Спосіб та композиція для боротьби з бур’янами (варіанти)

Реферат: Винахід стосується способу боротьби з ростом бур′янистої рослини, який включає місцеве нанесення на поверхню бур′янистої рослини композиції, яка містить полінуклеотид ідентичний або комплементарний до щонайменше 18 безперервних нуклеотидів послідовності гена АККази UA 116090 C2 (12) UA 116090 C2 або РНК-транскрипту вказаної послідовності гена АККази, де вказану послідовність гена АККази вибирають із групи, яка складається з SEQ ID NO: 1, 5, 6, 11, 12, 16, 18, 22-24, 26, 27, 32, 34-73, 79 і 81-92, і агент перенесення, який готує вказану поверхню вказаної бур′янистої рослини для проникнення вказаного полінуклеотиду, причому ріст, розвиток або репродуктивна здатність вказаної бур′янистої рослини знижується, або вказана бур′яниста рослина стає сприйнятливішою до гербіциду, який є інгібітором АККази, порівняно з необробленою бур′янистою рослиною; композиції, що містить вказаний полінуклеотид і вказаний агент перенесення. UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Відповідно до § 119 (e) розділу 35 Кодексу США (35 U.S.C.) у цій заявці заявляється пріоритет за попередньою заявкою на видачу патенту США із серійним номером 61/534,073, поданої 13 вересня 2011 року, розкриття якої включене в цей документ у вигляді посилання в повному обсязі. Перелік послідовностей, що міститься у файлі з ім'ям "40_21(58637)B seq listing.txt", розмір якого складає 2,094,591 байт (виміряний в операційній системі MS-Windows) і який був створений 6 вересня 2012 року, приведений та включений в цей документ у вигляді посилання. ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ Зокрема, винахід належить до генів ацетил-КоА-карбоксилази (АККази) у смітних рослин і композицій, що містять полінуклеотидні молекули для модуляції їх експресії. Винахід додатково забезпечує способи та композиції, що використовуються для боротьби з бур'янами. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Бур'яни являють собою рослини, що конкурують з культурними рослинами в агрономічних умовах і коштують фермерам мільярди доларів щорічно у зв'язку з втратами урожаю і витратами на спроби утримати бур'яни під контролем. Бур'яни також є хазяїнами носіями хвороб сільськогосподарських культур та комах-шкідників. Збитки, заподіяні бур'янами в умовах сільськогосподарського виробництва, включають зниження врожайності, погіршення якості урожаю, підвищення витрат на зрошування, збільшення витрат на збір урожаю, зниження вартості землі, спричинення шкоди для худоби та пошкодження урожаю шкідниками і хворобами, які несуть бур'яни. Основними засобами, за допомогою яких бур'яни викликають ці наслідки, є: 1) конкуренція із культурними рослинами за воду, поживні речовини, сонячне світло та інші невід'ємні умови для росту та розвитку, 2) виділення токсичних або дратівливих хімічних речовин, які викликають проблеми зі здоров'ям у людей або тварини, 3) утворення величезної кількості насіння або вегетативних репродуктивних органів або і тих, і інших, які засмічують сільськогосподарську продукцію і назавжди зберігаються в сільськогосподарських землях, та 4) утворення на сільськогосподарських і несільськогосподарських землях величезної кількості рослинності, що підлягає знищенню. Гербіцидостійкі бур'яни є проблемою при використанні майже усіх гербіцидів; існує необхідність ефективної боротьби з цими бур'янами. Нині більше ніж 365 біотипів бур'янів визначаються як стійкі до одного або декількох гербіцидів згідно з Комітетом з попередження виникнення стійкості до дії гербіцидів (HRAC), Північноамериканським комітетом з попередження виникнення стійкості до дії гербіцидів (NAHRAC) і Американським науковим суспільством з дослідження бур'янів (WSSA). Фермент ацетил-КоА-карбоксилази (АККази) каталізує біотин-залежне карбоксилювання ацетил-КоА з утворенням малоніл-КоА, це перший і фіксований крок у біосинтезі довголанцюгових жирних кислот. Цей фермент є мішенню багатьох гербіцидів, які включають представників таких хімічних сімейств як арілоксифеноксипропіонати, циклогександіони та фенілпіразолін. СУТЬ ВИНАХОДУ У одному аспекті цей винахід належить до способу контролю за ростом рослин, що включає зовнішню обробку рослини композицією, яка містить полінуклеотид та агент перенесення, в якій полінуклеотид практично ідентичний або практично комплементарний послідовності гену АККази або її фрагменту, або РНК-транскрипту вказаної послідовності гену АККази або її фрагменту, в якій вказану послідовність гену АККази обирають із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-92 або фрагмента полінуклеотиду, внаслідок чого ріст або розвиток, або репродуктивна здатність смітної рослини знижується або смітна рослина стає сприйнятливішою до гербіциду, що є інгібітором АККази, у порівнянні зі смітною рослиною, яка не оброблена вказаною композицією. Таким чином, рослини, які стали стійкими до застосування гербіцидів, що містять інгібітор АККази, можна зробити сприйнятливішими до гербіцидних дій гербіциду, що містить інгібітор АККази, тим самим посилюючи дію гербіциду. Фрагмент полінуклеотиду, який складається з щонайменше 18 безперервних нуклеотидів, щонайменше 19 безперервних нуклеотидів, щонайменше 20 безперервних нуклеотидів або щонайменше 21 безперервних нуклеотидів у довжину і щонайменше на 85 відсотків ідентичний послідовності гену АККази, обраній із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-92 та агента перенесення, являє собою кремнійорганічну композицію або сполуку. Фрагмент полінуклеотиду може бути смисловою або антисмисловою молекулою олДНК або олРНК, длРНК або длДНК, або гібридами длДНК/РНК. Композиція може містити більше ніж один фрагмент полінуклеотиду та композиція може містити гербіцид, що є інгібітором АККази, і/або інші гербіциди, які підвищують дію композиції для боротьби з бур'янами. В іншому аспекті цього винаходу розкриваються полінуклеотидні молекули та способи модуляції експресії гену АККази у смітних видів рослин. Спосіб знижує, пригнічує або іншим 1 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 чином уповільнює експресію гену АККази у смітної рослини, що включає зовнішню обробку смітної рослини композицією, яка містить полінуклеотид та агент перенесення, в якій полінуклеотид практично ідентичний або практично комплементарний послідовності гену АККази пригнічує або іншим чином уповільнює, або РНК-транскрипту послідовності гену АККази пригнічує або іншим чином уповільнює, в якій послідовність гену АККази обирають із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-92 або їх фрагмента полінуклеотиду. Фрагмент полінуклеотиду, який складається з щонайменше 18 безперервних нуклеотидів, щонайменше 19 безперервних нуклеотидів, щонайменше 20 безперервних нуклеотидів або щонайменше 21 безперервних нуклеотидів у довжину і щонайменше на 85 відсотків ідентичний послідовності гену АККази, обраній із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-92 та агента перенесення, являє собою кремнійорганічну композицію. Фрагмент полінуклеотиду може бути смисловою або антисмисловою молекулою олДНК або олРНК, длРНК або длДНК, або гібридами длДНК/РНК. У додатковому аспекті винаходу композицію, що містить полінуклетидну молекулу, можна змішати з іншими гербіцидними сполуками, щоб забезпечити додатковий контроль за небажаними рослинами на полі із культурними рослинами. У додатковому аспекті композицію полінуклеотидної молекули можна змішати з будь-яким одним або декількома додатковими агрохімікатами, такими як, інсектициди, фунгіциди, нематоциди, бактерициди, акарициди, регулятори росту, хемостерилізатори, хімічні сигнальні речовини, репеленти, атрактанти, феромони, стимулятори поїдання, біопестициди, мікробні пестициди або інші біологічно активні сполуки для отримання багатокомпонентного пестициду, що надає ще ширший спектр захисту сільськогосподарської продукції. ПЕРЕЛІК ФІГУР КРЕСЛЕННЯ Наступні креслення утворюють частину цього опису і включені для додаткової демонстрації деяких аспектів цього винаходу. Цей винахід може бути краще зрозумілим із посиланням на один або декілька із цих креслень у поєднанні з детальним описом конкретних варіантів реалізації винаходу, приведених в цьому документі. Цей винахід може бути краще зрозумілий завдяки наступному опису фігур: Фігура 1. ілюструє обробку щириці Палмера (Amaranthus palmeri) тригерними полінкулеотидами олДНК і гербіцидом, що є інгібітором АККази, клетодимом. ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ Пропонуються способи та композиції, що містять полінуклеотид, який забезпечує регуляцію, репресію або уповільнення експресії гену АККази (ацетил-КоА-карбоксилази), а також поліпшений контроль за видами смітних рослин і особливо за біотипами бур'янів, стійкими до інгібіторів АККази. Аспекти способу можуть застосовуватися для контролю за ростом різних смітних рослин в агрономічних та інших культурних середовищах. Наступні визначення та способи пропонуються для того, щоб краще визначити цей винахід і спрямувати фахівців цієї галузі техніки на практику цього винаходу. Якщо не вказане інше, терміни, використані в цьому винаході, мають ті ж значення, які зазвичай відомі фахівцеві із загальною підготовкою в галузі техніки, до якої належить цей винахід. Якщо термін приведений в однині, автори цього винаходу також мають на увазі множину цього терміну. Під полінуклеотидами, що "не транскрибуються", мають на увазі, що полінуклеотиди не містять повної одиниці транскрипції полімерази II. Використовуваний тут термін "розчин" належить до однорідних сумішей і до неоднорідних сумішей, таких як суспензії, колоїди, міцели та емульсії. Смітними рослинами є рослини, які конкурують із культурними рослинами, найбільш важливі з яких включають, без обмеження ними, такі важливі інвазивні та шкідливі бур'яни, а також стійкі до дії гербіциду біотипи в рослинництві, як Amaranthus вид -A. albus, A. blitoides, A. hybridus, A. palmeri, A. powellii, A. retroflexus, A. spinosus, A. tuberculatus та A. viridis; Ambrosia вид -A. trifida, A. artemisifolia; Lolium вид -L. multiflorum, L. rigidium, L perenne; Digitaria вид -D. insularis; Euphorbia вид -E. heterophylla; Kochia вид -K. scoparia; Sorghum вид -S. halepense; Conyza вид C. bonariensis, C. canadensis, C. sumatrensis; Chloris вид -C. truncate; Echinochola вид -E. colona, E. crus-galli; Eleusine вид -E. indica; Poa вид -P. annua; Plantago вид -P. lanceolata; Avena вид -A. fatua; Chenopodium вид -C. album; Setaria вид –S. viridis, Abutilon theophrasti, Ipomoea вид, Sesbania, вид, Cassia вид, Sida вид, Brachiaria вид та Solanum вид. Додаткові види смітних рослин, знайдені на посівних площах включають Alopecurus myosuroides, Avena sterilis, Avena sterilis ludoviciana, Brachiaria plantaginea, Bromus diandrus, Bromus rigidus, Cynosurus echinatus, Digitaria ciliaris, Digitaria ischaemum, Digitaria sanguinalis, Echinochloa oryzicola, Echinochloa phyllopogon, Eriochloa punctata, Hordeum glaucum, Hordeum leporinum, Ischaemum rugosum, Leptochloa chinensis, Lolium persicum, Phalaris minor, Phalaris paradoxa, Rottboellia exalta, Setaria faberi, Setaria viridis var, robusta-alba schreiber, Setaria viridis 2 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 var, robusta-purpurea, Snowdenia polystachea, Sorghum sudanese, Alisma plantago-aquatica, Amaranthus lividus, Amaranthus quitensis, Ammania auriculata, Ammania coccinea, Anthemis cotula, Apera spica-venti, Bacopa rotundifolia, Bidens pilosa, Bidens subalternans, Brassica tournefortii, Bromus tectorum, Camelina microcarpa, Chrysanthemum coronarium, Cuscuta campestris, Cyperus difformis, Damasonium minus, Descurainia sophia, Diplotaxis tenuifolia, Echium plantagineum, Elatine triandra var, pedicellata, Euphorbia heterophylla, Fallopia convolvulus, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Helianthus annuus, Iva xanthifolia, Ixophorus unisetus, Ipomoea indica, Ipomoea purpurea, Ipomoea sepiaria, Ipomoea aquatic, Ipomoea triloba, Lactuca serriola, Limnocharis flava, Limnophila erecta, Limnophila sessiliflora, Lindernia dubia, Lindernia dubia var, major, Lindernia micrantha, Lindernia procumbens, Mesembryanthemum crystallinum, Monochoria korsakowii, Monochoria vaginalis, Neslia paniculata, Papaver rhoeas, Parthenium hysterophorus, Pentzia suffruticosa, Phalaris minor, Raphanus raphanistrum, Raphanus sativus, Rapistrum rugosum, Rotala indica var, uliginosa, Sagittaria guyanensis, Sagittaria montevidensis, Sagittaria pygmaea, Salsola iberica, Scirpus juncoides var, ohwianus, Scirpus mucronatus, Setaria lutescens, Sida spinosa, Sinapis arvensis, Sisymbrium orientale, Sisymbrium thellungii, Solanum ptycanthum, Sonchus asper, Sonchus oleraceus, Sorghum bicolor, Stellaria media, Thlaspi arvense, Xanthium strumarium, Arctotheca calendula, Conyza sumatrensis, Crassocephalum crepidiodes, Cuphea carthagenenis, Epilobium adenocaulon, Erigeron philadelphicus, Landoltia punctata, Lepidium virginicum, Monochoria korsakowii, Solanum americanum, Solanum nigrum, Vulpia bromoides, Youngia japonica, Hydrilla verticillata, Carduus nutans, Carduus pycnocephalus, Centaurea solstitialis, Cirsium arvense, Commelina diffusa, Convolvulus arvensis, Daucus carota, Digitaria ischaemum, Echinochloa crus-pavonis, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Limnophila erecta, Matricaria perforate, Papaver rhoeas, Ranunculus acris, Soliva sessilis, Sphenoclea zeylanica, Stellaria media, Nassella trichotoma, Stipa neesiana, Agrostis stolonifera, Polygonum aviculare, Alopecurus japonicus, Beckmannia syzigachne, Bromus tectorum, Chloris inflate, Echinochloa erecta, Portulaca oleracea та Senecio vulgaris. Вважається, що усі рослини містять у своєму геномі ген фітоендесатурази, послідовність якого можна виділити та отримати полінуклеотиди відповідно до способів цього винаходу, які застосовуються для регуляції, пригнічення або уповільнення експресії гену-мішені АККази в рослинах і росту або розвитку оброблених рослин. Деякі культурні рослини також можуть бути смітними рослинами, якщо вони зустрічаються в небажаному середовищі. Наприклад, кукурудза, яка росте на полі сої. Трансгенні культури, стійкі до одного або декількох гербіцидів потребують спеціалізованих способів управління для боротьби з бур'янами та самопосівними сільськогосподарськими культурами. Цей винахід дозволяє виявляти трансгени стійкості до гербіцидів, щоб дозволити обробленим рослинам стати сприйнятливими до гербіциду. Наприклад, трансгенні послідовності ДНК АККази в трансгенних об'єктах, які включають DAS-40278-9. "Тригер" або "тригерний полінуклеотид" являє собою молекулу полінуклеотиду, яка гомологічна або комплементарна полінуклеотиду гену-мішені. Тригерні молекули полінуклеотиду модулюють експресію гену-мішені при місцевому нанесенні на поверхню рослин за допомогою агента перенесення, завдяки якому ріст або розвиток, або репродуктивна здатність рослини, обробленої вказаною композицією, регулюється, пригнічується або сповільнюється, або вказана рослина стає срийнятливішою до гербіциду, що є інгібітором АККази, у результаті використання вказаної композиції, яка містить полінуклеотид, у порівнянні з рослиною, яка не оброблена композицією, що містить тригерну молекулу. Передбачається, що композиція згідно цього винаходу міститиме декілька полінуклеотидів та гербіцидів, які включають, без обмеження ними, тригерні полінуклеотиди гену АККази і гербіцид, що є інгібітором АККази, і будь-який один або декілька додаткових тригерних полінуклеотидів гену-мішені гербіциду і відповідних гербіцидів, і будь-який один або декілька додаткових тригерних полінуклеотидів основного гену. Основні гени являють собою гени в рослині, які забезпечують ключові ферменти або інші білки, наприклад, фермент біосинтезу, метаболізуючий фермент, рецептор, білок-переносник сигналу, структурний продукт гену, фактор транскрипції або транспортний білок; або регулюючі РНК, такі як, мікроРНК, які важливі для росту або виживання організму або клітини, або беруть участь у нормальному рості і розвитку рослин (Meinke зі співавторами, Trends Plant Sci. 2008 Sep;13(9):483-91). Пригнічення основного гену посилює дію гербіциду, що впливає на функцію продукту гена, відмінну від пригніченого основного гену. Композиції згідно цього винаходу можуть містити різні тригерні полінуклеотиди, які модулюють експресію основного гену, відмінного від АККази. Гербіциди, до яких трансгени рослин проявили стійкість і можна застосувати спосіб згідно цього винаходу, включають, без обмеження ними: ауксиноподібні гербіциди, гліфосат, 3 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 глюфосинат, сульфонілсечовини, імідазолінони, бромоксиніл, делапон, дикамбу, циклогександіон, інгібітори протопорфириноген оксидази, гербіциди що є інгібіторами 4гідроксифеніл-піруват диоксигенази. Наприклад, трансгени та їх полінуклеотидні молекули, які кодують білки, які відповідають за стійкість до гербіцидів, відомі в цій галузі техніки, і включають, без обмеження нею, 5-енолпірувіл-шикімат-3-фосфат-синтазу (EPSPS), наприклад, що детальніше описано в патентах США за номерами 7,807,791 (SEQ ID NO: 5); 6,248,876 B1; 5,627,061; 5,804,425; 5,633,435; 5,145,783; 4,971,908; 5,3072,910; 5,188,642; 4,940,835; 5,866,775; 6,225,114 B1; 6,130,366; 5,3070,667; 4,535,060; 4,769,061; 5,633,448; 5,510,471; патенті США за номером Re. 36,449; патентах США за номерами RE 37,287 E; і 5,491,288; стійкість до сульфонілсечовини і/або імідазолінону, наприклад, що детальніше описана в патентах США за номерами 5,605,011; 5,013,659; 5,141,870; 5,767,361; 5,7307,180; 5,304,732; 4,761,373; 5,3307,107; 5,928,937; і 5,378,824; і міжнародній заявці WO 96/33270; стійкість до гербіцидів, що є інгібіторами гідроксифенілпіруватдиоксигенази в рослинах, описана в патентах США за номерами 6,245,968 B1; 6,268,549; і 6,069,115; публікаціях патенту США 20110191897 і US7,3072,379 SEQ ID NO: 3; US7,935,869; US7,304,209, SEQ ID NO: 1, 3,5 і 15; полінуклеотиди арілоксиалканоат диоксигенази, які надають стійкість до 2,4-D та інших гербіцидів на основі феноксиауксину, а також до гербіцидів на основі арілоксифеноксипропіонату, що описано, наприклад, в WO2005/107437; US7,838,733 SEQ ID NO: 5; і полінуклеотиди, стійкі до дикамби, що описано, наприклад, в Herman зі співавторами (2005) J. Biol. Chem. 280: 24759-24767. Інші приклади ознак стійкості до гербіциду включають ті, які обумовлені полінуклеотидами, які кодують екзогенну фосфінотріцин ацетилтрансферазу, що описано в патентах США за номерами 5,969,213; 5,489,520; 5,550,3078; 5,874,265; 5,919,675; 5,561,236; 5,648,477; 5,646,024; 6,177,616; та 5,879,903. Рослини, що містять екзогенну фосфінотріцин ацетилтрансферазу можуть проявляти підвищену стійкість до гербіцидів на основі глюфосинату, які інгібують фермент глутамінсинтетазу. Крім того, стійкі до гербіцидів полінуклеотиди включають ті, які обумовлені полінуклеотидами, що обумовлюють змінену дію протопорфириноген оксидази (протокс), як описано в патентах США за номерами 6,288,306 B1; 6,282,837 B1; та 5,767,373; та WO 01/12825. Рослини, які містять такі полінуклеотиди, можуть проявляти покращену стійкість до будь-якого з безлічі гербіцидів, що націлені на фермент протокс (також позначені як протокс інгібітори). Полінуклеотиди, які кодують гліфосат оксидоредуктазу та гліфосат-N-ацетил трансферазу (GOX описаний в патенті США 5,463,175 та GAT описаний в публікації патенту США 20030083480, дикамба монооксигенази в патенті США 7,022,896 та 7,884,262, усі з яких включені в цей документ у вигляді посилання); молекула полінуклеотиду, яка кодує бромоксиніл нітрилазу (Bxn описана в патенті США за номером 4,810,648 щодо стійкості до бромоксинілу, який включений в цей документ у вигляді посилання); молекула полінуклеотиду, яка кодує фітоендесатуразу (crtI), описана у Misawa зі співавторами, (1993) Plant J. 4:833-840 та у Misawa зі співавторами, (1994) Plant J. 6:481-489 щодо стійкості до норфлуразону; молекула полінуклеотиду, яка кодує синтазу ацетогідроксикислот (AHAS, aka ALS), описана у Sathasiivan зі співавторами (1990) Nucl. Acids Res. 18:2188-2193 щодо стійкості до гербіцидів групи сульфонілсечовини; та ген bar, описаний у DeBlock зі співавторами (1987) EMBO J. 6:2513-2519 щодо стійкості до глюфосинату та біалафосу. Трансгенні кодуючі області і регуляторні елементи генів стійкості до гербіцидів являють собою мішені, в яких тригерні полінуклеотиди і гербіциди можуть бути включені в композиції згідно цього винаходу. Композиція згідно цього винаходу містить компонент, який являє собою гербіцид, що є інгібітором АККази, який включає представників таких хімічних сімейств як арілоксифеноксипропіонати, циклогександіони та фенілпіразолін, що включають, без обмеження ними, арілоксифеноксипропіонат, що включає клодинафоп ((2R)-2-пропініловий ефір, 2-[4-[(5-хлор-3-флуоро-2-піридиніл)окси]фенокси]-пропанової кислоти), цигалофоп (бутил(2R)-2-[4-(4-циано-2-флуорофенокси)фенокси] пропіонату), диклофоп (метил 2-[4-(2,4дихлорфенокси)фенокси] пропаноату), феноксапроп (етил (R)-2-[4-(6-хлор-1,3-бензоксазол-2ілокси)фенокси] пропіонату), флуазіфоп (2R)-2-[4-[[5-(трифлуорометил)-2піридиніл]окси]фенокси] пропанової кислоти), галоксифоп (2-[4-[[3-хлор-5-(трифлуорометил)-2піридиніл]окси]фенокси] пропанової кислоти), пропаквізафоп (2-[[(1метилетиліден)аміно]окси]етил (2R)-2-[4-[(6-хлор-2-хіноксалініл)окси]фенокси] пропаноату) та хізалофоп (2R)-2-[4-[(6-хлор-2-хіноксалініл)окси]фенокси] пропанової кислоти; циклогександіон, що включає алоксидим (метил 2,2-диметил-4,6-диокси-5-[(1E)-1-[(2-пропен-1-ілокси)іміно]бутил] циклогексанкарбоксилату), бутроксидим (2-[1-(етоксиіміно)пропіл]-3-гідрокси-5-[2,4,6-триметил3-(1-оксобутил)феніл]-2-циклогексен-1-ону), клетодим (2-[1-[[[(2E)-3-хлор-2-пропен-1іл]окси]іміно]пропіл]-5-[2-(етилтіо)пропіл]-3-гідрокси-2-циклогексен-1-ону), циклоксидим (2-[1(етоксиіміно)бутил]-3-гідрокси-5-(тетрагідро-2H-тіопіран-3-іл)-2-циклогексен-1-ону), 4 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 профоксидим (2-[1-[[2-(4-хлорфенокси)пропокси]іміно]бутил]-3-гідрокси-5-(тетрагідро-2Hтіопіран-3-іл)-2-циклогексен-1-ону), сетоксидим (2-[1-(етоксиіміно)бутил]-5-[2-(етилтіо)пропіл]-3гідрокси-2-циклогексен-1-ону), тепралоксидим (2-[1-[[[(2E)-3-хлор-2-пропен-1іл]окси]іміно]пропіл]-3-гідрокси-5-(тетрагідро-2H-піран-4-іл)-2-циклогексен-1-ону) та тралкоксидим (2-[1-(етоксиіміно)пропіл]-3-гідрокси-5-(2,4,6-триметилфеніл)-2-циклогексен-1ону); фенілпіразолін, що включає піноксаден (8-(2,6-диетил-4-метилфеніл)-1,2,4,5-тетрагідро-7оксо-7H-піразоло[1,2-d][1,4,5]оксадіазепін-9-іл 2,2-диметилпропаноату). Доступні численні гербіциди з аналогічними або різними механізмами дії (надалі позначені як сумісні гербіциди), які можна додати до композиції згідно цього винаходу, наприклад, представники сімейства гербіцидів, що включають, без обмеження ними, амідні гербіциди, гербіциди на основі ароматичних кислот, миш'якові гербіциди, гербіциди на основі бензотіазолу, гербіциди на основі бензоїлциклогександіону, гербіциди на основі бензофураніл алкілсульфонату, гербіциди на основі карбамату, гербіциди на основі циклогексеноксиму, гербіциди на основі циклопропілізоксазолу, гербіциди на основі дикарбоксиміду, гербіциди на основі динітроаніліну, гербіциди на основі динітрофенолу, гербіциди на основі дифенілового ефіру, гербіциди на основі дитіокарбамату, галогеновані аліфатичні гербіциди, гербіциди на основі імідазолінону, неорганічні гербіциди, нітрильні гербіциди, фосфорорганічні гербіциди, гербіциди на основі оксадиазолону, гербіциди на основі оксазолу, феноксигербіциди, гербіциди на основі фенілендиаміну, піразольні гербіциди, гербіциди на основі піридазину, гербіциди на основі пирідазінону, піридинові гербіциди, гербіциди на основі піримідиндиаміну, гербіциди на основі піримідинілоксибензиламіну, четвертинні амонієві гербіциди, гербіциди на основі тіокарбамату, гербіциди на основі тіокарбонату, гербіциди на основі тіосечовини, триазинові гербіциди, гербіциди на основі триазинону, гербіциди на основі триазолу, гербіциди на основі триазолону, гербіциди на основі триазолопіримідину, гербіциди на основі урацилу і гербіциди на основі сечовини. Зокрема, норми витрати доданих гербіцидів в композиціях, що містять полінуклеотиди, можна зменшити. Скорочення норм витрат додатково доданих гербіцидів може складати 10-25 відсотків, 26-50 відсотків, 51-75 відсотків або може бути більшим, та в якості аспекту винаходу очікується підвищення активності полінуклеотидів і композиції гербіциду. Типові сумісні гербіциди сімейств включають, без обмеження ними, ацетохлор, ацифлуорфен, ацифлуорфен натрію, аклоніфен, акролеїн, алахлор, алоксидим, аліловий спирт, аметрин, амікарбазон, амідосульфурон, амінопіралід, амітрол, сульфамат амонію, анілофос, асулам, атратон, атразін, азимсульфурон, BCPC, бефлубутамід, беназолін, бенфлуралін, бенфуресат, бенсульфурон, бенсульфурон-метил, бенсулід, бентазон, бензфендізон, бензобіциклон, бензофенап, біфенокс, біланафос, біспірібак, біспірібак натрію, буру, бромацил, бромобутид, бромоксиніл, бутахлор, бутафенацил, бутаміфос, бутралін, бутроксидим, бутилат, какодилову кислоту, хлорат кальцію, кафенстрол, карбетамід, карфентразон, карфентразон-етил, CDEA, CEPC, хлорфлуренол, хлорфлуренолметил, хлоридазон, хлорімурон, хлорімурон-етил, хлороцетову кислоту, хлоротолурон, хлорпрофам, хлорсульфурон, хлортал, хлортал-диметил, цинідон-етил, цинметилін, циносульфурон, цисанілід, клетодим, клодинафоп, клодинафоппропаргіл, кломазон, кломепроп, клопіралід, клорансулам, клорансулам-метил, CMA, 4-CPB, CPMF, 4-CPP, CPPC, крезол, кумілурон, цианамід, цианазін, циклоат, циклосульфамурон, циклоксидим, цигалофоп, цигалофоп-бутил, 2,4-D, 3,4-DA, даімурон, далапон, дазомет, 2,4-DB, 3,4-DB, 2,4-DEB, десмедіфам, дикамбу, дихлобеніл, орто-дихлорбензол, пара-дихлорбензол, дихлорпроп, дихлорпроп-П, диклофоп, диклофоп-метил, диклосулам, дифензокват, дифензоквату метилсульфат, дифлуфенікан, дифлуфензопір, димефурон, димепіперат, диметахлор, диметаметрин, диметенамід, диметенамід-П, диметипін, диметиларсинову кислоту, динітрамін, динотерб, дифенамід, дикват, диквату дибромід, дитіопір, діурон, DNOC, 3,4-DP, DSMA, EBEP, ендотал, ЕРТС, еспрокарб, еталфлуралін, етаметсульфурон, етаметсульфурон-метил, етофумезат, етоксифен, етоксисульфурон, етобензанід, феноксапроп-П, феноксапроп-П-етил, фентразамід, сульфат заліза, флампроп-M, флазасульфурон, флорасулам, флуазіфоп, флуазіфоп-бутил, флуазіфоп-П, флуазіфоп-Пбутил, флукарбазон, флукарбазон натрію, флуцетосульфурон, флухлоралін, флуфенацет, флуфенпір, флуфенпір-етил, флуметсулам, флуміклорак, флуміклорак-пентил, флуміоксазин, флуометурон, флуороглікофен, флуороглікофен-етил, флупропанат, флупірсульфурон, флупірсульфурон-метил натрію, флуренол, флурідон, флуорохлоридон, флуороксипір, флуртамон, флутіацет, флутіацет-метил, фомесафен, форамсульфурон, фосамін, глюфосинат, глюфосинат амонію, гліфосат, галосульфурон, галосульфурон-метил, галоксифоп, галоксифопП, HC-252, гексазінон, імазаметабенз, імазаметабенз-метил, імазамокс, імазапік, імазапір, імазаквін, імазетапір, імазосульфурон, інданофан, йодометан, йодосульфурон, йодосульфуронметил натрію, іоксиніл, ізопротурон, ізоурон, ізоксабен, ізоксахлортол, ізоксафлутол, 5 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 карбутилат, лактофен, ленацил, лінурон, MAA, МАМА, МСРА, МСРА-тіоетил, МСРВ, мекопроп, мекопроп-П, мефенацет, мефлуїдид, мезосульфурон, мезосульфурон-метил, мезотріон, метам, метаміфоп, метамітрон, метазахлор, метабензтіазурон, метиларсонову кислоту, метилдімрон, метилізотіоцианат, метобензурон, метолахлор, С-метолахлор, метосулам, метоксурон, метрибузін, метсульфурон, метсульфурон-метил, МK-66, молінат, монолінурон, MSMA, напроанілід, напропамід, напталам, небурон, нікосульфурон, нонанову кислоту, норфлуразон, олеїнову кислоту (жирні кислоти), орбенкарб, ортосульфамурон, оризалін, оксадиаргіл, оксадиазон, оксасульфурон, оксацикломефон, оксифлуорфен, паракват, дихлоріду паракват, пебулат, пендиметалін, пеноксулам, пентахлорфенол, пентанохлор, пентоксазон, петоксамід, нафтові олії, фенмедифам, фенмедифам-етил, піклорам, піколінафен, піноксаден, піперофос, арсеніт калію, азид калію, претілахлор, примісульфурон, примісульфурон-метил, продиамін, профлуазол, профоксидим, прометон, прометрин, пропахлор, пропаніл, пропаквізафоп, пропазін, профам, пропізохлор, пропоксикарбазон, пропоксикарбазон натрію, пропизамід, просульфокарб, просульфурон, піраклоніл, пірафлуфен, пірафлуфен-етил, піразолінат, піразосульфурон, піразосульфурон-етил, піразоксифен, пірибензоксим, пірибутикарб, піридафол, піридат, пірифталід, піримінобак, піримінобак-метил, піримісульфан, піритіобак, піритіобак натрію, квінклорак, квінмерак, квінокламін, хізалофоп, хізалофоп-П, римсульфурон, сетоксидим, сидурон, симазин, симетрин, SMA, арсеніт натрію, азид натрію, хлорат натрію, сулкотрион, сульфентразон, сульфометурон, сульфометурон-метил, сульфосат, сульфосульфурон, сірчану кислоту, дігтярну олію, 2,3,6-TBA, TCA, TCA-натрію, тебутіурон, тепралоксидим, тербацил, тербуметон, тербутилазін, тербутрин, тенілхлор, тіазопір, тіфенсульфурон, тіфенсульфурон-метил, тіобенкарб, тіокарбазил, топрамезон, тралкоксидим, триалат, триасульфурон, триазифлам, трибенурон, трибенурон-метил, трикамбу, триклопір, триетазин, трифлоксисульфурон, трифлоксисульфурон натрію, трифлуралін, трифлусульфурон, трифлусульфурон-метил, тригідрокситриазин, тритосульфурон, [3-[2-хлор-4флуоро-5-(-метил-6-трифлуорометил-2,4-диоксо-,2,3,4-тетрагідропіримідин-3-іл)фенокси]-2піриділокси] етиловий ефір оцтової кислоти (CAS RN 353292-3-6), 4-[(4,5-дигідро-3-метокси-4метил-5-оксо)-H-,2,4-триазол-ілкарбоніл-сульфамоїл]-5-метилтіофен-3 карбонової кислоти (BAY636), BAY747 (CAS RN 33504-84-2), топрамезон (CAS RN 2063-68-8), 4-гідрокси-3-[[2-[(2метоксиетокси)метил]-6-(трифлуоро-метил)-3-піридиніл]карбоніл]-біцикло[3.2.]окт-3-ен-2-ону (CAS RN 35200-68-5), і 4-гідрокси-3-[[2-(3-метоксипропіл)-6-(дифлуорометил)-3піридиніл]карбон-іл]-біцикло[3.2.]окт-3-ен-2-ону. Крім того, включення гербіцидних сполук із невказаними механізмами дії описано в CN101279950A, CN101279951A, DE10000600A1, DE10116399A1, DE102004054666A1, DE102005014638A1, DE102005014906A1, DE102007012168A1, DE102010042866A1, DE10204951A1, DE10234875A1, DE10234876A1, DE10256353A1, DE10256354A1, DE10256367A1, EP1157991A2, EP1238586A1, EP2147919A1, EP2160098A2, JP03968012B2, JP2001253874A, JP2002080454A, JP2002138075A, JP2002145707A, JP2002220389A, JP2003064059A, JP2003096059A, JP2004051628A, JP2004107228A, JP2005008583A, JP2005239675A, JP2005314407A, JP2006232824A, JP2006282552A, JP2007153847A, JP2007161701A, JP2007182404A, JP2008074840A, JP2008074841A, JP2008133207A, JP2008133218A, JP2008169121A, JP2009067739A, JP2009114128A, JP2009126792A, JP2009137851A, US20060111241A1, US20090036311A1, US20090054240A1, US20090215628A1, US20100099561A1, US20100152443A1, US20110105329A1, US20110201501A1, WO2001055066A2, WO2001056975A1, WO2001056979A1, WO2001090071A2, WO2001090080A1, WO2002002540A1, WO2002028182A1, WO2002040473A1, WO2002044173A2, WO2003000679A2, WO2003006422A1, WO2003013247A1, WO2003016308A1, WO2003020704A1, WO2003022051A1, WO2003022831A1, WO2003022843A1, WO2003029243A2, WO2003037085A1, WO2003037878A1, WO2003045878A2, WO2003050087A2, WO2003051823A1, WO2003051824A1, WO2003051846A2, WO2003076409A1, WO2003087067A1, WO2003090539A1, WO2003091217A1, WO2003093269A2, WO2003104206A2, WO2004002947A1, WO2004002981A2, WO2004011429A1, WO2004029060A1, WO2004035545A2, WO2004035563A1, WO2004035564A1, WO2004037787A1, WO2004067518A1, WO2004067527A1, WO2004077950A1, WO2005000824A1, WO2005007627A1, WO2005040152A1, WO2005047233A1, WO2005047281A1, WO2005061443A2, WO2005061464A1, WO2005068434A1, WO2005070889A1, WO2005089551A1, WO2005095335A1, WO2006006569A1, WO2006024820A1, WO2006029828A1, WO2006029829A1, WO2006037945A1, WO2006050803A1, WO2006090792A1, WO2006123088A2, WO2006125687A1, WO2006125688A1, WO2007003294A1, WO2007026834A1, WO2007071900A1, WO2007077201A1, WO2007077247A1, WO2007096576A1, WO2007119434A1, WO2007134984A1, WO2008009908A1, WO2008029084A1, WO2008059948A1, WO2008071918A1, WO2008074991A1, WO2008084073A1, WO2008100426A2, WO2008102908A1, WO2008152072A2, WO2008152073A2, WO2009000757A1, 6 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 WO2009005297A2, WO2009035150A2, WO2009063180A1, WO2009068170A2, WO2009068171A2, WO2009086041A1, WO2009090401A2, WO2009090402A2, WO2009115788A1, WO2009116558A1, WO2009152995A1, WO2009158258A1, WO2010012649A1, WO2010012649A1, WO2010026989A1, WO2010034153A1, WO2010049270A1, WO2010049369A1, WO2010049405A1, WO2010049414A1, WO2010063422A1, WO2010069802A1, WO2010078906A2, WO2010078912A1, WO2010104217A1, WO2010108611A1, WO2010112826A3, WO2010116122A3, WO2010119906A1, WO2010130970A1, WO2011003776A2, WO2011035874A1, WO2011065451A1, усі з яких включені в цей документ у вигляді посилання. Агрономічні поля, які потребують контролю за ростом рослин, обробляють шляхом нанесенням композиції безпосередньо на поверхню зростаючих рослин, наприклад, за допомогою обприскування. Наприклад, спосіб застосовують для боротьби з бур'янами на полі культурних рослин шляхом розпилення композиції на полі. Композиція може бути надана у вигляді бакової суміші, послідовної обробки компонентів (зазвичай композиціями, які містять полінуклеотид, а потім гербіцидом) або одночасної обробки, або змішування одного або більше компонентів композиції з окремих контейнерів. Обробка поля може проводитися в міру необхідності для забезпечення боротьби з бур'янами, а компоненти композиції можна скорегувати для боротьби з конкретними видами смітних рослин або сімействами бур'янів за допомогою використання конкретних полінуклеотидів або полінуклеотидних композицій, здатних вибірково охоплювати конкретні види або сімейства рослин, з якими належить боротися. Композицію можна використовувати з ефективною робочою концентрацією залежно від часу обробки поля, наприклад, передпосівне внесення, при посадці, після посадки, після збору урожаю. Гербіциди, що є інгібіторами АККази, можна використовувати на полі, виходячи з норми від 10 до 500 грамів аі/га (активного інгредієнту на гектар) або більше. Полінуклеотидні композиції можна використовувати, виходячи з норми від 1 до 30 грамів на акр, залежно від кількості тригерних молекул, необхідних для охоплення бур'янів на цьому полі. Культурні рослини, які потребують боротьби з бур'янами включають, без обмеження ними, такі рослини, як: а) кукурудза, соя, бавовна, рапс, цукровий буряк, люцерна, цукрова тростина, рис і пшениця; б) овочеві рослини, включаючи, без обмеження ними, томат, солодкий перець, гострий перець, диня, кавун, огірок, баклажан, цвітна капуста, броколі, салат, шпинат, лук, горох, морква, солодка кукурудза, пекінська капуста, цибуля-порей, кріп, гарбуз, кабачок або пляшковий гарбуз, редька, брюссельська капуста, фізаліс овочевий, стручкова квасоля, зріла квасоля або бамія; в) зелень, включаючи, без обмеження ними, базилік, петрушка, кава або чай; або г) плодові рослини, включаючи, без обмеження ними, яблуко, груша, вишня, персик, слива, абрикос, банан, плантан, столовий виноград, винний виноград, цитрусові, авокадо, манго або ягоди; д) дерева, які вирощуються для декоративного або комерційного використання, включаючи, без обмеження ними, фруктові або горіхоплідні дерева; або е) декоративні рослини (наприклад, квітучі декоративні рослини або чагарники, або рулонний газон). Способи та композиції, приведені в цьому документі, також можна застосовувати до рослин, отриманих за допомогою живцювання, клонування або прищепи (тобто до рослин, які виросли не з насіння), у тому числі до плодових дерев і рослин, які включають, без обмеження ними, цитрусові, яблука, авокадо, помідори, баклажани, огірки, дині, кавуни, виноград, а також різні декоративні рослини. Суміші пестицидів Полінуклеотидні композиції можуть також використовуватися у сумішах із різним агрохімікатами і/або інсектицидами, акарицидами і фунгіцидами, пестицидними і біопестицидними засобами. Приклади включають, без обмеження ними, азинфос-метил, ацефат, ізоксатіон, ізофенфос, етіон, етримфос, оксидеметон-метил, оксидепрофос, хіналфос, хлорпірифос, хлорпірифос-метил, хлорфенвінфос, цианофос, диоксабензофос, дихлофос, дисульфотон, диметилвінфос, диметоат, сульпрофос, диазинон, тіометон, тетрахлорвінфос, темефос, тебупіримфос, тербуфос, налед, вамідотіон, піраклофос, піридафентіон, піриміфосметил, фенитротіон, фентіон, фентоат, флупиразофос, протіофос, пропафос, профенофос, фоксим, фозалон, фосмет, формотіон, форат, малатіон, мекарбам, месульфенфос, метамідофос, метидатіон, паратіон, паратіон-метил, монокротофос, трихлорфон, EPN, ізазофос, ізамідофос, кадусафос, диамідафос, дихлорфентіон, тіоназин, фенаміфос, фостіазат, фостіетан, фосфокарб, DSP, етопрофос, аланікарб, алдікарб, ізопрокарб, етіофенкарб, карбаріл, карбосульфан, ксилілкарб, тіодикарб, піримікарб, фенобукарб, фуратіокарб, пропоксур, бендиокарб, бенфуракарб, метоміл, метолкарб, XMC, карбофуран, алдоксикарб, оксаміл, акрінатрин, алетрин, есфенвалерат, емпентрин, циклопротрин, цигалотрин, гаммацигалотрин, лямбда-цигалотрин, цифлутрин, бета-цифлутрин, циперметрин, альфациперметрин, зета-циперметрин, силафлуофен, тетраметрин, тефлутрин, дельтаметрин, тралометрин, біфентрин, фенотрин, фенвалерат, фенпропатрин, фураметрин, пралетрин, 7 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 флуцитринат, флувалінат, флуброцитринат, перметрин, ресметрин, етофенпрокс, картап, тіоциклам, бенсультап, ацетаміприд, імідаклоприд, клотіанидин, динотефуран, тіаклоприд, тіаметоксам, нітенпірам, хлорфлуазурон, дифлубензурон, тефлубензурон, трифлумурон, новалурон, новифлумурон, бистрифлуорон, флуазурон, флуциклоксурон, флуфеноксурон, гексафлумурон, луфенурон, хромафенозид, тебуфенозид, галофенозид, метоксифенозид, діофенолан, циромазін, пірипроксифен, бупрофезин, метопрен, гідропрен, кінопрен, триазамат, ендосульфан, хлорфенсон, хлорбензилат, дикофол, бромопропілат, ацетопрол, фіпроніл, етіпрол, піретрин, ротенон, сульфат нікотину, агент BT (Bacillus Thuringiensis), спіносад, абамектин, ацеквіноцил, амідофлумет, амітраз, етоксазол, хінометіонат, клофентезин, фенбутатіну оксид, дієнохлор, цигексатин, спіродиклофен, спіромезіфен, тетрадіфон, тебуфенпірад, бінапакрил, біфеназат, піридабен, піримідифен, феназахін, фенотіокарб, фенпіроксимат, флуакрипірим, флуазінам, флуфензин, гекситіазокс, пропаргіт, бензомат, полінактиновий комплекс, мілбемектин, луфенурон, мекарбам, метіокарб, мевінфос, халфенпрокс, азадірахтін, діафентіурон, індоксакарб, бензоат емамектину, олеат калію, олеат натрію, хлорфенапір, толфенпірад, піметрозин, феноксикарб, гідраметилнон, гідроксипропіл крохмаль, піридаліл, флуфенерим, флубендиамід, флонікамід, метафлумізол, лепімектин, TPIC, альбендазол, оксибендазол, оксфендазол, трихламід, фенсульфотіон, фенбендазол, левамізолу гідрохлорид, морантель тартрат, дазомет, метам натрію, триадімефон, гексаконазол, пропіконазол, іпконазол, прохлораз, трифлумізол, тебуконазол, епоксиконазол, дифеноконазол, флусилазол, триадіменол, ципроконазол, метконазол, флухінконазол, бітертанол, тетраконазол, тритіконазол, флутриафол, пенконазол, диніконазол, фенбуконазол, бромуконазол, імібенконазол, сімеконазол, міклобутаніл, хімексазол, імазаліл, фураметпір, тифлузамід, етрідіазол, окспоконазол, окспоконазолу фумарат, пефуразоат, протіоконазол, пірифенокс, фенарімол, нуарімол, бупіримат, мепаніпірим, ципродиніл, піриметаніл, металаксіл, мефеноксам, оксадиксіл, беналаксіл, тіофанат, тіофанат-метил, беноміл, карбендазим, фуберідазол, тіабендазол, манзеб, пропінеб, зінеб, метірам, манеб, зірам, тіурам, хлороталоніл, етабоксама, оксикарбоксин, карбоксин, флутоланіл, силтіофам, мепроніл, диметоморф, фенпропідин, фенпропіморф, спіроксамін, тридеморф, додеморф, флуморф, азоксистробін, крезоксим-метил, метоміностробін, орисастробін, флуоксастробін, трифлоксистробін, димоксистробін, піраклостробін, пікоксистробін, іпродіон, процимідон, вінклозолін, хлозолінат, флусульфамід, дазомет, метил ізотіоцианат, хлорпікрин, метасульфокарб, гідроксиізоксазол, гідроксиізоксазол калію, ехломезол, D-D, карбам, основний хлорид міді, основний сульфат міді, нонілфенолсульфонат міді, оксин міді, DBEDC, безводий сульфат міді, міді сульфат пентагідрат, гідроксид міді, неорганічна сірка, сірка, що змочується, сірчисте вапно, сульфат цинку, фентін, гідрокарбонат натрію, гідрокарбонат калію, гіпохлорит натрію, срібло, едифенфос, толклофос-метил, фосетіл, іпробенфос, дінокап, піразофос, карпропамід, фталід, трициклазол, пірохілон, диклоцимет, феноксаніл, касугаміцин, валідаміцин, поліоксини, бластицидін С, окситетрациклін, мілдіоміцин, стрептоміцин, рапсова олія, машинне мастило, бентіавалікарбізопропіл, іпровалікарб, пропамокарб, диетофенкарб, флуороімід, флудиоксаніл, фенпіклоніл, хіноксифен, оксолінова кислота, хлороталоніл, каптан, фолпет, пробеназол, ацибензолар-С-метил, тіадиніл, цифлуфенамід, фенгексамід, дифлуметорим, метрафенон, пікобензамід, прохіназид, фамоксадон, циазофамід, фенамідон, зоксамид, боскалід, цимоксаніл, дитіанон, флуазінам, дихлофлуанід, трифорін, ізопротіолан, ферімзон, дикломезин, теклофталам, пенцикурон, хіномеіионат, іміноктадину ацетат, іміноктадину албесілат, амбам, полікарбамат, тіадіазін, хлоронеб, диметилдитіокарбамат нікелю, гуазатин, додецилгуанідинацетат, квінтозен, толілфлуанід, анілазін, нітроталізопропіл, фенітропан, діметірімол, бентіазол, білок гарпін, флуметовер, мандіпропамід та пентіопірад. Полінуклеотиди Як використовується в цьому документі, термін "ДНК", "молекула ДНК", "полінуклеотидна молекула ДНК" належить до одноланцюгової ДНК (олДНК) або дволанцюгової ДНК (длДНК) молекули геномного або синтетичного походження, наприклад, полімеру з дезоксирібонуклеотидних основ або полінуклеотидна молекула ДНК. Як використовується в цьому документі, термін "послідовність ДНК", "нуклеотидна послідовність ДНК" або "полінуклеотидна послідовність ДНК" належить до нуклеотидної послідовності молекули ДНК. Як використовується в цьому документі, термін "РНК", "молекула РНК", "полінуклеотидна молекула РНК" належить до одноланцюгової РНК (олРНК) або дволанцюгової РНК (длРНК) молекули геномного або синтетичного походження, наприклад, полімер із рібонуклеотидних основ, які складають одно- або дволанцюгові ділянки. Якщо не вказане інше, то нуклеотидні послідовності в тексті цього опису читаються зліва направо в напрямку від 5' до 3'. Номенклатура, яка використовується в цьому документі, приведена згідно з вимогами Розділу 8 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 37 Зводу нормативних актів федеральних органів виконавчої влади США § 1,822 і представлена в таблицях згідно стандарту ВОІВ (Всесвітня організація інтелектуальної власності) ST.25 (1998), Додаток 2, Таблиці 1 та 3. Як використовується в цьому документі, "полінуклеотид" належить до молекули ДНК або РНК, що містить декілька нуклеотидів і зазвичай належить як до "олігонуклеотидів" (молекула полінуклеотиду зазвичай із 50 або менше нуклеотидів у довжину), так і до полінуклеотидів із 51 або більше нуклеотидів. Варіанти реалізації цього винаходу включають композиції, які складаються з олігонуклеотидів довжиною 18-25 нуклеотидів (18-мер, 19-мер, 20-мер, 21-мер, 22-мер, 23-мер, 24-мер або 25-мер), наприклад, олігонуклеотиди SEQ ID NO: 3901-4530 або їх фрагменти, або полінуклеотиди середньої довжини, довжина яких складає 26 або більше нуклеотидів (полінуклеотиди з 26, 27, 28, 29, 30, 307, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, близько 65, близько 70, близько 75, близько 80, близько 85, близько 90, близько 95, близько 100, близько 110, близько 120, близько 130, близько 140, близько 150, близько 160, близько 170, близько 180, близько 190, близько 200, близько 210, близько 220, близько 230, близько 240, близько 250, близько 260, близько 270, близько 280, близько 290 або близько 300 нуклеотидів), наприклад, олігонуклеотиди SEQ ID NO: 93-3900 або їх фрагменти, або довгі полінуклеотиди, більше ніж близько 300 нуклеотидів (наприклад, полінуклеотиди від близько 300 до близько 400 нуклеотидів, від близько 400 до близько 500 нуклеотидів, від близько 500 до близько 600 нуклеотидів, від близько 600 до близько 700 нуклеотидів, від близько 700 до близько 800 нуклеотидів, від близько 800 до близько 900 нуклеотидів, від близько 900 до близько 1000 нуклеотидів, від близько 300 до близько 500 нуклеотидів, від близько 300 до близько 600 нуклеотидів, від близько 300 до близько 700 нуклеотидів, від близько 300 до близько 800 нуклеотидів, від близько 300 до близько 900 нуклеотидів або близько 1000 нуклеотидів у довжину, або навіть більше ніж близько 1000 нуклеотидів у довжину, наприклад, досягають загальної довжини гену-мішені, у тому числі з кодуючими або некодуючими, або як кодуючими, так і некодуючими ділянками генумішені), наприклад, полінуклеотиди Таблиці 1 (SEQ ID NO: 1-93), в якій обрані полінуклеотиди або їх фрагменти, які гомологічні або комплементарні SEQ ID NO: 1-93, пригнічують, стримують або іншим чином уповільнюють експресію гену-мішені АККази. Ген-мішень містить будь-яку молекулу полінуклеотиду в клітині рослини або її фрагменті, для якої модуляція експресії генумішені забезпечується способами та композиціями цього винаходу. Якщо полінуклеотид є дволанцюговим, його довжина може бути аналогічним чином описана відповідно до пар основ. Олігонуклеотиди та полінуклеотиди згідно цього винаходу можна зробити практично ідентичними або практично комплементарними суміжним генетичним елементам гену, наприклад, таким, що охоплюють місце з'єднання інтрону та екзону, місце з'єднання промотору та області, що транскрибується, місце з'єднання 5'-лідерної і кодуючої послідовності, з'єднання 3'-нетрансльованої області і кодуючої послідовності. Композиції полінуклеотидів, використовувані в різних варіантах реалізації цього винаходу, включають композиції, які містять олігонуклеотиди або полінуклеотиди, або суміші їх обох, у тому числі РНК або ДНК, або гібриди РНК/ДНК, або хімічно модифіковані олігонуклеотиди або полінуклеотиди, або їх суміші. У деяких варіантах реалізації полінуклеотид може являти собою сполучення рібонуклеотидів і дезоксирібонуклеотидів, наприклад, синтетичні полінуклеотиди, що складаються переважно з рібонуклеотидів, але з одним або декількома кінцевими дезоксирібонуклеотидами або синтетичні полінуклеотиди, що складаються переважно з дезоксирібонуклеотидів, але з одним або більше кінцевими дидезоксирібонуклеотидами. У деяких варіантах реалізації полінуклеотид містить неканонічні нуклеотиди, такі як інозин, тіоуридин або псевдоуридин. У деяких варіантах реалізації полінуклеотид містить хімічно модифіковані нуклеотиди. Приклади хімічно модифікованих олігонуклеотидів або полінуклеотидів добре відомі в цій галузі техніки; дивися, наприклад, публікацію патенту США 20110171287, публікацію патенту США 20110171176 та публікацію патенту США 20110152353, публікацію патенту США 20110152346, публікацію патенту США 20110160082, які включені в цей документ у вигляді посилання. Наприклад, ті, які включають, без обмеження ним, фосфодиефірний остов олігонуклеотиду або полінуклеотиду, який зустрічається в природі, можуть бути частково або повністю модифіковані за допомогою міжнуклеотидних зв'язків, модифікованих фосфоротіоатом, фосфородитіоатом або метилфосфонатом, модифіковані нуклеозидні основи або модифіковані цукри можуть використовуватися в синтезі олігонуклеотидів або полінуклеотидів, та олігонуклеотиди або полінуклеотиди можуть бути помічені флуоресцентним фрагментом (наприклад, флуоресцеїн або родамін) або іншою міткою (наприклад, біотин). 9 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Полінуклеотиди можуть бути одно- або дволанцюговою РНК або одно- або дволанцюговою ДНК, або дволанцюговими ДНК/РНК гібридами або їх модифікованими аналогами та можуть мати довжини, як у олігонуклеотида або більше. У більш конкретних варіантах реалізації полінуклеотиди, які забезпечують одноланцюгову РНК в клітині рослини, обирають із групи, що складається з (а) одноланцюгової молекули РНК (олРНК), (б) одноланцюгової молекули РНК, яка самостійно гібридизується з утворенням дволанцюгової молекули РНК, (в) дволанцюгової молекули РНК (длРНК), (г) одноланцюгової молекули ДНК (олДНК), (д) одноланцюгової молекули ДНК, яка самостійно гібридизується з утворенням дволанцюгової молекули ДНК, і (е) одноланцюгової молекули ДНК, яка містить модифікований ген Pol III, який транскрибується в молекулу РНК, (є) дволанцюгової молекули ДНК (длДНК), (ж) дволанцюгової молекули ДНК, яка містить модифікований ген Pol III, який транскрибується в молекулу РНК, (з) дволанцюгової, гібридизированої молекули РНК/ДНК або їх комбінацій. У деяких варіантах реалізації ці полінуклеотиди містять хімічно модифіковані нуклеотиди або неканонічні нуклеотиди. У деяких варіантах реалізації олігонуклеотиди можуть бути з тупими кінцями або можуть мати 3'-виступ з 1-5 нуклеотидів, щонайменше одного або обох ланцюгів. Інші конфігурації олігонуклеотиду відомі в цій галузі техніки та розглядаються в цьому документі. У варіантах реалізації способу полінуклеотиди містять дволанцюгову ДНК, утворену внутрішньомолекулярною гібридизацією, дволанцюгову ДНК, утворену міжмолекулярною гібридизацією, дволанцюгову РНК, утворену внутрішньомолекулярною гібридизацією або дволанцюгову РНК, утворену міжмолекулярною гібридизацією. В одному варіанті реалізації полінуклеотиди містять одноланцюгову ДНК або одноланцюгову РНК, яка самостійно гібридизується і утворює шпилькову структуру із щонайменше частково дволанцюговою структурою, що містить щонайменше один сегмент, який буде гібридизуватися з РНК, яка транскрибується з гену-мішені з метою пригнічення. У разі, якщо не передбачається зв'язування якимось механізмом, вважають, що такі полінуклеотиди є або утворюватимуть одноланцюгову РНК із щонайменше одним сегментом, який буде гібридизуватися з РНК, яка транскрибується з гену-мішені з метою пригнічення. У деяких інших варіантах реалізації полінуклеотиди додатково містять промотор, зазвичай промотор, що функціонує в рослині, наприклад, промотор pol II, промотор pol III, промотор pol IV або промотор pol V. Термін "ген" належить до хромосомної ДНК, плазмідної ДНК, кДНК, інтрону та екзону ДНК, штучної полінуклеотидної ДНК або іншої ДНК, яка кодує пептид, поліпептид, білок або молекулу РНК-транскрипту, а також генетичні елементи, які фланкують кодуючу послідовність, які беруть участь у регуляції експресії, наприклад, промоторні області, 5'-лідерні області, 3'нетрансльовані області. Будь-який із компонентів гену являє собою потенційні мішені для олігонуклеотидів та полінуклеотидів згідно цього винаходу. Полінуклеотидні молекули згідно цього винаходу призначені для модуляції експресії за допомогою індукції регуляції або пригнічення ендогенного гену АККази у рослині і призначені, щоб їх нуклеотидна послідовність була практично ідентичною або практично комплементарною нуклеотидній послідовності ендогенного гену АККази рослини або послідовності РНК, яка транскрибується з ендогенного гену АККази рослини, включаючи трансген у рослині, який забезпечує стійкий до гербіциду фермент АККази, який може бути кодуючою послідовністю або некодуючою послідовністю. Ефективні молекули, які модулюють експресію, називають "тригерною молекулою або тригерним полінуклеотидом". Під "практично ідентичними" або "практично комплементарними" мають на увазі, що тригерні полінуклеотиди (або щонайменше один ланцюг дволанцюгового полінуклеотиду або його ділянки, або ділянки одноланцюгового полінуклеотиду) призначені для гібридизаціі з ендогенним геном некодуючої послідовності або з РНК, що транскрибується (відома як інформаційна РНК або РНК-транскрипт) з ендогенного гену для здійснення регуляції або пригнічення експресії ендогенного гену. Тригерні молекули визначають за допомогою "перекриття" генів-мішеней зондами, які частково перекриваються, або зондами, які не перекриваються, антисмислових або смислових полінуклеотидів, які практично ідентичні або практично комплементарні нуклеотидній послідовності ендогенного гену. Декілька послідовностей-мішеней можуть збігатися та області послідовності з однаковою гомологією, відповідно до способів цього винаходу, визначають як потенційні тригерні молекули для декількох мішеней. Декілька тригерних молекул різної довжини, наприклад, з 18-25 нуклеотидів, 26-50 нуклеотидів, 51-100 нуклеотидів, 101-200 нуклеотидів, 201-300 нуклеотидів або більше можна об'єднати в пул із декількох обробок для дослідження полінуклеотидних молекул, які охоплюють ділянку генної послідовності (наприклад, ділянка кодуючої області в порівнянні з ділянкою некодуючої області, або 5'-ділянка гену в порівнянні з 3'-ділянкою гену) або усю генну послідовність, включаючи кодуючу і некодуючу область гену-мішені. Полінуклеотидні молекули тригерних молекул, об'єднаних у пул, можна розділити на дрібніші 10 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 пули або одиночні молекули, щоб визначити тригерні молекули, які забезпечують бажаний ефект. Полінуклеотидні молекули РНК та ДНК гену-мішені (Таблиця 1, SEQ ID NO: 1-93) секвенують будь-якою кількістю доступних способів і устаткування. Деякі з технологій секвенування є в продажу, наприклад, платформа для секвенування за допомогою гібридизації від компанії Affymetrix Inc. (Саннівейл, штат Каліфорнія) і платформи для секвенування за допомогою синтезу від компаній 454 Life Sciences (Бредфорд, штат Коннектікут), Illumina/Solexa (Хейуорд, штат Каліфорнія), і Helicos Biosciences (Кембрідж, штат Массачусетс), а також платформа секвенування за допомогою лігування від компанії Applied Biosystems (Фостер Сіті, штат Каліфорнія), як описано нижче. На додаток до секвенування одиночної молекули, виконаного з використанням секвенування за допомогою синтезу від компанії Helicos Biosciences, інші технології секвенування одиночної молекули здійснюються і включають технологію SMRT™ компанії Pacific Biosciences, технологію Ion Torrent™ і нанопорове секвенування, розроблені, наприклад, компанією Oxford Nanopore Technologies. Ген-мішень АККази, що містить ДНК або РНК, може бути виділений із використанням праймерів або зондів практично комплементарних або практично гомологічних SEQ ID NO: 1-93 або їх фрагменту. Полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) фрагменту гену можна отримати за допомогою використання праймерів практично комплементарних або практично гомологічних SEQ ID NO: 1-93 або їх фрагменту, що доцільно для виділення гену АККази з геному рослини. SEQ ID NO: 1-93 або їх фрагменти можуть використовуватися в різних технологіях захоплення послідовності для виділення додаткових послідовностей гену-мішені, наприклад, включаючи, без обмеження ними, Roche NimbleGen® (Медісон, штат Вісконсін) та стрептавідин-зв'язані Dynabeads® (Life Technologies, Гранд Айленд, штат Нью-Йорк), та US20110015084, які включені в цей документ у вигляді посилання в повному обсязі. У деяких варіантах реалізації комплементарність послідовностей функціональних одноланцюгових полінуклеотидів має бути не 100 відсотковою, а щонайменше достатньою, щоб дозволити гібридизацію з РНК, яка транскрибується з гену-мішені або ДНК гену-мішені з утворенням дуплексу, щоб дозволити механізм пригнічення експресії генів. Таким чином, у варіантах реалізації фрагмент полінуклеотиду призначений бути практично ідентичним або практично комплементарним послідовності з 18 або більше безперервних нуклеотидів як у послідовності-мішені гену АККази, так і в інформаційній РНК, що транскрибується з гену-мішені. Під "практично ідентичними" мають на увазі 100 відсоткову ідентичність послідовності або щонайменше близько 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 99 відсоткову ідентичність послідовності в порівнянні з послідовністю з 18 або більше безперервних нуклеотидів як у гені-мішені, так і в РНК, що транскрибується з гену-мішені; під "практично комплементарними" мають на увазі 100 відсоткову комплементарність послідовності або щонайменше близько 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 99 відсоткову комплементарність послідовності в порівнянні з послідовністю з 18 або більше безперервних нуклеотидів як у гені-мішені, так і в РНК, що транскрибується з гену-мішені. У деяких варіантах реалізації цього винаходу молекули полінуклеотиду мають 100 відсоткову ідентичність послідовності з компліментарністю до однієї алелі або до одного представника сімейства цього гену-мішені (кодуюча або некодуюча послідовність гену згідно цього винаходу); у інших варіантах реалізації молекули полінуклеотиду мають 100 відсоткову ідентичність послідовності з комплементарністю до декількох алелей або представників сімейства цього гену-мішені. У деяких варіантах реалізації полінуклеотиди, які використовуються в композиціях, які практично ідентичні або практично комплементарні гену-мішені або транскрипту, включатимуть домінуючу нуклеїнову кислоту в композиції. Таким чином, у деяких варіантах реалізації полінуклеотиди, які практично ідентичні або практично комплементарні гену-мішені або транскрипту, міститимуть щонайменше близько 50 %, 75 %, 95 %, 98 % або 100 % нуклеїнових кислот, приведених у композиції в масовій або молярній концентрації. Проте, у деяких варіантах реалізації полінуклеотиди, які практично ідентичні або практично комплементарні гену-мішені або транскрипту, можуть містити щонайменше від близько 1 % до близько 50 %, від близько 10 % до близько 50 %, від близько 20 % до близько 50 % або від близько 30 % до близько 50 % нуклеїнових кислот, приведених у композиції в масовій або молярній концентрації. Також надані композиції, в яких полінуклеотиди, які практично ідентичні або практично комплементарні генумішені або транскрипту, можуть містити щонайменше від близько 1 % до 100 %, від близько 10 % до 100 %, від близько 20 % до близько 100 %, від близько 30 % до близько 50 % або від близько 50 % до 100 % нуклеїнових кислот, приведених у композиції в масовій або молярній концентрації. 11 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 "Ідентичність" належить до міри схожості двох послідовностей полінуклеїнових кислот або білків. Вирівнювання двох послідовностей виконується за допомогою відповідної комп'ютерної програми. Комп'ютерною програмою для виконання вирівнювання послідовностей, яка широко використовується і прийнята до використання являється CLUSTALW v1.6 (Thompson, зі співавторами Nucl. Acids Res., 22: 4673-4680, 1994). Кількість схожих основ або амінокислот ділять на загальну кількість основ або амінокислот та множать на 100, щоб отримати відсоток ідентичності. Наприклад, якщо у двох послідовностей із 580 пар основ було б 145 схожих основ, вони були б ідентичними на 25 відсотків. Якщо дві порівнювані послідовності мають різну довжину, кількість збігів ділять на найменшу з двох довжин. Наприклад, якщо з 200 і 400 амінокислот білку є 100 схожих амінокислот, вони ідентичні на 50 відсотків по відношенню до коротшої послідовності. Якщо коротша послідовність складається з менше ніж 150 основ або 50 амінокислот у довжину, кількість збігів ділять на 150 (для основ нуклеїнових кислот) або на 50 (для амінокислот) і множать на 100, щоб отримати відсоток ідентичності. Тригерні молекули для конкретних представників сімейства генів можна визначити з кодуючих і/або некодуючих послідовностей сімейств генів рослини або декількох рослин шляхом вирівнювання і вибору 200-300 фрагментів полінуклеотиду з найменш гомологічних областей серед вирівняних послідовностей і оцінити за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів (таких, як смислова або антисмислова олДНК або олРНК, длРНК або длДНК), щоб визначити їх відносну ефективність у стимулюванні фенотипу стійкості до гербіцидів. Ефективні сегменти додатково ділять на 50-60 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги найменш гомологічним і повторно оцінюють за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів. 50-60 ефективних фрагментів полінуклеотиду ділять на 19-30 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги найменш гомологічним і знову оцінюють для стимулювання виходу/якості фенотипу. Після оцінки відносної ефективності фрагменти використовують окремо або знову оцінюють у комбінації з одним або декількома іншими фрагментами для визначення складу тригеру або суміші тригерних полінуклеотидів для забезпечення виходу/якості фенотипу. Тригерні молекули для широкого спектру дій можна визначити з кодуючих і/або некодуючих послідовностей сімейств генів рослини або декількох рослин за допомогою вирівнювання і вибору 200-300 фрагментів полінуклеотиду з найменш гомологічних областей серед вирівняних послідовностей і оцінити за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів (таких, як смислова або антисмислова олДНК або олРНК, длРНК або длДНК), щоб визначити їх відносну ефективність у стимулюванні виходу/якості фенотипу. Ефективні сегменти ділять на 50-60 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги більш гомологічним і повторно оцінюють за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів. 50-60 ефективних фрагментів полінуклеотиду ділять на 19-30 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги більш гомологічним і знову оцінюють для стимулювання виходу/якості фенотипу. Після оцінки відносної ефективності фрагменти використовують окремо або в комбінації з одним або декількома іншими фрагментами для визначення складу тригеру або суміші тригерних полінуклеотидів для забезпечення виходу/якості фенотипу. Способи отримання полінуклеотидів добре відомі в цій галузі техніки. Способи і композиції хімічного синтезу, синтезу in vivo та синтезу in vitro відомі в цій галузі техніки і включають різні вірусні елементи, мікробні клітини, модифіковані полімерази і модифіковані нуклеотиди. Комерційний синтез олігонуклеотидів часто забезпечує два дезоксирібонуклеотиди на 3'-кінці смислового ланцюга. Довгі молекули полінуклеотиду можна отримати за допомогою комерційно доступних наборів, наприклад, у наборах Applied Biosystems/Ambion (Остін, штат Техас) ДНК лігується на 5'-кінці в мікробній касеті експресії, яка містить бактерійний промотор полімерази Т7, що робить ланцюги РНК, які можна зібрати в длРНК, і наборів, що постачаються різними виробниками, які включають T7 RiboMax Express (Promega, Медісон, штат Вайомінг), AmpliScribe T7-Flash (Epicentre, Медісон, штат Вайомінг) та TranscriptAid T7 High Yield (Fermentas, Глен Берні, штат Меріленд). Молекули длРНК можна отримати з мікробних касет експресії в бактерійних клітинах (Ongvarrasopone зі співавторами ScienceAsia 33:35-39; Yin, Appl. Microbiol. Biotechnol 84:323-333, 2009; Liu зі співавторами, BMC Biotechnology 10:85, 2010), у яких регульована або недостатня активність ферменту РНКази III або із використанням різних вірусних векторів для отримання достатньої кількості длРНК. Згідно цього винаходу фрагменти гену АККази поміщають у мікробні касети експресії в такому положенні, в якому фрагменти швидко формують олРНК або длРНК, які використовуються в способах, описаних у цьому документі, для регуляції експресії гену-мішені АККази. У деяких варіантах реалізації розрахункові параметри, такі як індекс Рейнольдса (Reynolds зі співавторами Nature Biotechnology 22, 326-330 (2004), правила Тушля (Pei та Tuschl, Nature Methods 3(9): 670-676, 12 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2006), алгоритм i-score (Nucleic Acids Res 35: e123‚ 2007), програма i-Score Designer tool і пов'язані алгоритми (Nucleic Acids Res 32: 936-948‚ 2004. Biochem Biophys Res Commun 316: 1050-1058‚ 2004, Nucleic Acids Res 32: 893-901‚ 2004, Cell Cycle 3: 790-5‚ 2004, Nat Biotechnol 23: 995-1001‚ 2005, Nucleic Acids Res 35: e27‚ 2007, BMC Bioinformatics 7: 520‚ 2006, Nucleic Acids Res 35: e123‚ 2007, Nat Biotechnol 22: 326-330‚ 2004) відомі в цій галузі техніки і можуть використовуватися при виборі полінуклеотидних послідовностей, ефективних для пригнічення експресії генів. У деяких варіантах реалізації проводять скринінг послідовності полінуклеотиду проти геномної ДНК рослини-мішені, щоб мінімізувати неумисне пригнічення експресії інших генів. Композиції тригерних молекул полінуклеотиду і олігонуклеотиду використовуються в композиціях, наприклад, в рідинах, які ці містять молекули полінуклеотиду при низьких концентраціях, окремо або в комбінації з іншими компонентами, наприклад, однією або декількома молекулами гербіциду або в тій же рідині, або в окремо взятих рідинах, які також забезпечують агент перенесення. Хоча не існує ніякої верхньої межі концентрацій і дозувань молекул полінуклеотиду, які можуть використовуватися в цих способах, для ефективності зазвичай треба буде знайти нижню межу ефективних концентрацій і дозувань. Концентрації можна скорегувати з урахуванням об'єму спрею або обробки, яка застосовується до листя рослини або інших частин поверхні рослини, таких як квіткові пелюстки, стебла, бульби, фрукти, пильовики, пилок або насіння. В одному варіанті реалізації необхідна обробка трав'янистих рослин із використанням 25-мерної олігонуклеотидної молекули вимагає близько 1 наномоль (нмоль) молекул олігонуклеотидів на рослину, наприклад, від близько 0,05 до 1 нмоль на рослину. Інші варіанти реалізації для трав'янистих рослин включають необхідні діапазони концентрації від близько 0,05 до близько 100 нмоль або від близько 0,1 до близько 20 нмоль, або від близько 1 нмоль до близько 10 нмоль полінуклеотидів на рослину. Дуже великі рослини, дерева або лози можуть потребувати відповідно більшої кількості полінуклеотидів. При використанні довгих молекул длРНК, які можна перетворити в декілька олігонуклеотидів, можна використати нижчі концентрації. Щоб продемонструвати варіанти реалізації, відносно олігонуклеотидних молекул для зазначення обробки 0,8 нмоль молекули полінуклеотиду на рослину умовно використовують фактор 1Х; 10Х для 8 нмоль молекули полінуклеотиду на рослину; і 100Х для 80 нмоль молекули полінуклеотиду на рослину. Полінуклеотидні композиції використовуються в композиціях, наприклад, в рідинах, які містять молекули полінуклеотиду, окремо або в комбінації з іншими компонентами, або в тій же рідині, або в окремо взятих рідинах, які також забезпечують агент перенесення. Як використовується в цьому документі, агент перенесення являє собою агент, який у поєднанні з полінуклеотидом в композиції, яка місцево застосовується до поверхні рослини-мішені, дозволяє полінуклеотиду потрапити в клітину рослини. У деяких варіантах реалізації агент перенесення являє собою агент, який кондиціонує поверхню тканини рослини, наприклад, листя, стебла, корені, квіти або фрукти для потрапляння за допомогою молекул полінуклеотиду в клітини рослини. Перенесення полінуклеотидів в клітини рослини може бути полегшене за допомогою попереднього або одночасного застосування агенту перенесення полінуклеотиду до тканини рослини. У деяких варіантах реалізації агент перенесення застосовують після нанесення полінуклеотидної композиції. Агент перенесення полінуклеотиду забезпечує полінуклеотидам шлях через воскові бар'єри серозної оболонки, пори і/або стінки клітини або мембранні бар'єри в клітини рослини. Відповідні агенти перенесення для полегшення перенесення полінуклеотиду в клітину рослини включають агенти, які покращують проникність зовнішньої поверхні рослини або які покращують проникність олігонуклеотидів або полінуклеотидів в клітини рослини. Такі агенти для полегшення перенесення композиції в клітину рослини містять хімічну речовину або фізичну речовину, або їх комбінації. Хімічні речовини для кондиціонування або перенесення містять: (а) поверхнево-активні речовині, (б) органічний розчинник або водний розчин, або водні суміші органічних розчинників, (в) окисники, (г) кислоти, (д) луги, (е) олії, (є) ферменти або їх комбінації. Варіанти реалізації способу можуть необов'язково включати етап інкубації, етап нейтралізації (наприклад, щоб нейтралізувати кислоту, лугу або окисник або інактивувати фермент), етап обполіскування або їх комбінації. Варіанти реалізації агентів або обробки для кондиціонування рослини з метою проникнення полінуклеотидів включають емульсії, зворотні емульсії, ліпосоми та інші міцелоподібні композиції. Варіанти реалізації агентів або обробки для кондиціонування рослини з метою проникнення полінуклеотидів містять протиіони або інші молекули, які, як відомо, пов'язують з молекулами нуклеїнових кислот, наприклад, неорганічні іони амонію, іони алкіламонію, іони алкіллітію, поліаміни, такі як спермін, спермідин або путресцин та інші катіони. Органічні розчинники, які використовуються в кондиціонуванні рослини з метою проникнення 13 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 полінуклеотидів, містять DMSO, DMF, піридин, N-піролідин, гексаметилфосфорамід, ацетонітрил, диоксан, поліпропіленгліколь, інші розчинники, здатні змішуватися з водою або які розчинятимуть фосфонуклеотиди в неводних системах (наприклад, які використовуються в реакціях синтезу). Можуть використовуватися природні або синтетичні олії з додаванням або без поверхнево-активних речовин або емульгаторів, наприклад, олії рослинного походження, th олії з насіння (наприклад, можна використати ті, які є в переліку 9 Compendium of Herbicide Adjuvants, у відкритому доступі всесвітньої мережі (Інтернет) на сайті herbicide.adjuvants.com, наприклад, парафінові олії, ефіри жирної кислоти і багатоатомного спирту або олії з молекулами з коротким ланцюгом, модифіковані амідами або поліамінами, такі як поліетиленімін або N-піролідин. Агенти перенесення містять, без обмеження ними, кремнійорганічні препарати. У деяких варіантах реалізації кремнійорганічний препарат, який є комерційно доступним, як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77 під номером CAS 27306-78-1 та номером EPA: CAL.REG.NO. 5905-50073-AA і нині поставляється компанією Momentive Performance Materials, Олбані, штат Нью-Йорк, можна використовувати для виготовлення полінуклеотидної композиції. У деяких варіантах реалізації, в яких кремнійорганічний препарат Silwet L-77 використовується для попередньої обробки (перед розпиленням) листя рослини або інших поверхонь рослини, свіжоприготовані концентрації в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків по вазі (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %) є ефективними в підготовці листа або іншої поверхні рослини до перенесення молекул полінуклеотиду в клітини рослини при місцевому застосуванні на поверхні. У деяких варіантах реалізації способів та композицій, приведених у цьому винаході, використовується або надається композиція, яка містить полінуклеотидну молекулу і кремнійорганічний препарат, який містить Silwet L-77 в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків по вазі (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %). У деяких варіантах реалізації будь-який із комерційно доступних кремнійорганічних препаратів, що надаються під наступними товарними знаками: Breakthru S 321, Breakthru S 200 Cat# 67674-67-3, Breakthru OE 441 Cat#68937-55-3, Breakthru S 278 Cat #27306-78-1, Breakthru S 243, Breakthru S 233 Cat#134180-76-0, виробництва компанії Evonik Goldschmidt (Німеччина), Silwet® HS 429, Silwet® HS 312, Silwet® HS 508, Silwet® HS 604 (виробництва компанії Momentive Performance Materials, Олбані, штат Нью-Йорк), може використовуватися як агент перенесення в полінуклеотидній композиції. У деяких варіантах реалізації, в яких кремнійорганічний препарат використовується для попередньої обробки (перед розпиленням) листя рослини або інших поверхонь рослини, свіжоприготовані концентрації в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків по вазі (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %) є ефективними в підготовці листа або іншої поверхні рослини до перенесення молекул полінуклеотиду в клітини рослини при місцевому застосуванні на поверхні. У деяких варіантах реалізації способів та композицій, приведених у цьому винаході, використовується або надається композиція, яка містить полінуклеотидну молекулу і кремнійорганічний препарат в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків по вазі (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %). Кремнійорганічні препарати, використовувані в способах та композиціях, приведених у цьому винаході, можуть містити одну або більше ефективних кремнійорганічних сполук. Як використовується в цьому документі, вираз "ефективна кремнійорганічна сполука" використовується для опису будь-якої кремнійорганічної сполуки, яка міститься в кремнійорганічному препараті, який дозволяє полінуклеотиду потрапити в клітину рослини. У деяких варіантах реалізації ефективні кремнійорганічні сполуки можуть дозволити полінуклеотиду потрапити в клітину рослини таким чином, щоб дозволити полінуклеотидоопосередковане пригнічення експресії гену-мішені в клітині рослини. В цілому, ефективні кремнійорганічні сполуки включають, без обмеження ними, сполуки, які можуть містити: i) трисилоксанову головну групу, сполучену ковалентним зв'язком з, ii) алкільним лінкером, який включає, без обмеження ним, н-пропіловий лінкер, сполучений ковалентним зв'язком з, iii) 14 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 полігліколевим ланцюгом, сполученим ковалентним зв'язком з, iv) кінцевою групою. Трисилоксанові головні групи таких ефективних кремнійорганічних сполук включають, без обмеження ним, гептаметилтрисилоксан. Алкільні лінкери можуть включати, без обмеження ним, н-пропіловий лінкер. Полігліколеві ланцюги включають, без обмеження ними, поліетиленгліколь або поліпропіленгліколь. Полігліколеві ланцюги можуть містити суміш, яка забезпечує середню довжину ланцюга "n" близько "7,5". У деяких варіантах реалізації середня довжина ланцюга "n" може варіюватися від близько 5 до близько 14. Кінцеві групи можуть включати, без обмеження ними, алкільні групи, такі як метильна група. Вважається, що ефективні кремнійорганічні сполуки включають, без обмеження ними, трисилоксанетоксиліровані поверхнево-активні речовини або поліалкіленоксид, модифікований гептаметилтрисилоксаном. (Сполука I: поліалкіленоксид гептаметилтрисилоксан, середня довжина n=7,5). У деяких варіантах реалізації кремнійорганічний препарат, що містить кремнійорганічну сполуку, включаючу трисилоксанову головну групу, використовується в способах та композиціях, приведених у цьому винаході. У деяких варіантах реалізації кремнійорганічний препарат, що містить кремнійорганічну сполуку, включаючу гептаметилтрисилоксанову головну групу, використовується в способах та композиціях, приведених у цьому винаході. У деяких варіантах реалізації кремнійорганічна композиція, яка містить Сполуку I, використовується в способах та композиціях, приведених у цьому винаході. У деяких варіантах реалізації способів та композицій, приведених у цьому винаході, використовується або надається композиція, яка містить полінуклеотидну молекулу та одну або більше ефективну кремнійорганічну сполуку в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків по вазі (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %. Композиції містять, без обмеження ними, компоненти, в яких один або більше полінуклеотидів практично ідентичні або практично комплементарні послідовності гену АККази (промотор, інтрон, екзон, 5'-нетрансльована область, 3'-нетрансльована область), агент перенесення, який забезпечує полінуклеотиду потрапляння в клітину рослини, гербіцид, який доповнює дію полінуклеотиду, один або декілька додаткових гербіцидів, які додатково посилюють гербіцидну дію композиції або забезпечують додатковий механізм дії, відмінний від механізму дії доповнюючого гербіциду, різні солі та стабілізуючи агенти, які збільшують корисність композиції у вигляді домішки компонентів композиції. Способи включають одну або декілька обробок полінуклеотидною композицією та одну або декілька обробок агентом перенесення для кондиціонування рослини з метою проникнення полінуклеотидів. Якщо агент для кондиціонування з метою проникнення являє собою кремнійорганічну сполуку або сполуку, що міститься в нім, варіанти реалізації полінуклеотидних молекул являють собою дволанцюгові РНК олігонуклеотиди, одноланцюгові РНК олігонуклеотиди, дволанцюгові РНК полінуклеотиди, одноланцюгові РНК полінуклеотиди, дволанцюгові ДНК олігонуклеотиди, одноланцюгові ДНК олігонуклеотиди, дволанцюгові ДНК полінуклеотиди, одноланцюгові ДНК полінуклеотиди, хімічно модифіковані РНК або ДНК олігонуклеотиди або полінуклеотиди або їх суміші. Композиції та способи можуть використовуватися для модуляції експресії ендогенного гену АККази (наприклад, патент США за номером 7,297,541, публікації патенту США 20110185444 та 20110185445) або трансгенного гену АККази (наприклад, патент США за номером 7,3072,379, публікація патенту США 20110191897) або інактивуючіх генів інгібітору АККази (патенти США за номерами 6,268,549; 6,768,044; 7,3072,379; 7,304,209; WO 96/38567, WO 99/24585) у клітині рослини. У різних варіантах реалізації ген АККази містить кодуючу (білок-кодуючу або трансльовану) послідовність, некодуючу (нетрансльовану) послідовність або як кодуючу, так і некодуючу послідовність. Композиції згідно цього винаходу можуть містити полінуклеотиди та олігонуклеотиди, призначені для виявлення декількох генів або декількох сегментів одного або більше генів. Ген-мішень може містити декілька послідовних сегментів гену-мішені, декілька непослідовних сегментів гену-мішені, декілька алелей гену-мішені або декілька генів-мішені з одного або більше видів. 15 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Аспект цього винаходу розкриває спосіб для модуляції експресії гену АККази в рослині, який включає: (а) кондиціонування рослини для проникнення полінуклеотидів та (б) обробку рослини полінуклеотидними молекулами, в якій полінуклеотидні молекули містять щонайменше один сегмент із 18 або більше безперервних нуклеотидів, клонованих або іншим чином отриманих із гену-мішені АККази в антисмисловій або смисловій орієнтації, при якій полінуклеотидні молекули потрапляють всередину рослини та стимулюють модуляцію гену-мішені. Кондиціонування та застосування полінуклеотиду можна виконати окремо або за один етап. Коли кондиціонування та застосування полінуклеотиду виконують на окремих етапах, кондиціонування може передувати або може виконуватися після застосування полінуклеотиду впродовж декількох хвилин, годин або днів. У деяких варіантах реалізації на одній і тій же рослині може здійснювати більше ніж один етап кондиціонування або застосовувати більше ніж одну молекулу полінуклеотиду. У варіантах реалізації способу сегмент можна клонувати або отримати з (а) кодуючої (білок-кодуючої), (б) некодуючої (промотор та інші молекули, які стосуються гену) або (в) і кодуючих, і некодуючих частин гену-мішені. Некодуючі частини включають ДНК, наприклад, промоторні області або РНК, що транскрибується за допомогою ДНК, яка забезпечує регуляторні молекули РНК, включаючи, без обмеження ними: інтрони, 5'або 3'-нетрансльовані області та мікроРНК, транс-діючі міРНК, природні антисмислові міРНК та інші малі РНК із регуляторною функцією або РНК, виконуючі структурну або ферментативну функцію, включаючи, без обмеження ними: рібозими, рібосомні РНК, тРНК, аптамери та рібосвітчі. Усі публікації, патенти та патентні заявки включені в цей документ у вигляді посилання так, як якби кожна окрема публікація або патентна заявка була б конкретно і окремо включена за допомогою окремого посилання. Наступні приклади включені для демонстрації прикладів деяких переважних варіантів реалізації цього винаходу. Фахівцями в цій галузі техніки повинно оцінитися те, що технології, розкриті в прикладах, відповідають підходам, які винахідники успішно застосували на практиці, і, отже, можуть розглядатися в якості зразків переважних варіантів реалізації для його практичного застосування. Проте, фахівці в цій галузі техніки, відповідно до цього опису, повинні оцінити можливість виконання багатьох змін у конкретних варіантах реалізації, які були розкриті і все ж таки отримати схожий або аналогічний результат без відхилення від суті і обсягу цього винаходу. ПРИКЛАДИ Приклад 1. Полінуклеотиди, що належать до послідовностей гену АККази. Полінуклеотидні молекули гену-мішені АККази в природі зустрічаються в геномі Amaranthus palmeri, Amaranthus rudis, Amaranthsu chlorostachys, Amaranthus thunbergii, Amaranthus graecizans, Amaranthus hybridus, Amaranthus lividus, Amanaranthus spinosus, Abutilon theophrasti, Ambrosia trifida, Commelina diffusa, Conyza candensis, Lolium multiflorum, Sorghum halepense, Xanthium strumarium, Euphorbia heterophylla, Kochia scoparia та Digitaria sanguinalis та включають молекули, пов'язані з експресією поліпептиду, який визначається як АККаза, що містить регуляторні молекули, кДНК, які містять кодуючі і некодуючі області гену АККази і його фрагментів, як показано в Таблиці 1. Полінуклеотидні молекули екстрагують із цих видів рослин за допомогою стандартних для цієї галузі техніки способів, наприклад, тотальну РНК екстрагують із використанням реагенту Trizol (Invitrogen Corp, Карлсбад, штат Каліфорнія, Cat. No. 15596-018) з дотриманням фахівцями в галузі екстракції полінуклеотиду протоколу виробника або його модифікацій, що може поліпшити відновлення або чистоту екстрагованої РНК. Коротко, розпочинають із 1 граму подрібнених тканин рослини для екстракції. Розподіляють на аліквоти 10 мілілітрів (мл) реагенту Trizol у 15 мл конічні пробірки. Додають подрібнений порошок у пробірки і струшують, щоб гомогенізувати. Інкубують гомогенізовані зразки впродовж 5 хвилин (хв) при кімнатній температурі (КТ) та потім додають 3 мл хлороформу. Енергійно трясуть пробірку вручну впродовж 15-30 секунд (сек) і інкубують при КТ впродовж 3 хв. Центрифугують пробірку при 7000 оборотах за хвилину (об/хв) впродовж 10 хв при 4 °C. Переливають водну фазу в нову 1,5 мл пробірку і додають 1 об'єм холодного ізопропанолу. Інкубують зразки впродовж 20-30 хв при КТ і центрифугують при 10000 об/хв впродовж 10 хв при 4 °C. Промивають гранули 80 відсотковим етанолом Sigma-класу. Видаляють супернатант і швидко висушують гранули на повітрі. Розчиняють РНК гранулу в близько 200 мікролітрах води, очищеної діетилпірокарбонатом. Недовго нагрівають при 65 °C, щоб розчинити гранулу і перемішують на вортексі або відміряють піпеткою, щоб ресуспендувати РНК гранулу. Корегують концентрацію РНК до 1-2 мікрограмів/мікролітр. 16 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ДНК екстрагують за допомогою набору EZNA SP Plant DNA Mini kit (Omega Biotek, Норкросс, штат Джорджія, Cat#D5511) і пробірки Lysing Matrix E (Q-Biogen, Cat#6914) з дотриманням фахівцями в галузі екстракції полінуклеотиду протоколу виробника або його модифікацій, що може поліпшити відновлення або чистоту екстрагованої ДНК. Коротко, до аліквоти подрібненої тканини в пробірці Lysing Matrix E на сухому льоді додають 800 мкл Buffer SP1 в кожен зразок, гомогенізують за допомогою руйнуючого клітини міні-гомогенізатора типу beadbeater впродовж 35-45 сек, інкубують на льоду впродовж 45-60 сек, центрифугують при ≥ 14000 об/хв впродовж 1 хв при КТ, додають 10 мікролітрів РНКази А в лізат, інкубують при 65 °C впродовж 10 хв, центрифугують впродовж 1 хв при КТ, додають 280 мкл Buffer SP2 і перемішують на вортексі, інкубують зразки на льоду впродовж 5 хв, центрифугують при ≥ 10000 об/хв впродовж 10 хв при КТ, переносять супернатант у колонку-гомогенізатор у 2 мл пробірці для збору зразків, центрифугують при 10000 об/хв впродовж 2 хв при КТ, переносять очищений лізат у 1,5 мл мікроцентрифужну пробірку, додають 1,5 об'єму Buffer SP3 до очищеного лізату, негайно перемішують на вортексі для отримання гомогенної суміші, переносять до 650 мкл супернатанту до колонки Hi-Bind, центрифугують при 10000 об/хв впродовж 1 хв, повторюють, застосовують 100 мкл 65 °C Elution Buffer до колонки, центрифугують при 10000 об/хв впродовж 5 хв при КТ. Секвенсори ДНК нового покоління, такі як 454-FLX (Roche, Бренфорд, штат Коннектікут), SOLiD (Applied Biosystems), а також Genome Analyzer (HiSeq2000, Illumina, Сан-Дієго, штат Каліфорнія) використовують, щоб забезпечити екстракцію з тканин рослини полінуклеотидної послідовності ДНК та РНК. Первинні дані секвенування збирають у контиги. Послідовність контигів використовують для визначення тригерних молекул, які можуть застосовуватися до рослин, щоб дозволити регуляцію експресії генів. Послідовність ДНК-мішені виділяють із геномної (гДНК) та кодуючої ДНК (кДНК) з різних видів смітних рослин для гену АККази, і зібрані контиги викладають у послідовності SEQ ID NO: 1-93 та в Таблиці 1. Приклад 2. Полінуклеотиди, що згідно винаходу належать до тригерних молекул Послідовності генів та фрагментів із Таблиці 1 розділяють на довжини по 200 полінуклеотидів (200-мер) з 25 полінуклеотидними областями, що перекриваються (SEQ ID NO: 93-3900). Ці полінуклеотиди випробують, щоб вибрати найбільш ефективні тригерні області по усій довжині будь-якої послідовності-мішені. Тригерні полінуклеотиди виконують у вигляді смислової або антисмислової олДНК або олРНК, длРНК або длДНК, або длДНК/РНК гібридів і об'єднують з агентом перенесення на кремнійорганічній основі, щоб забезпечити створення полінуклеотидного препарату. Полінуклеотиди об'єднують у набори з від двох до трьох полінуклеотидів у наборі, використовуючи по 4-8 нмоль кожного полінуклеотиду. Кожен набір полінуклеотидів готують з агентом перенесення і застосовують до рослини або поля рослин у комбінації з гербіцидом, який містить інгібітор АККази, або з подальшою обробкою інгібітором АККази на перший-третій день після застосування полінуклеотиду, щоб визначити вплив на сприйнятливість рослини до інгібітору АККази. Вплив визначають як затримку росту і/або загибель рослини та визначають на 8-14 день після обробки набором полінуклеотиду і інгібітором АККази. Виявляють найбільш ефективні набори і випробовують окремі полінуклеотиди тими ж способами, як і набори та виявляють окремий 200-мерний найбільш ефективний полінуклеотид. 200-мерну послідовність розділяють на дрібніші послідовності з 5070-мерних областей із 10-15 полінуклеотидними областями, що перекриваються, і випробовують полінуклеотиди в індивідуальному порядку. Найбільш ефективний 50-70-мерний полінуклеотид додатково розділяють на дрібніші послідовності з 25-мерних областей із 12-13 полінуклеотидними областями, що перекриваються, і випробовують на ефективність у комбінації з обробкою інгібітором АККази. За допомогою цього способу можна визначити олігонуклеотид або декілька олігонуклеотидів, які є найбільш ефективними тригерними молекулами для впливу на сприйнятливість рослини до інгібітору АККази або на модуляцію експресії гену АККази. Модуляцію експресії гену АККази визначають за допомогою виявлення міРНК молекул АККази, характерних для гену АККази, або за допомогою вивчення зменшення кількості РНК-транскрипту АККази, що виробляється, у порівнянні з необробленою рослиною, або за допомогою простого вивчення очікуваного фенотипу застосування тригеру з гербіцидом, що містить інгібітор АККази. Виявити міРНК можна, наприклад, з використанням наборів, таких як mirVana (Ambion, Остін, штат Техас) і mirPremier (Sigma-Aldrich, Сент-Луїс, штат Міссурі). Послідовність ДНК-мішені, виділена з геномної (гДНК) та кодуючої ДНК (кДНК) з різних видів смітних рослин для гену АККази, та зібрані контиги, представлені в SEQ ID NO: 1-92, розділяють на полінуклеотидні фрагменти, як представлено в SEQ ID NO: 93-3900. Послідовності генів та фрагментів із Таблиці 1 порівнюють та виявляють 21-мери безперервних полінуклеотидів із гомологією по усіх різних послідовностях гену АККази. Мета 17 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 полягає в тому, щоб визначити тригерні молекули, які застосовуються в якості гербіцидних молекул або в комбінації з гербіцидом, що є інгібітором АККази, до широкого діапазону видів бур'янів. Послідовності SEQ ID NO: 3901-4530 показують 21-мери, які присутні в гені АККази щонайменше восьми видів бур'янів із Таблиці 1. Передбачається, що додаткові 21-мер можна обрати з послідовностей Таблиці 1, які є характерними для одного виду бур'янів або декількох видів бур'янів у межах роду, або тригерних молекул, які складаються із щонайменше 18 безперервних нуклеотидів, щонайменше 19 безперервних нуклеотидів, щонайменше 20 безперервних нуклеотидів або щонайменше 21 безперервних нуклеотидів у довжину і щонайменше на 85 відсотків ідентичні послідовності гену АККази, обраній із групи, яка складається з послідовності SEQ ID NO: 1-92 або їх фрагменту. За допомогою цього способу можна визначити олігонуклеотид або декілька олігонуклеотидів, які є найбільш ефективними тригерними молекулами для впливу на сприйнятливість рослини до інгібітору АККази або на модуляцію експресії гену АККази. Модуляцію експресії гену АККази визначають за допомогою виявлення міРНК молекул АККази, характерних для гену АККази, або за допомогою вивчення зменшення кількості РНКтранскрипту АККази, що виробляється, у порівнянні з необробленою рослиною, або за допомогою простого вивчення очікуваного фенотипу застосування тригеру з гербіцидом, що містить інгібітор АККази. Виявити міРНК можна, наприклад, з використанням наборів, таких як mirVana (Ambion, Остін, штат Техас) і mirPremier (Sigma-Aldrich, Сент-Луїс, штат Міссурі). Послідовність ДНК-мішені, виділена з геномної (гДНК) та кодуючої ДНК (кДНК) з різних видів смітних рослин для гену АККази, та зібрані контиги, представлені в SEQ ID NO: 1-92, розділяють на фрагменти, як представлено в SEQ ID NO: 3901-4530. Приклад 3. Способи, використовувані у винаході, які пов'язані з обробкою рослин або частин рослин сумішами тригерних молекул зовнішнього застосування. Рослини щириці Палмера (A. palmeri R-22), сприйнятливі до гліфосату, вирощують в теплиці (30 / 20 С денна/нічна температура (T); при довжині світлового дня в 14 годин) у 4 дюймових квадратних горщиках із земляною сумішшю Sun Gro® Redi-Earth та 3,5 кг/м3 добрива Osmocote® 14-14-14. Рослини щириці Палмера висотою від 5 до 10 см обробляють пулом із 8 коротких (21-22-мер) одноланцюгових антисмислових оліго ДНК полінуклеотидів (олДНК), спрямованих на АККазу, як показано в Таблиці 2, при 16 нмоль, які додали до складу 10мілімолярного натрій-фосфатного буферу (рН 6,8), що містить 2 % сульфату амонію і 0,5 % Silwet L-77. Рослини обробляють вручну шляхом капання піпеткою по 10 мкл розчину полінуклеотиду на чотири повністю зрілих розкритих листа, усього використали 40 мкл розчину на одну рослину. Через двадцять чотири і сорок вісім годин рослини обробляють клетодимом (SelectMax®, 0,97 фунтів аі на галон; інгібітор АККази) при нормі внесення 272 грамів аі/га, до гербіцидної обробки також додають 1% маслянистого концентрату, який знижує ушкодження рослин-мішеней при обробці гербіцидом (COC). Кожну обробку повторюють чотири рази. Висоту рослини виміряють безпосередньо перед обробкою олДНК та з інтервалом до дванадцяти днів (дн) після обробки гербіцидом для визначення ефективності обробок олігонуклеотидом та гербіцидом. Таблиця 2 Олігонуклеотиди олДНК АККази ОЛІГО1 ОЛІГО2 ОЛІГО3 ОЛІГО4 ОЛІГО5 ОЛІГО6 ОЛІГО7 ОЛІГО8 45 SEQ ID NO: 4531 SEQ ID NO: 4532 SEQ ID NO: 4533 SEQ ID NO: 4534 SEQ ID NO: 4535 SEQ ID NO: 4536 SEQ ID NO: 4537 SEQ ID NO: 4538 gtcttacaagggttctcaa ATCTATGTTCACCTCCCTGTG ATAAACCATTAGCTTTCCcGG TTtATtGgAaCAaGCGgAgTT TATAGCACCACTTCCCGATAG GCACCACGAGGATCACAAGAA CCACCCGAGAAACCTCTCCAA CAGTCTTGaCGAGTGATTCCT Результати обробки проілюстровані на Фіг. 1 і демонструють, що у рослин, оброблених 16 нмоль і гербіцидом клетодим, спостерігається 22 відсоткове зниження висоти рослин у порівнянні з необробленими контрольними зразками, а використання лише клетодиму призвело до 0 відсоткового зниження висоти рослин. Це несподіваний результат, оскільки дводольні рослини зазвичай не сприйнятливі до гербіцидів, які є інгібітором АККази. 18 UA 116090 C2 5 10 15 20 25 30 Додаткове випробування проводять, щоб визначити, які з олігонуклеотидів АККази відповідають за результат. У цьому випробуванні кожен олігонуклеотид наносять на чотири рослини при нормі 4 нмоль (наномоль) на рослину, через 24 години після обробки олігонуклеотидом наносять гербіцид та оцінюють влив на ріст рослин. Це постреєстраційне випробування визначає, що з усіх оліго, які додавали до складу, оліго6 (SEQ ID NO: 4536) має найбільший ефект і може зменшити зростання рослин у середньому на 40 відсотків у порівнянні з необробленими рослинами. Цей результат дає можливість розширити спектр використання гербіцидів, що є інгібітором АККази, і впливати на дводольні бур'яни. Приклад 4. Спосіб боротьби з бур'янами на полі. Спосіб для боротьби з бур'янами на полі включає використання тригерних полінуклеотидів, які можуть модулювати експресію гену АККази в одному або декількох видах смітних рослинмішеней. Аналіз послідовностей гену АККази із сімнадцяти видів рослин забезпечив відбір 21мерних полінуклеотидів, які можна використати в композиціях для впливу на ріст або розвиток, або для покращення сприйнятливості до гербіциду, що є інгібітором АККази, щоб контролювати декілька видів бур'янів на полі. Композиція, що містить 1 або 2, або 3, або 4, або більше полінуклеотидів із SEQ ID NO: 3901-4530, забезпечить широкий спектр дій композиції відносно декількох видів бур'янів, які зустрічаються в середовищі поля. Спосіб включає створення композиції, яка містить компоненти, які включають щонайменше один полінуклеотид із SEQ ID NO: 3901-4530 або будь-який інший полінуклеотид, що ефективно модулює експресію гену, практично ідентичний або практично комплементарний SEQ ID NO: 192 або їх фрагменту, агент перенесення, яке мобілізує полінуклеотид у клітину рослини, і гербіцид, який інгібує АККазу, і необов'язково полінуклеотид, який модулює експресію основного гену, і необов'язково гербіцид із відмінним механізмом дії в порівнянні з інгібітором АККази. Полінуклеотид композиції містить длРНК, олДНК або длДНК, або їх комбінацію. Робоча концентрація композиції, що містить полінуклеотид, може бути від близько 1 до 30 грамів на акр або більше залежно від розміру полінуклеотиду і кількості полінуклеотидів у композиції. Композиція може містити один або більше додаткових гербіцидів, кількість яких потрібна для забезпечення ефективної боротьби з бур'янами декількох видів. Поля культурних рослин, що потребують боротьби зі смітними рослинами, обробляють за допомогою розпилення композиції. Композиція може бути надана у вигляді бакової суміші, послідовної обробки компонентів (зазвичай полінуклеотидом, а потім гербіцидом), одночасної обробки або змішування одного або більше компонентів композиції з окремих контейнерів. Обробка поля може проводитися в міру необхідності для забезпечення боротьби з бур'янами, а компоненти композиції можна скорегувати для боротьби з конкретними видами бур'янів або сімействами бур'янів. 35 Таблиця 1 Послідовності генів АККази, виділені із смітних видів рослин SEQ ID NO 1 Вид Абутилон Теофраста Тип кДНК Контиг Довжина Послідовність 1036 TTGCTGTAACTGATCTTGCCTGCAGTAAGAAAC TGCCTTTAATTTATTTGGCTGCGAACTCTGGTGC TCGTATTGGGGTAGCTGAAGAAGTCAAAGCCTG CTTTAAAGTTGGTTGGTCTGATGAATCCAGCCC TGAGCGTGGTTTTCAGTACATTTACATAACTCCT GAGGATTATACTAGGATTGGATCATCGGTCATT GCACATGAGATGAAGCTGGCCAGTGGAGAGAG CAGATGGGTGATAGATACTATTGTTGGGAAGGA GGATGGTTTGGGGGATCGAGAACTTAACAGGTA GTGGAGCCATTGCTGGTGCATACTCTCGGGCAT ACAAAGAAACCTTTACCCTAACGTATGTGACTG GTAGAACTGTGGGAATTGGTGCTTATCTTGCTC GTCTTGGCATGCGGTGTATACAAAGACTCGATC AACCCATTATTTTGACTGGTTTCTCAGCATTGAA CAAACTTCTAGGTCGTGAGGTGTATAGCTCCCA CATGCAACTTGGTGGACCTAAAATCATGGCAAC AAATGGGGTGGTTCATCTCACCGTCTCAGATGA TCTTGAAGGGGTGTCAGCTATTTTGAACTGGAT AAGTTGCATACCTCCTCATATTGGTGGTCCACTT 19 UA 116090 C2 SEQ ID NO 2 Вид Щириця маскована Тип кДНК Контиг Довжина 1479 Послідовність CCCATTTTAAACCCATCAGATCCTCCAGAAAGG CCTGTGGAGTACATCCCGGAAAATTCATGTGAT CCTCGTGCCGCTATTTGTGGTGCTTTAGATAGT AATGGCAAGTGGAAGGGCGGTATTTTTGACAGG GATAGCTTTGTGGAGACGCTCGAAGGTTGGGC TAGAACAGTTGTCACAGGAAGGGCAAAGCTTGG AGGAATTCCTGCAGGAATAGTTGCAGTTGAGAC ACAGACGGTGATGCAGGTTATCCCTGCCGATCC AGGACAACTTGATTCCCATGAAAGAGTTGTCCC TCAAGCTGGACAGGTATGGTTTCCGGATTCTGC TACAAAGACAGCTCAGGCAATAATGGATTTCAA CAGGGAAGAGCTTCCACTTTTCATTCTTGCCAA TTGGAGAGGCT ACCACGAGAAGATGCTTTCTTCCTTGCGGTTAC AAATCTTGCTTGTGCGAAGAAACTTCCTCTTATT TATCTGGCTGCAAATTCAGGAGCTCGACTTGGT GTTGCCGAAGAGCTAAAATCCTGCTTTAAAGTT GGCTGGTCGGATGAGTCAAACCCCGAGAGTGG ATTTCAGTATGTCTTCTTAACCCCGGAAGATTAC GATCGTATCGGATCGTCAGTCATAGCCCACGAG TTAAAACTCGAAAGTGGAGAAAAAAGATGGGTT ATAGACACAGTTGTCGGAAAGGAGGACGGATTA GGTGTCGAGAATCTATCAGGAAGTGGTGCTATA GCCAGTGCATACTCAAGGGCTTACAAGGAAACA TTTACTCTGACTTTTGTAACTGGTAGAACGGTCG GTATTGGTGCCTATCTTGCTCGCCTTGGGATGC GTTGTATACAGAGGCTTGACCAGCCTATAATTC TCACGGGTTTTTCTGCGTTAAATAAACTTCTTGG TCGGGAGGTTTACAGTTCACACATGCAACTTGG TGGACCGAAGATTATGGGCACAAACGGGGTAG TTCATCTTACAGTTTCCGATGATCTTGAAGGCAT TTCATCTATCTTGAAGTGGCTGAGCTATGTTCCA CCCTATGCAGGTGGTGAACTTCCGATTTCTCGG TGTTTAGACCCTCCAGAAAGACCCGTTGCGTAT TTGCCTGAAAATTCTTGTGATCCTCGTGGTGCT ATATCTGGTACAGTTGACTCCACCGGTAAATGG CATGGGGGTATTTTCGACAAGGATAGTTTTGTG GAAACCTTAGAAGGCTGGGCACGAACAGTTGTC ACGGGAAGGGCTAAACTTGGAGGAATTCCAGTT GGGATAGTTGCCGTTGAGACGCAGACTGTTATG CAAGTAATCCCAGCAGATCCCGGTCAACTCGAC TCACACGAGAGAGTCGTACCACAAGCAGGGCA AGTATGGTTCCCAGATTCCGCATCCAAGACAGC ACAAGCGCTGATGGATTTCAACCGGGAAGAACT ACCACTTTTCATTTTAGCTAATTGGAGAGGTTTC TCGGGTGGACAAAGGGATCTCTTTGAAGGGATC CTTCAAGCCGGATCCACCATTGTCGAAAATCTT AGGACTTATAATCAACCCGTTTTTGTTTATATAC CAATGATGGGGGAGCTTCGAGGAGGCGCATGG GTGGTCGTGGATAGTCGAATTAATTCCGATCAT ATAGAAATGTACGCCGACCAAACAGCTAAAGGA AATGTGCTTGAACCCGAAGGAATGATCGAGATT AAGTTCAGAACCAAGGAACTTCTCGAGTGTATG GGAAGGCTTGATCAACAACTCATCGGTCTCAAG GAAAAACTAGCAGAAGCCAAGAGCTCTAATTCC TACGATAAAATCGACCCCCTGCAGCAACAAATA AAAGCCCGCGAGAAGCAACTATTGCCTCTATAT ACTCAGATAGCCACCAAATTTGC 20 UA 116090 C2 SEQ ID NO Вид Тип Довжина 3 Щириця маскована кДНК Контиг 638 4 Щириця гібридна кДНК Контиг 2174 Послідовність AAATATACTCCTTCCCGTGATCGTCAATGGCAT CTTTACACGGTTATTGATAAACCACTCATTCGGA GGATGTTTTTGAGAACCCTTGTAAGACAACCCA TCTCTGAGTTCACAGGCGTCGAACTAAGCGCTC TTGAAACACAAAAGCCCATCTCTTTTACTTCAAG AAGCATCCTAAGGTCCTTAACAACCGCCATGGA GGAGTTGGAACTCAATGCACATAGTGCTTCATT GAAACCCGATCACGCTCATATGTACTTGTACATT GTTCGAGAGCAACAAATATACGATCTTGTGCCA TATCACAGGGAGGTGAACATAGATTACCAACAA GAAGAGGCTTCGGTTCAATTCTTTTTGGAAGAG CTCGCGCATGAAATCCACAGTCTTGCTGGTGTA AGGATGCATAAACTAAATGTTTGTGAGTGGGAA GTGAAACTTCGGATATCTTCTCCCGGGAAAGCT AATGGTTTATGGAGGGTGGCGGTTACTAATGTG ACTGGTCAGACCTGTTCGGTACATGTTTATCGT GAATTGGAAGATAGCAACCTACATGAAATGGTC TACCATTCATTATCCGTTCACGGTCCCCACCAT GGGGTACCTGTGAATGCACCCTATCAACCACTA GGTGGCAT TGAACATAGATTACCAACAAGAAGAGGCTTCGG TTCAATTCTTTTTGGAAGATCTCGCGCATGAAAT CCATAGTCTTGCTGGTGTAAGGATGCATAAACT AAATGTTTGTGAGTGGGAAGTGAAACTTCGGAT ATCATCTCCCGGGAAAGCTAATGGTTTATGGAG GGTGGCAGTTACTAATGTGACTGGTCATACCTG TTCGGTACATGTTTATCGTGAATTGGAAGATAG CAACCTACATGAAATGGTCTACCATTCAGTATCT GTTCACGGCCCCCACCATGGGGTACCTGTGAA TGCACCCTATCAACCACTCGGTGGCATCTCCCG TAAGCGACTTCAGGCCATGAAGAGTAGCACAAC ATACTGTTACGATTTTCCACTGGCTTTCTCAACT GCCCTGAAGCAATCATGGGCATCGGAAGCTCC GGATGTCAAGAAACCCTCGGACAAAGCACTTTT GAAAGTAACCGAGCTAGCATTTGCTGATCCAAA AGGCACATGGGGAACTCCGCTTGTTCCAATAAA TCGCAAGCCTGGTATGAACGATGTTGGCATGGT AGCCTGGTACTTGGAAATGTCCACCCCCGAGTT CCCTAACGGAAGAACAATAATGGTTGTAGCTAA TGATGTTACCTTCAAGGCCGGATCTTTCGGACC ACGAGAAGATGCTTTCTTCCTTGCTGTTACAAAT CTTGCTTGCGCGAAGAAACTTCCTCTTATTTATC TGGCTGCCAATTCAGGAGCTCGACTTGGTGTTG CCGAAGAGCTAAAATCCTGCTTTAAAGTTGGCT GGTCGGATGAGTCAAACCCCGAGAGTGGATTT CAGTATGTCTACTTAACCCCTGAAGATTACGATC GTATAGGATCGTCAGTCATAGCCCACGAGTTAA AACTCGAAAGTGGAGAAAAAAGATGGGTTATAG ACACCGTTGTCGGTAAGGAGGACGGATTAGGT GTCGAGAATCTATCAGGAAGTGGTGCTATAGCC AGTGCATACTCAAGGGCTTACAAGGAAACATTT ACTCTGACTTTTGTAACCGGTAGAACGGTCGGT ATTGGTGCCTATCTTGCTCGTCTTGGGATGCGT TGTATACAGAGGCTTGACCAGCCTATAATTCTC ACGGGTTTTTCTGCGTTAAATAAACTTCTCGGTC GGGAGGTTTACAGTTCACACATGCAACTTGGTG GACCGAAGATAATGGGCACAAACGGGGTAGTT CATCTTACAGTTTCCGATGATCTTGAAGGCATTT 21 UA 116090 C2 SEQ ID NO Вид Тип Довжина 5 Щириця гібридна кДНК Контиг 530 6 Щириця гібридна кДНК Контиг 527 Послідовність CATCTATCTTGAAGTGGCTGAGCTATGTTCCAC CCTATTCAGGTGGTGAACTTCCGATTTCTCGGT GTTTAGACCCTCCCGAAAGACCGGTTGCGTATT TGCCTGAAAATTGTTGTGATCCTCGTGGGGCTA TATCTGGTACGGTTGACTCCGCCGGTAAATGGT TTGGGGGTATTTTCGACAAGGATAGTTTTGTGG AAACCTTAGAAGGATGGGCACGAACAGTTGTCA CGGGAAGGGCTAAACTCGGAGGAATTCCAGTT GGCATAGTTGCTGTTGAGACACAGACTGTTATG CAAGTAATCCCAGCAGATCCCGGTCAACTCGAC TCACATGAGAGAGTCGTACCACAAGCAGGGCA AGTATGGTTCCCAGATTCCGCATCCAAGACAGC ACAAGCGCTGATGGATTTCAACCGGGAAGAACT CCCACTTTTCATTTTAGCTAATTGGAGAGGTTTC TCGGGTGGACAAAGGGATCTCTTTGAAGGGATC CTTCAGGCTGGATCCACCATAGTCGAAAATCTT AGGACTTATAATCAACCCGTTTTTGTTTATATCC CTATGATGGGGGAGCTTCGAGGAGGCGCATGG GTGGTCGTCGATAGTCGAATTAATTCCGACCAT ATAGAAATGTACGCCGACCAAACAGCTAAAGGA AATGTGCTTGAACCGGAAGGAATGATCGAGATT AAGTTCCGAACCAAGGAACTTCTCGAGTGTATG GGAAGGCTTGACCAACAACTCATCGGTCTCAAG GAAAAACTAGCCGAAGCCAAGAGCTCTAATTCC TACGATAAAATCGAGCCCCTGCAGCAACAAATA AAAGCCCGCGAGAAGCAACTATTGCCTCTTTAT ACTCAGATAGCCACCAAATTTGCCGAGTTGCAT GATACGTCTTTAAGGATGGCTGCCAAA CACTCGTCAAGACTGTTCGAGATGCTGCAGGTG AACGGTTGACCCATAAGTCGGCTTTGGAGTTGA TCCGGAAATGGTTCAATGAGTCAGATATTTCCG GAGAGGCTTCCGATGCTTGGGCTGATGATGCG ACCTTCTTTAAGTGGAAGGACAATACCGCTAAC TACGAGGAGAAGTTGAAAGAGTTGCGGGTTCA GAAGGTATTGGATCAGCTGTCGAATATTGGAGA TTCGGTAACTAATTTGAGGGCTCTGCCTCAGGG TCTTGCTGCCCTACTTCAAAAGGTGGATCCATC GAGTCGAGAAGAACTAGTCGAGGAACTCCGAA AAGTGCTCACTTGATTTCGCAACCGTTGATGGT GAAGTGAAACCTTCTTGGTTTCATCATGGTAGA AAATATTATTAGGCAAATCTATAATTTTTAGTGAC ATCAATTGTTTTAGACAATAGTATTGAACTAATTT ATTTAATTAAATTGTATAAATAGGAGACCTTGAA TTCATTTGAATTAAGTGGCTTATGCTTGCATTA TATAGATGAAGTAGTACAGAGTTTGCTGGAATG CCTTGATAGTCCCGAACTTCCATTCCTTCAATG GCAAGAATGCTTGTCTGTGCTGGCAACACGACT TCCCAAAGATCTGAGATACGAATTGGAATCAAA ATCTAGAGCTTTTGAAGGGATTACCAACACCCA GAACGTAGAATTTCCTGCTAAGTTGTTGAAAAG CATTCTTGAGGACCATTTAAACTCATGCCACGA GAAAGATAAAGGAGCTCAAGAGAGGCTTATTGA GCCTCTTATGGCTCTTGTAAAGTCTTACGAAGG TGGGCGAGAAAGTCATGCTCGTTTTATTGTTCA ATCTTTATTTGAAGAGTATTTATCCGTTGAAGAA TTGTTTAGCGACAATCTCCAGGCTGATGTGATT GAACGTCTCCGCCTTCAGTATAAGAAGGATCTG CTGAAGATTGTTGACATTGTACTGTCGCATCAG 22 UA 116090 C2 SEQ ID NO Вид Тип Довжина 7 Щириця синювата кДНК Контиг 1310 8 Щириця синювата кДНК Контиг 1309 Послідовність GGTGTTAAGAATAAAAATAAGCTGATTCTACGAC TCATGGAACAGCTGGTTTACCCAAATCCCG CGAGAGTGGATTTCAGTATGTCTACTTAACCCC TGAAGATTACGATCGTATAGGATCGTCAGTCAT AGCCCACGAGTTAAAACTCGAAAGTGGAGAAAA AAGATGGGTTATAGACACCGTTGTCGGTAAGGA GGACGGATTAGGTGTCGAGAATCTATCAGGAAG TGGTGCTATAGCCAGTGCATACTCAAGGGCTTA CAAGGAAACATTTACTCTGACTTTTGTAACCGGT AGAACGGTCGGTATTGGTGCCTATCTTGCTCGT CTTGGGATGCGTTGTATACAGAGGCTTGACCAG CCTATAATTCTCACGGGTTTTTCTGCGTTAAATA AACTTCTCGGTCGGGAGGTTTACAGTTCACACA TGCAACTTGGTGGACCGAAGATAATGGGCACAA ACGGGGTAGTTCATCTTACAGTTTCCGATGATC TTGAAGGCATTTCATCTATCTTGAAGTGGCTGA GCTATGTTCCACCCTATTCAGGTGGTGAACTTC CGATTTCTCGGTGTTTAGACCCTCCCGAAAGAC CGGTTGCGTATTTGCCTGAAAATTGTTGTGATC CTCGTGGGGCTATATCTGGTACGGTTGACTCCT CCGGTAAATGGTTTGGGGGTATTTTCGACAAGG ATAGTTTTGTGGAAACCTTAGAAGGATGGGCAC GAACAGTTGTCACGGGAAGGGCTAAACTCGGA GGAATTCCAGTTGGCATAGTTGCTGTTGAGACG CAGACTGTTATGCAAGTAATCCCAGCAGATCCC GGTCAACTCGACTCACATGAGAGAGTCGTACCA CAAGCAGGGCAAGTATGGTTCCCAGATTCCGCA TCCAAGACAGCACAAGCGCTGATGGATTTCAAC CGGGAAGAACTCCCACTTTTCATTTTAGCTAATT GGAGAGGTTTCTCGGGTGGACAAAGGGATCTC TTTGAAGGGATCCTTCAGGCTGGATCCACCATA GTCGAAAATCTTAGGACTTATAATCAACCCGTTT TTGTTTATATCCCTATGATGGGGGAGCTTCGAG GAGGCGCATGGGTGGTCGTCGATAGTCGAATT AATTCCGACCATATAGAAATGTACGCCGATCAA ACAGCTAAAGGAAATGTGCTTGAACCGGAAGGA ATGATCGAGATTAAGTTCCGAACCAAGGAACTT CTCGAGTGTATGGGAAGGCTTGACCAACAACTC ATCGGTCTCAAGGAAAAACTAGCCGTAGCCAAG AGCTCTAATTCCTACGATAAAATCGAGCCCCTG CAGCAACAAATAAAAGCCCGCGAGAAGCAACTA TTGCCTCTTTATACTCAGATAG AAAGCATTCTTGAGGACCATTTAAATTCATGCCA CGAGAAAGATAAAGGAGCTCAAGAGAGGCTTAT TGAGCCTCTTATGGCTCTTGTAAAGTCTTACGAA GGTGGGCGAGAAAGTCATGCTCGTTTTATTGTT CAATCTTTATTTGAAGAGTATTTATCCGTTGAAG AATTGTTTAGCGACAATCTCCAGGCTGATGTGA TTGAACGTCTCCGTCTTCAGTATAAGAAGGATC TGCTGAAGATTGTTGACATTGTACTGTCGCATC AGGGTGTTAAGAATAAAATAAGCTGATTCTACG ACTCATGGAACAGCTGGTTTACCCAAATCCCGC TGCATACAGGGGGAAACTTATCCGTTTCTCTCA ATTGAACCATACAATGTATTCTGAGTTGGCACTA AAGGCCAGTCAATTGCTTGAACAAACGAAATTG AGTGAGCTCCGTTCGAACATTGCTAGAAACCTC TCTGAGCTAGAAATGTTTACCGAGGATGGCGAA AACATGGATACTCCAAAAAGAAAAAGTGCTATTA 23 UA 116090 C2 SEQ ID NO Вид Тип Довжина 9 Щириця синювата кДНК Контиг 638 10 Щириця Палмера кДНК Контиг 4689 Послідовність ATGAACGTATGGAGGCGCTTGTGAGTACTCCTC TAGCTGTCGAAGATGCCCTTGTTGGTTTGTTTG ATCATAGTGATCATACACTTCAGAGGCGGGTTG TTGAGACCTATGTTCGGAGGCTTTATCAGCCTT ATCTTGTCAAGGGAAGTGTCAGGATGCTGTGGC ACAGATCAGGCTTCATAGCTTTATGGGAATTTGT TGAGGAGAATATTGACCGAACAAATTTTTCTGAT CTGACTACAAACAGTGGGAACCATAGTGAGCGA AAGTGGGGGGCCATGGTCGTTATTAAAACTCTT CAGTTCTTGCCATCGGTAATTGCTGCAGCATTG AGAGAAACAACTCATAGTTCCGATCAATCAACTT CCACTGGCTCTATAGAATCAGTCATCCATGGAA ATATGCTGCACATTGCACTAGTGGGGGTGAATA ACCAGATGAGCTTGTTGCAGGATAGTGGTGATG AAGATCAGGCTCAAGAGAGAATCGATAAGTTGG CCAAAATTCTGAGAGAACAAGAAGTGAGTTCAG CCCTTCGTGCTGTTGGTGTTGGTGTGATTAGTT GCATCATACAGAGAGATGAAGGGCGAACTCCG ATGAGGCATTCATTCTATTGGTCAGCAGAAAAA CAATATTATAGTGAGGAACCTTTACTACGTCATT TGGAACCCCTCTATCTATGTATCTCGAGCTGGA CAAGCTTAAGGGTTATGAAGATATCAAATATACT CCTTCCCGTGATCGTCAATGGCATCTTTACACG GTTATTGATAAAC GGCAGTTACTAATGTGACTGGTCATACCTGTTC GGTACATGTTTATCGTGAATTGGAAGATAGCAA CCTACATGAAATGGTCTACCATTCAGTATCTGTT CACGGCCCCCACCATGGGGTACCTGTGAATGC ACCCTACCAACCACTCGGTGGCATCTCCCGTAA GCGACTTCAGGCCATGAAGAGTAGCACAACATA CTGTTATGATTTTCCACTGGCTTTCTCAACTGCC CTGAAGCAATCATGGGCATCGGAAGCTCCGGA TGTCAAGAAACCCTCGGACAAAGCACTTTTGAA AGTAACCGAGCTAGCATTTGCTGATCCAAAAGG CACATGGGGAACTCCGCTTGTTCCAATAAATCG CAAGCCTGGTATGAACGATGTTGGCATGGTAGC CTGGTACTTGGAAATGTCCACCCCCGAGTTCCC TAACGGAAGAACAATAATGGTTGTAGCTAATGA TGTTACCTTCAAGGCCGGATCTTTCGGACCACG AGAAGATGCTTTCTTCCTTGCTGTTACAAATCTT GCTTGCGCGAAGAAACTTCCTCTTATTATCTGG CTGCCAATTCAGGAGCTCGACTTGGTGTTGCCG AAGAGCTAAAATCCTGCTTTAAAGTTGGCTGGT CGGATGAGTC CATAATACATTAAGTCCAGTATCTATACAAGAGA TTAAACCAGCTACAAAAAAGCTGATGAGCACAA GATACATCAAACAAAAACCAGCAGCTGATAGCA GTATTTCCTTTTTCTTAATGGCAAGAATGCTTGT CTGTGCTGGCAACACGACTCCCCAAAGATCTGA GATACGAATTGGAATCAAAATCTAGAGCTTTTGA AGCGATTACCAACACCCCAAACATAGAATTTCC TGCTAAGTTGTTGAAAAGTATTCTTGAGGACCAT TTAAACTCATGCCAAGAGAAAGATAAAGGAGCT CAAGAGAGGCTTATTGAGCCTCTTATGGTTCTT GTAAAGTCTTACGAAGGTGGGCGAGAAAGTCAT GCTCGTTTTATTGTTCAATCTTTATTTGAAGAGT ATTTATCCGTTGAAGAATTGTTTAGCGACAATCT CCAGGCTGATGTGATTGAACGTCTCCGCCTTCA 24 UA 116090 C2 SEQ ID NO Вид Тип Довжина Послідовність GTATAAGAAGGATCTGCTGAAGATTGTTGACAT TGTACTGTCGCATCAGGGTGTTAAGAATAAAAA TAAGCTGATTCTACGACTCATGGAACAGCTGGT TTACCCAAATCCCGCTGCATACAGGGGGCAACT TATCCGTTTCTCTCAATTGAACCATACAATGTAT TCTGAGTTGGCACTAAAGGCCAGTCAATTGCTT GAACAAACGAAATTGAGTGAGCTCCGTTCGAAC ATTGCTAGAAACCTCTCTGAGCTAGAAATGTTTA CCGAGGATGGCGAAAACATGGATACTCCAAAAA GAAAAAGTGCTATTAATGAACGTATGGAGGCCC TTGTGAGTACTCCTCTAGCTGTTGAAGATGCCC TTGTCGGTTTGTTTGATCATAGTGATCATACACT TCAGAGGCGGGTTGTTGAGACCTATGTTCGGA GGCTTTATCAGCCTTATCTTGTCAAGGGAAGTG TCAGGATGCTGTGGCACAGATCAGGTTTCATAG CTTTATGGGAATTTGTTGAGGAGAATATTGACC GAACAAATTTTTCNGATGATCTGACTACAAACAG TGGGAACCATAGTGAGCGAAAGTGGGGGGCCA TGGTCGTTATTAAAACTCTTCAGTTCTTGCCATC GGTGATTGCTGCAGCATTGAGAGAAACAACTCA TAGTTCCGATCAATCAACTTCCACTGGCTCTATA GAATCAGTCATCCATGGAAATATGCTGCACATT GCACTAGTGGGGGTGAACAACCAGATGAGCTT GTTGCAGGATAGTGGTGATGAAGATCAGGCTCA AGAGAGAATCGATAAATTGGCCAAAATTCTGAG AGAGCAAGAAGTGAGTTCAGCCCTTCGTGCTGC TGGTGTTGGTGTGATTAGTTGCATCATACAGAG AGATGAAGGGCGAACTCCGATGAGGCATTCATT CTATTGGTCAGCAGAAAAACAATATTATAGTGAG GAGCCTTTACTACGTCATTTGGAACCCCCTCTA TCTATGTATCTCGAGCTGGACAAGCTTAAGGGT TATGAAGATATCAAATATACTCCTTCCCGTGATC GTCAATGGCATCTTTACACGGTTATTGATAAACC ATTCATTCGGAGGATGTTTTTGAGAACCCTTGTA AGACAACCCATCTCTGAGTTCACAGGCGTCGAA CTAAGCGCTCTTGAAACACAAAAGCCTATCTCTT TCACTTCAAGAAGCATCCTAAGGTCCTTAACAA CCGCCATGGAGGAGTTGGAGCTCAATGCACAT AGTGCTTCACTGAAACCCGATCACGCTCATATG TACTTGTACATTGTCCGAGAGCAACAAATATAC GATCTTGTGCCATATCACAGGGAGGTGAACATA GATCACCAACAAGAAGAGGCTTCGGTTCAATTC TTTTTGGAAGATCTCGCGCATGAAATCCATAGT CTTGCTGGTGTAAGGATGCATAAACTAAATGTTT GTGAGTGGGAAGTGAAACTTCGGGTATCATCTC CCGGGAAAGCTAATGGTTTATGGAGGGTGGCA GTTACTAATGTGACTGGTCATACCTGTTCGGTA CATGTTTATCGTGAATTGGAAGATAGCAACCTA CATGAAATGGTCTACCATTCAGTATCTGTTCACG GCCCCCACCATGGGGTACCTGTGAATGCACCC TATCAACCACTCGGTGGCATCGCCCGTAAGCGA CTTCAGGCCATGAAAAGTAGCACAACTTACTGT TACGATTTTCCACTGGCTTTCTCAACTGCCCTGA AGCAATCATGGGCATCGGAAGCTCCGGATGTC AAGAAACCCTCGGACAAAGCGCTTTTGAAAGTA ACCGAGCTTAGCATTTGCTGATCCAAAAGGCAC ATGGGGAACTCCGCTTGTTCCAATAAATCGCAA GCCTGGTATGAACGATGTTGGCATGGTAGCCTG 25 UA 116090 C2 SEQ ID NO Вид Тип Довжина Послідовність GTACATGGAAATGTCCACCCCCGAGTTCCCTAA CGGAAGAACAATAATGGTTGTAGCTAATGATGT TACCTTCAAGGCCGGATCTTTCGGACCACGAGA AGATGCTTTCTTCCTTGCTGTTACAAATCTTGCT TGCGCGAAGAAACTTCCTCTTATTTATCTGGCT GCCAATTCAGGAGCTCGACTTGGTGTTGCCGAA GAGCTAAAATCCTGCTTTAAAGTTGGCTGGTCG GATGAGTCAAATCCCGAGAGTGGATTTCAGTAT GTCTACTTAACCCCTGAAGATTACGATCGTATA GGATCGTCAGTCATAGCCCACGAGTTAAAACTC GAAAGTGGAGAAAAAAGATGGGTTATAGATACC GTTGTAGGTAAGGAGGACGGATTAGGTGTTGA GAACCTATCGGGAAGTGGTGCTATAGCCAGTG CATACTCAAGGGCTTACAAGGAAACATTTACTCT GACTTTTGTAACCGGAAGAACGGTCGGTATTGG TGCCTATCTTGCTCGTCTTGGGATGCGTTGTAT ACAGAGGCTTGACCAGCCTATAATTCTCACGGG TTTTTCTGCTTTAAATAAACTTCTCGGCCGGGAG GTTTATAGTTCACACATGCAACTTGGTGGACCG AAGATTATGGGCACAAACGGGGTAGTTCATCTT ACAGTTTCCGATGATCTTGAAGGCATTTCATCTA TCTTGAAGTGGCTGAGCTACGTTCCACCCTATT CAGGTGGTGAACTTCCGATTTCTCGGTGTTTAG ACCCTCCAGAAAGACCGGTTGCGTATTTGCCTG AAAATTCTTGTGATCCTCGTGGTGCTATATCTGG TACGGTTGACTCCACCGGTAAATGGTTAGGGG GTATTTTCGACAAAGATAGTTTTGTGGAAACCTT AGAAGGATGGGCGCGAACAGTTGTCACGGGAA GGGCTAAGCTCGGAGGAATTCCAGTTGGCATA GTTGCCGTTGAGACGCAGACTGTTATGCAAGTA ATCCCAGCAGATCCCGGTCAACTCGACTCACAC GAGAGAGTCGTACCACAAGCAGGGCAAGTATG GTTCCCAGATTCCGCATCCAAGACAGCACAAGC GCTGATGGATTTCAACCGGGAAGAACTCCCACT TTTCATTTTAGCTAATTGGAGAGGTTTCTCGGGT GGACAAAGGGATCTCTTTGAAGGGATCCTTCAG GCCGGATCCACCATAGTTGAAAATCTTAGGACT TATAATCAACCCGTTTTTGTTTATATCCCTATGAT GGGGGAGCTTCGAGGAGGCGCATGGGTGGTC GTCGATAGTCGAATTAATTCCGACCATATAGAAA TGTACGCCGACCAAACAGCTAAAGGAAATGTGC TTGAACCGGAAGGAATGATCGAGATTAAGTTCC GAACCAAGGAACTTCTCGAGTGTATGGGAAGG CTTGATCAACAACTCATCGGTCTCAAGGAAAAA CTAGCCGAAGCCAAGAGCTCTAATTCCTACAAT AAAATCGAGCCCCTGCAGCAACAAATAAAAGCC CGCGAGAAGCAACTATTGCCTCTATATACTCAA ATAGCCACCAAATTTGCCGAGTTGCACGATACG TCTTTAAGGATGGCTGCCAAAGGAGTTATTAGG GACGTCTTGGAATGGAAAAGCTCGCGTTCGTTC TTTTACAAAAGATTATACAGGAGAGTTATGGAG GAATCACTCGTCAAGACTGTTCGAGATGCTGCA GGTGAACGGTTGACCCATAAGTCGGCTTTGGA GTTGATCCAAAAATGGTTCAATGAGTCGAATATC TCCGGAGAGGCTTCCGATGCTTGGGCTGATGA TGCGGCCTTCTTTAAGTGGAAGGACGATACCGC CAACTACGAGGAGAAGTTGAAAGAGTTGCGCGT TCAGAAGGTATTGGATCAGCTGTCGAATATTGG 26 UA 116090 C2 SEQ ID NO 11 Вид Щириця Палмера Тип кДНК Контиг Довжина 1582 Послідовність AGATTCGGCAACTAATTTGAGGGCTCTGCCTCA GGGTCTTGCTGCCCTACTTCAAAAGGTGGATCC ATCGAGTCGAGAAGAACTAGTCGAGGAACTCC GTAGAGTGCTCACTTGATTTCGCAACCGTTGAT GGTGAAGTGAAACCTTCTTGGTTTCATCATGGT AGAAAATATTATTAGGCAAATCTATAATTCTAGT TACATCCATTGTTTTAGACAATAGTATTGAACTA ATTTATTTAATTAAATTGTATAAATAGGAGACCTT GAATTCATTTGAATTAAGTGGCTTATGCTTGCAT TATTTTGTATTGAATCAAATAATTATTTACATACT TTTGATTATTAATAATGGTAAATCCTCAAAATTTG AGGGATTTGTTACCT GTTGCAGCATTGCATAGCCGTGATTGCAGTGTC CAAAGGCGGCACCAAAAGATCATTGAAGAAGG CCCAATAACGATAGCTCCACCAGAAACGGTGAA GAAGCTTGAGCAAGCAGCTAGAAGATTGGCTTT ATGTGTGGGTTATGTTGGCGCAGCTACAGTTGA ATATTTATACAGCATGGAAACAGGCGAGTTCCA TTTCCTTGAGTTGAATCCTCGGTTACAGGTGGA GCATCCTGTTACTGAGTGGATTGCTGAGGTAAA TCTTCCAGCTGCTCAAGTTGCAGTTGGCATGGG TATCCCACTTTGGCAAATTCCTGAAATCCGTCG GTTCTATGGGAAGGAACATGGTGGGGGTTATGA TACTTGGATGAGGACATCTGCTTTGGCTACTGC TTTTGATTTTAACGAGGCACAGTCGGTGAAACC TAAAGGTCATTGTATTGCTGCGCGTGTGACAAG TGAGGATCCCGATGACGGTTTTAAGCCTACAAG CGGGAAAGTACAGGAGCTGAGTTTTAAAAGTAA ACCGAATGTGTGGGCCTACTTCTCTGTTAAGTC TGGGGGAGGCATTCATGAGTTCTCGGATTCTCA ATTTGGCCATGTTTTTGCATTTGGTGAAAACCGA GGTTTGGCCATAGCAAATATGATTCTTGGATTAA AAGAAATTCAAATTCGTGGAGAAATTCGAACTAA TGTTGATTACACCATCGATCTTTTAAATTGTTTG GATTATAGAGAAAACCAAATTCATACAGGTTGGT TGGATAGTAGAATTGCGATGAGGGTCAGAGCTG AAAGGCCACCTTGGTACATCTCTGTTGTGGGAG GAGGGCTTTACAAAGCATCGACTAGTAGTGCAG CGACTGTTTCAGAGTATATAGGCTATCTTGAAAA AGGTCAAATTCCTCCGAAGCATATATCACTCGT CCACTATGAAGTTGCTCTAAATATCGAGGGGAT GAAATATACCATTGAGATGATTAGGGGTGGACC AGGAAGCTACAAAATGTGGTTGAATGGGTCCGT AGTTGAGGCGGAAATACATACTTTAAGAGATGG GGGTCTCTTGATGCAGTTGGACGGAAACAGCC ATGTGATATATGCCGAGGAAGAAGCTGCAGGAA CTCGCCTTCTGATTGATGGAAGAACTTGTTTGC TTCAGAACGATCACGATCCTTCAAAGCTAATTG CGGAGACTCCGTGTAAGCTTATGCGGTATTTGG TACCAGATAACAGTCACATAGATGCAGATACTC CGTATGCTGAAGTTGAGGTCATGAAGATGTGTA TGCCTTTGCTTTCCCCTGCATCCGGTGTTTTACA ATTTAAGATGTCCGAAGGTCAAGCTATGCAGGC TGGTGAACTCATAGCTAGTCTAGAGTTGGATGA TCCTTCAGCTGTAAGAAAAGCCGAACCTTTCAG TGGAAGCTTTCCTGTCATGGGCTCACCAACTGC AATATCTGGAAAAGTTCATCAGAGGTGTGCCGC AAGTTTAAATGCCGCTCGGATGATTTTGGCTGG 27 UA 116090 C2 SEQ ID NO Вид Тип Довжина 12 Щириця Палмера кДНК Контиг 822 13 Щириця Палмера гДНК Контиг 17981 Послідовність TTATGAACACAATATAGATGAAGTAGTACAGAGT TTGCTGGAATGCCTTGATAGTCCCG AGATGTGTATAAGAGACAGTATAATCAAGTTTTT TAGTACCCAAAGCTCTAAATGTTACTTAAAGTTT TGATCTTTTAATGGTTTCTTCTATTTAATCCAATA ATTTAAAGTACCCAGATTTCAATTTTTAGAATAAA TTGAGTTTTTGAATTGCCCAAGTTGTAATTGTTG CTGAATTCTCTTGCTTTGATTTGGGTTTTCTGAT TCTATCCCTTCTGATTCATACAGTTTCAGGAGCA GTGGTCTCATTTTCGAGCAATACAAAAAGTGCC GTGCTTCTCTAAACAACGACGATTCAGACATGT CTTCTCCTTCCCACAATAATGAAAACCCGAACG GACCGATGATGCCACTCCTGAGGAATTCATCTG TAGTATCCATTGTTGATAAGTTCTGTTATGCTCT TGGAGGGACGCGGCCAATCCATAGTATTTTGAT AGCAAACAATGGGATGGCTGCTGTCAAATTTAT AAGAAGTATCCGAACATGGGCTTACGAGACTTT TGGTACTGAGAAGGCTATATTATTGGTAGCCAT GGCTACTCCCGAAGACATGAAAATCAATGCCGA GCATATTCGAATGGCTGATCAGTTTGTTGAAGT CCCCGGAGGAACTAACAACAATAACTACGCCAA TGTGCAGCTCATTGTTGAGTTAGCGGAAGTTAC ACGAGTTGACGCAGTTTGGCCTGGTTGGGGAC ATGCATCGGAGATCCCCGAGTTGCCAGATTCAT TAGCTACGAAGGGAATTGTGTTTCTGGGCCCCC CAGCTGCATCTATGGCTGCTCTTGGAGATAAAA TTGGTTCATCATTGATTGCAC AAACCAAACCAACCTCCTTAAACTTCTCTTCTTC TACTCACCATTTTTTCCTCTTTTTATTGATTATTG ATTTTAAATATACATTATATTGTAGGAATTTAATG AAATTTTCATTAAATTCTGATAAAGTTTTGATTTT TTTTAGTGTATGAGATTTTTCAGAAGTACCCAAA TGGTAAATTTCAAGTATAATCAAGTTTTTTAGTA CCCAAAGCTCTAAATGTTACTTAAAGTTTTGATC TTTTAATGGTTTCTTGTATTTAATCCAATAATTTA AAGTACCCAGATTTCAATTTTTAGAATAAATTGA GTTTTTGAATTGCCCAAGTTGTAATTGTTGCTGA ATTCTCTTGCTTTGATTTGGGTTTTCTGATTCTAT CCCTTCTGATTCATACAGGTATTCTGATTTTTTC TTGCTTGATTACTTTTTGTTAGTGTATGGTTGAG CTAATTTAGTTTATAGTAGTGTGAATTTTATTTTA TTTTTTTTCAATTTTTTCAATTATTTCAATTTGTAG AGTAGATTCTCCTATTATGATTTGTTTTTGTAGC TGGGTTTTAATTTTTATTGTCTGATGATTTATCTT AGCAATGTTTTAATGGGTGTGCTGTTTTTCAATT TATAGTGTAATTTAGTTGATTCCTCTTTTCCAATA GAGTGTACAAAACCGACCTGATTAACTGAAACC GAGTATTATCCAACGGGAACAATCCCTGTTACA AAATTCAAATTAGAATGTCAAGTACCGAAATCAA CCCGACCCCACATATTATACCCGAGATCCACCC GAACACCCGAATGAACACCTCTGAGATCATAGA GAGGATATAAAGAAAAGTGGAACTAGAATGGGG AATTTAGTTTATTTGAGCTACATTGAGCAAAATT TTTTTTAGTGACTGATTATTGTAGCTGGCTTTTG TTGTATAACTCATCTAAGCAATGTTTTTGATGTG TGTGCAGTAGCATTGGATTGTTTTGATTTTTTGT TATATTGTCTATACAATTCAAATCTTGAATCACA CTTGACTTTTAGTTCCATTTTCATCTTCACAAATT 28