Антипаразитарна композиція, яка містить макроциклічний лактон і левамізол, і спосіб лікування паразитарної інфестації

Реферат: Винахід належить до ветеринарної антипаразитарної розчиненої композиції, яка містить макроциклічний лактон або фармацевтично еквівалентну його сіль і левамізол, або фармацевтично еквівалентну його сіль, яка характеризується тим, що рН композиції знаходиться в межах від 2,0 до 5,0 і в якій композиція містить принаймні одну поверхневоактивну речовину і принаймні один антиоксидант. UA 113179 C2 (12) UA 113179 C2 UA 113179 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ Винахід стосується антипаразитарної композиції. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ У переважних варіантах здійснення даного винаходу даний винахід стосується композиції для використання в лікуванні тварин, таких як домашні і сільськогосподарські тварини. Існує значна втрата продуктивності у всьому світі через вплив паразитів на сільськогосподарських тваринах. Такі паразити можуть включати шлунково-кишкові круглі гельмінти, легеневі гельмінти, очні гельмінти, личинки паразитуючої стадії, кусаючі і сисні воші, коростяні кліщі, кліщі, личинки м'ясної мухи і малі коров'ячі жигалки. Як наслідок, значна кількість грошей, часу і зусиль було витрачено на розробку композицій для лікування тварин від цих паразитів. Звичайно лікувальні композиції основані на використанні широкого спектра макроциклічних лактонів як первинного активного інгредієнта. Однак, з широким поширенням використання макроциклічних лактонів, у паразитів була вироблена резистентність, і лікувальні композиції стають менш ефективними. Збільшення рівня дозування не є готовим вирішенням. Передусім, збільшення дозування може спричиняти значні побічні ефекти і може позначатися на здоров'ї тварини. Основним побоюванням, однак, є те, що збільшення дозування приводить до того, що залишкові концентрації ліків у тварини стають більшими. Це спричиняє більш тривалий час витримування пролікованих тварин, перш ніж вони можуть бути забиті для споживання людиною. Потік від ефекту від не своєчасно забитих тварин збільшує витрати на утримання стада і відповідно споживчу ціну. Слід, однак, взяти до уваги, що може бути запропонована композиція і спосіб лікування, який скерований на перемогу над стійкістю серед паразитів і також мінімальні побічні ефекти, і час втримування. Взятися за вирішення вищевикладених проблем або, принаймні, надати громадськості корисний вибір є метою даного винаходу. Всі посилання, які включають будь-які патенти або заявки на патенти, процитовані в даному описі винаходу, включені в даний документ шляхом посилань. Не зроблено жодних допущень, що будь-яке посилання належить відомому рівню техніки. Обговорення посилань, висловлює те, що заявляють їх автори, і заявники залишають за собою право заперечувати правильність і релевантність процитованих документів. Без жодного сумніву, буде зрозуміло, що хоч тут посилаються на ряд публікацій попереднього рівня техніки, ці посилання не означають прийняття, що будь-який із цих документів становить частину єдиного загального знання в даній техніці в Новій Зеландії або будь-якій іншій країні. Протягом цього опису винаходу слово «складають» або його варіації такі як «складає» або «що складає» будуть зрозумілі як такі, що означають включення названого елемента, цілого або стадії, або групи елементів, ціле або стадії, але не виключення будь-якого іншого елемента, цілого або стадії, або груп елементів, цілих або стадій. Інші особливості і переваги даного винаходу стануть очевидними із наступного опису, який наведений як приклад тільки. РОЗКРИТТЯ ВИНАХОДУ Відповідно до однієї особливості даного винаходу запропонована ветеринарна антипаразитарна розчинена композиція, яка включає макроциклічний лактон або його фармацевтично еквівалентну сіль і левамізол або його фармацевтично еквівалентну сіль, відмінна тим, що pH композиції знаходиться в межах від 2,0 до 5,0 і в якому композиція включає, принаймні, одну поверхнево-активну речовину і один антиоксидант. Відповідно до іншої особливості даного винаходу представлений спосіб лікування тварин від паразитарної інфестації композицією, яка включає макроциклічний лактон або його фармацевтично еквівалентну сіль і левамізол або його фармацевтично еквівалентну сіль, в якій pH композиції знаходиться в межах від 2,0 до 5,0 і в якому композиція включає, принаймні, одну поверхнево-активну речовину і один антиоксидант, що характеризується стадією введення ветеринарної антипаразитарної розчинної композиції тваринам, які потребують цього. Переважні макроциклічні лактони вибирають із похідних авермектину і мілбеміцину, включаючи, але не обмежуючись цим, абамектин, дорамектин, еприномектин, івермектин, моксидектин і мілбемектин. Особливо переважним макроциклічним лактоном є дорамектин, який визнаний як ефективний як антипаразитарний засіб. Популярним препаратом, який включає дорамектин є Dectomax™, який широко застосовується в Новій Зеландії для великої рогатої худоби. 1 UA 113179 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Однак, як багато які інші макроциклічні лактони, дорамектин повністю ефективний тільки проти частини паразитів в результаті створеної збільшуваної резистентності. Не зважаючи на це, все ще існує менша резистентність до дорамектину, ніж до інших препаратів (таких як івермектин), і він є порівняно економічним (в порівнянні, наприклад із моксидектином). Левамізол був вибраний як інша активна речовина, призначена для використання в композиції, тому що автори усвідомили, що це приведе до синергетичного ефекту в ефективності проти тих паразитів, які резистентні до дорамектину. Комбінація дорамектину і левамізолу не є єдиною, яка, виходячи зі знань авторів, повинна бути розглянута, тому, що ці дві активних речовини вважаються несумісними одна з одною через дуже різні їх переважні діапазони pH. У переважних варіантах здійснення винаходу, даний винахід подається в формі ін'єкційної композиції. Однак це може бути введено іншими способами, такими як оральним або шляхом обливання. Обговорення результатів випробувань йде, але в резюме були виявлені значні і несподівані переваги при використанні даного винаходу для великої рогатої худоби, коли порівняли із застосуванням використовуваного препарату Dectomax™ і нелікованих тварин. Досвід заявників у ветеринарній індустрії приводить до припущення, що даний винахід буде також ефективний при застосуванні до інших видів сільськогосподарських тварин таких як вівці. Наприклад, вони очікують більш низькі залишки в ділянках введення як і для великої рогатої худоби і кращу ефективність, оскільки резистентність до дорамектину в овець стає більш звичайною. Ці результати включають значне поліпшення ефективності, коли виявляється наявність резистентності до дорамектину. Зокрема, даний винахід був високо ефективним в порівнянні з Dectomax™ проти таких резистентних як Cooperia і Trichostrongylus. Інша значна перевага, виявлена при використанні даного винаходу, полягає в тому, що виявлено, що залишки, особливо в області ін'єкції, не зберігаються так само довго і на високих рівнях, виявлених для стандартного препарату дорамектину. У переважних варіантах здійснення даного винаходу ефективна кількість макроциклічного лактону всередині композиції становить близько від 0,2 до 1,2% вага/об'єм. Це можна порівняти із ефективною кількістю макролактону (дорамектину) в Dectomax™, яка складає близько 1% вага/об'єм. У переважних варіантах здійснення даного винаходу ефективна кількість левамізолу в композиції знаходиться в межах від 6 до 27% вага/об'єм. Заявниками було підтверджено, що це є ефективною кількістю з точки зору знищення паразитів, але при цьому збереження здоров'я тварини, і співіснує з дорамектином в стабільному розчині. Передбачається, що левамізол може бути наданий у вигляді левамізолу гідрохлориду або левамізолу фосфату. Левамізол фосфат є переважнішим, ніж левамізол гідрохлорид, оскільки існує менше виявів подразнення в місці ін'єкції. У композиції переважно він повинен бути в діапазоні від 10 до 40% вага/об'єм. Однією з труднощів створення рецептури з левамізолом є те, що його переважним pH є приблизно 3, в той час як інші активні речовини виявляють стабільність в розчинах при більш нейтральному pH. У переважному варіанті здійснення даного винаходу, діапазон pH композиції є близько від 2,0 до 5,0. Найбільш переважним діапазоном pH композиції є близько від 3,0 до 4,5. Як буде видно в наступних даних випробувань, ретельний вибір переважних наповнювачів і концентрацій був необхідний, щоб допомогти підтримувати обидва і макроциклічний лактон і левамізол в розчині і при відповідному рН. У переважних варіантах здійснення даного винаходу, одним із наповнювачів є хелатуючий агент, призначений для хелатування будь-яких важких металів, які сприяли б окисненню активних речовин. Переважним хелатуючим агентом є ЕДТА динатрію, хоч можуть бути використані інші агенти. Інші солі ЕДТА можуть бути також використані, включаючи натрій, кальцій і калій. Ще хелатуючі агенти, які можуть бути використані, включають моногідрат лимонної кислоти, фумарову і малікову кислоти. У переважних варіантах здійснення винаходу, композиція також містить антиоксидант. Це є переважним включенням в композицію, оскільки він стабілізує активні речовини в препараті від окиснення. Зокрема, автори виявили, що включення антиоксиданту є корисним для запобігання деградації макроциклічного лактону, який в іншому випадку може бути нестабільним при переважному низькому pH композиції. 2 UA 113179 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Відповідні антиоксиданти включають BHA, вітамін Е, пропілгалат, TBHQ, метабісульфат натрію. Переважним антиоксидантом є бутилгідрокситолуол (BHT), оскільки BHT є звичайним стабілізатором для мектинів. Переважно антиоксидант присутній в композиції в або більше 0,15% вага/об'єм. Більш переважно антиоксидант присутній в композиції в або більше 0,20% вага/об'єм. Найбільш переважно антиоксидант присутній в композиції в приблизно 0,25% вага/об'єм. Несподівано автори виявили, що традиційна кількість антиоксиданту (від 0,1 до 0,15% вага/об'єм), використана в ін'єкційних композиціях, може бути недостатня для стабілізації активних речовин і зокрема макроциклічного лактону. Проте, коли рівень антиоксиданту був збільшений вище загальноприйнятих кількостей, стабільність могла бути значно поліпшена, що було важко досягнути при таких більш низьких pH. Вважається, що в поєднанні з іншими наповнювачами, такими як стабілізатори і/або поверхнево-активні речовини, ця стабільність може бути синергічно поліпшена. Переважно, композиція також включає консерванти. Прийнятні консерванти містять парабени, тіомерсали, крезоли і хлорбутанол. Переважним консервантом є бензиловий спирт, оскільки він діє одночасно як солюбілізатор і консервант. Переважно композиція також включає стабілізатор. Прийнятні стабілізатори включають поліоли з переважним стабілізатором стабілізованим гліцерин формалем, оскільки він вже знаходиться в стабілізованій формі. У переважних варіантах винаходу, композиція також включає поверхнево-активну речовину, яка в даному винаході допомагає в стабілізації макроциклічного лактону (наприклад, дорамектину) від низького pH препарату. Слід зазначити, що більш низький pH необхідний для стабілізації левамізолу. Переважно, кількість поверхнево-активної речовини в композиції становить вище 15% вага/об'єм. Більш переважно, кількість поверхнево-активної речовини в композиції становить приблизно 20% вага/об'єм. Це відрізняється від багатьох останніх композицій, зокрема тих, які намагалися, хоча й безуспішно, досягнути стабільної розчинної композиції при низьких pH нижче 4,0 (наприклад, NZ 508969). Автори виявили, що збільшення рівня поверхнево-активної речовини допомогло стабілізувати макроциклічний лактон, зокрема, від кристалізації при pH в проміжку від 2,0 до 5,0. До того ж автори побачили, що стабільність може бути синергічно поліпшена, коли поверхнево-активна речовина включена одночасно зі стабілізатором і/або антиоксидантом. Прийнятні поверхнево-активні речовини містять полісорбат 20, кремофор і ПЕГ-12 олеат. Переважною поверхнево-активною речовиною є полісорбат-80, він є розчинним у воді і широко використовується в речовинах для ін'єкцій. Особливості даного винаходу тепер будуть описані тільки за допомогою прикладу із посиланням на різні експерименти і випробування, проведені заявником. ПЕРЕВАЖНІ ВАРІАНТИ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ Як згадувалося раніше в описі патенту, може бути дуже важко виготовити стабільну композицію, яка містить ефективну кількість макроциклічного лактону (такого як дорамектин) і левамізолу. Що стосується даного винаходу, потрібно взяти до уваги, що автори є високодосвідченими хіміками-технологами, особливо в галузі ветеринарної медицини. Тому важливо, що авторам довелося зробити більше сорока спроб при розробці даного винаходу, перш ніж, був знайдений препарат, який зберігався стабільним і не мав кристалічного складу при ключових температурах. Таблиця 1 нижче - це узагальнені результати деяких із випробуваних препаратів. 3 UA 113179 C2 Таблиця 1 Випробувані препарати PF-1 PF-2 PF-3 PF-4 PF-5 PF-6 PF-7 № Інгредієнти % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. 1 Дорамектин** 0,42 0,525 0,42 0,525 0,42 0,525 0,525 Левамізол 2 15,8 21 15,8 21 15,8 21 21 гідрохлорид** 3 Левамізол фосфат** 0 0 0 0 0 0 0 4 Динатрію едетат 0 0 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Бутилгідрок5 0,25 0,05 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 ситолуол 6 Бензиловий спирт 0 0 2,5 2,5 2 2,5 3 Стабілізований 7 40 40 0 0 0 0 0 гліцерин формаль 8 Пропілен-гліколь qs qs 0 0 0 0 0 9 Полісорбат 80 0 0 8 8 10 12 20 10 Лимонна кислота 0 0 2 2 2 2 2,2 11 Гідроокис натрію 0 0 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 12 Вода для ін'єкції 0 0 qs qs qs qs qs ** 5% доданий надлишок PF-01- на основі розчинника - результат стабільності - не стабільний PF-02 - на основі розчинника - результат стабільності - не стабільний PF-03 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-04 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-05 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-06 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-07, 08 і 09 - на основі води - утворення кристалів при 4 °C PF-11 - на основі води - замінений на левамізол фосфат через подразнення від левамізолу гідрохлориду PF-12 - на основі води - утворення кристалів при 4 °C і 40 °C Qs - сліди. 4 UA 113179 C2 Таблиця 1 Випробувані препарати № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Інгредієнти Дорамектин** Левамізол гідрохлорид** Левамізол фосфат** Динатрію едетат Бутилгідрок-ситолуол Бензиловий спирт Стабілізований гліцерин формаль Пропілен-гліколь Полісорбат 80 Лимонна кислота Гідроокис натрію Вода для ін'єкції PF-8 % ваг./об. 0,525 21 0 0,1 0,25 3 PF-9 PF-10 PF-11 PF-12 PF-13 % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. % ваг./об. 0,525 0,63 0,84 0,525 0,525 21 31,5 42 0 0 0 0 0 26,25 26,25 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 3 4 4 3 3 0 20 0 0 0 20 20 20 2,2 0,5 qs 0 20 2,2 0,5 qs 20 20 2,2 0,4 qs 20 20 2,2 0,4 qs 20 20 2,2 0,3 qs 0 20 2,2 0,3 qs ** 5% доданий надлишок PF-01- на основі розчинника - результат стабільності - не стабільний PF-02 - на основі розчинника - результат стабільності - не стабільний PF-03 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-04 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-05 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-06 - на основі води - результат стабільності - не стабільний PF-07, 08 і 09 - на основі води - утворення кристалів при 4 °C PF-11 - на основі води - замінений на левамізол фосфат через подразнення від левамізолу гідрохлориду PF-12 - на основі води - утворення кристалів при 4 °C і 40 °C Qs - сліди. 5 10 15 20 25 Різні наповнювачі, концентрації активних речовин і буферна система були проварійовані для визначення впливу на стабільність активних речовин макроциклічного лактону і левамізолу. Несподівано було виявлено, що можливо запобігти або значно знизити деградацію макроциклічного лактону у водній композиції при низькому pH. Це дозволяє використовувати pH, прийнятний для стабілізації компонента левамізолу, розчиненого у водній композиції. Цей підхід є переважним в порівнянні із компромісом, який вимагав би pH в проміжку низького значення, прийнятного для левамізолу, і нейтрального pH, прийнятного для макроциклічного лактону. Навіть більш несподівано, було знайдено, що комбінація макроциклічного лактону і левамізолу може бути стабілізована в композиції, яка містить відносно високі концентрації активних речовин, які звичайно були б необхідні для ін'єкційного препарату. Розробка композиції, прийнятної для ін'єкції, може бути ускладнена через бажання збільшити концентрацію активних речовин в порівнянні з іншими видами композицій, обмежити або зменшити об'єм композиції, призначеної для ін'єкції. Макроциклічний лактон розчиняється з використанням розчинника, який повністю розчиняється в складі композиції. Тому, швидше утворюється справжній розчин або міцелярний розчин, ніж емульсія. Переважним розчинником є бензиловий спирт, який є ефективним розчинником для макроциклічних лактонів і при цьому діє як консервант. Розчинність розчинника всередині композиції може бути збільшена при використанні співрозчинників таких як розчинники гліцерин формаль і пропіленгліколь, які змішуються із водою, які можуть також діяти як стабілізатори. Кваліфікований фахівець легко визначить інші системи розчинників, які також можуть бути прийнятними. Використання поверхнево-активних речовин для збільшення розчинності і/або стабільності активних речовин особливо переважне. Створення міцелярного розчину є переважним способом розчинення макроциклічного лактону всередині водної композиції. 5 UA 113179 C2 Таблиця 2 нижче представляє переважну композицію відповідно до даного винаходу. Композиція містить дорамектин і левамізол в кількостях, які, як було показано, є високоефективними проти паразитів. Препарат є стабільним, без утворення кристалів і має мінімальні, якщо є, побічні ефекти на тваринах. 5 Таблиця 2 Переважна композиція Назва інгредієнта Дорамектин Левамізол фосфат ЕДТА динатрій Бутилгідрокситолуол (BHT) Бензиловий спирт Стабілізований гліцерин формаль Полісорбат 80 Лимонна кислота Гідроокис натрію Вода для ін'єкції DL-ін'єкція CAS номер Кількість г/л 117704-25-3 4,2* 32093-35-9 210* 139-33-3 1 128-37-0 2,5 100-51-6 35 4740-78-7 200 5464-28-8 9005-65-6 200 77-92-9 22 1310-73-2 3 7732-18-5 qs Функція Активний інгредієнт Активний інгредієнт Хелатуюча речовина Антиоксидант Консервант Стабілізатор Поверхнево-активна речовина pH-регулятор pH-регулятор Розчинник/ носій *5 % доданий надлишок Qs - сліди. 10 15 20 25 30 35 pH композиції був доведений до близько 3,9 за допомогою цитратної буферної системи. Зокрема, було зазначено, що для досягнення стабільності і збереження композиції в розчині був необхідний високий процент поверхнево-активної речовини. Без наявності поверхневоактивної речовини в достатній кількості, спостерігалися кристалізація і зміни кольору розчину. Спосіб виробництва Переважний спосіб виробництва переважного варіанту винаходу складається з етапів: Етап 1: а. У чисту і суху виробничу посудину вміщують 30 % воду для ін'єкції. b. Додають і розчиняють при перемішуванні ЕДТА динатрій. с. Додають і розчиняють при перемішуванні лимонну кислоту. d. Додають і розчиняють при перемішуванні гідроокис натрію. е. Додають і перемішують стабілізований гліцерин нормаль. f. Додають і розчиняють при перемішуванні левамізол фосфат. g. Перевіряють прозорість розчину. Етап 2: h. У окрему чисту і суху виробничу посудину вміщують бензиловий спирт і нагрівають до 5055 °C. i. Додають і розчиняють при перемішуванні BHT. j. Додають і розчиняють при перемішуванні дорамектин. k. Додають теплий полісорбат 80 і добре перемішують. l. Перевіряють прозорість розчину. Етап 3: m. Додають "Етап 1" до "Етапу 2" і добре перемішують. n. Споліскують посудину від Етапу 2 певною кількістю води для ін'єкції і додають промивну воду до основного об'єму. о. Доводять до кінцевого об'єму водою для ін'єкції і добре перемішують. р. Перевіряють pH він повинен бути 3,6-4,2. Значне число випробувань було проведене з використанням композиції відповідно до даного винаходу і в порівнянні її ефектів відносно Detomax™ і контрольною групою, яка не лікувалася. Нижченаведена таблиця 3 показує значення підрахунків фекальних яєць, виявлених у не забитої великої рогатої худоби, після лікування даним винаходом (DL-ін'єкція) і Detomax™. Розмір дослідної партії тут - 36 великих рогатих тварин. 6 UA 113179 C2 Як, безсумнівно, видно підрахунки яєць через 35 днів після лікування у випадку даного винаходу залишаються все ще нульовими, в той час як велика рогата худоба, яка лікувалась або не лікувалась Deсtomax™ має значні підрахунки фекальних яєць. Ця припущена резистентність може бути представлена в цьому дослідженні. 5 Таблиця 3 Середні підрахунки фекальних яєць у незабитої великої рогатої худоби після лікування DL ін'єкцією або Dectomax Застосований препарат Дні після лікування 21 28 7 14 DL-ін'єкція 121,4 0 (100) 0 (100) 0 (100) 0 (100) 0 (100) Dectomax 128,6 неліковані 10 -3 35 128,6 57,1 (71,5) 200,0 21,4 (85,7) 150,0 28,6 (80,0) 142,9 57,1 (63,7) 157,1 107,1 (40,0) 178,6 42 50,0 (73,1) 135,7 (26,9) 185,7 49 50,0 (70,8) 128,6 (25) 171,4 Таблиця 4 нижче представляє середні підрахунки фекальних яєць в забитих великих рогатих тваринах в такому ж дослідженні. Також вона вказує на те, що, коли присутня резистенція до дорамектину, даний винахід може значно поліпшити результати в порівнянні з промисловим стандартом Dectomax™. Таблиця 4 Середні підрахунки фекальних яєць у забитої великої рогатої худоби після лікування DL ін'єкцією, Dectomax або нелікованої Застосований препарат Дні після лікування 7 0 (100) 22,2 (90,5) 233,3 -3 DL-ін'єкція 288 Dectomax 250 неліковані 271,4 13/14 0 (100) 77,8 (67,0) 235,7 Аналогічним чином, Таблиця 5 показує значні відмінності між ефектом даного винаходу на личинкові культури в порівнянні із Dectomax™. 15 Таблиця 5 Кількісні дані про личинкову культуру для 50 г зразків, зібраних у незабитої великорогатої худоби у різні часи після лікування DL ін'єкцією, Dectomax або нелаковані Застосований препарат DL-ін'єкція Dectomax неліковані -3 22000 22000 22000 Дні після лікування 7 15 21 28 35 42 0 (100) 15 (99,7) 0 (100) 8 (99,8) 0 (100) 6500 (19,8) 7600 (19,1) 490 (90,9) 410 (94,6) 2300 (53,1) 1100 (64,5) 3100 (61,7) 9400 5400 7600 4900 3100 8100 Число в дужках стосуватися % перевірки, звіреної із нелікованою группою. 20 Інтерпретація цих даних спільно із більш детальними даними (не наведені в описі) представлені нижче. Кількісне вимірювання числа личинок може надати більш чутливе вимірювання ефективності тестуючого препарату, ніж підрахунки яєць, і результати по незабитій великій рогатій худобі показали, що виявилося, що DL-ін'єкція ефективно подавляє екскрецію життєздатних яєць за період, принаймні, в 35 днів. 7 UA 113179 C2 5 10 Істотно, що рівень контролю, заданий цим єдиним інгредієнтом препаратом дорамектину, був відносно низьким протягом всього дослідження, найбільш ймовірно завдяки резистентним Trichostrongylus і Cooperia. Кількісні результати по личинковій культурі, також надали інформацію про види, які маскуються від яєць, що виділяються. В обох випадках в забитих і незабитих частинах дослідження Cooperia були домінантними видами личинок, виявленими в групі яку лікували Dectomax через 7, 13/14, 15, 21 і 28 днів після лікування. Крім того, значні числа для личинок Trichostrongylus були виявлені в кожному після лікувальному відборі проб у великої рогатої худоби яку лікували Dectomax. Цікаво, що ця тенденція узгоджується з системою, яку виявили в результатах підрахунку сукупності личинок. Як було згадано раніше, даний винахід виявився особливо ефективним відносно видів резистентних до дорамектину і це було підтверджено шляхом підрахунку тотальних личинок, як можна бачити в таблиці 6. Таблиця 6 1 Ефективність (%) тесту і використовуваних препаратів проти Trichostrongylus spp. і Cooperia spp., основана на підрахунках сукупності личинок Препарат DL-ін'єкція Dectomax Trichostrongylus axei >99,9 79,3 Види паразитів і стадія життя Trichostrongylus spp. тонкого кишечнику >99,9 83,8 Cooperia spp. >99,9 97,6 1 Основано на середньому геометричному. 15 20 Присутність резистентних до дорамектину видів в цьому дослідженні однозначно підтверджена для Trichostrongylus spp. сичуга і тонкої кишки, коли індивідуальний сумарний підрахунок личинок у забитих тварин отриманий для Dectomax порівнюється з даним винаходом (DL-ін'єкція), див. нижченаведену таблицю 7. Результати від індивідуальних підрахунків личинок і середньоарифметичний % зниження відносно Cooperia також дуже наводять на думку про появу резистентності до дорамектину у цих видів. Також можна зазначити, що в Новій Зеландії була задокументована резистентність Coperia spp. до макроциклічних лактонів у великої рогатої худоби. 8 UA 113179 C2 Таблиця 7 DL-ін'єкція Мітка № 48 57 239 242 309 438 PVS080 R74 АМ GM % зниження АМ % зниження GM 5-а стадія 50 6,3 0,6 >99,9 % >99,9 % Trichostrongylus spp. тонкого кишечнику 5-а 0,0 0,0 >99,9 % >99,9 % 59 236 237 560 573 1039 2066 65 233 АМ GM % зниження АМ % зниження GM 450 600 500 11000 15500 850 6250 300 3750 4356 1728 71,9 79,3 200 250 100 450 350 200 100 183,3 63,1 76,5 83,8 Trichostrongylus axei Cooperia spp. 5-а 0,0 0,0 >99,9 % >99,9 % 450 400 8600 2750 5150 250 1956 120,8 83,8 97,6 АМ = среднє арифметичне, GM = среднє геометричне. 5 10 15 20 Зокрема результати можна підсумовувати як зазначено нижче: 1. DL ін'єкція забезпечує >99,9 % від контролю, основаному на середньогеометричному значенні для Ostertagia spp, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus spp тонкого кишечнику, Cooperia spp, Oesophagostomum spp, Chabertia sp і Trichuris spp. 2. Dectomax™ і DL ін'єкція представили порівняльні рівні контролю Ostertagia spp, Oesophagostomum spp, Chabertia sp і Trichuris spp. 3. Dectomax™ дав низький рівень ефективності відносно Т. axei і Trichostrongylus spp. тонкого кишечнику, що значно відрізнялося від того, що давала DL-ін'єкція. Без жодного сумніву, можна бачити, що даний винахід високоефективний сам по собі, але також в порівнянні із існуючим препаратом, коли присутня резистентність до дорамектину. Використання даного винаходу має також додаткову перевагу у володінні значно меншими залишками дорамектину, ніж стандартний препарат дорамектину, особливо в місці ін'єкції. JECFA (1996) Монографія по дорамектину в "Residues of Some Veterinary Drugs in Animals and Foods, FAO Food and Nutrition Paper", № 41/8, pp 85-98 відмітила високі концентрації дорамектину в місці ін'єкції протягом 35 денного періоду після первинного введення неміченої дози ін'єкції дорамектину в кількості, рекомендованій на етикетці. Носій, використаний в цій ін'єкційній композиції, містив 75 % кунжутної олії і 25 % етилолеату. У тому звіті таблиця 8, представлена нижче для днів 21, 28 і 35, мала середні залишки дорамектину в місці ін'єкції 1900, 380 і 930 мкг/кг після 21, 28 і 35 днів відповідно після лікування неміченим дорамектином в кількості 0,2 мг/кг ваги тіла. 9 UA 113179 C2 Таблиця 8 Залишки дорамектину (мкг/кг) в тканинах великої рогатої худоби після лікування неміченим дорамектином в кількості 0,2 мг/кг ваги тіла Тканина м'язова печінка нирки жир ін'єкція День 21