2 легкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 220, 149, 250, 282, 300, 320, 340 та 266; та CDR3 легкого ланцюга, вибраний з групи, що складається з SEQ ID NO: 221, 236, 251, 283, 301, 321, 341, 361 та 267, де антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, де антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 228, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 229; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 242, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 243; або варіабельну ділянку важкої ланцюги, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 258, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 259; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 290, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 291; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 294, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 291; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 308, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 309; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 314, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 309; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 328, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 329; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 334, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 329; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 348, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 349; або варіабельну ділянку важкої ланцюги, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 357, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 291; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 367, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 368; або варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 274, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 275, і де антитіло нейтралізує інфекцію лЦМВ. Винахід далі передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, продуковані іморталізованим клоном B-клітин 8I21, 2C12, 8C15, 4N10, 11B12, 3G16, 4H9, 6B4, 10C6 або 6L3, депонованим в Advanced Biotechnology Center (ABC), Largo Rossana Benzi 10, 16132 Genoa (Italy), відповідно до Будапештського договору, 9 липня 2008 р. (під номерами доступу PD 08005, PD 08007, PD 08006, PD 08009, PD 08011, PD 08012, PD 08013, PD 08004, PD 08014 та PD 08010, відповідно), та іморталізованим клоном B-клітин 7H3, депонованим 16 липня 2008 р. під номером доступу PD 08017. Антитіла та їх антигензв'язуючі фрагменти, з такою ж амінокислотною послідовністю, як експресовані вищезгаданими депонованими іморталізованими B-клітинами, також вважаються такими, що входять до обсягу винаходу. В іншому аспекті, винахід передбачає молекулу нуклеїнової кислоти, яка містить полінуклеотид, що кодує антитіло або фрагмент антитіла за винаходом, які нейтралізують інфекцію лЦМВ. У ще одному аспекті, винахід передбачає клітину, що експресує антитіло за винаходом. У ще одному аспекті, винахід передбачає виділений або очищений імуногенний поліпептид, що містить епітоп, який зв'язується з антитілом за винаходом. Винахід далі передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент, молекулу нуклеїнової кислоти за винаходом або імуногенний поліпептид за винаходом, та фармацевтично прийнятний розріджувач або носій. Винахід також передбачає фармацевтичну композицію, що містить перше антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент та друге антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, де перше антитіло є антитілом за винаходом, і друге антитіло є антитілом, яке нейтралізує інфекцію лЦМВ. Використання антитіла за винаходом або його антигензв'язуючого фрагмента, нуклеїнової 3 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кислоти за винаходом, імуногенного поліпептиду за винаходом або фармацевтичної композиції за винаходом (i) у виробництві лікарського засобу для лікування інфекції лЦМВ, (ii) у вакцині, або (iii) при діагностиці інфекції лЦМВ також вважається таким, що входить до обсягу винаходу. Далі, використання антитіла за винаходом або його антигензв'язуючого фрагмента для контролю якості анти-лЦМВ вакцин шляхом перевірки присутності в антигені зазначеної вакцини специфічного епітопа із правильною конформацією також вважається таким, що входить до обсягу винаходу. У наступному аспекті, винахід передбачає епітоп, який специфічно зв'язується з будь-яким антитілом за винаходом або його антигензв'язуючим фрагментом, для використання (i) у терапії, (ii) у виробництві лікарського засобу для лікування інфекції лЦМВ, (iii) як вакцини, або (iv) при скринінгу лігандів, здатних нейтралізувати інфекцію лЦМВ. Короткий опис креслень Фігура 1 зображує фарбування клітин HEK293T, трансфекованих генами лЦМВ UL128, UL130, UL131A, gH та gL, окремо або в різних комбінаціях, типовими моноклональними антитілами (15D8, 2C12 та 8I21). Фігура 2 зображує експерименти з перехресної конкурентності, у яких клітини HEK293T, трансфековані геном лЦМВ gH (A) або gB (B), спочатку інкубують з неміченим антитіломконкурентом, а потім офарблюють біотинильованим анти-gh або анти-gb антитілом. Фігура 3 зображує фарбування клітин HEK293T, що експресують ген UL128 VR1814 дикого типу або пан-мутований (pan-mutated) ген UL128, моноклональним антитілом 15D8 людини та неконкурентним анти-UL128 мишачим моноклональним антитілом. Пан-мутований ген UL128 містить заміщення послідовності VR1814 дикого типу відомими варіантами, описаними для інших клінічних ізолятів та лабораторних штамів лЦМВ. Детальний опис винаходу Винахід оснований, частково, на відкритті нових антитіл, які нейтралізують інфекцію лЦМВ з високою ефективністю, а також нових епітопів, з якими зв'язуються антитіла за винаходом. Такі антитіла є бажаними, оскільки для нейтралізації певної кількості вірусу будуть потрібні лише низькі їх концентрації. Це сприяє досягненню високих рівнів захисту при введенні менших кількостей антитіл. Відповідно, в одному аспекті, винахід передбачає нейтралізуюче антитіло та його антигензв'язуючі фрагменти, що володіють високою ефективністю нейтралізації інфекції лЦМВ. Моноклональні антитіла людини та іморталізовані клони B-клітин, що секретують такі антитіла, також включені до обсягу винаходу. У використовуваному тут значенні, терміни "фрагмент, ” "антигензв'язуючий фрагмент" та "фрагмент антитіла" використовуються взаємозамінно для позначення будь-якого фрагмента антитіла за винаходом, який зберігає антигензв'язуючую активність антитіл. Типові приклади фрагментів антитіл включають, без обмежень, одноланцюгове антитіло, Fab, Fab", F(ab')2, Fv або scFv. У використовуваному тут значенні, термін "висока ефективність" використовується для опису антитіла за винаходом або його антигензв'язуючого фрагмента, які нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC90 менше приблизно 2 мкг/мл, (тобто, концентрація антитіла, необхідна для 90 % нейтралізації клінічного ізоляту лЦМВ, становить приблизно 2 мкг/мл чи менше, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1 або 1,05 мкг/мл чи менше). В одному варіанті здійснення, антитіло за даним винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент мають IC90, що дорівнює 1 мкг/мл чи менше (тобто, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,05, 0,01 мкг/мл чи менше). В іншому варіанті здійснення, антитіло за даним винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент має IC90, що дорівнює 0,16 мкг/мл чи менше (тобто, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002 мкг/мл чи менше). В іншому варіанті здійснення, антитіло може нейтралізувати інфекцію лЦМВ при концентрації, рівній 0,016 мкг/мл чи менше (тобто, при 0,015, 0,013, 0,01, 0,008, 0,005, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше). Це означає, що дуже низькі концентрації антитіла необхідні для 90 % нейтралізації клінічного ізоляту лЦМВ in vitro у порівнянні з концентрацією відомих антитіл, таких як MSL-109, 8F9 або 3E3, необхідною для нейтралізації такого ж титру лЦМВ. Ефективність може бути виміряна за допомогою стандартного аналізу нейтралізації, відомого фахівцям. В одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло, наприклад, моноклональне антитіло або моноклональне антитіло людини або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом білка UL128 лЦМВ, та нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC 90 менше приблизно 2 мкг/мл, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше. 4 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом, утвореним білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, та нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC90 менше приблизно 2 мкг/мл, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом, утвореним білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, та нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC90 менше приблизно 2 мкг/мл, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом, утвореним білками UL130 та UL131A лЦМВ, та нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC90 менше приблизно 2 мкг/мл, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом білка gH лЦМВ та нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC 90 менше приблизно 2 мкг/мл, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом білка gB лЦМВ та нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC 90 менше приблизно 2 мкг/мл, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які зв'язуються з епітопом, утвореним білками gM та gN лЦМВ та нейтралізують інфекцію лЦМВ з IC90 менше приблизно 2 мкг/мл, наприклад, 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 мкг/мл чи менше. Антитіла за винаходом Винахід передбачає антитіла, що виявляють особливо високу ефективність нейтралізації лЦМВ. У використовуваному тут значенні, "антитіло, що нейтралізує", є антитілом, яке запобігає, знижує, затримує або перешкоджає здатності патогену, наприклад, лЦМВ, ініціювати та/або підтримувати інфекцію у хазяїні. Антитіла за винаходом та їх антигензв'язуючі фрагменти здатні нейтралізувати інфекцію лЦМВ декількох видів клітин. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом нейтралізує інфекцію епітеліальних клітин, клітин сітківки, ендотеліальних клітин, мієлоїдних клітин та дендритних клітин. Антитіла за винаходом можуть також нейтралізувати інфекцію лЦМВ фібробластів та мезенхимних стромальних клітин. Такі антитіла можуть бути використані як профілактичні або терапевтичні агенти у відповідних рецептурах композицій або як діагностичні засоби, як описано тут. Антитіла за винаходом можуть бути моноклональними антитілами, антитілами людини або рекомбінантними антитілами. В одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом є моноклональними антитілами, наприклад, моноклональними антитілами людини. Винахід також передбачає фрагменти антитіл за винаходом, зокрема, фрагменти, які зберігають антигензв'язуючу активність антитіл та нейтралізують інфекцію лЦМВ. Хоча опис, включаючи формулу винаходу, може, у деяких місцях, прямо вказувати на фрагмент(и) антитіла, варіант(и) та/або похідне (похідні) антитіл, слід розуміти, що термін "антитіло" або "антитіло за винаходом" включає всі категорії антитіл, а саме, фрагмент(и) антитіла, варіант(и) та похідне (похідні) антитіл. В одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом та їх антигензв'язуючі фрагменти зв'язуються з одним чи декількома білками лЦМВ. Антитіла за винаходом можуть зв'язуватися з епітопом, утвореним одним білком лЦМВ або комбінацією двох чи більше білків лЦМВ. Типові приклади білків лЦМВ включають, без обмежень, продукти вірусних генів UL55 (глікопротеїн оболонки B, "gB"), UL75 (глікопротеїн оболонки H, "gH"), UL100 (глікопротеїн M, "gM"), UL73 (глікопротеїн N, "gN"), UL115 (глікопротеїн L, "gL"), UL74 (глікопротеїн O, "gO"), UL128 5 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 (глікопротеїн UL128, "UL128"), UL130 (глікопротеїн UL130, "UL130") або UL131A (глікопротеїн UL131A, "UL131A"). В одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом зв'язуються з епітопом, утвореним одним білком лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, антитіла зв'язуються з епітопом, утвореним комбінацією 2, 3 чи більше білків лЦМВ. У типовому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або фрагмент антитіла, які зв'язуються з епітопом білка UL128 лЦМВ або з епітопом, утвореним білками UL130 та UL131A лЦМВ, або з епітопом, утвореним білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, або з епітопом, утвореним білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, або з епітопом білка gH лЦМВ або білка gB лЦМВ, або с епітопом, утвореним білками gM та gN лЦМВ. В одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або фрагмент антитіла, які зв'язуються з епітопом UL128. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або фрагмент антитіла, які зв'язуються з епітопом, утвореним UL130 та UL131A. У використовуваному тут значенні, епітоп, утворений UL130 та UL131A, означає, що епітоп може бути утворений обома білками UL130 та UL131A або може бути утворений одним із двох білків, причому присутність іншого білка є необхідною для зв'язування антитіла. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або фрагмент антитіла, які зв'язуються з епітопом, утвореним UL128, UL130 та UL131A. У використовуваному тут значенні, епітоп, утворений UL128, UL130 та UL131A, означає, що епітоп може бути утворений усіма трьома білками (UL128, UL130 та UL131A) або може бути утворений одним білком чи декількома білками, причому присутність іншого білка (білків) є необхідною для зв'язування антитіла. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або фрагмент антитіла, які зв'язуються з епітопом, утвореним gH, gL, UL128 та UL130. У використовуваному тут значенні, епітоп, утворений gH, gL, UL128 та UL130, означає, що епітоп може бути утворений усіма чотирма білками (gh, gL, UL128 та UL130) або може бути утворений одним білком чи декількома із чотирьох білків, причому присутність іншого білка (білків) є необхідною для зв'язування антитіла. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає антитіло або фрагмент антитіла, які зв'язуються з епітопом, утвореним gM та gN. У використовуваному тут значенні, епітоп, утворений gM та gN означає, що епітоп може бути утворений обома gM та gN або може бути утворений одним із двох білків, причому присутність іншого білка є необхідною для зв'язування антитіла. Були визначені послідовності важких ланцюгів та легких ланцюгів декількох типових прикладів антитіл за винаходом, кожне з яких містить три CDR у важкому ланцюзі та три CDR у легкому ланцюзі. Положення амінокислот CDR визначалися відповідно до системи нумерації IMGT [12, 13, 14]. Послідовності CDR, важких ланцюгів, легких ланцюгів, а також послідовностей молекул нуклеїнових кислот, що кодують CDR, важкі ланцюги, легкі ланцюги, розкриті в переліку послідовностей. Таблиця 1 вказує SEQ ID NO. для послідовностей шести CDR типових прикладів антитіл за винаходом. Таблиці 2 та 3 вказують SEQ ID NO для послідовностей важких та легких ланцюгів, відповідно, типових прикладів антитіл за винаходом, і Таблиця 4 вказує SEQ ID NO для послідовностей молекул нуклеїнових кислот, що кодують CDR, важкі ланцюги та легкі ланцюги антитіл. Таблиця 1 Антитіло 15D8 15D8 варіант 1 15D8 варіант 2 4N10 10F7 10P3 4I22 8L13 2C12 8C15 9I6 7B13 8J16 8I21 7I13 SEQ ID NO. CDRH1, CDRH3, CDRH3 188, 189, 190 188, 204, 205 188, 189, 210 1, 2, 3 17, 18, 19 33, 34, 35 49, 50, 51 113, 114, 115 65, 66, 67 81, 82, 83 97, 98, 99 129, 130, 131 145, 146, 147 174, 175, 176 113, 161, 162 6 SEQ ID NO. CDRL1, CDRL2, CDRL3 191, 192, 193 191, 192, 193 191, 192, 193 4, 5, 6 20, 21, 22 36, 37, 38 52, 53, 54 116, 117, 118 68, 69, 70 84, 85, 86 100, 101, 102 132, 133, 134 148, 149, 150 177, 149, 178 163, 149, 164 UA 106354 C2 Продовження таблиці 1 Антитіло 7H3 7H3 варіант 1 6B4 5F1 10C6 4H9 4H9 варіант 1 11B12 13H11 3G16 2B11 6L3 SEQ ID NO. CDRH1, CDRH3, CDRH3 316, 317, 318 316, 317, 332 336, 337, 338 278, 279, 280 352, 279, 280 296, 297, 298 296, 312, 298 232, 233, 234 216, 217, 218 246, 247, 248 360, 279, 280 262, 263, 264 SEQ ID NO. CDRL1, CDRL2, CDRL3 319, 320, 321 319, 320, 321 339, 340, 341 281, 282, 283 281, 282, 283 299, 300, 301 299, 300, 301 235, 149, 236 219, 220, 221 249, 250, 251 281, 282, 361 265, 266, 267 Таблиця 2 Антитіло 15D8 15D8 варіант 1 15D8 варіант 2 4N10 10F7 10P3 4I22 8L13 2C12 8C15 9I6 7B13 8J16 8I21 7I13 7H3 7H3 варіант 1 6B4 5F1 5F1 варіант 1 10C6 4H9 4H9 варіант 1 11B12 13H11 3G16 2B11 6L3 SEQ ID NO. важких ланцюгів 200 208 212 13 29 45 61 125 77 93 109 141 157 184 170 328 334 348 290 294 357 308 314 242 228 258 367 274 7 UA 106354 C2 Таблиця 3 Антитіло 15D8 15D8 варіант 1 15D8 варіант 2 4N10 10F7 10P3 4I22 8L13 2C12 8C15 9I6 7B13 8J16 8I21 7I13 7H3 7H3 варіант 1 6B4 5F1 5F1 варіант 1 10C6 4H9 4H9 варіант 1 11B12 13H11 3G16 2B11 6L3 SEQ ID NO. легких ланцюгів 201 201 213 14 30 46 62 126 78 94 110 142 158 185 171 329 329 349 291 291 291 309 309 243 229 259 368 275 Таблиця 4 Антитіло 15D8 4N10 10F7 10P3 4I22 8L13 2C12 8C15 9I6 7B13 8J16 8I21 7I13 7H3 6B4 5F1 10C6 4H9 11B12 13H11 3G16 2B11 6L3 5 SEQ ID NO. нуклеїнових кислот, що кодують CDR, важких ланцюгів, легких ланцюгів та варіантів (CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, CDRL3 та варіанти; важкий ланцюг та варіанти; і легкі ланцюги та варіанти) 194-199 та 206, 207, 211; 202 та 209, 214; 203 та 215 7-12; 15; 16 23-28; 31; 32 39-44; 47; 48 55-60; 63; 64 119-124; 127; 128 71-76; 79; 80 87-92; 95; 96 103-108, 111, 112 135-140; 143; 144 151-156; 159; 160 179-182,155,183; 186; 187 165, 166, 167, 168, 155, 169; 172; 173 322-327 та 333; 330 та 335; 331 342-347; 350; 351 284-289; 292 та 295; 293 353-355, 287, 288, 356; 358; 359 302-307 та 313; 310 та 315; 311 237-240, 155, 241; 244; 245 222-227; 230; 231 252-257; 260; 261 362-364; 287, 365, 366; 369; 370 268-273; 276; 277 В одному варіанті здійснення, антитіла або фрагменти антитіл за винаходом містять один чи декілька важких або легких ланцюгів CDR типових прикладів антитіл за винаходом. У типовому 8 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіанті здійснення, антитіла або фрагменти антитіл за винаходом містять амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 188-193, 204-205, 210, 1-6, 17-22, 33-38, 49-54, 113-118, 65-70, 81-86, 97-102, 129-134, 145-150, 174-178 та 161-164. В іншому варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність однієї чи декількох з SEQ ID NO: 188-190, 204, 205, 210, 1-3, 17-19, 33-35, 49-51, 113-115, 65-67, 81-83, 97-99, 129-131, 145-147, 174-176, 161 або 162. Наприклад, антитіла за винаходом містять важкий ланцюг, що містить SEQ ID NO: 188 як CDRH1, SEQ ID NO: 189 як CDRH2, SEQ ID NO: 190 як CDRH3; SEQ ID NO: 188 як CDRH1, SEQ ID NO; 204 як CDRH2, SEQ ID NO: 205 як CDRH3; SEQ ID NO; 188 як CDRH1, SEQ ID NO: 189 як CDRH2, SEQ ID NO: 210 як CDRH3; SEQ ID NO: 1 як CDRH1, SEQ ID NO: 2 як CDRH2, SEQ ID NO: 3 як CDRH3; SEQ ID NO; 17 як CDRH1, SEQ ID NO; 18 як CDRH2, SEQ ID NO: 19 як CDRH3; SEQ ID NO: 33 як CDRH1, SEQ ID NO: 34 як CDRH2, SEQ ID NO: 35 як CDRH3; SEQ ID NO 49 як CDRH1, SEQ ID NO: 50 як CDRH2, SEQ ID NO: 51 як CDRH3; SEQ ID NO: 113 як CDRH1, SEQ ID NO: 114 як CDRH2, SEQ ID NO: 115 як CDRH3; SEQ ID NO: 65 як CDRH1, SEQ ID NO: 66 як CDRH2, SEQ ID NO: 67 як CDRH3; SEQ ID NO: 81 як CDRH1, SEQ ID NO 82 як CDRH2, SEQ ID NO: 83 як CDRH3; SEQ ID NO: 97 як CDRH1, SEQ ID NO: 98 як CDRH2, SEQ ID NO: 99 як CDRH3; SEQ ID NO: 129 як CDRH1, SEQ ID NO: 130 як CDRH2, SEQ ID NO: 131 як CDRH3; SEQ ID NO: 145 як CDRH1, SEQ ID NO: 146 як CDRH2, SEQ ID NO: 147 як CDRH3; SEQ ID NO: 174 як CDRH1, SEQ ID NO: 175 як CDRH2, SEQ ID NO: 176 як CDRH3; та SEQ ID NO: 113 як CDRH1, SEQ ID NO: 161 як CDRH2, SEQ ID NO: 162 як CDRH3. У ще одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність однієї чи декількох з SEQ ID NO: 191-193, 4-6, 20-22, 36-38, 52-54, 116-118, 68-70, 84-86, 100-102, 132-134, 148-150, 177, 178, 163 або 164. Наприклад, антитіла за винаходом містять легкий ланцюг, що містить SEQ ID NO: 191 як CDRL1, SEQ ID NO: 192 як CDRL2; SEQ ID NO: 193 як CDRL3; SEQ ID NO: 4 як CDRL1, SEQ ID NO: 5 як CDRL2 та SEQ ID NO: 6 як CDRL3; SEQ ID NO: 20 як CDRL1, SEQ ID NO: 21 як CDRL2, SEQ ID NO: 22 як CDRL3; SEQ ID NO; 36 як CDRL1, SEQ ID NO: 37 як CDRL2, SEQ ID NO: 38 як CDRL3; SEQ ID NO: 52 як CDRL1, SEQ ID NO: 53 як CDRL2, SEQ ID NO: 54 як CDRL3; SEQ ID NO: 116 як CDRL1, SEQ ID NO: 117 як CDRL2, SEQ ID NO: 118 як CDRL3; SEQ ID NO: 68 як CDRL1, SEQ ID NO: 69 як CDRL2, SEQ ID NO: 70 як CDRL3; SEQ ID NO 84 як CDRL1, SEQ ID NO: 85 як CDRL2, SEQ ID NO: 86 як CDRL3; SEQ ID NO: 100 як CDRL1, SEQ ID NO: 101 як CDRL2, SEQ ID NO: 102 як CDRL3; SEQ ID NO: 132 як CDRL1, SEQ ID NO: 133 як CDRL2, SEQ ID NO: 134 як CDRL3; SEQ ID NO: 148 як CDRL1, SEQ ID NO: 149 як CDRL2, SEQ ID NO: 150 як CDRL3; SEQ ID NO: 177 як CDRL1, SEQ ID NO: 149 як CDRL2, SEQ ID NO: 178 як CDRL3; SEQ ID NO: 163 як CDRL1, SEQ ID NO: 149 як CDRL2 та SEQ ID NO: 164 як CDRL3. У ще одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, щонайменше на 70 % ідентичною SEQ ID NO: 200, 208, 212, 13, 29, 45, 61, 125, 77, 93, 109, 141, 157, 184 або 170, та нейтралізують інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом білка UL128 лЦМВ та містить важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 % ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 200, 208 або 212, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає важкий ланцюг, що має послідовність, описану в SEQ ID NO: 200, 208 або 212, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками UL130 та UL131A лЦМВ, та містить важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або по меншій мері на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 13, 29, 45, 61 або 125, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає важкий ланцюг, що має послідовність, описану в SEQ ID NO: 13, 29, 45, 61 або 125, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, та містить важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 77, 93, 109, 141, 157 або 170, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає важкий ланцюг, що має послідовність, описану в SEQ ID NO: 77, 93, 109, 141, 157 або 170, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. 9 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У додатковому варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, та містить важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 184, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає важкий ланцюг, що має послідовність, описану в SEQ ID NO: 184, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, щонайменше на 70 % ідентичною SEQ ID NO: 201, 213, 14, 30, 46, 62, 126, 78, 94, 110, 142, 158, 185 або 171, та нейтралізують інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом білка UL128 лЦМВ, та містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 201 або 213, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає легкий ланцюг, що має послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 201 або 213, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками UL130 та UL131A лЦМВ, та містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або по меншій мері на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62 або 126, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає легкий ланцюг, що має послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62 або 126, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, та містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 78, 94, 110, 142, 158 або 171, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає легкий ланцюг, що має послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 78, 94, 110, 142, 158 або 171, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. У додатковому варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, та містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 185, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає легкий ланцюг, що має послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 185, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, антитіла або фрагменти антитіл за винаходом містять один чи декілька важких або легких ланцюгів CDR типових прикладів антитіл за винаходом. У типовому варіанті здійснення, антитіла або фрагменти антитіл за винаходом містять амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 316-321, 332, 336-341, 278-283, 352, 296-301, 312, 232-236, 149, 216-221, 246-251, 360, 361 та 262-267, та нейтралізують інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність однієї чи декількох з SEQ ID NO: 316-318, 332, 336-338, 278-280, 352, 296-298, 312, 232-234, 216-218, 246-248, 360, 361 та 262-264. Наприклад, антитіла за винаходом містять важкий ланцюг, що містить SEQ ID NO: 316 як CDRH1, SEQ ID NO: 317 як CDRH2, SEQ ID NO: 318 як CDRH3; SEQ ID NO: 316 як CDRH1, SEQ ID NO: 317 як CDRH2 та SEQ ID NO: 332 як CDRH3; SEQ ID NO: 336 як CDRH1, SEQ ID NO: 337 як CDRH2, SEQ ID NO: 338 як CDRH3; SEQ ID NO: 278 як CDRH1, SEQ ID NO: 279 як CDRH2, SEQ ID NO: 280 як CDRH3; SEQ ID NO: 352 як CDRH1, SEQ ID NO: 279 як CDRH2, SEQ ID NO: 280 як CDRH3; SEQ ID NO: 296 як CDRH1, SEQ ID NO: 297 як CDRH2, SEQ ID NO: 298 як CDRH3; SEQ ID NO: 296 як CDRH1, SEQ ID NO: 312 як CDRH2, SEQ ID NO: 298 як CDRH3; SEQ ID NO: 232 як CDRH1, SEQ ID NO: 233 як CDRH2, SEQ ID NO: 234 як CDRH3; SEQ ID NO: 216 як CDRH1, SEQ ID NO: 217 як CDRH2, SEQ ID NO: 218 як CDRH3; SEQ ID NO: 246 як CDRH1, SEQ ID NO: 247 як CDRH2, SEQ ID NO: 248 як CDRH3; та SEQ ID NO: 360 як CDRH1, SEQ ID NO: 279 як CDRH2, SEQ ID NO: 280 як CDRH3; та SEQ ID NO: 262 як CDRH1, SEQ ID NO: 263 як CDRH2, SEQ ID NO: 264 як CDRH3. У ще одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять легкий ланцюг, що містить 10 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 амінокислотну послідовність однієї чи декількох з SEQ ID NO: 319-321, 339-341, 281-283, 299301, 149, 235, 236, 219-221, 249-251, 265-267. Наприклад, антитіла за винаходом містять легкий ланцюг, що містить SEQ ID NO: 319 як CDRL1, SEQ ID NO: 320 як CDRL2, SEQ ID NO: 321 як CDRL3; SEQ ID NO: 339 як CDRL1, SEQ ID NO: 340 як CDRL2, SEQ ID NO: 341 як CDRL3; SEQ ID NO: 281 як CDRL1, SEQ ID NO: 282 як CDRL2, SEQ ID NO: 283 як CDRL3; SEQ ID NO: 299 як CDRL1, SEQ ID NO: 300 як CDRL2, SEQ ID NO: 301 як CDRL3; SEQ ID NO: 235 як CDRL1, SEQ ID NO: 149 як CDRL2, SEQ ID NO: 236 як CDRL3; SEQ ID NO: 219 як CDRL1, SEQ ID NO: 220 як CDRL2, SEQ ID NO: 221 як CDRL3; SEQ ID NO: 249 як CDRL1, SEQ ID NO: 250 як CDRL2, SEQ ID NO: 251 як CDRL3; та SEQ ID NO: 281 як CDRL1, SEQ ID NO: 282 як CDRL2, SEQ ID NO: 361 як CDRL3; та SEQ ID NO: 265 як CDRL1, SEQ ID NO: 266 як CDRL2, SEQ ID NO: 267 як CDRL3. У додатковому варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять важкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, щонайменше на 70 % ідентичною SEQ ID NO: 328, 334, 348, 290, 294, 357, 308, 314, 242, 228, 258, 367 або 274, та нейтралізують інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом білка gB лЦМВ та містить важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 328, 334, 348, 290, 294, 308, 357, 314 або 367, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає важкий ланцюг, що має послідовність, описану в SEQ ID NO: 328, 334, 348, 290, 294, 308, 357, 314 або 367, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом білка gH лЦМВ та містить важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 242, 228 або 258, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає важкий ланцюг, що має послідовність, описану в SEQ ID NO: 242, 228 або 258, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками gM та gN лЦМВ, та містить важкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 274, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає важкий ланцюг, що має послідовність, описану в SEQ ID NO: 274, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. У ще одному варіанті здійснення, антитіла за винаходом містять легкий ланцюг з амінокислотною послідовністю, щонайменше на 70 % ідентичною SEQ ID NO: 329, 349, 291, 309, 243, 229, 259, 368 або 275, та нейтралізують інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом білка gB лЦМВ та містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 329, 349, 291, 309 або 368, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає легкий ланцюг, що має послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 329, 349, 291, 309 або 368, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення,антитіло зв'язується з епітопом білка gH лЦМВ та містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 243, 229 або 259, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає легкий ланцюг, що має послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 243, 229 або 259, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В іншому варіанті здійснення, антитіло зв'язується з епітопом, утвореним білками gM та gN лЦМВ, та містить легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, щонайменше на 70 %, щонайменше на 75 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 98 %, або щонайменше на 99 %, ідентичну амінокислотній послідовності SEQ ID NO: 275, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом передбачає легкий ланцюг, що має послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 275, та нейтралізує інфекцію лЦМВ. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом не є MSL-109, 8F9, 3E3 або R551A. В 11 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом не є 1F11, 2F4, 5A2 або 6G4, розкритими в заявках США №№ 11/969104 та 12/174568. Типові приклади антитіл за винаходом включають, без обмежень, 15D8, 4N10, 10F7, 10P3, 4I22, 8L13, 2C12, 8C15, 9I6, 7B13, 8J16, 8I21, 7I13, 7H3, 6B4, 5F1, 10C6, 4H9, 2B11, 11B12, 13H11, 3G16 та 6L3. Варіанти 15D8, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, складаються з варіанта важкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 208 ("15D8 варіант 1") та SEQ ID NO: 212 ("15D8 варіант 2"), та легкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 213 (15D8 варіант 2). Послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують варіанти важкого ланцюга, описані в SEQ ID NO: 209 (15D8 варіант 1) та SEQ ID NO: 214 (15D8 варіант 2). Нуклеїнова кислота, що кодує варіант легкого ланцюга, описана в SEQ ID NO: 215 (15D8 варіант 2). Таким чином, антитіла, що містять 15D8 варіанти важкого ланцюга (SEQ ID NO: 208, 212) та варіант легкого ланцюга (SEQ ID NO: 213), які нейтралізують інфекцію лЦМВ, включені до обсягу винаходу. У використовуваному тут значенні, термін "15D8" використовується для позначення будьякого та/або всіх варіантів 15D8, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, наприклад, з важкими ланцюгами, що відповідають SEQ ID NO: 208 та 212, та легкими ланцюгами, що відповідають SEQ ID NO; 213. Варіант 7H3, що нейтралізує інфекцію лЦМВ, складається з важкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 334 ("7H3 варіант 1"). Послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує варіант важкого ланцюга, описана в SEQ ID NO: 335. Таким чином, антитіла, що містять варіант 7H3 важкого ланцюга (SEQ ID NO: 334), які нейтралізують інфекцію лЦМВ, включені до обсягу винаходу. У використовуваному тут значенні, термін "7H3" використовується для позначення будьякого та/або всіх варіантів 7H3, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, наприклад, з важкими ланцюгами, що відповідають SEQ ID NO:334. Варіант 5F1, що нейтралізує інфекцію лЦМВ, складається з важкого ланцюга, що має амінокислотну послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 294 ("5F1 варіант 1"). Послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує варіант важкого ланцюга, описана в SEQ ID NO: 295. Таким чином, антитіла, що містять варіант 5F1 важкого ланцюга (SEQ ID NO: 294), які нейтралізують інфекцію лЦМВ, включені до обсягу винаходу. У використовуваному тут значенні, термін "5F1" використовується для позначення будьякого та/або всіх варіантів 5F1, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, наприклад, з важкими ланцюгами, що відповідають SEQ ID NO:294. Варіант 4H9, що нейтралізує інфекцію лЦМВ, складається з важкого ланцюга, який має амінокислотну послідовність, зазначену в SEQ ID NO: 314 ("4H9 варіант 1"). Послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує варіант важкого ланцюга, описана в SEQ ID NO: 315. Таким чином, антитіла, що містять варіант 4H9 важкого ланцюга (SEQ ID NO: 314), які нейтралізують інфекцію лЦМВ, включені до обсягу винаходу. У використовуваному тут значенні, термін "4H9" використовується для позначення будьякого та/або всіх варіантів 4H9, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, наприклад, з важкими ланцюгами, що відповідають SEQ ID NO:314. В одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 15D8, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 15D8 варіант 1, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 15D8 варіант 2, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. У ще одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 8I21, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. У ще одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 4N10, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 10F7, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 10P3, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі 12 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR антитіла 4I22, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людинихазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 8L13, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. У ще одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 2C12, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 8C15, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 9I6, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 7B13, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людинихазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 8J16, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 7I13, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. У ще одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 7H3, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 7H3 варіант 1, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 6B4, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 5F1, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людинихазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 10C6, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 4H9, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 4H9 варіант 1, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 2B11, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. У ще одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 11B12, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 13H11, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. В іншому варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 3G16, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. У ще одному варіанті здійснення, антитіло за винаходом або його антигензв'язуючий фрагмент містять усі CDR антитіла 6L3, зазначені в Таблиці 1, та нейтралізують інфекцію лЦМВ в організмі людини-хазяїна. Винахід далі передбачає антитіло або його фрагмент, які зв'язуються з епітопом, здатним зв'язуватися з антитілом за винаходом або антитілом, що конкурує із антитілом за винаходом. Антитіла за винаходом також включають гібридні молекули антитіл, які містять один чи декілька CDR з антитіла за винаходом та один чи декілька CDR з іншого антитіла до цього ж епітопа. В одному варіанті здійснення, такі гібридні антитіла містять три CDR з антитіла за винаходом та три CDR з іншого антитіла до цього ж епітопа. Типові приклади гібридних антитіл містять i) три легкі ланцюги CDR з антитіла за винаходом та три важкі ланцюги CDR з іншого антитіла до цього ж епітопа, або ii) три важкі ланцюги CDR з антитіла за винаходом та три легкі ланцюги CDR з іншого антитіла до цього ж епітопа. В іншому аспекті, винахід також включає послідовності нуклеїнових кислот, що кодують частину або всі легкі та важкі ланцюги та CDR антитіл за даним винаходом. В одному варіанті здійснення, послідовності нуклеїнових кислот відповідно до винаходу включають послідовності нуклеїнових кислот, що мають щонайменше 70 %, щонайменше 75 %, щонайменше 80 %, 13 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 щонайменше 85 %, щонайменше 90 %, щонайменше 95 %, щонайменше 98 % або щонайменше 99 % ідентичності з нуклеїновими кислотами, що кодують важкий або легкий ланцюг антитіла за винаходом. В іншому варіанті здійснення, послідовність нуклеїнової кислоти за винаходом має послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує важкий або легкий ланцюг CDR антитіла за винаходом. Наприклад, послідовність нуклеїнової кислоти відповідно до винаходу передбачає послідовність, яка щонайменше на 75 % ідентична послідовності нуклеїнової кислоти SEQ ID NO: 7-12, 15, 16, 23-28, 31, 32, 39-44, 47, 48, 55-60, 63, 64, 71-76, 79, 80, 87-92, 95, 96, 103-108, 111, 112, 119-124, 127, 128, 135-140, 143, 144, 151-156, 159, 160, 165-169, 172, 173, 179-183, 186, 187, 194-199, 202, 203, 206, 207, 209, 211, 214, 215, 222-227, 230, 231, 237-241, 244, 245, 252-257, 260, 261, 268-273, 276, 277, 284-289, 292, 293, 295, 302-307, 310, 311, 313, 315, 322327, 330, 331, 333, 335, 342-347, 350, 351, 353-356, 358, 359, 362-364, 365, 366, 369 та 370. В одному варіанті здійснення, послідовність нуклеїнової кислоти відповідно до винаходу передбачає послідовність, яка щонайменше на 80 %, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 97 %, щонайменше на 98 % або щонайменше на 99 % ідентична послідовності нуклеїнової кислоти вищевказаних SEQ ID NO. Внаслідок надмірності генетичного коду будуть існувати варіанти таких послідовностей, що кодують такі ж самі амінокислотні послідовності. Ці варіанти включені до обсягу винаходу. Варіанти антитіл, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, також включені до обсягу винаходу. Таким чином, варіанти послідовностей, перелічених у заявці, також включені до обсягу винаходу. Такі варіанти включають природні варіанти, що утворюються в результаті соматичних мутацій in vivo при імунній реакції або in vitro при культивації іморталізованих клонів B-клітин. Альтернативно, варіанти можуть виникнути внаслідок вирожденности генетичного коду, як вказувалося вище, або можуть виникнути внаслідок помилок при транскрипції чи трансляції. Додаткові варіанти послідовностей антитіл, що виявляють підвищену афінність та/або активність, можуть бути одержані з використанням методів, відомих фахівцям, та включені до обсягу винаходу. Наприклад, заміщення амінокислот можуть бути використані для одержання антитіл з додатково підвищеною афінністю. Альтернативно, оптимізація кодонів нуклеотидної послідовності може бути використана для підвищення ефективності трансляції в системах експресії для продукування антитіл. Далі, полінуклеотиди, що містять послідовність, оптимізовану по специфічності або нейтралізуючій активності антитіла шляхом застосування методу спрямованої еволюції до будь-яких послідовностей нуклеїнових кислот за винаходом, також входять до обсягу винаходу. В одному варіанті здійснення варіанти послідовностей антитіл, які нейтралізують інфекцію лЦМВ, можуть мати 70 % чи більше (тобто, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % чи більше) ідентичності амінокислотних послідовностей з послідовностями, зазначеними в заявці. У деяких варіантах здійснення така ідентичність послідовностей обчислюється по відношенню до повної довжини референсної послідовності (тобто, послідовності, зазначеної в заявці). У деяких додаткових варіантах здійснення, відсоток ідентичності, що вказується тут, визначається за допомогою BLAST версії 2.1.3 з використанням параметрів за замовчуванням, встановлених NCBI (National Center for Biotechnology Information) [матриця Blosum 62; штраф за відкриття пробілу = 11 та штраф за продовження пробілу = 1]. Далі, до обсягу винаходу включені вектори, наприклад, експресійні вектори, що містять послідовність нуклеїнової кислоти відповідно до винаходу. Клітини, трансформовані такими векторами, також включені до обсягу винаходу. Приклади таких клітин включають, без обмежень, еукаріотичні клітини, наприклад, дріжджові клітини, тваринні клітини або рослинні клітини. В одному варіанті здійснення, клітини належать ссавцеві, наприклад, клітини людини, CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, клітини мієломи або гібридоми. Винахід також стосується моноклональних антитіл, які зв'язуються з епітопом, здатним зв'язувати антитіла за винаходом, включаючи, без обмежень, моноклональне антитіло, вибране із групи, що складається з 15D8, 4N10, 10F7, 10P3, 4I22, 8L13, 2C12, 8C15, 9I6, 7B13, 8J16, 8I21, 7I13, 7H3, 6B4, 5F1, 10C6, 4H9, 11B12, 13H11, 3G16, 2B11 та 6L3. Моноклональні та рекомбінантні антитіла є особливо придатними для ідентифікації та очищення індивідуальних поліпептидів або інших антигенів, проти яких вони спрямовані. Антитіла за винаходом додатково корисні тим, що вони можуть бути використані як реагенти для імунологічних аналізів, радіоімунологічних аналізів (RIA) або твердофазових імуноферментних аналізів (ELISA). Для такого застосування, антитіла можуть бути мічені аналітично детектованим реагентом, таким як радіоізотоп, флуоресцентна молекула або фермент. Антитіла також можуть бути використані для молекулярної ідентифікації та характеризації (картування епітопів) антигенів. Антитіла за винаходом можуть бути зчеплені з лікарським препаратом для доставки до 14 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 місця лікування або зчеплені з детектованою міткою для полегшення візуалізації ділянки, що містить клітини, які представляють інтерес, такі як клітини, інфіковані лЦМВ. Методи зчеплення антитіл з лікарськими засобами та детектованими мітками добре відомі фахівцям, так само як і методи візуалізації з використанням детектованих міток. Мічені антитіла можуть бути використані для проведення різних аналізів з використанням різноманітних міток. Детектуванню утворення комплексу антитіло-антиген між антитілом за винаходом, та епітопом, що представляє інтерес (епітоп лЦМВ), може сприяти приєднання детектованої речовини до антитіла. Придатні засоби детектування включають використання міток, таких як радіонукліди, ферменти, коферменти, люмінофори, хемілюмінофори, хромогени, субстрати або кофактори ферментів, інгібітори ферментів, комплекси простетичних груп, вільні радикали, частинки, барвники і т.п. Приклади придатних ферментів включають пероксидазу хрону, лужну фосфатазу, β-галактозидазу або ацетилхолнестеразу; приклади придатних комплексів простетичних груп включають стрептавідин/біотин та авідин/біотин; приклади придатних флуоресцентних матеріалів включають умбеліферон, флуоресцеїн, флуоресцеїнізотіоціанат, родамін, дихлортриазиніламінфлуоресцеїн, дансил хлорид або фікоеритрин; прикладом люмінесцентного матеріалу є люмінол; приклади біолюмінесцентних матеріалів включають люциферазу, люциферин та екворин; і приклади придатних радіоактивних матеріалів 125 131 35 3 включають I, I, S або H. Такі мічені реагенти можуть бути використані в різних добре відомих аналізах, таких як радіоімунологічні аналізи, ферменті імунологічні аналізи, наприклад, ELISA, флуоресцентні імунологічні аналізи і т.п. Дів., наприклад, роботи [15-18]. Антитіло за винаходом може бути кон'юговано з терапевтичним фрагментом, таким як цитотоксин, терапевтичний агент або іон радіоактивного металу або радіоізотоп. Приклади радіоізотопів включають, без обмежень, I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111 і т.п. Такі кон'югати антитіл можуть бути використані для модифікації певної біологічної реакції; фрагмент лікарського засобу не слід розуміти як обмежений класичними хімічними терапевтичними агентами. Наприклад, фрагмент лікарського засобу може бути білком або поліпептидом, що виявляють бажану біологічну активність. Такі білки можуть включати, наприклад, токсин, такий як абрин, рицин A, екзотоксин Pseudomonas або дифтерійний токсин. Методики кон'югації таких терапевтичних фрагментів з антитілами добре відомі. Дів., наприклад, Arnon et al. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, " у Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), pp. 243-256; ed. Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delivery, " у Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2d ed; Marcel Dekker, Inc.), pp. 623-653; Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, " у Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. pp. 475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italy, 1985); "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, " у Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al. (Academic Press, New York, 1985), pp. 303-316; та Thorpe et al. (1982) Immunol. Rev. 62:119-158. Альтернативно, антитіло може бути кон'юговано з іншим антитілом з утворенням гетерокон'югата антитіл, як описано в роботі [19]. На додаток до цього, можуть бути використані лінкери між мітками та антитілами за винаходом [20]. Антитіла або їх антигензв'язуючі фрагменти можуть бути безпосередньо мічені радіоактивним йодом, індієм, ітрієм або іншими радіоактивними частинками, відомими фахівцям [21]. Лікування може складатися з комбінації лікування кон'югованими та некон'югованими антитілами, які вводяться одночасно або послідовно [22, 23]. Антитіла за винаходом також можуть бути зв'язані із твердою основою. Додатково, антитіла за винаходом або функціональні фрагменти таких антитіл можуть бути хімічно модифіковані шляхом утворення ковалентних зв'язків з полімером, наприклад, для збільшення їх періоду напіввиведення із циркуляції, наприклад. Приклади полімерів та способів їх приєднання до пептидів наведені в роботах [24-27]. У деяких варіантах здійснення полімери можуть бути вибрані з поліоксіетилованих поліолів та поліоксіетиленгліколю (ПЕГ). ПЕГ є розчинним у воді при кімнатній температурі та має загальну формулу: R(O-CH2-CH2)nO-R, де R може позначати водень або захисну групу, таку як алкільна або алканольна група. В одному варіанті здійснення, захисна група може містити від 1 до 8 атомів вуглецю. У додатковому варіанті здійснення, захисна група є метилом. Символ n позначає додатне ціле число. В одному варіанті здійснення, n має значення в інтервалі від 1 до 1000. В іншому варіанті здійснення, n має значення в інтервалі від 2 до 500. В одному варіанті здійснення, ПЕГ має середню молекулярну вагу від 1000 до 40000. У додатковому варіанті здійснення, ПЕГ має молекулярну вагу від 2000 до 20000. У ще одному варіанті здійснення ПЕГ має молекулярну вагу від 3000 до 15 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 12000. В одному варіанті здійснення ПЕГ містить щонайменше одну гідроксильну групу. В іншому варіанті здійснення ПЕГ містить термінальну гідроксильну групу. У ще одному варіанті здійснення вона є термінальною гідроксильною групою, яка активується для реакції з вільною аміногрупою інгібітора. Однак, слід розуміти, що тип та кількість реакційноздатних груп може змінватися для забезпечення утворення ковалентних зв'язків ПЕГ/антитіло за даним винаходом. Водорозчинні поліоксіетиловані поліоли також є придатними за даним винаходом. Вони включають поліоксіетилований сорбіт, поліоксіетиловану глюкозу, поліоксіетилований гліцерин (POG) і т.п. В одному варіанті здійснення, використовується POG. Без обмежень будь-якою теорією, зазначимо, що, оскільки гліцериновий основний ланцюг поліоксіетилованого гліцерину є таким самим ланцюгом, що зустрічається в природних умовах, наприклад, у тварин та людей в моно-, ди-, тригліцеридах, така розгалуженість не обов'язково буде сприйматися організмом як чужорідний агент. У деяких варіантах здійснення POG має молекулярну вагу в такому ж інтервалі значень, що й ПЕГ. Структура POG наведена в роботі [28], і опис кон'югатів POG/IL-2 наведений в роботі [24]. Іншою системою доставки лікарського засобу, яка може бути використана для збільшення періоду напіввиведення із циркуляції, є ліпосоми. Методи приготування систем доставки на основі ліпосом описані в роботах [29, 30 та 31]. Інші системи доставки лікарських засобів відомі фахівцям та описані, наприклад, у роботах [32 та 33]. Антитіла за винаходом можуть бути забезпечені в очищеній формі. Типово, антитіло буде входити до складу композицій, які по суті не містять інших поліпептидів, наприклад, у яких менше 90 % (мас.), звичайно, менше 60 %, та найчастіше, менше 50 %, композиції складається з інших поліпептидів. Антитіла за винаходом можуть бути імуногенними в організмах-хазяїнах, що не належать до людини (або гетерологічних), наприклад, у мишей. Зокрема, антитіла можуть мати ідіотипову детермінанту (idiotope), імуногенну в організмах хазяїв, крім людини, алі не в організмі людинихазяїна. Антитіла за винаходом для використання у людей включають антитіла, які не можуть бути легко виділені з організмів хазяїв, таких як миші, кози, кролики, пацюки, ссавці за винятком приматів і т.д., і звичайно не можуть бути одержані шляхом гуманізації або у мишей із ксенотрансплантатами (xeno-mice). Антитіла за винаходом можуть належати до будь-якого ізотипу (наприклад, IgA, IgG, IgM, тобто, α-, γ- або µ-важкі ланцюги), але звичайно будуть належати до IgG. У рамках ізотипу IgG, антитіла можуть належати до підкласів IgG1, IgG2, IgG3 або IgG4. Антитіла за винаходом можуть мати κ- або λ-легкий ланцюг. Продукування антитіл Моноклональні антитіла відповідно до винаходу можуть бути одержані будь-якими способами, відомими фахівцям. Загальна методологія одержання моноклональних антитіл з використанням гібридомної технології є добре відомою [34, 35]. Краще, використовується альтернативний метод іморталізації EBV, описаний у роботі [36]. Використовуючи метод, описаний у роботі [36], B-клітини, що продукують антитіло за винаходом, можуть бути трансформовані за допомогою EBV у присутності поліклонального активатора B-клітин. Трансформація за допомогою EBV є стандартною методикою і може бути легко адаптована із включенням поліклональних активаторів B-клітин. Додаткові стимулятори клітинного росту та диференціювання можуть бути необов'язково додані на стадії трансформації для додаткового підвищення ефективності. Такі стимулятори можуть бути цитокінами, такими як IL- 2 та IL-15. В одному аспекті, IL-2 додають на стадії іморталізації для додаткового підвищення ефективності іморталізации, алі його використання не є істотним. Іморталізовані B-клітини, одержані з використанням цих методів, можуть потім культивуватися з використанням методів, відомих фахівцям, та з них виділяються антитіла. Антитіла за винаходом також можуть бути одержані шляхом культивування окремих клітин плазми на культуральних мікропланшетах з використанням способу, описаного в патентній заявці UK 0819376.5. Потім, з культур окремих клітин плазми, може бути екстрагована РНК і може бути проведена ПЛР (PCR) окремих клітин з використанням методів, відомих фахівцям. Області VH та VL антитіл можуть бути ампліфіковані методом ЗТ-ПЛР (RT-PCR), секвеновані та клоновані в експресійний вектор, який потім трансфекують у клітини HEK293T або інші клітинихазяї. Клонування нуклеїнової кислоти в експресійні вектори, трансфекція клітин-хазяїв, культивація трансфекованих клітин-хазяїв та виділення продукованого антитіла можуть бути здійснені з використанням будь-яких методів, відомих фахівцям. Моноклональні антитіла можуть бути додатково очищені, при необхідності, з використанням фільтрації, центрифугування та різних хроматографічних методів, таких як ВЕРХ або афінна 16 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 хроматографія. Методики очищення моноклональних антитіл, включаючи методики одержання антитіл для фармацевтичного застосування, добре відомі фахівцям. Фрагменти моноклональних антитіл за винаходом можуть бути одержані з моноклональних антитіл методами, які включають гідроліз ферментами, такими як пепсин або папаїн, та/або розщеплення дисульфідних зв'язків хімічним відновленням. Альтернативно, фрагменти моноклональних антитіл можуть бути одержані шляхом клонування та експресії частини послідовностей важких або легких ланцюгів. "Фрагменти" антитіл можуть включати фрагменти Fab, Fab", F(ab')2 та Fv. Винахід також охоплює одноланцюгові фрагменти Fv (scFv), виділені з важких та легких ланцюгів моноклонального антитіла за винаходом, наприклад, винахід включає scFv, що містить CDR антитіла за винаходом. Також включені мономери та димери важких або легких ланцюгів, а також одноланцюгові антитіла, наприклад, одноланцюговий Fv, у якому варіабельні домени важкого та легкого ланцюгів з'єднані пептидним лінкером. Для одержання ДНК послідовностей, що кодують антитіла або фрагменти антитіл за даним винаходом, можуть бути використані стандартні методики молекулярної біології. Бажані ДНК послідовності можуть бути синтезовані повністю або частково з використанням методик олігонуклеотидного синтезу. При необхідності можуть бути використані методики сайтспецифічного мутагенезу та полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР, PCR). Будь-яка придатна система клітина-хазяїн/вектор може бути використана для експресії ДНК послідовностей, що кодують молекули антитіл за даним винаходом або їх фрагменти. Бактеріальні, наприклад, E. coli, та інші мікробіологічні системи можуть бути використані, частково, для експресії фрагментів антитіл, таких як фрагменти Fab та F(ab") 2 і, особливо, фрагменти Fv та одноланцюгові фрагменти антитіл, наприклад, одноланцюгові Fv. Системи експресії на основі еукаріотичних клітин-хазяїв, наприклад, таких, що належать ссавцям, можуть бути використані для продукування більш великих молекул антитіл, включаючи повні молекули антитіл. Придатні клітини-хазяї ссавців включають клітини CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, мієломи або гібридоми. Даний винахід також передбачає спосіб продукування молекули антитіла відповідно до даного винаходу, який включає культивацію клітини-хазяїна, що містить вектор за даним винаходом, в умовах, придатних для забезпечення експресії білка із ДНК, що кодує молекулу антитіла за даним винаходом, та виділення молекули антитіла. Молекула антитіла може містити тільки поліпептид важкого або легкого ланцюга, і в цьому випадку для трансфекції клітин-хазяїв має бути використана тільки послідовність, що кодує поліпептид важкого ланцюга або легкого ланцюга. Для одержання продуктів, що містять як важкі, так і легкі ланцюги, клітинна лінія може бути трансфекована двома векторами, причому перший вектор кодує легкий ланцюг поліпептиду і другий вектор кодує важкий ланцюг поліпептиду. Альтернативно, може бути використаний один вектор, який містить послідовності, що кодують поліпептиди легкого ланцюга та важкого ланцюга. Альтернативно, антитіла відповідно до винаходу можуть бути одержані шляхом i) експресії послідовності нуклеїнової кислоти відповідно до винаходу в клітині, та ii) виділення експресованого продукту антитіла. Додатково, спосіб може включати iii) очищення антитіла. Скринінг та виділення B-клітин Трансформовані B-клітини можуть бути піддані скринінгу для визначення клітин, продукуючих антитіла з бажаною антигенною специфічністю, і індивідуальні клони B-клітин можуть бути потім одержані з позитивних клітин. Стадія скринінга може бути проведена методом ELISA, фарбуванням тканин або клітин (включаючи трансфековані клітини), методом аналізу нейтралізації або одним з ряду інших відомих фахівцям методів ідентифікації бажаної антигенної специфічності. При аналізі може здійснюватися селекція на підставі розпізнавання одного антигену або може здійснюватися селекція на підставі додаткової бажаної функції, наприклад, добір нейтралізуючих антитіл, а не просто антиген-зв'язуючих антитіл, добір антитіл, які можуть змінювати характеристики клітинмішеней, такі як їх сигнальні каскади, їх форма, їх швидкість росту, їх здатність впливати на інші клітини, їх реакція на вплив інших клітин або інших реагентів, або на зміну умов, їх стан диференціювання і т.д. Стадія клонування для виділення індивідуальних клонів із суміші позитивних клітин може бути проведена з використанням граничного розведення, мікроманіпуляції, осадження окремих клітин шляхом сортування клітин або іншим способом, відомим фахівцям. Іморталізовані клони B-клітин за винаходом можуть бути використані різними способами, наприклад, як джерела моноклональних антитіл, як джерела нуклеїнової кислоти (ДНК або мРНК), що кодує моноклональне антитіло, яке представляє інтерес для досліджень, і т.д. Винахід передбачає композицію, що містить іморталізовані B-клітини пам'яті, причому 17 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 клітини продукують антитіла, що виявляють високу нейтралізуючу ефективність, специфічні по відношенню до лЦМВ, і антитіла продукуються в кількості ≥5 пг на клітину в день. Винахід також передбачає композицію, що містить клони іморталізованих B-клітин пам'яті, причому клони продукують моноклональне антитіло, що виявляє високу спорідненість, специфічне по відношенню до лЦМВ, і антитіло продукується в кількості ≥5 пг на клітину в день. Краще, зазначені клони продукують моноклональне антитіло з високою ефективністю нейтралізації інфекції лЦМВ. Типові приклади іморталізованих клонів B-клітин відповідно до винаходу включають, без обмежень, 15D8, 4N10, 10F7, 10P3, 4I22, 8L13, 2C12, 8C15, 9I6, 7B13, 8J16, 8I21, 7I13, 7H3, 6B4, 5F1, 10C6, 4H9, 11B12, 13H11, 3G16, 2B11 та 6L3. Епітопи Як було зазначено вище, антитіла за винаходом можуть бути використані для картування епітопів, з якими вони зв'язуються. Автори винаходу знайшли, що кілька антитіл, що нейтралізують лЦМВ-інфекцію ендотеліальних клітин, епітеліальних клітин, клітин сітківки та дендритних клітин, спрямовані проти епітопів білка UL128 лЦМВ, епітопів, утворених білками UL130 та UL131A лЦМВ, епітопів, утворених білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, епітопів, утворених білками gH, gL, UL128 та UL130, gB, gH лЦМВ або епітопів, утворених білками gM та gN лЦМВ. Епітопи, з якими зв'язуються антитіла за винаходом, можуть бути лінійними (безперервними) або конформаційними (переривчастими) та утворені одним білком лЦМВ або комбінацією 2, 3 чи більше білків лЦМВ. Епітопи, розпізнавані антитілами за даним винаходом, можуть використовуватися в різних цілях. Епітоп та його мімотопи в очищеній або синтетичній формі можуть бути використані для посилення імунної відповіді (тобто, як вакцини або для продукування антитіл для іншого застосування) або для скринінгу сироватки пацієнта на антитіла, імунореактивні по відношенню до епітопа або його мімотопів. В одному варіанті здійснення, такий епітоп або мімотоп, або антиген, що містить такий епітоп чи мімотоп, можуть бути використані як вакцини для посилення імунної відповіді. Антитіла та фрагменти антитіл за винаходом також можуть бути використані в методах контролю якості вакцини. Зокрема, антитіла можуть бути використані для перевірки того, щоб антиген у вакцині містив специфічний імуногенний епітоп із правильною конформацією. Епітоп може також використовуватися для скринінгу лігандів, які зв'язуються із зазначеним епітопом. Такі ліганди включають, без обмежень, антитіла; включаючи одержані від верблюдів, акул та інших видів тварин, фрагменти антитіл, пептиди, продукти технології фагового дисплея, аптамери, аднектини або фрагменти інших вірусних чи клітинних білків, які можуть блокувати епітоп і, таким чином, запобігати інфекції. Такі ліганди включені до обсягу винаходу. Рекомбінантна експресія Іморталізовані B-клітини пам'яті за винаходом також можуть бути використані як джерела нуклеїнової кислоти для клонування генів антитіл для наступної рекомбінантної експресії. Експресія з рекомбінантних джерел частіше використовується у фармацевтичних цілях, ніж експресія з B-клітин або гібридом, наприклад, із причин стабільності, відтворюваності, простоти культивації і т.д. Таким чином, винахід передбачає спосіб одержання рекомбінантної клітини, що включає стадії: (i) одержання однієї чи декількох нуклеїнових кислот (наприклад, генів важкого та/або легкого ланцюга) із клону B-клітин, які кодують антитіло, що представляє інтерес; та (ii) вставляння нуклеїнової кислоти в хазяїна експресії для забезпечення експресії антитіла, що представляє інтерес, в даному хазяїні. Аналогічно, винахід передбачає спосіб одержання рекомбінантної клітини, який включає стадії: (i) секвенування нуклеїнової кислоти (кислот) із клону B-клітин, які кодують антитіло, що представляє інтерес; та (ii) використання інформації про послідовність зі стадії (i) для одержання нуклеїнової кислоти (кислот) для вставляння в хазяїна експресії з метою забезпечення експресії антитіла, що представляє інтерес, у даному хазяїні. Нуклеїнова кислота може, але не обов'язково, бути піддана маніпуляціям між стадіями (i) та (ii) для введення сайтів рестрикції, для зміни частоти використання кодонів та/або для оптимізації регуляторних послідовностей транскрипції та/або трансляції. Винахід також передбачає спосіб одержання рекомбінантної клітини, що включає стадію трансформації клітини-хазяїна однією чи декількома нуклеїновими кислотами, які кодують моноклональне антитіло, що представляє інтерес, де нуклеїнові кислоти є нуклеїновими кислотами, одержаними з іморталізованого клону B-клітин за винаходом. Таким чином, процедури одержання спочатку нуклеїнової кислоти (кислот) і потім її використання для трансформації клітини-хазяїна можуть проводитися в різний час різними людьми в різних місцях 18 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (наприклад, у різних країнах). Такі рекомбінантні клітини за винаходом можуть бути потім використані для експресії та культивації. Вони є особливо придатними для експресії антитіл у великомасштабному фармацевтичному виробництві. вони також можуть бути використані як активний інгредієнт фармацевтичної композиції. Можуть бути використані будь-які придатні методики культивації, включаючи, без обмежень, статичну культуру, культуру в обертовому флаконі, асцитичну рідину, картриджі біореактора з пустотілого волокна, модульні міні-ферментери, ємність із перемішуванням, культуру на мікроносіях, перфузію через керамічну серцевину і т.д. Способи одержання та секвенування генів імуноглобуліну з B-клітин добре відомі фахівцям (наприклад, див. роботу [37]). Хазяїном експресії, краще, є еукаріотична клітина, включаючи клітини дріжджів та тварин, зокрема, клітини ссавця (наприклад, клітини CHO, клітини NSО, клітини людини, такі як PER.C6 [Crucell; робота 38] або клітини HKB-11 [Bayer; роботи 39 та 40], клітини мієломи [41 та 42] і т.д.), а також рослинні клітини. Кращі хазяї експресії можуть глікозилювати антитіло за винаходом, зокрема, вуглеводними структурами, які самі по собі не є імуногенними для людей. В одному варіанті здійснення, хазяїн експресії може бути здатний до росту в безсироватковому середовищі. У додатковому варіанті здійснення, хазяїн експресії може бути здатний до росту в культурі, що не містить продуктів тваринного походження. Хазяїн експресії може культивуватися для одержання клітинної лінії. Винахід передбачає спосіб одержання однієї чи декількох молекул нуклеїнових кислот (наприклад, генів важкого та легкого ланцюгів), які кодують антитіло, що представляє інтерес, який включає стадії: (i) одержання іморталізованого клону B-клітин відповідно до винаходу; (ii) одержання із клону B-клітин нуклеїнової кислоти, яка кодує антитіло, що представляє інтерес. Винахід також передбачає спосіб одержання послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує антитіло, що представляє інтерес, який включає стадії: (i) одержання іморталізованого клону Bклітин відповідно до винаходу; (ii) секвенування нуклеїнової кислоти із клону B-клітин, яка кодує антитіло, що представляє інтерес. Винахід також передбачає спосіб одержання молекули (молекул) нуклеїнової кислоти, які кодують антитіло, що представляє інтерес, який включає стадію одержання нуклеїнової кислоти із клону B-клітин, одержаного із трансформованих B-клітин за винаходом. Таким чином, процедури одержання спочатку клону B-клітин і потім одержання з нього нуклеїнової кислоти (кислот) можуть виконуватися в зовсім різний час різними людьми в різних місцях (наприклад, у різних країнах). Винахід передбачає спосіб одержання антитіла (наприклад, для фармацевтичного застосування), який включає стадії: (i) одержання та/або секвенування однієї чи декількох нуклеїнових кислот (наприклад, генів важкого та легкого ланцюгів) з вибраного клону B-клітин, які експресують антитіло, що представляє інтерес; (ii) введення нуклеїнової кислоти (кислот) в, або використання нуклеїнової кислоти (кислот), для одержання хазяїна експресії, який може експресувати антитіло, що представляє інтерес; (iii) культивації або субкультивації хазяїна експресії в умовах, при яких протікає експресія антитіла, що представляє інтерес; і, необов'язково, (iv) очищення антитіла, що представляє інтерес. Винахід також передбачає спосіб одержання антитіла, який включає стадії: культивації або субкультивації популяції клітин-хазяїв експресії в умовах, при яких протікає експресія антитіла, що представляє інтерес, і, необов'язково, очищення антитіла, що представляє інтерес, у якому зазначена популяція клітин-хазяїв експресії була одержана шляхом (i) забезпечення нуклеїнової кислоти (кислот), які кодують вибране антитіло B-клітин, що представляє інтерес, продуковане популяцією B-лімфоцитів пам'яті, одержаних, як описано вище, (ii) вставляння нуклеїнової кислоти (кислот) у хазяїна експресії, який може експресувати антитіло, що представляє інтерес, та (iii) культивації або субкультивації хазяїв експресії, що містять зазначені вставлені нуклеїнові кислоти, для одержання зазначеної популяції клітин-хазяїв експресії. Таким чином, процедури одержання спочатку рекомбінантного хазяїна експресії і потім його культивації з метою експресії антитіла можуть проводитися в зовсім різний час різними людьми в різних місцях (наприклад, у різних країнах). Далі, клітинні лінії, що експресують типові приклади антитіл за винаходом, 4N10, 2C12, 8C15, 8I21, 6B4, 10C6, 4H9, 11B12, 3G16 та 6L3, були депоновані в Advanced Biotechnology Center (ABC), Largo Rossana Benzi 10, 16132 Genoa (Italy), відповідно до Будапештського договору, 9 липня 2008 р., (під номерами доступу PD 08009, PD 08007, PD 08006, PD 08005, PD 08004, PD 08014, PD 08013, PD 08011, PD 08012 та PD 08010, відповідно), та іморталізована Bклітинна лінія, що експресує 7H3, була депонована 16 липня 2008 р. під номером доступу PD 08017. Антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, експресовані вищевказаними клітинними 19 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 лініями, а також антитіла та їх антигензв'язуючі фрагменти, що мають такі ж самі амінокислотні послідовності, як експресовані вищевказаними клітинними лініями, також вважаються такими, що входять до обсягу винаходу. Ці депоновані матеріали призначені для зручності кваліфікованих фахівців у даній області і не є припущенням того, що такі депоновані матеріали необхідні для практичної реалізації винаходу, або того, що еквівалентні варіанти здійснення будуть недоступними для фахівців з урахуванням даного опису. Загальнодоступність даних депонованих матеріалів не дає права виготовляти, використовувати або продавати депоновані матеріали відповідно до даного або будь-яких інших патентів. Послідовності нуклеїнової кислоти депонованих матеріалів включені в даний опис як посилання та є контрольними при виявленні будь-яких конфліктів з будь-якими описаними тут послідовностями. Фармацевтичні композиції Винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіла та/або фрагменти антитіл за винаходом та/або нуклеїнову кислоту, що кодує такі антитіла, та/або іморталізовані B-клітини, які экспрессируют такі антитіла та/або епітопи, розпізнавані антитілами за винаходом. Фармацевтична композиція може також містити фармацевтично прийнятний носій для забезпечення введення. Носій не повинен сам по собі індукувати продукування антитіл, шкідливих для особи, що приймає композицію, та не повинен бути токсичним. Придатними носіями можуть бути великі макромолекули, що повільно метаболізуються, такі як білки, поліпептиди, ліпосоми, полісахариди, полімолочні кислоти, полігліколеві кислоти, полімерні амінокислоти, співполімери амінокислот та інактивовані вірусні частинки. Можуть бути використані фармацевтично прийнятні солі, наприклад, солі мінеральних кислот, такі як гідрохлориди, гідроброміди, фосфати та сульфати, або солі органічних кислот, такі як ацетати, пропіонати, малонати та бензоати. Фармацевтично прийнятні носії в терапевтичних композиціях можуть додатково містити рідини, такі як вода, сольовий розчин, гліцерин та етанол. Додатково, у таких композиціях можуть бути присутніми допоміжні речовини, такі як змочувальні агенти або емульгатори або буферні речовини для регулювання pH. Такі носії дозволяють виготовляти фармацевтичні композиції у вигляді таблеток, пігулок, драже, капсул, рідин, гелів, сиропів, дисперсій та суспензій для приймання усередину пацієнтом. У межах обсягу винаходу, форми для введення можуть включати форми, придатні для парентерального введення, наприклад, шляхом ін'єкції або інфузії, наприклад, болісної ін'єкції або безперервної інфузії. У тих випадках, коли продукт призначений для ін'єкції або інфузії, він може мати форму суспензії, розчину або емульсії в масляному або водному носії, і може містити агенти для приготування композицій, такі як суспендувальні агенти, консерванти, стабілізатори та/або диспергенти. Альтернативно, молекула антитіла може перебувати в сухій формі, призначеній для відновлення перед застосуванням відповідною стерильною рідиною. Після приготування рецептури, композиції за винаходом можуть бути введені безпосередньо суб'єктові. В одному варіанті здійснення, композиції адаптовані для введення людям. Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть бути введені будь-яким числом шляхів, включаючи, без обмежень, пероральний, внутрішньовенний, внутрішньом'язовий, інтраартеріальний, інтрамедулярний, інтраперитонеальний, інтратекальний, інтравентрикулярний, трансдермальний, черезшкірний, місцевий, підшкірний, інтраназальний, ентеральний, сублінгвальний, інтравагінальний або ректальний шляхи. Продукти в аерозольних упаковках (hyposprays) також можуть бути використані для введення фармацевтичних композицій за винаходом. Типово, терапевтичні композиції можуть бути приготовлені у вигляді препаратів для ін'єкцій, таких як рідкі розчини або суспензії. Також можуть бути приготовлені тверді форми, придатні для розчинення або суспендування в рідких носіях перед ін'єкцією. Пряма доставка композицій буде звичайно здійснюватися шляхом ін'єкції, підшкірно, інтраперитонеально, внутрішньовенно або внутрішньом'язово, або шляхом доставки в інтерстиціальний простір тканини. Композиції також можуть бути введені на ділянки ураження. Дозування курсу лікування може бути введенням однократної дози або введенням кратних доз. Відомі фармацевтичні препарати на основі антитіл дозволяють одержати загальну уяву про частоту введення, наприклад, чи має фармацевтичний препарат вводитися щодня, щотижня, щомісяця і т.д. Частота та дозування можуть також залежати від тяжкості симптомів. Композиції за винаходом можуть бути приготовлені в різних формах. Наприклад, композиції можуть бути приготовлені у вигляді препаратів для ін'єкцій, таких як рідкі розчини або суспензії. Також можуть бути виготовлені тверді форми, придатні для розчинення або суспендування в рідких носіях перед ін'єкцією (наприклад, ліофілізована композиція, така як Synagis™ та Herceptin™, призначена для відновлення стерильною водою, що містить консервант). Може 20 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 бути приготовлена композиція для місцевого введення, наприклад, у вигляді рідкої мазі, крему або порошку. Композиція може бути приготовлена для перорального введення, наприклад, у вигляді таблетки або капсули, у вигляді спрея або сиропу (необов'язково, зі смаковими добавками). Композиція може бути приготовлена для легеневого введення, наприклад, у вигляді інгалятора, з використанням тонкодисперсного порошку або спрея. Композиція може бути виготовлена у вигляді супозиторія або вагінального супозиторія. Композиція може бути приготовлена для назального, вушного або очного введення, наприклад, у вигляді крапель. Композиція може мати форму набору, приготовленого таким чином, щоб об'єднана композиція відновлювалася безпосередньо перед введенням пацієнтові. Наприклад, ліофілізоване антитіло може бути забезпечене у вигляді набору зі стерильною водою або стерильним буфером. Слід розуміти, що активним інгредієнтом у композиції буде молекула антитіла, фрагмент антитіла або їх варіанти та похідні. Як такі, вони будуть зазнавати деградації в шлунковокишковому тракті. Таким чином, якщо композиція повинна вводитися шляхом, що проходить через шлунково-кишковий тракт, композиція повинна буде містити агенти, які захищають антитіло від деградації, але вивільняють антитіло після його всмоктування зі шлунковокишкового тракту. Детальний опис фармацевтично прийнятних носіїв наведений в Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, ISBN: 0683306472. Фармацевтичні композиції за винаходом звичайно мають значення pH між 5,5 та 8,5, у деяких варіантах здійснення воно може перебувати в інтервалі значень від 6 до 8 і, у додатковому варіанті здійснення - бути рівним приблизно 7. Величина pH може підтримуватися шляхом використання буфера. Композиція може бути стерильною та/або апірогенною. Композиція може бути ізотонічною для людини. В одному варіанті здійснення, фармацевтичні композиції за винаходом поставляються в герметично упакованих контейнерах. Фармацевтичні композиції будуть містити ефективну кількість одного чи декількох антитіл за винаходом та/або однієї чи декількох іморталізованих B-клітин за винаходом та/або поліпептиду, що містить епітоп, який зв'язує антитіло за винаходом, тобто, кількість, що є достатньою для лікування, полегшення або запобігання потрібного захворювання або стану, або для виявлення детектованого терапевтичного ефекту. Терапевтичні ефекти також включають ослаблення фізичних симптомів. Точна величина ефективної кількості для будьякого конкретного суб'єкта буде залежати від його розмірів та стану здоров'я, характеру та ступеня прояву стану і терапевтичного засобу або комбінації терапевтичних засобів, вибраних для введення. Ефективна кількість для даної ситуації визначається звичайним експериментуванням та на розсуд клінічного лікаря. В цілях даного винаходу, ефективна доза буде звичайно становити від приблизно 0,01 мг/кг до приблизно 50 мг/кг, або від приблизно 0,05 мг/кг до приблизно 10 мг/кг, композицій за даним винаходом особі, якій робиться введення. Відомі фармацевтичні засоби на основі антитіл дають можливість одержати загальну уяву про це, наприклад, Herceptin™ уводиться шляхом внутрішньовенної інфузії розчину з концентрацією 21 мг/мл, при початковій ударній дозі 4 мг/кг ваги тіла та щотижневій підтримуючій дозі 2 мг/кг 2 ваги тіла; Rituxan™ уводиться щотижня по 375 мг/м ; і т.д. В одному варіанті здійснення, композиції можуть містити більше одного (наприклад, 2, 3, 4, 5 і т.д.) антитіла за винаходом для забезпечення адитивного або синергічного терапевтичного ефекту. У додатковому варіанті здійснення, композиція може містити одне чи декілька (наприклад, 2, 3, 4, 5 і т.д.) антитіл за винаходом та одне чи декілька (наприклад, 2, 3, 4, 5 і т.д.) додаткових антитіл, які нейтралізують інфекцію лЦМВ. Наприклад, одне антитіло може зв'язуватися з епітопом білка UL128 лЦМВ, епітопом, утвореним білками UL130 та UL131A лЦМВ, епітопом, утвореним білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, епітопом, утвореним білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, епітопом білка gB лЦМВ, епітопом білка gH лЦМВ або епітопом, утвореним білками gM та gN лЦМВ, а інше може зв'язуватися з іншим епітопом білка UL128 лЦМВ, епітопом, утвореним UL130 та UL131A, епітопом, утвореним UL128, UL130 та UL131A, епітопом, утвореним gH, gL, UL128 та UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO або епітопом, утвореним gM та gN. Без обмеження будь-якою теорією, одне антитіло може виступати в ролі мішені в механізмі, що медіює інфекцію фібробластів, в тої час як інше антитіло може бути мішенню в механізмі, що медіює інфекцію ендотеліальних клітин. Для оптимального клінічного ефекту може бути цілком бажаним впливати на обидва механізми інфікування та підтриманнялЦМВ. В одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є специфічним по відношенню до першого епітопа UL128 і друге антитіло є специфічним по відношенню до іншого епітопа UL128, комбінації UL130 21 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 та UL131A, комбінації UL128, UL130 та UL131A, комбінації gH, gL, UL128 та UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, або комбінації gM та gN. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є специфічним по відношенню до першого епітопа на комбінації UL130 та 131A, і друге антитіло є специфічним по відношенню до UL128, другого епітопа на комбінації UL130 та 131A, комбінації UL128, UL130 та UL131A, комбінації gH, gL, UL128 та UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, або комбінації gM та gN. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є специфічним по відношенню до першого епітопа на комбінації UL128, UL130 та 131A, і друге антитіло є специфічним по відношенню до UL128, комбінації UL130 та UL131A, другого епітопа на комбінації UL128, UL130 та 131A, комбінації gH, gL, UL128 та UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, або комбінації gM та gN. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є специфічним по відношенню до першого епітопа на комбінації gH, gL, UL128, UL130 та UL131A, і друге антитіло є специфічним по відношенню до UL128, комбінації UL130 та UL131A, комбінації UL128, UL130 та 131A, другого епітопа на комбінації gH, gL, UL128 та UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, або комбінації gM та gN. У додатковому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є специфічним по відношенню до першого gB-епітопа, і друге антитіло є специфічним по відношенню до UL128, комбінації UL130 та UL131A, комбінації UL128, UL130 та UL131A, комбінації gH, gL, UL128 та UL130, другого gBепітопа, gH, gL, gM, gN, gO, або комбінації gM та gN. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є специфічним по відношенню до першого gHепітопа, і друге антитіло є специфічним по відношенню до UL128, комбінації UL130 та UL131A, комбінації UL128, UL130 та UL131A, комбінації gH, gL, UL128 та UL130, gB, другого gH-епітопа, gL, gM, gN, gO, або комбінації gM та gN. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є специфічним по відношенню до першого епітопа на комбінації gM та gN, і друге антитіло є специфічним по відношенню до UL128, комбінації UL130 та UL131A, комбінації UL128, UL130 та UL131A, комбінації gH, gL, UL128 та UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, або другого епітопа на комбінації gM та gN. Типові приклади антитіл за винаходом для використання у фармацевтичній композиції, які зв'язуються з епітопом білка UL128 лЦМВ, включають, без обмежень, 15D8. Типові приклади антитіл за винаходом для використання у фармацевтичній композиції, які зв'язують епітоп, утворений білками UL130 та UL131A лЦМВ, включають, без обмежень, 4N10, 10F7, 10P3, 4I22, 8L13, 1F11, 2F4 та 5A2 (див. заявку США № 11/969104, подану 3 січня 2008 р.). Типові приклади антитіл за винаходом для використання у фармацевтичній композиції, які зв'язують епітоп, утворений білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, включають, без обмежень, 2C12, 7B13, 7I13, 8C15, 8J16, 9I6 та 6G4 (див. заявку США № 12/174568, подану 16 липня 2008 р.). Типові приклади антитіл за винаходом для використання у фармацевтичній композиції, які зв'язують епітоп, утворений білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, включають, без обмежень, 8I21. Типові приклади антитіл за винаходом для використання у фармацевтичній композиції, які зв'язуються з епітопом білка gB лЦМВ, включають, без обмежень, 7H3, 10C6, 5F1, 6B4, 4H9 та 2B11. Типові приклади антитіл за винаходом для використання у фармацевтичній композиції, які зв'язуються з епітопом білка gH лЦМВ, включають, без обмежень, 11B12, 13H11 та 3G16. Типові приклади антитіл за винаходом для використання у фармацевтичній композиції, які зв'язують епітоп, утворений білками gM та gN лЦМВ, включають, без обмежень, 6L3. Винахід далі передбачає фармацевтичну композицію, що містить два чи більше антитіл, у якій перше антитіло є антитілом або фрагментом антитіла за винаходом, і друге антитіло є антитілом, що нейтралізує інфекцію лЦМВ, яке відомо фахівцям зараз або буде винайдено пізніше. Приклади таких антитіл включають, без обмежень, MSL-109, 8F9 або 3E3. В одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 15D8 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить варіант 1 антитіла 15D8 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить варіант 2 антитіла 15D8 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 8I21 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. 22 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 2C12 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 8C15 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 9I6 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 7B13 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 8J16 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 7I13 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 4N10 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 10F7 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 10P3 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 4I22 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 8L13 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 7H3 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить варіант 1 антитіла 7H3 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 10C6 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 5F1 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 6B4 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 4H9 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить варіант 1 антитіла 4H9 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 2B11 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. У ще одному варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 13H11 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 11B12 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 3G16 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В іншому варіанті здійснення, винахід передбачає фармацевтичну композицію, що містить антитіло 6L3 або його антигензв'язуючий фрагмент та фармацевтично прийнятний носій. В одному варіанті здійснення, фармацевтичні композиції за винаходом можуть містити вищевказані антитіла або їх антигензв'язуючі фрагменти, як єдиний активний інгредієнт. В іншому варіанті здійснення, фармацевтична композиція може містити 2 чи більше, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 чи більше, вищевказаних антитіл або їх антигензв'язуючих фрагментів. Як зазначено в даному описі, фармацевтичні композиції за винаходом можуть також містити одне чи декілька антитіл, або їх антигензв'язуючі фрагменти, та друге антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які нейтралізують інфекцію лЦМВ. Антитіла за винаходом можуть бути введені (у комбінації або роздільно) з іншими терапевтичними засобами, наприклад, з хіміотерапевтичними сполуками, з радіотерапією і т.д. Кращі терапевтичні сполуки включають антивірусні сполуки, такі як ганцикловір, фоскамет та цидофовір. Така комбінована терапія забезпечує адитивне або синергічне збільшення 23 UA 106354 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 терапевтичної ефективності в порівнянні з індивідуальними терапевтичними агентами при введенні їх поодинці. Термін "синергія" використовується для опису об'єднаного ефекту двох чи більше активних агентів, який перевищує суму індивідуальних ефектів для кожного відповідного активного агента. Таким чином, у тих випадках. коли комбінований ефект двох чи більше агентів приводить до "синергічного інгібування" активності або процесу, мається на увазі, що інгібування активності або процесу перевищує суму інгібуючих ефектів кожного відповідного активного агента. Термін "синергічний терапевтичний ефект" стосується терапевтичного ефекту, спостережуваного для комбінації двох чи більше терапій, де терапевтичний ефект (вимірюваний за будь-яким числом параметрів) перевищує суму індивідуальних терапевтичних ефектів, спостережуваних при відповідних індивідуальних терапіях. Антитіла можуть бути введені тим пацієнтам, які раніше не виявляли відгуку на лікування інфекції лЦМВ, тобто, виявилися несприйнятливими до анти-лЦМВ лікування. Таке лікування може включати попереднє лікування антивірусним агентом. Це може бути зв'язане, наприклад, з інфекцією штамом лЦМВ, резистентним до антивірусних засобів. У композиціях за винаходом, що містять антитіла за винаходом, антитіла можуть складати щонайменше 50 % мас. (наприклад, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % чи більше) від загального білка в композиції. Таким чином, антитіла перебувають в очищеній формі. Винахід передбачає спосіб виготовлення фармацевтичного засобу, який включає стадії: (i) одержання антитіла за винаходом; та (ii) змішування очищеного антитіла з одним чи декількома фармацевтично прийнятними носіями. Винахід також передбачає спосіб виготовлення фармацевтичного засобу, що включає стадію змішування антитіла з одним чи декількома фармацевтично прийнятними носіями, у якому антитіло є моноклональним антитілом, яке було одержано із трансформованої B-клітини за винаходом. Таким чином, процедури одержання спочатку моноклонального антитіла і потім виготовлення фармацевтичного засобу можуть проводитися в зовсім різний час різними людьми в різних місцях (наприклад, у різних країнах). Як альтернатива доставці антитіла або B-клітин в терапевтичних цілях, можна здійснювати доставку суб'єктові нуклеїнової кислоти (типово, ДНК), яка кодує моноклональне антитіло, що представляє інтерес (або його активний фрагмент), так щоб нуклеїнова кислота могла експресуватися у суб'єкта in situ для забезпечення бажаного терапевтичного ефекту. Придатні методи генної терапії та вектори доставки нуклеїнових кислот відомі фахівцям. Композиції за винаходом можуть бути імуногенними композиціями і, у деяких варіантах здійснення, можуть бути композиціями вакцини, яка містять антиген, що містить епітоп білка UL128 лЦМВ, утворений білками лЦМВ UL130 та 131A, утворений білками UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, утворений білками gH, gL, UL128 та UL130 лЦМВ, білком gB лЦМВ, білком gH лЦМВ, або утворений білками gM та gN лЦМВ. Альтернативно, композиції можуть містити (i) антиген, що містить епітоп, утворений комбінацією білків UL128, UL130 та UL131A лЦМВ, та (ii) антиген, що містить епітоп, присутній в gB, gH, gL, gM, gN, gO, UL128, UL130 або UL131A, або їх комбінацію. Вакцини відповідно до винаходу можуть бути профілактичними (тобто, запобігати інфекції) або терапевтичними (тобто, лікувати інфекцію). Композиції можуть містити протимікробний засіб, особливо, упаковані у вигляді кратних доз. Вони можуть містити поверхнево-активну речовину, наприклад, твін(Tween) (полісорбат), такий як Tween 80. Поверхнево-активні речовини звичайно присутні в низьких кількостях, наприклад,