Спосіб та композиція для боротьби з бур’янами (варіанти)

Реферат: Винахід стосується способу боротьби з рослинами і композиції для використання за вказаним способом, яка містить полінуклеотид, ідентичний або комплементарний до щонайменше 18 безперервних нуклеотидів послідовності гена глутамінсинтетази (GS) або РНК-транскрипту вказаної послідовності гена GS, і агент перенесення, де вказаний агент перенесення готує вказану поверхню вказаної рослини для проникнення вказаного полінуклеотиду, і причому експресія гена GS знижується, пригнічується або іншим чином уповільнюється у вказаній рослині, причому ріст, розвиток або репродуктивна здатність вказаної рослини пригнічується або уповільнюється, або вказана рослина стає сприйнятливішою до гербіциду, що є інгібітором GS, завдяки використанню вказаної композиції, що містить полінуклеотид, порівняно з необробленою рослиною; мікробної касети експресії, яка містить полінуклеотид, ідентичний або комплементарний до щонайменше 18 безперервних нуклеотидів послідовності гена GS. UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Відповідно до § 119 (e) розділу 35 Кодексу США (35 U.S.C.) у цій заявці заявляється пріоритет за попередньою заявкою на видачу патенту США із серійним номером 61/534,076, поданою 13 вересня 2011 року, розкриття якої включене в цей документ у вигляді посилання в повному обсязі. Перелік послідовностей, що міститься у файлі з ім'ям "40_21(58638)B seq listing.txt", розмір якого складає 849,153 байт (виміряний в операційній системі MS-Windows) і який був створений 6 вересня 2012 року, наведений та включений в цей документ у вигляді посилання. Галузь винаходу Способи та композиції в цілому належать до галузі боротьби з бур'янами. Зокрема, стосуються генів глутамінсинтетази у рослин і композицій, які містять полінуклеотидні молекули для модуляції їх експресії. Нижче наводяться способи та композиції, що використовуються для боротьби з бур'янами. Рівень техніки Бур'яни являють собою рослини, що конкурують із культурними рослинами в агрономічних умовах і коштують фермерам мільярди доларів щорічно у зв'язку з втратами урожаю і заходами з боротьби з бур'янами. Бур'яни також є хазяїнами-носіями хвороб сільськогосподарських культур та комах-шкідників. Збитки, завдані бур'янами в умовах сільськогосподарського виробництва, включають зниження врожайності, погіршення якості урожаю, підвищення витрат на зрошування, збільшення витрат на збір урожаю, зниження вартості землі, спричинення шкоди для худоби та пошкодження урожаю шкідниками і хворобами, які несуть бур'яни. Основними засобами, за допомогою яких бур'яни викликають ці наслідки, є: 1) конкуренція із культурними рослинами за воду, поживні речовини, сонячне світло та інші невід'ємні умови для росту та розвитку, 2) виділення токсичних або подразнювальних хімічних речовин, які викликають проблеми зі здоров'ям у людей або тварини, 3) утворення величезної кількості насіння або вегетативних репродуктивних органів або і тих, і інших, які засмічують сільськогосподарську продукцію і назавжди зберігаються в сільськогосподарських землях, та 4) утворення на сільськогосподарських і несільськогосподарських землях величезної кількості рослинності, що підлягає знищенню. Гербіцидостійкі бур'яни є проблемою при використанні майже усіх гербіцидів; існує необхідність ефективної боротьби з цими бур'янами. Нині більше, ніж 365 біотипів бур'янів визначаються як стійкі до одного або декількох гербіцидів згідно з Комітетом з попередження виникнення стійкості до дії гербіцидів (HRAC), Північноамериканським комітетом із попередження виникнення стійкості до дії гербіцидів (NAHRAC) і Американським науковим товариством з дослідження бур'янів (WSSA). Фермент глутамінсинтетаза (GS) є важливим ферментом в метаболізмі азоту, який каталізує конденсацію глутамату та аміаку з утворенням глутаміну. Цей фермент є мішенню гербіцидів на основі фосфінових кислот, які містять глюфосинат амонію та біалафос. Суть винаходу В одному аспекті цей винахід стосується способу боротьби з рослинами, який включає зовнішню обробку рослини композицією, яка містить полінуклеотид та агент перенесення, в якій полінуклеотид практично ідентичний до або практично комплементарний до послідовності гена глутамінсинтетази або її фрагмента, або РНК-транскрипту вказаної послідовності гена GS або її фрагмента, в якій вказану послідовність гена GS обирають із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-59 або фрагмента полінуклеотиду, внаслідок чого ріст або розвиток, або репродуктивна здатність бур'янистої рослини знижується або бур'яниста рослина стає сприйнятливішою до гербіциду, що є інгібітором GS, порівняно з бур'янистою рослиною, яка не оброблена вказаною композицією. Таким чином, рослини, які стали стійкими до застосування гербіцидів, що містять інгібітор GS, можна зробити сприйнятливішими до гербіцидних дій гербіциду, що містить інгібітор GS, тим самим посилюючи дію гербіциду. Фрагмент полінуклеотиду, який складається із щонайменше 18 безперервних нуклеотидів, щонайменше 19 безперервних нуклеотидів, щонайменше 20 безперервних нуклеотидів або щонайменше 21 безперервного нуклеотиду у довжину і щонайменше на 85 відсотків ідентичний до послідовності гена GS, обраної із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-59 та агента перенесення, являє собою кремнійорганічну композицію або сполуку. Фрагмент полінуклеотиду може бути смисловою або антисмисловою молекулою олДНК або олРНК, длРНК або длДНК, або гібридами длДНК/РНК. Композиція може містити більше, ніж один фрагмент полінуклеотиду, та композиція може містити гербіцид, що є інгібітором GS, і/або інші гербіциди (сумісні гербіциди), які підвищують дію композиції для боротьби з бур'янами. В іншому аспекті розкриваються полінуклеотидні молекули та способи модуляції експресії гена GS у видів рослин. Спосіб знижує, пригнічує або іншим чином уповільнює експресію гена GS у рослини, що включає зовнішню обробку такої рослини композицією, яка містить 1 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 полінуклеотид та агент перенесення, в якій полінуклеотид практично ідентичний або практично комплементарний до послідовності гена GS або її фрагмента, або РНК-транскрипту послідовності гена GS або її фрагмента, в якій послідовність гена GS обирають із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-59 або їх фрагмента полінуклеотиду. Фрагмент полінуклеотиду, який складається із щонайменше 18 безперервних нуклеотидів, щонайменше 19 безперервних нуклеотидів, щонайменше 20 безперервних нуклеотидів або щонайменше 21 безперервного нуклеотиду у довжину і щонайменше на 85 відсотків ідентичний до послідовності гена GS, обраної із групи, що складається з SEQ ID NO: 1-59 та агента перенесення, являє собою кремнійорганічну композицію. Фрагмент полінуклеотиду може бути смисловою або антисмисловою молекулою олДНК або олРНК, длРНК або длДНК, або гібридами длДНК/РНК. Полінуклеотидні молекули, які містять SEQ ID NO: 37-1056, є фрагментами гена GS. У додатковому аспекті композицію, яка містить полінуклеотидну молекулу, можна змішати з іншими гербіцидними сполуками (сумісними гербіцидами), щоб забезпечити додаткову боротьбу з небажаними рослинами на полі із культурними рослинами. У додатковому аспекті композицію полінуклеотидної молекули можна змішати з будь-яким одним або декількома додатковими агрохімікатами, такими, як, інсектициди, фунгіциди, нематоциди, бактерициди, акарициди, регулятори росту, хемостерилізатори, хімічні сигнальні речовини, репеленти, атрактанти, феромони, стимулятори поїдання, біопестициди, мікробні пестициди або інші біологічно активні сполуки для отримання багатокомпонентного пестициду, що надає ще ширший спектр захисту сільськогосподарської продукції. Детальний опис винаходу Пропонуються способи та композиції, які містять полінуклеотид, який забезпечує регуляцію, репресію або уповільнення експресії гена GS (глутамінсинтетази), а також поліпшену боротьбу з видами бур'янистих рослин і особливо з біотипами бур'янів, стійкими до інгібіторів GS. Аспекти способу можуть застосовуватися для боротьби з різними бур'янистими рослинами в агрономічних та інших культурних середовищах. Наступні визначення та способи пропонуються для того, щоб краще визначити цей винахід і спрямувати фахівців цієї галузі техніки на практику цього винаходу. Якщо не вказане інше, терміни, використані в цьому винаході, мають ті ж значення, які зазвичай відомі фахівцеві із загальною підготовкою в галузі техніки, до якої належить цей винахід. Якщо термін наведений в однині, автори цього винаходу також мають на увазі множину цього терміну. Під полінуклеотидами, що "не транскрибуються", мають на увазі, що полінуклеотиди не містять повної одиниці транскрипції полімерази II. Використовуваний тут термін "розчин" стосується однорідних сумішей і неоднорідних сумішей, таких, як суспензії, колоїди, міцели та емульсії. Бур'янистими рослинами є рослини, які конкурують із культурними рослинами, найбільш важливі з яких включають, без обмеження ними, такі важливі інвазивні та шкідливі бур'яни, а також стійкі до дії гербіциду біотипи в рослинництві, як Amaranthus вид -A. albus, A. blitoides, A. hybridus, A. palmeri, A. powellii, A. retroflexus, A. spinosus, A. tuberculatus та A. viridis; Ambrosia вид -A. trifida, A. artemisifolia; Lolium вид -L. multiflorum, L. rigidium, L perenne; Digitaria вид -D. insularis; Euphorbia вид -E. heterophylla; Kochia вид -K. scoparia; Sorghum вид -S. halepense; Conyza вид -C. bonariensis, C. canadensis, C. sumatrensis; Chloris вид -C. truncate; Echinochola вид - E. colona, E. crus-galli; Eleusine вид -E. indica; Poa вид -P. annua; Plantago вид -P. lanceolata; Avena вид -A. fatua; Chenopodium вид -C. album; Setaria вид –S. viridis, Abutilon theophrasti, Ipomoea вид, Sesbania вид, Cassia вид, Sida вид, Brachiaria вид та Solanum вид. Додаткові види бур'янистих рослин, знайдені на посівних площах, включають Alopecurus myosuroides, Avena sterilis, Avena sterilis ludoviciana, Brachiaria plantaginea, Bromus diandrus, Bromus rigidus, Cynosurus echinatus, Digitaria ciliaris, Digitaria ischaemum, Digitaria sanguinalis, Echinochloa oryzicola, Echinochloa phyllopogon, Eriochloa punctata, Hordeum glaucum, Hordeum leporinum, Ischaemum rugosum, Leptochloa chinensis, Lolium persicum, Phalaris minor, Phalaris paradoxa, Rottboellia exalta, Setaria faberi, Setaria viridis var, robusta-alba schreiber, Setaria viridis var, robusta-purpurea, Snowdenia polystachea, Sorghum sudanese, Alisma plantago-aquatica, Amaranthus lividus, Amaranthus quitensis, Ammania auriculata, Ammania coccinea, Anthemis cotula, Apera spica-venti, Bacopa rotundifolia, Bidens pilosa, Bidens subalternans, Brassica tournefortii, Bromus tectorum, Camelina microcarpa, Chrysanthemum coronarium, Cuscuta campestris, Cyperus difformis, Damasonium minus, Descurainia sophia, Diplotaxis tenuifolia, Echium plantagineum, Elatine triandra var, pedicellata, Euphorbia heterophylla, Fallopia convolvulus, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Helianthus annuus, Iva xanthifolia, Ixophorus unisetus, Ipomoea indica, Ipomoea purpurea, Ipomoea sepiaria, Ipomoea aquatic, Ipomoea triloba, Lactuca serriola, Limnocharis flava, Limnophila erecta, Limnophila sessiliflora, Lindernia dubia, Lindernia dubia var, 2 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 major, Lindernia micrantha, Lindernia procumbens, Mesembryanthemum crystallinum, Monochoria korsakowii, Monochoria vaginalis, Neslia paniculata, Papaver rhoeas, Parthenium hysterophorus, Pentzia suffruticosa, Phalaris minor, Raphanus raphanistrum, Raphanus sativus, Rapistrum rugosum, Rotala indica var, uliginosa, Sagittaria guyanensis, Sagittaria montevidensis, Sagittaria pygmaea, Salsola iberica, Scirpus juncoides var, ohwianus, Scirpus mucronatus, Setaria lutescens, Sida spinosa, Sinapis arvensis, Sisymbrium orientale, Sisymbrium thellungii, Solanum ptycanthum, Sonchus asper, Sonchus oleraceus, Sorghum bicolor, Stellaria media, Thlaspi arvense, Xanthium strumarium, Arctotheca calendula, Conyza sumatrensis, Crassocephalum crepidiodes, Cuphea carthagenenis, Epilobium adenocaulon, Erigeron philadelphicus, Landoltia punctata, Lepidium virginicum, Monochoria korsakowii, Solanum americanum, Solanum nigrum, Vulpia bromoides, Youngia japonica, Hydrilla verticillata, Carduus nutans, Carduus pycnocephalus, Centaurea solstitialis, Cirsium arvense, Commelina diffusa, Convolvulus arvensis, Daucus carota, Digitaria ischaemum, Echinochloa crus-pavonis, Fimbristylis miliacea, Galeopsis tetrahit, Galium spurium, Limnophila erecta, Matricaria perforate, Papaver rhoeas, Ranunculus acris, Soliva sessilis, Sphenoclea zeylanica, Stellaria media, Nassella trichotoma, Stipa neesiana, Agrostis stolonifera, Polygonum aviculare, Alopecurus japonicus, Beckmannia syzigachne, Bromus tectorum, Chloris inflate, Echinochloa erecta, Portulaca oleracea та Senecio vulgaris. Вважається, що усі рослини містять у своєму геномі ген глутамінсинтетази, послідовність якого можна виділити та отримати полінуклеотиди відповідно до способів цього винаходу, які застосовуються для регуляції, пригнічення або уповільнення експресії гена-мішені GS у рослинах і росту або розвитку оброблених рослин. Деякі культурні рослини також можуть бути бур'янистими рослинами, якщо вони зустрічаються в небажаному середовищі. Наприклад, кукурудза, яка росте на полі сої. Трансгенні культури, стійкі до одного або декількох гербіцидів, можуть потребувати спеціалізованих способів управління для боротьби з бур'янами та самопосівними сільськогосподарськими культурами. Цей винахід дозволяє виявляти трансгени стійкості до гербіцидів, щоб дозволити обробленим рослинам стати сприйнятливими до гербіциду. Наприклад, трансгенні послідовності ДНК GS у трансгенних об'єктах, які включають, без обмеження ними, DP-004114-3, DAS-44406-6, DAS-68416-4, T304-40XGHB119, LLRICE601, TC6275, LLCotton25, MS1 & RF1/RF2, Topas 19/2, Line 1507, MS6, GU262, A5547-127, T-120-7, W62, W98, A2704-12, A2704-21, A5547-35 та B16. "Тригер" або "тригерний полінуклеотид" згідно з цим винаходом являє собою молекулу полінуклеотиду, яка гомологічна або комплементарна до полінуклеотиду гена-мішені. Молекули тригерного полінуклеотиду модулюють експресію гена-мішені при місцевому нанесенні на поверхню рослин за допомогою агента перенесення, завдяки якому ріст або розвиток, або репродуктивна здатність рослини, обробленої вказаною композицією, регулюється, пригнічується або сповільнюється, або вказана рослина стає срийнятливішою до гербіциду, що є інгібітором GS, або гербіциду, що є інгібітором мітозу, у результаті використання вказаної композиції, яка містить полінуклеотид, порівняно з рослиною, яка не оброблена композицією, що містить тригерну молекулу. Передбачається, що композиція згідно з цим винаходом міститиме декілька полінуклеотидів та гербіцидів, які включають, без обмеження ними, тригерні полінуклеотиди гена GS і гербіцид, що є інгібітором GS, і будь-який один або декілька додаткових тригерних полінуклеотидів генамішені гербіциду і відповідних гербіцидів, і будь-який один або декілька додаткових тригерних полінуклеотидів основного гена. Основні гени являють собою гени в рослині, які забезпечують ключові ферменти або інші білки, наприклад, фермент біосинтезу, метаболізуючий фермент, рецептор, білок-переносник сигналу, структурний продукт гена, фактор транскрипції або транспортний білок; або регулюючі РНК, такі, як, мікроРНК, які важливі для росту або виживання організму або клітини, або беруть участь у нормальному рості і розвитку рослин (Meinke зі співавторами, Trends Plant Sci. 2008 Sep; 13(9):483-91). Пригнічення основного гена посилює дію гербіциду, що впливає на функцію продукту гена, відмінну від пригніченого основного гена. Композиції згідно з цим винаходом можуть містити різні тригерні полінуклеотиди, які модулюють експресію основного гена, відмінного від GS. Гербіциди, до яких трансгени рослин проявили стійкість і можна застосувати спосіб згідно з цим винаходом, включають, без обмеження ними: ауксиноподібні гербіциди, гліфосат, глюфосинат, сульфонілсечовини, імідазолінони, бромоксиніл, делапон, дикамбу, циклогександіон, інгібітори протопорфіриноген оксидази, гербіциди, що є інгібіторами 4гідроксифеніл-піруват діоксигенази. Наприклад, трансгени та їх полінуклеотидні молекули, які кодують білки, які відповідають за стійкість до гербіцидів, відомі в цій галузі техніки, і включають, без обмеження нею, 5-енолпірувіл-шикімат-3-фосфат-синтазу (EPSPS), наприклад, що 3 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 детальніше описано в патентах США за номерами 7,807,791 (SEQ ID NO: 5); 6,248,876 B1; 5,627,061; 5,804,425; 5,633,435; 5,145,783; 4,971,908; 5,3372,910; 5,188,642; 4,940,835; 5,866,775; 6,225,114 B1; 6,130,366; 5,3370,667; 4,535,060; 4,769,061; 5,633,448; 5,510,471; патенті США за номером Re. 36,449; в патентах США за номерами RE 37,287 E; і 5,491,288; стійкість до сульфонілсечовини і/або імідазолінону, наприклад, що детальніше описана в патентах США за номерами 5,605,011; 5,013,659; 5,141,870; 5,767,361; 5,7337,180; 5,304,732; 4,761,373; 5,3337,107; 5,928,937; і 5,378,824; та міжнародній заявці WO 96/33270; стійкість до гербіцидів, що є інгібіторами гідроксифенілпіруватдіоксигенази в рослинах, описана в патентах США за номерами 6,245,968 B1; 6,268,549; і 6,069,115; публікаціях патенту США 20110191897 і US7,3372,379 SEQ ID NO: 3; US7,935,869; US7,304,209, SEQ ID NO: 1, 3,5 і 15; полінуклеотиди арілоксіалканоат діоксигенази, які надають стійкість до 2,4-D та інших гербіцидів на основі феноксіауксину, а також до гербіцидів на основі арілоксифеноксипропіонату, що описано, наприклад, в WO2005/107437; US7,838,733 SEQ ID NO: 5; і полінуклеотиди, стійкі до дикамби, що описано, наприклад, в Herman зі співавторами (2005) J. Biol. Chem. 280: 24759-24767. Інші приклади ознак стійкості до гербіциду включають ті, які обумовлені полінуклеотидами, які кодують екзогенну фосфінотрицин ацетилтрансферазу, що описано в патентах США за номерами 5,969,213; 5,489,520; 5,550,3378; 5,874,265; 5,919,675; 5,561,236; 5,648,477; 5,646,024; 6,177,616; та 5,879,903. Рослини, які містять екзогенну фосфінотрицин ацетилтрансферазу, можуть проявляти підвищену стійкість до гербіцидів на основі глюфосинату, які інгібують фермент глутамінсинтетазу. Крім того, стійкі до гербіцидів полінуклеотиди включають ті, які обумовлені полінуклеотидами, що обумовлюють змінену дію протопорфіриноген оксидази (протокс), як описано в патентах США за номерами 6,288,306 B1; 6,282,837 B1; та 5,767,373; та WO 01/12825. Рослини, які містять такі полінуклеотиди, можуть проявляти покращену стійкість до будь-якого з безлічі гербіцидів, що націлені на фермент протокс (також позначені як протокс-інгібітори). Полінуклеотиди, які кодують гліфосат оксидоредуктазу та гліфосат-N-ацетил трансферазу (GOX описаний в патенті США 5,463,175 та GAT описаний в публікації патенту США 20030083480, дикамба монооксигенази в патенті США 20030135879, усі з яких включені в цей документ у вигляді посилання); молекула полінуклеотиду, яка кодує бромоксиніл нітрилазу (Bxn описана в патенті США за номером 4,810,648 щодо стійкості до бромоксинілу, який включений в цей документ у вигляді посилання); молекула полінуклеотиду, яка кодує фітоендесатуразу (crtI), описана у Misawa зі співавторами, (1993) Plant J. 4:833-840 та у Misawa зі співавторами, (1994) Plant J. 6:481-489 щодо стійкості до норфлуразону; молекула полінуклеотиду, яка кодує синтазу ацетогідроксикислот (AHAS, aka ALS), описана у Sathasiivan зі співавторами (1990) Nucl. Acids Res. 18:3378-2193 щодо стійкості до гербіцидів групи сульфонілсечовини; та ген bar, описаний у DeBlock зі співавторами (1987) EMBO J. 6:2513-2519 щодо стійкості до глуфосинату та біалафосу. Трансгенні кодуючі ділянки і регуляторні елементи генів стійкості до гербіцидів являють собою мішені, в яких тригерні полінуклеотиди і гербіциди можуть бути включені в композиції згідно з цим винаходом. Композиції містять компонент, який являє собою гербіцид, що є інгібітором GS, який включає представників групи гербіцидів на основі фосфінових кислот, таких, як глуфосинат амонію та біалафос. Доступні численні гербіциди з аналогічними або різними механізмами дії (надалі позначені як сумісні гербіциди), які можна додати до композиції згідно з цим винаходом, наприклад, представники сімейства гербіцидів, що включають, без обмеження ними, амідні гербіциди, гербіциди на основі ароматичних кислот, миш'якові гербіциди, гербіциди на основі бензотіазолу, гербіциди на основі бензоїлциклогександіону, гербіциди на основі бензофураніл алкілсульфонату, гербіциди на основі карбамату, гербіциди на основі циклогексеноксиму, гербіциди на основі циклопропілізоксазолу, гербіциди на основі дикарбоксиміду, гербіциди на основі динітроаніліну, гербіциди на основі динітрофенолу, гербіциди на основі дифенілового ефіру, гербіциди на основі дитіокарбамату, галогеновані аліфатичні гербіциди, гербіциди на основі імідазолінону, неорганічні гербіциди, нітрильні гербіциди, фосфорорганічні гербіциди, гербіциди на основі оксадіазолону, гербіциди на основі оксазолу, феноксигербіциди, гербіциди на основі фенілендіаміну, піразольні гербіциди, гербіциди на основі піридазину, гербіциди на основі пирідазинону, піридинові гербіциди, гербіциди на основі піримідиндіаміну, гербіциди на основі піримідинілоксибензиламіну, четвертинні амонієві гербіциди, гербіциди на основі тіокарбамату, гербіциди на основі тіокарбонату, гербіциди на основі тіосечовини, триазинові гербіциди, гербіциди на основі триазинону, гербіциди на основі триазолу, гербіциди на основі триазолону, гербіциди на основі триазолопіримідину, гербіциди на основі урацилу і гербіциди на основі сечовини. Зокрема, згідно з цим винаходом норми витрати доданих гербіцидів у композиціях, що містять полінуклеотиди, можна зменшити. Скорочення норм витрат додатково 4 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 доданих гербіцидів може складати 10-25 відсотків, 26-50 відсотків, 51-75 відсотків або може бути більшим, та як аспект винаходу очікується підвищення активності полінуклеотидів і композиції гербіциду. Типові сумісні гербіциди сімейств включають, без обмеження ними, ацетохлор, ацифлуорфен, ацифлуорфен натрію, аклоніфен, акролеїн, алахлор, алоксидим, аліловий спирт, аметрин, амікарбазон, амідосульфурон, амінопіралід, амітрол, сульфамат амонію, анілофос, асулам, атратон, атразин, азимсульфурон, BCPC, бефлубутамід, беназолін, бенфлуралін, бенфуресат, бенсульфурон, бенсульфурон-метил, бенсулід, бентазон, бензфендизон, бензобіциклон, бензофенап, біфенокс, біланафос, біспірібак, біспірібак натрію, буру, бромацил, бромобутид, бромоксиніл, бутахлор, бутафенацил, бутаміфос, бутралін, бутроксидим, бутилат, какодилову кислоту, хлорат кальцію, кафенстрол, карбетамід, карфентразон, карфентразон-етил, CDEA, CEPC, хлорфлуренол, хлорфлуренолметил, хлоридазон, хлоримурон, хлоримурон-етил, хлороцетову кислоту, хлоротолурон, хлорпрофам, хлорсульфурон, хлортал, хлортал-диметил, цинідон-етил, цинметилін, циносульфурон, цисанілід, клетодим, клодинафоп, клодинафоп-пропаргіл, кломазон, кломепроп, клопіралід, клорансулам, клорансулам-метил, CMA, 4-CPB, CPMF, 4-CPP, CPPC, крезол, кумілурон, ціанамід, ціаназин, циклоат, циклосульфамурон, циклоксидим, цигалофоп, цигалофоп-бутил, 2,4-D, 3,4-DA, даїмурон, далапон, дазомет, 2,4-DB, 3,4-DB, 2,4-DEB, десмедифам, дикамбу, дихлобеніл, орто-дихлорбензол, пара-дихлорбензол, дихлорпроп, дихлорпроп-П, диклофоп, диклофоп-метил, диклосулам, дифензокват, дифензоквату метилсульфат, дифлуфенікан, дифлуфензопір, димефурон, димепіперат, диметахлор, диметаметрин, диметенамід, диметенамід-П, диметипін, диметиларсинову кислоту, динітрамін, динотерб, дифенамід, дикват, диквату дибромід, дитіопір, діурон, DNOC, 3,4-DP, DSMA, EBEP, ендотал, ЕРТС, еспрокарб, еталфлуралін, етаметсульфурон, етаметсульфурон-метил, етофумезат, етоксифен, етоксисульфурон, етобензанід, феноксапроп-П, феноксапроп-П-етил, фентразамід, сульфат заліза, флампроп-M, флазасульфурон, флорасулам, флуазифоп, флуазифоп-бутил, флуазифоп-П, флуазифоп-П-бутил, флукарбазон, флукарбазон натрію, флуцетосульфурон, флухлоралін, флуфенацет, флуфенпір, флуфенпір-етил, флуметсулам, флуміклорак, флуміклорак-пентил, флуміоксазин, флуометурон, флуороглікофен, флуороглікофен-етил, флупропанат, флупірсульфурон, флупірсульфурон-метил натрію, флуренол, флуридон, флуорохлоридон, флуороксипір, флуртамон, флутіацет, флутіацет-метил, фомесафен, форамсульфурон, фосамін, глуфозинат, глуфозинат амонію, гліфосат, галосульфурон, галосульфурон-метил, галоксифоп, галоксифоп-П, HC-252, гексазинон, імазаметабенз, імазаметабенз-метил, імазамокс, імазапік, імазапір, імазаквін, імазетапір, імазосульфурон, інданофан, йодометан, йодосульфурон, йодосульфурон-метил натрію, іоксиніл, ізопротурон, ізоурон, ізоксабен, ізоксахлортол, ізоксафлутол, карбутилат, лактофен, ленацил, лінурон, MAA, МАМА, МСРА, МСРА-тіоетил, МСРВ, мекопроп, мекопроп-П, мефенацет, мефлуїдид, мезосульфурон, мезосульфурон-метил, мезотріон, метам, метаміфоп, метамітрон, метазахлор, метабензтіазурон, метиларсонову кислоту, метилдимрон, метилізотіоціанат, метобензурон, метолахлор, С-метолахлор, метосулам, метоксурон, метрибузін, метсульфурон, метсульфуронметил, МK-66, молінат, монолінурон, MSMA, напроанілід, напропамід, напталам, небурон, нікосульфурон, нонанову кислоту, норфлуразон, олеїнову кислоту (жирні кислоти), орбенкарб, ортосульфамурон, оризалін, оксадіаргіл, оксадіазон, оксасульфурон, оксацикломефон, оксифлуорфен, паракват, дихлориду паракват, пебулат, пендиметалін, пеноксулам, пентахлорфенол, пентанохлор, пентоксазон, петоксамід, нафтові олії, фенмедифам, фенмедифам-етил, піклорам, піколінафен, піноксаден, піперофос, арсеніт калію, азид калію, претилахлор, примісульфурон, примісульфурон-метил, продіамін, профлуазол, профоксидим, прометон, прометрин, пропахлор, пропаніл, пропаквізафоп, пропазін, профам, пропізохлор, пропоксикарбазон, пропоксикарбазон натрію, пропізамід, просульфокарб, просульфурон, піраклоніл, пірафлуфен, пірафлуфен-етил, піразолінат, піразосульфурон, піразосульфуронетил, піразоксифен, пірибензоксим, пірибутикарб, піридафол, піридат, пірифталід, піримінобак, піримінобак-метил, піримісульфан, піритіобак, піритіобак натрію, квінклорак, квінмерак, квінокламін, хізалофоп, хізалофоп-П, римсульфурон, сетоксидим, сидурон, симазин, симетрин, SMA, арсеніт натрію, азид натрію, хлорат натрію, сулкотрион, сульфентразон, сульфометурон, сульфометурон-метил, сульфосат, сульфосульфурон, сірчану кислоту, дігтярну олію, 2,3,6-TBA, TCA, TCA-натрію, тебутіурон, тепралоксидим, тербацил, тербуметон, тербутилазин, тербутрин, тенілхлор, тіазопір, тіфенсульфурон, тіфенсульфурон-метил, тіобенкарб, тіокарбазил, топрамезон, тралкоксидим, триалат, триасульфурон, триазифлам, трибенурон, трибенуронметил, трикамбу, триклопір, триетазин, трифлоксисульфурон, трифлоксисульфурон натрію, трифлуралін, трифлусульфурон, трифлусульфурон-метил, тригідрокситриазин, тритосульфурон, [3-[2-хлор-4-флуоро-5-(-метил-6-трифлуорометил-2,4-діоксо-,2,3,4 5 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 тетрагідропіримідин-3-іл)фенокси]-2-піридилокси] етиловий ефір оцтової кислоти (CAS RN 353292-3-6), 4-[(4,5-дигідро-3-метокси-4-метил-5-оксо)-H-,2,4-триазол-ілкарбоніл-сульфамоїл]-5метилтіофен-3 карбонової кислоти (BAY636), BAY747 (CAS RN 33504-84-2), топрамезон (CAS RN 2063-68-8), 4-гідрокси-3-[[2-[(2-метоксіетокси)метил]-6-(трифлуоро-метил)-3піридиніл]карбоніл]-біцикло[3.2.]окт-3-ен-2-ону (CAS RN 35200-68-5) і 4-гідрокси-3-[[2-(3метоксипропіл)-6-(дифлуорометил)-3-піридиніл]карбон-іл]-біцикло[3.2.]окт-3-ен-2-ону. Крім того, включення гербіцидних сполук із невказаними механізмами дії описано в CN101279950A, CN101279951A, DE10000600A1, DE10116399A1, DE102004054666A1, DE102005014638A1, DE102005014906A1, DE102007012168A1, DE102010042866A1, DE10204951A1, DE10234875A1, DE10234876A1, DE10256353A1, DE10256354A1, DE10256367A1, EP1157991A2, EP1238586A1, EP2147919A1, EP2160098A2, JP03968012B2, JP2001253874A, JP2002080454A, JP2002138075A, JP2002145707A, JP2002220389A, JP2003064059A, JP2003096059A, JP2004051628A, JP2004107228A, JP2005008583A, JP2005239675A, JP2005314407A, JP2006232824A, JP2006282552A, JP2007153847A, JP2007161701A, JP2007182404A, JP2008074840A, JP2008074841A, JP2008133207A, JP2008133218A, JP2008169121A, JP2009067739A, JP2009114128A, JP2009126792A, JP2009137851A, US20060111241A1, US20090036311A1, US20090054240A1, US20090215628A1, US20100099561A1, US20100152443A1, US20110105329A1, US20110201501A1, WO2001055066A2, WO2001056975A1, WO2001056979A1, WO2001090071A2, WO2001090080A1, WO2002002540A1, WO2002028182A1, WO2002040473A1, WO2002044173A2, WO2003000679A2, WO2003006422A1, WO2003013247A1, WO2003016308A1, WO2003020704A1, WO2003022051A1, WO2003022831A1, WO2003022843A1, WO2003029243A2, WO2003037085A1, WO2003037878A1, WO2003045878A2, WO2003050087A2, WO2003051823A1, WO2003051824A1, WO2003051846A2, WO2003076409A1, WO2003087067A1, WO2003090539A1, WO2003091217A1, WO2003093269A2, WO2003104206A2, WO2004002947A1, WO2004002981A2, WO2004011429A1, WO2004029060A1, WO2004035545A2, WO2004035563A1, WO2004035564A1, WO2004037787A1, WO2004067518A1, WO2004067527A1, WO2004077950A1, WO2005000824A1, WO2005007627A1, WO2005040152A1, WO2005047233A1, WO2005047281A1, WO2005061443A2, WO2005061464A1, WO2005068434A1, WO2005070889A1, WO2005089551A1, WO2005095335A1, WO2006006569A1, WO2006024820A1, WO2006029828A1, WO2006029829A1, WO2006037945A1, WO2006050803A1, WO2006090792A1, WO2006123088A2, WO2006125687A1, WO2006125688A1, WO2007003294A1, WO2007026834A1, WO2007071900A1, WO2007077201A1, WO2007077247A1, WO2007096576A1, WO2007119434A1, WO2007134984A1, WO2008009908A1, WO2008029084A1, WO2008059948A1, WO2008071918A1, WO2008074991A1, WO2008084073A1, WO2008100426A2, WO2008102908A1, WO2008152072A2, WO2008152073A2, WO2009000757A1, WO2009005297A2, WO2009035150A2, WO2009063180A1, WO2009068170A2, WO2009068171A2, WO2009086041A1, WO2009090401A2, WO2009090402A2, WO2009115788A1, WO2009116558A1, WO2009152995A1, WO2009158258A1, WO2010012649A1, WO2010012649A1, WO2010026989A1, WO2010034153A1, WO2010049270A1, WO2010049369A1, WO2010049405A1, WO2010049414A1, WO2010063422A1, WO2010069802A1, WO2010078906A2, WO2010078912A1, WO2010104217A1, WO2010108611A1, WO2010112826A3, WO2010116122A3, WO2010119906A1, WO2010130970A1, WO2011003776A2, WO2011035874A1, WO2011065451A1, усі з яких включені в цей документ у вигляді посилання. Агрономічні поля, які потребують боротьби з рослинами, обробляють нанесенням композиції безпосередньо на поверхню зростаючих рослин, наприклад, за допомогою обприскування. Наприклад, спосіб застосовують для боротьби з бур'янами на полі культурних рослин шляхом розпилення композиції на полі. Композиція може бути надана у вигляді бакової суміші, послідовної обробки компонентів (зазвичай композиціями, які містять полінуклеотид, а потім гербіцидом) або одночасної обробки, або змішування одного або більше компонентів композиції з окремих контейнерів. Обробка поля може проводитися в міру необхідності для забезпечення боротьби з бур'янами, а компоненти композиції можна скорегувати для боротьби з конкретними видами бур'янистих рослин або сімействами бур'янів за допомогою використання конкретних полінуклеотидів або полінуклеотидних композицій, здатних вибірково націлювати конкретні види або сімейства рослин, з якими належить боротися. Композицію можна використовувати з ефективною робочою концентрацією залежно від часу обробки поля, наприклад, передпосівне внесення, при садінні, після садіння, після збору урожаю. Гербіциди, що є інгібіторами GS, можна використовувати на полі, виходячи з норми від 100 до 500 грамів аі/га (активного інгредієнта на гектар) або більше. Полінуклеотидні композиції можна використовувати, виходячи з норми від 1 до 30 грамів на акр, залежно від кількості тригерних молекул, необхідних для охоплення бур'янів на цьому полі. Культурні рослини, які потребують боротьби з бур'янами включають, без обмеження ними, 6 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 такі рослини, як: а) кукурудза, соя, бавовна, рапс, цукровий буряк, люцерна, цукрова тростина, рис і пшениця; б) овочеві рослини, включаючи, без обмеження ними, томат, солодкий перець, гострий перець, диня, кавун, огірок, баклажан, цвітна капуста, броколі, салат, шпинат, цибуля, горох, морква, солодка кукурудза, пекінська капуста, цибуля-порей, кріп, гарбуз, кабачок або пляшковий гарбуз, редька, брюссельська капуста, фізаліс овочевий, стручкова квасоля, зріла квасоля або бамія; в) зелень, включаючи, без обмеження ними, базилік, петрушка, кава або чай; або г) плодові рослини, включаючи, без обмеження ними, яблуко, груша, вишня, персик, слива, абрикос, банан, плантан, столовий виноград, винний виноград, цитрусові, авокадо, манго або ягоди; д) дерева, які вирощуються для декоративного або комерційного використання, включаючи, без обмеження ними, фруктові або горіхоплідні дерева; або е) декоративні рослини (наприклад, квітучі декоративні рослини або чагарники, або рулонний газон). Способи та композиції, наведені в цьому документі, також можна застосовувати до рослин, отриманих за допомогою живцювання, клонування або прищепи (тобто до рослин, які виросли не з насіння), зокрема до плодових дерев і рослин, які включають, без обмеження ними, цитрусові, яблука, авокадо, помідори, баклажани, огірки, дині, кавуни, виноград, а також різні декоративні рослини. Суміші пестицидів Полінуклеотидні композиції можуть також використовуватися у сумішах із різним агрохімікатами і/або інсектицидами, акарицидами і фунгіцидами, пестицидними і біопестицидними засобами. Приклади включають, без обмеження ними, азинфос-метил, ацефат, ізоксатіон, ізофенфос, етіон, етримфос, оксидеметон-метил, оксидепрофос, хіналфос, хлорпірифос, хлорпірифос-метил, хлорфенвінфос, ціанофос, діоксабензофос, дихлофос, дисульфотон, диметилвінфос, диметоат, сульпрофос, діазинон, тіометон, тетрахлорвінфос, темефос, тебупіримфос, тербуфос, налед, вамідотіон, піраклофос, піридафентіон, піриміфосметил, фенітротіон, фентіон, фентоат, флупіразофос, протіофос, пропафос, профенофос, фоксим, фозалон, фосмет, формотіон, форат, малатіон, мекарбам, месульфенфос, метамідофос, метидатіон, паратіон, паратіон-метил, монокротофос, трихлорфон, EPN, ізазофос, ізамідофос, кадусафос, діамідафос, дихлорфентіон, тіоназин, фенаміфос, фостіазат, фостіетан, фосфокарб, DSP, етопрофос, аланікарб, алдікарб, ізопрокарб, етіофенкарб, карбарил, карбосульфан, ксилілкарб, тіодикарб, піримікарб, фенобукарб, фуратіокарб, пропоксур, бендіокарб, бенфуракарб, метоміл, метолкарб, XMC, карбофуран, алдоксикарб, оксаміл, акрінатрин, алетрин, есфенвалерат, емпентрин, циклопротрин, цигалотрин, гаммацигалотрин, лямбда-цигалотрин, цифлутрин, бета-цифлутрин, циперметрин, альфациперметрин, зета-циперметрин, силафлуофен, тетраметрин, тефлутрин, дельтаметрин, тралометрин, біфентрин, фенотрин, фенвалерат, фенпропатрин, фураметрин, пралетрин, флуцитринат, флувалінат, флуброцитринат, перметрин, ресметрин, етофенпрокс, картап, тіоциклам, бенсультап, ацетаміприд, імідаклоприд, клотіанідин, динотефуран, тіаклоприд, тіаметоксам, нітенпірам, хлорфлуазурон, дифлубензурон, тефлубензурон, трифлумурон, новалурон, новіфлумурон, бистрифлуорон, флуазурон, флуциклоксурон, флуфеноксурон, гексафлумурон, луфенурон, хромафенозид, тебуфенозид, галофенозид, метоксифенозид, діофенолан, циромазин, пірипроксифен, бупрофезин, метопрен, гідропрен, кінопрен, триазамат, ендосульфан, хлорфенсон, хлорбензилат, дикофол, бромопропілат, ацетопрол, фіпроніл, етіпрол, піретрин, ротенон, сульфат нікотину, агент BT (Bacillus Thuringiensis), спіносад, абамектин, ацеквіноцил, амідофлумет, амітраз, етоксазол, хінометіонат, клофентезин, фенбутатину оксид, дієнохлор, цигексатин, спіродиклофен, спіромезифен, тетрадифон, тебуфенпірад, бінапакрил, біфеназат, піридабен, піримідифен, феназахін, фенотіокарб, фенпіроксимат, флуакрипірим, флуазинам, флуфензин, гекситіазокс, пропаргіт, бензомат, полінактиновий комплекс, мілбемектин, луфенурон, мекарбам, метіокарб, мевінфос, халфенпрокс, азадирахтин, діафентіурон, індоксакарб, бензоат емамектину, олеат калію, олеат натрію, хлорфенапір, толфенпірад, піметрозин, феноксикарб, гідраметилнон, гідроксипропіл крохмаль, піридаліл, флуфенерим, флубендіамід, флонікамід, метафлумізол, лепімектин, TPIC, альбендазол, оксибендазол, оксфендазол, трихламід, фенсульфотіон, фенбендазол, левамізолу гідрохлорид, морантель тартрат, дазомет, метам натрію, триадимефон, гексаконазол, пропіконазол, іпконазол, прохлораз, трифлумізол, тебуконазол, епоксиконазол, дифеноконазол, флусилазол, триадименол, ципроконазол, метконазол, флухінконазол, бітертанол, тетраконазол, тритіконазол, флутриафол, пенконазол, диніконазол, фенбуконазол, бромуконазол, імібенконазол, сімеконазол, міклобутаніл, хімексазол, імазаліл, фураметпір, тифлузамід, етрідіазол, окспоконазол, окспоконазолу фумарат, пефуразоат, протіоконазол, пірифенокс, фенаримол, нуаримол, бупіримат, мепаніпірим, ципродиніл, піриметаніл, металаксил, мефеноксам, оксадиксил, беналаксил, тіофанат, тіофанат-метил, беноміл, карбендазим, фуберидазол, тіабендазол, манзеб, пропінеб, зінеб, метірам, манеб, зірам, 7 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 тіурам, хлороталоніл, етабоксама, оксикарбоксин, карбоксин, флутоланіл, силтіофам, мепроніл, диметоморф, фенпропідин, фенпропіморф, спіроксамін, тридеморф, додеморф, флуморф, азоксистробін, крезоксим-метил, метоміностробін, орисастробін, флуоксастробін, трифлоксистробін, димоксистробін, піраклостробін, пікоксистробін, іпродіон, процимідон, вінклозолін, хлозолінат, флусульфамід, дазомет, метил ізотіоціанат, хлорпікрин, метасульфокарб, гідроксіізоксазол, гідроксіізоксазол калію, ехломезол, D-D, карбам, основний хлорид міді, основний сульфат міді, нонілфенолсульфонат міді, оксин міді, DBEDC, безводий сульфат міді, міді сульфат пентагідрат, гідроксид міді, неорганічна сірка, змочувана сірка, сірчисте вапно, сульфат цинку, фентин, гідрокарбонат натрію, гідрокарбонат калію, гіпохлорит натрію, срібло, едифенфос, толклофос-метил, фосетил, іпробенфос, динокап, піразофос, карпропамід, фталід, трициклазол, пірохілон, диклоцимет, феноксаніл, касугаміцин, валідаміцин, поліоксини, бластицидин С, окситетрациклін, мілдіоміцин, стрептоміцин, рапсова олія, машинне мастило, бентіавалікарбізопропіл, іпровалікарб, пропамокарб, діетофенкарб, флуороїмід, флудіоксаніл, фенпіклоніл, хіноксифен, оксолінова кислота, хлороталоніл, каптан, фолпет, пробеназол, ацибензолар-С-метил, тіадиніл, цифлуфенамід, фенгексамід, дифлуметорим, метрафенон, пікобензамід, прохіназид, фамоксадон, ціазофамід, фенамідон, зоксамід, боскалід, цимоксаніл, дитіанон, флуазинам, дихлофлуанід, трифорин, ізопротіолан, феримзон, дикломезин, теклофталам, пенцикурон, хіномеїонат, іміноктадину ацетат, іміноктадину албесилат, амбам, полікарбамат, тіадіазин, хлоронеб, диметилдитіокарбамат нікелю, гуазатин, додецилгуанідин-ацетат, квінтозен, толілфлуанід, анілазін, нітроталізопропіл, фенітропан, диметиримол, бентіазол, білок гарпін, флуметовер, мандипропамід та пентіопірад. Полінуклеотиди Як використовується в цьому документі, термін "ДНК", "молекула ДНК", "полінуклеотидна молекула ДНК" стосується одноланцюгової ДНК (олДНК) або дволанцюгової ДНК (длДНК) молекули геномного або синтетичного походження, наприклад, полімеру з дезоксирибонуклеотидних основ, або полінуклеотидна молекула ДНК. Як використовується в цьому документі, термін "послідовність ДНК", "нуклеотидна послідовність ДНК" або "полінуклеотидна послідовність ДНК" стосується нуклеотидної послідовності молекули ДНК. Як використовується в цьому документі, термін "РНК", "молекула РНК", "полінуклеотидна молекула РНК" стосується одноланцюгової РНК (олРНК) або дволанцюгової РНК (длРНК) молекули геномного або синтетичного походження, наприклад, полімер із рибонуклеотидних основ, які складають одно- або дволанцюгові ділянки. Якщо не вказане інше, то нуклеотидні послідовності в тексті цього опису читаються зліва направо в напрямку від 5' до 3'. Номенклатура, яка використовується в цьому документі, наведена згідно з вимогами Розділу 37 Зводу нормативних актів федеральних органів виконавчої влади США § 1,822 і представлена в таблицях згідно зі стандартом ВОІВ (Всесвітня організація інтелектуальної власності) ST.25 (1998), Додаток 2, Таблиці 1 та 3. Як використовується в цьому документі, "полінуклеотид" стосується молекули ДНК або РНК, що містить декілька нуклеотидів і зазвичай належить як до "олігонуклеотидів" (молекула полінуклеотиду зазвичай із 50 або менше нуклеотидів у довжину), так і до полінуклеотидів із 51 або більше нуклеотидів. Варіанти реалізації винаходу включають композиції, які складаються з олігонуклеотидів довжиною 18-25 нуклеотидів (18-мер, 19-мер, 20-мер, 21-мер, 22-мер, 23-мер, 24-мер або 25-мер), наприклад, олігонуклеотиди SEQ ID NO: 1444-2045 або їх фрагменти, або полінуклеотиди середньої довжини, довжина яких складає 26 або більше нуклеотидів (полінуклеотиди з 26, 27, 28, 29, 30, 337, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, близько 65, близько 70, близько 75, близько 80, близько 85, близько 90, близько 95, близько 100, близько 110, близько 120, близько 130, близько 140, близько 150, близько 160, близько 170, близько 180, близько 190, близько 200, близько 210, близько 220, близько 230, близько 240, близько 250, близько 260, близько 270, близько 280, близько 290 або близько 300 нуклеотидів), наприклад, олігонуклеотиди SEQ ID NO: 60-1443 або їх фрагменти, або довгі полінуклеотиди, більше, ніж близько 300 нуклеотидів, (наприклад, полінуклеотиди від близько 300 до близько 400 нуклеотидів, від близько 400 до близько 500 нуклеотидів, від близько 500 до близько 600 нуклеотидів, від близько 600 до близько 700 нуклеотидів, від близько 700 до близько 800 нуклеотидів, від близько 800 до близько 900 нуклеотидів, від близько 900 до близько 1000 нуклеотидів, від близько 300 до близько 500 нуклеотидів, від близько 300 до близько 600 нуклеотидів, від близько 300 до близько 700 нуклеотидів, від близько 300 до близько 800 нуклеотидів, від близько 300 до близько 900 нуклеотидів або близько 1000 нуклеотидів у довжину, або навіть більше, ніж близько 1000 нуклеотидів у довжину, наприклад, досягають загальної довжини гена-мішені, зокрема з кодуючими або некодуючими, або як кодуючими, так і некодуючими ділянками гена 8 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 мішені), наприклад, полінуклеотиди Таблиці 1 (SEQ ID NO: 1-59), в якій обрані полінуклеотиди або їх фрагменти, які гомологічні або комплементарні до SEQ ID NO: 1-59, пригнічують, стримують або іншим чином уповільнюють експресію гена-мішені GS. Ген-мішень містить будьяку молекулу полінуклеотиду в клітині рослини або її фрагменті, для якої модуляція експресії гена-мішені забезпечується способами та композиціями цього винаходу. Якщо полінуклеотид є дволанцюговим, його довжина може бути аналогічним чином описана відповідно до пар основ. Олігонуклеотиди та полінуклеотиди згідно з цим винаходом можна зробити практично ідентичними або практично комплементарними до суміжних генетичних елементів гена, наприклад, таких, що охоплюють місце з'єднання інтрону та екзону, місце з'єднання промотору та ділянки, що транскрибується, місце з'єднання 5'-лідерної і кодуючої послідовності, з'єднання 3'-нетрансльованої ділянки і кодуючої послідовності. Композиції полінуклеотидів, використовувані в різних варіантах реалізації цього винаходу, включають композиції, які містять олігонуклеотиди або полінуклеотиди, або суміші їх обох, зокрема РНК або ДНК, або гібриди РНК/ДНК, або хімічно модифіковані олігонуклеотиди або полінуклеотиди, або їх суміші. У деяких варіантах реалізації полінуклеотид може являти собою сполучення рибонуклеотидів і дезоксирибонуклеотидів, наприклад, синтетичні полінуклеотиди, що складаються переважно з рибонуклеотидів, але з одним або декількома кінцевими дезоксирибонуклеотидами, або синтетичні полінуклеотиди, що складаються переважно з дезоксирибонуклеотидів, але з одним або більше кінцевими дидезоксирибонуклеотидами. У деяких варіантах реалізації полінуклеотид містить неканонічні нуклеотиди, такі, як інозин, тіоуридин або псевдоуридин. У деяких варіантах реалізації полінуклеотид містить хімічно модифіковані нуклеотиди. Приклади хімічно модифікованих олігонуклеотидів або полінуклеотидів добре відомі в цій галузі техніки; дивися, наприклад, публікацію патенту США 20110171287, публікацію патенту США 20110171176 та публікацію патенту США 20110152353, публікацію патенту США 20110152346, публікацію патенту США 20110160082, які включені в цей документ у вигляді посилання. Наприклад, ті, які включають, без обмеження ним, фосфодіефірний остов олігонуклеотиду або полінуклеотиду, який зустрічається в природі, можуть бути частково або повністю модифіковані за допомогою міжнуклеотидних зв'язків, модифікованих фосфоротіоатом, фосфородитіоатом або метилфосфонатом, модифіковані нуклеозидні основи або модифіковані цукри можуть використовуватися в синтезі олігонуклеотидів або полінуклеотидів, та олігонуклеотиди або полінуклеотиди можуть бути помічені флуоресцентним фрагментом (наприклад, флуоресцеїн або родамін) або іншою міткою (наприклад, біотин). Полінуклеотиди можуть бути одно- або дволанцюговою РНК або одно- або дволанцюговою ДНК, або дволанцюговими ДНК/РНК гібридами або їх модифікованими аналогами та можуть мати довжини, як у олігонуклеотиду або більше. У більш конкретних варіантах реалізації винаходу полінуклеотиди, які забезпечують одноланцюгову РНК у клітині рослини, обирають із групи, яка складається з (а) одноланцюгової молекули РНК (олРНК), (б) одноланцюгової молекули РНК, яка самостійно гібридизується з утворенням дволанцюгової молекули РНК, (в) дволанцюгової молекули РНК (длРНК), (г) одноланцюгової молекули ДНК (олДНК), (д) одноланцюгової молекули ДНК, яка самостійно гібридизується з утворенням дволанцюгової молекули ДНК, і (е) одноланцюгової молекули ДНК, яка містить модифікований ген Pol III, який транскрибується в молекулу РНК, (є) дволанцюгової молекули ДНК (длДНК), (ж) дволанцюгової молекули ДНК, яка містить модифікований ген Pol III, який транскрибується в молекулу РНК, (з) дволанцюгової, гібридизированої молекули РНК/ДНК або їх комбінацій. У деяких варіантах реалізації ці полінуклеотиди містять хімічно модифіковані нуклеотиди або неканонічні нуклеотиди. У деяких варіантах реалізації винаходу олігонуклеотиди можуть бути з тупими кінцями або можуть мати 3'-виступ із 1-5 нуклеотидів, щонайменше одного або обох ланцюгів. Інші конфігурації олігонуклеотиду відомі в цій галузі техніки та розглядаються в цьому документі. У варіантах реалізації способу полінуклеотиди містять дволанцюгову ДНК, утворену внутрішньомолекулярною гібридизацією, дволанцюгову ДНК, утворену міжмолекулярною гібридизацією, дволанцюгову РНК, утворену внутрішньомолекулярною гібридизацією або дволанцюгову РНК, утворену міжмолекулярною гібридизацією. В одному варіанті реалізації полінуклеотиди містять одноланцюгову ДНК або одноланцюгову РНК, яка самостійно гібридизується і утворює шпилькову структуру із щонайменше частковою дволанцюговою структурою, що містить щонайменше один сегмент, який буде гібридизуватися з РНК, яка транскрибується з гена-мішені з метою пригнічення. У разі, якщо не передбачається зв'язування якимось механізмом, вважають, що такі полінуклеотиди є або утворюватимуть одноланцюгову РНК із щонайменше одним сегментом, який буде гібридизуватися з РНК, яка транскрибується з гена-мішені з метою пригнічення. У деяких інших варіантах реалізації полінуклеотиди додатково 9 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 містять промотор, зазвичай промотор, що функціонує в рослині, наприклад, промотор pol II, промотор pol III, промотор pol IV або промотор pol V. Термін "ген" стосується хромосомної ДНК, плазмідної ДНК, кДНК, інтрону та екзону ДНК, штучної полінуклеотидної ДНК або іншої ДНК, яка кодує пептид, поліпептид, білок або молекулу РНК-транскрипту, а також генетичні елементи, які фланкують кодуючу послідовність, які беруть участь у регуляції експресії, наприклад, промоторні ділянки, 5'-лідерні ділянки, 3'нетрансльовані ділянки. Будь-який із компонентів гена являє собою потенційні мішені для олігонуклеотидів та полінуклеотидів згідно з цим винаходом. Полінуклеотидні молекули згідно з цим винаходом призначені для модуляції експресії за допомогою індукції регуляції або пригнічення ендогенного гена GS у рослині, і призначені, щоб їх нуклеотидна послідовність була практично ідентичною або практично комплементарною до нуклеотидної послідовності ендогенного гена GS рослини або послідовності РНК, яка транскрибується з ендогенного гена GS рослини, включаючи трансген у рослині, який забезпечує стійкий до гербіциду фермент GS, який може бути кодуючою послідовністю або некодуючою послідовністю. Ефективні молекули, які модулюють експресію, називають "тригерною молекулою або тригерним полінуклеотидом". Під "практично ідентичними" або "практично комплементарними" мають на увазі, що тригерні полінуклеотиди (або щонайменше один ланцюг дволанцюгового полінуклеотиду або його ділянки, або ділянки одноланцюгового полінуклеотиду) призначені для гібридизаціі з ендогенним геном некодуючої послідовності або з РНК, що транскрибується (відома як інформаційна РНК або РНК-транскрипт) з ендогенного гена для здійснення регуляції або пригнічення експресії ендогенного гена. Тригерні молекули визначають за допомогою "перекриття" генів-мішеней зондами, які частково перекриваються, або зондами, які не перекриваються, антисмислових або смислових полінуклеотидів, які практично ідентичні або практично комплементарні до нуклеотидної послідовності ендогенного гена. Декілька послідовностей-мішеней можуть збігатися та області послідовності з однаковою гомологією, відповідно до способів цього винаходу, визначають як потенційні тригерні молекули для декількох мішеней. Декілька тригерних молекул різної довжини, наприклад, з 18-25 нуклеотидів, 26-50 нуклеотидів, 51-100 нуклеотидів, 101-200 нуклеотидів, 201-300 нуклеотидів або більше можна об'єднати в пул із декількох обробок для дослідження полінуклеотидних молекул, які охоплюють ділянку генної послідовності (наприклад, ділянка кодуючої області порівняно з ділянкою некодуючої області, або 5'-ділянка гена порівняно з 3'-ділянкою гена) або усю генну послідовність, включаючи кодуючу і некодуючу область гена-мішені. Полінуклеотидні молекули тригерних молекул, об'єднаних у пул, можна розділити на дрібніші пули або одиничні молекули, щоб визначити тригерні молекули, які забезпечують бажаний ефект. Полінуклеотидні молекули РНК та ДНК гена-мішені (Таблиця 1, SEQ ID NO: 1-59) секвенують будь-якою кількістю доступних способів і устаткування. Деякі з технологій секвенування є в продажу, наприклад, платформа для секвенування за допомогою гібридизації від компанії Affymetrix Inc. (Саннівейл, штат Каліфорнія) і платформи для секвенування за допомогою синтезу від компаній 454 Life Sciences (Бредфорд, штат Коннектикут), Illumina/Solexa (Хейуорд, штат Каліфорнія) і Helicos Biosciences (Кембридж, штат Массачусетс), а також платформа секвенування за допомогою лігування від компанії Applied Biosystems (Фостер Сіті, штат Каліфорнія), як описано нижче. На додаток до секвенування одиничної молекули, виконаного з використанням секвенування за допомогою синтезу від компанії Helicos Biosciences, інші технології секвенування одиничної молекули здійснюються і включають технологію SMRTTM компанії Pacific Biosciences, технологію Ion TorrentTM і нанопорове секвенування, розроблені, наприклад, компанією Oxford Nanopore Technologies. Ген-мішень GS, що містить ДНК або РНК, може бути виділений із використанням праймерів або зондів практично комплементарних або практично гомологічних до SEQ ID NO: 1-59 або їх фрагмента. Полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) фрагмента гена можна отримати за допомогою використання праймерів практично комплементарних або практично гомологічних до SEQ ID NO: 1-59 або їх фрагмента, що доцільно для виділення гена GS з геному рослини. SEQ ID NO: 1-59 або їх фрагменти можуть використовуватися в різних технологіях захоплення послідовності для виділення додаткових послідовностей гена-мішені, наприклад, включаючи, без обмеження ними, Roche NimbleGen® (Медісон, штат Вісконсин) та стрептавідин-зв'язані Dynabeads® (Life Technologies, Гранд Айленд, штат Нью-Йорк), та US20110015084, які включені в цей документ у вигляді посилання в повному обсязі. У деяких варіантах реалізації комплементарність послідовностей функціональних одноланцюгових полінуклеотидів має бути не 100-відсотковою, а щонайменше достатньою, щоб дозволити гібридизацію з РНК, яка транскрибується з гена-мішені або ДНК гена-мішені з утворенням дуплексу, щоб дозволити механізм пригнічення експресії генів. Таким чином, у 10 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіантах реалізації фрагмент полінуклеотиду призначений бути практично ідентичним або практично комплементарним до послідовності з 18 або більше безперервних нуклеотидів як у послідовності гена-мішені GS, так і в інформаційній РНК, що транскрибується з гена-мішені. Під "практично ідентичними" мають на увазі 100-відсоткову ідентичність послідовності або щонайменше близько 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 99-відсоткову ідентичність послідовності порівняно з послідовністю з 18 або більше безперервних нуклеотидів як у гені-мішені, так і в РНК, що транскрибується з гена-мішені; під "практично комплементарними" мають на увазі 100-відсоткову комплементарність послідовності або щонайменше близько 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 99-відсоткову комплементарність послідовності порівняно з послідовністю з 18 або більше безперервних нуклеотидів як у гені-мішені, так і в РНК, що транскрибується з гена-мішені. У деяких варіантах реалізації цього винаходу молекули полінуклеотиду мають 100-відсоткову ідентичність послідовності з компліментарністю до однієї алелі або до одного представника сімейства цього гена-мішені (кодуюча або некодуюча послідовність гена згідно з цим винаходом); у інших варіантах реалізації молекули полінуклеотиду мають 100-відсоткову ідентичність послідовності з комплементарністю до декількох алелей або представників сімейства цього гена-мішені. У деяких варіантах реалізації полінуклеотиди, які використовуються в композиціях, які практично ідентичні або практично комплементарні до гена-мішені або транскрипту, включатимуть домінуючу нуклеїнову кислоту в композиції. Таким чином, у деяких варіантах реалізації полінуклеотиди, які практично ідентичні або практично комплементарні до генамішені або транскрипту, міститимуть щонайменше близько 50 %, 75 %, 95 %, 98 % або 100 % нуклеїнових кислот, наведених у композиції в масовій або молярній концентрації. Проте, у деяких варіантах реалізації полінуклеотиди, які практично ідентичні або практично комплементарні до гена-мішені або транскрипту, можуть містити щонайменше від близько 1 % до близько 50 %, від близько 10 % до близько 50 %, від близько 20 % до близько 50 % або від близько 30 % до близько 50 % нуклеїнових кислот, наведених у композиції в масовій або молярній концентрації. Також надані композиції, в яких полінуклеотиди, які практично ідентичні або практично комплементарні до гена-мішені або транскрипту, можуть містити щонайменше від близько 1 % до 100 %, від близько 10 % до 100 %, від близько 20 % до близько 100 %, від близько 30 % до близько 50 % або від близько 50 % до 100 % нуклеїнових кислот, наведених у композиції в масовій або молярній концентрації. "Ідентичність" стосується міри схожості двох послідовностей полінуклеїнових кислот або білків. Вирівнювання двох послідовностей виконується за допомогою відповідної комп'ютерної програми. Комп'ютерною програмою для виконання вирівнювання послідовностей, яка широко використовується і прийнята до використання, є CLUSTALW v1.6 (Thompson, зі співавторами Nucl. Acids Res., 22: 4673-4680, 1994). Кількість схожих основ або амінокислот ділять на загальну кількість основ або амінокислот та множать на 100, щоб отримати відсоток ідентичності. Наприклад, якщо у двох послідовностей із 580 пар основ було б 145 схожих основ, вони були б ідентичними на 25 відсотків. Якщо дві порівнювані послідовності мають різну довжину, кількість збігів ділять на найменшу з двох довжин. Наприклад, якщо з 200 і 400 амінокислот білка є 100 схожих амінокислот, вони ідентичні на 50 відсотків відносно коротшої послідовності. Якщо коротша послідовність складається з менше, ніж 150 основ або 50 амінокислот у довжину, кількість збігів ділять на 150 (для основ нуклеїнових кислот) або на 50 (для амінокислот) і множать на 100, щоб отримати відсоток ідентичності. Тригерні молекули для конкретних представників сімейства генів можна визначити з кодуючих і/або некодуючих послідовностей сімейств генів рослини або декількох рослин шляхом вирівнювання і вибору 200-300 фрагментів полінуклеотиду з найменш гомологічних областей серед вирівняних послідовностей, і оцінити за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів (таких, як смислова або антисмислова олДНК або олРНК, длРНК або длДНК), щоб визначити їх відносну ефективність у стимулюванні фенотипу стійкості до гербіцидів. Ефективні сегменти додатково ділять на 50-60 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги найменш гомологічним і повторно оцінюють за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів. 50-60 ефективних фрагментів полінуклеотиду ділять на 19-30 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги найменш гомологічним і знову оцінюють для стимулювання виходу/якості фенотипу. Після оцінювання відносної ефективності фрагменти використовують окремо або знову оцінюють у комбінації з одним або декількома іншими фрагментами для визначення складу тригеру або суміші тригерних полінуклеотидів для забезпечення виходу/якості фенотипу. Тригерні молекули для широкого спектру дій можна визначити з кодуючих і/або некодуючих послідовностей сімейств генів рослини або декількох рослин за допомогою вирівнювання і 11 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 вибору 200-300 фрагментів полінуклеотиду з найменш гомологічних областей серед вирівняних послідовностей, і оцінити за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів (таких, як смислова або антисмислова олДНК або олРНК, длРНК або длДНК), щоб визначити їх відносну ефективність у стимулюванні виходу/якості фенотипу. Ефективні сегменти ділять на 50-60 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги більш гомологічним і повторно оцінюють за допомогою місцево застосованих полінуклеотидів. 50-60 ефективних фрагментів полінуклеотиду ділять на 19-30 фрагментів полінуклеотиду з відданням переваги більш гомологічним і знову оцінюють для стимулювання виходу/якості фенотипу. Після оцінювання відносної ефективності фрагменти використовують окремо або в комбінації з одним або декількома іншими фрагментами для визначення складу тригеру або суміші тригерних полінуклеотидів для забезпечення виходу/якості фенотипу. Способи отримання полінуклеотидів добре відомі в цій галузі техніки. Способи і композиції хімічного синтезу, синтезу in vivo та синтезу in vitro відомі в цій галузі техніки і включають різні вірусні елементи, мікробні клітини, модифіковані полімерази і модифіковані нуклеотиди. Комерційний синтез олігонуклеотидів часто забезпечує два дезоксирибонуклеотиди на 3'-кінці смислового ланцюга. Довгі молекули полінуклеотиду можна синтезувати за допомогою комерційно доступних наборів, наприклад, у наборах Applied Biosystems/Ambion (Остін, штат Техас) ДНК лігується на 5'-кінці в мікробній касеті експресії, яка містить бактеріальний промотор полімерази Т7, що робить ланцюги РНК, які можна зібрати в длРНК, і наборів, що постачаються різними виробниками, які включають T7 RiboMax Express (Promega, Медісон, штат Вайомінг), AmpliScribe T7-Flash (Epicentre, Медісон, штат Вайомінг) та TranscriptAid T7 High Yield (Fermentas, Глен Берні, штат Меріленд). Молекули длРНК можна отримати з мікробних касет експресії в бактеріальних клітинах (Ongvarrasopone зі співавторами ScienceAsia 33:35-39; Yin, Appl. Microbiol. Biotechnol 84:323-333, 2009; Liu зі співавторами, BMC Biotechnology 10:85, 2010), у яких регульована або недостатня активність ферменту РНКази III або із використанням різних вірусних векторів для отримання достатньої кількості длРНК. Згідно з цим винаходом фрагменти гена GS поміщають у мікробні касети експресії в такому положенні, в якому фрагменти швидко формують олРНК або длРНК, які використовуються в способах, описаних у цьому документі, для регуляції експресії гена-мішені GS. Довгі молекули полінуклеотиду можна також зібрати з декількох фрагментів РНК або ДНК. У деяких варіантах реалізації розрахункові параметри, такі, як індекс Рейнольдса (Reynolds зі співавторами Nature Biotechnology 22, 326330 (2004), правила Тушля (Pei та Tuschl, Nature Methods 3(9): 670-676, 2006), алгоритм i-score (Nucleic Acids Res 35: e123‚ 2007), програма i-Score Designer tool і пов'язані алгоритми (Nucleic Acids Res 32: 936-948‚ 2004. Biochem Biophys Res Commun 316: 1050-1058‚ 2004, Nucleic Acids Res 32: 893-901‚ 2004, Cell Cycle 3: 790-5‚ 2004, Nat Biotechnol 23: 995-1001‚ 2005, Nucleic Acids Res 35: e27‚ 2007, BMC Bioinformatics 7: 520‚ 2006, Nucleic Acids Res 35: e123‚ 2007, Nat Biotechnol 22: 326-330‚ 2004) відомі в цій галузі техніки і можуть використовуватися при виборі полінуклеотидних послідовностей, ефективних для пригнічення експресії генів. У деяких варіантах реалізації проводять скринінг послідовності полінуклеотиду проти геномної ДНК рослини-мішені, щоб мінімізувати неумисне пригнічення експресії інших генів. Композиції тригерних молекул полінуклеотиду і олігонуклеотиду використовуються в композиціях, наприклад, у рідинах, які містять молекули полінуклеотиду при низьких концентраціях, окремо або в комбінації з іншими компонентами, наприклад, однією або декількома молекулами гербіциду або в тій же рідині, або в окремо взятих рідинах, які також забезпечують агент перенесення. Хоча не існує ніякої верхньої межі концентрацій і дозувань молекул полінуклеотиду, які можуть використовуватися в цих способах, для ефективності зазвичай треба буде знайти нижню межу ефективних концентрацій і дозувань. Концентрації можна скорегувати з урахуванням об'єму спрею або обробки, яка застосовується до листя рослини або інших частин поверхні рослини, таких, як квіткові пелюстки, стебла, бульби, фрукти, пиляки, пилок або насіння. В одному варіанті реалізації необхідна обробка трав'янистих рослин із використанням 25-мерної олігонуклеотидної молекули вимагає близько 1 наномоль (нмоль) молекул олігонуклеотидів на рослину, наприклад, від близько 0,05 до 1 нмоль на рослину. Інші варіанти реалізації для трав'янистих рослин включають необхідні діапазони концентрації від близько 0,05 до близько 100 нмоль або від близько 0,1 до близько 20 нмоль, або від близько 1 нмоль до близько 10 нмоль полінуклеотидів на рослину. Дуже великі рослини, дерева або лози можуть потребувати відповідно більшої кількості полінуклеотидів. При використанні довгих молекул длРНК, які можна перетворити в декілька олігонуклеотидів, можна використовувати нижчі концентрації. Щоб продемонструвати варіанти реалізації, відносно олігонуклеотидних молекул для зазначення обробки 0,8 нмоль молекули полінуклеотиду на рослину умовно використовують фактор 1Х; 10Х для 8 нмоль молекули полінуклеотиду на 12 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 рослину; і 100Х для 80 нмоль молекули полінуклеотиду на рослину. Полінуклеотидні композиції згідно з цим винаходом використовуються в композиціях, наприклад, в рідинах, які містять молекули полінуклеотиду, окремо або в комбінації з іншими компонентами, або в тій же рідині, або в окремо взятих рідинах, які також забезпечують агент перенесення. Як використовується в цьому документі, агент перенесення являє собою агент, який у поєднанні з полінуклеотидом в композиції, яка місцево застосовується до поверхні рослини-мішені, дозволяє полінуклеотиду потрапити в клітину рослини. У деяких варіантах реалізації агент перенесення являє собою агент, який готує поверхню тканини рослини, наприклад, листя, стебла, корені, квіти або фрукти для потрапляння за допомогою молекул полінуклеотиду в клітини рослини. Перенесення полінуклеотидів в клітини рослини може бути полегшене за допомогою попереднього або одночасного застосування агента перенесення полінуклеотиду до тканини рослини. У деяких варіантах реалізації агент перенесення застосовують після нанесення полінуклеотидної композиції. Агент перенесення полінуклеотиду забезпечує полінуклеотидам шлях через воскові бар'єри серозної оболонки, пори і/або стінки клітини або мембранні бар'єри в клітини рослини. Відповідні агенти перенесення для полегшення перенесення полінуклеотиду в клітину рослини включають агенти, які покращують проникність зовнішньої поверхні рослини або які покращують проникність олігонуклеотидів або полінуклеотидів у клітини рослини. Такі агенти для полегшення перенесення композиції в клітину рослини містять хімічну речовину або фізичну речовину, або їх комбінації. Хімічні речовини для готування або перенесення містять: (а) поверхнево-активні речовині, (б) органічний розчинник або водний розчин, або водні суміші органічних розчинників, (в) окисники, (г) кислоти, (д) луги, (е) олії, (є) ферменти або їх комбінації. Варіанти реалізації способу можуть необов'язково включати етап інкубації, етап нейтралізації (наприклад, щоб нейтралізувати кислоту, луг або окисник, або інактивувати фермент), етап обполіскування або їх комбінації. Варіанти реалізації агентів або обробки для готування рослини з метою проникнення полінуклеотидів включають емульсії, зворотні емульсії, ліпосоми та інші міцелоподібні композиції. Варіанти реалізації агентів або обробки для готування рослини з метою проникнення полінуклеотидів містять протиіони або інші молекули, які, як відомо, пов'язують із молекулами нуклеїнових кислот, наприклад, неорганічні іони амонію, іони алкіламонію, іони алкіллітію, поліаміни, такі, як спермін, спермідин або путресцин та інші катіони. Органічні розчинники, які використовуються в готуванні рослини з метою проникнення полінуклеотидів, містять DMSO, DMF, піридин, N-піролідин, гексаметилфосфорамід, ацетонітрил, діоксан, поліпропіленгліколь, інші розчинники, здатні змішуватися з водою або які розчинятимуть фосфонуклеотиди в неводних системах (наприклад, які використовуються в реакціях синтезу). Можуть використовуватися природні або синтетичні олії з додаванням або без поверхнево-активних речовин або емульгаторів, наприклад, олії рослинного походження, олії з насіння, наприклад, можна використати ті, які є в th переліку 9 Compendium of Herbicide Adjuvants, у відкритому доступі всесвітньої мережі (Інтернет) на сайті herbicide.adjuvants.com, наприклад, парафінові олії, ефіри жирної кислоти і багатоатомного спирту або олії з молекулами з коротким ланцюгом, модифіковані амідами або поліамінами, такі, як поліетиленімін або N-піролідин. Агенти перенесення містять, без обмеження ними, кремнійорганічні препарати. У деяких варіантах реалізації кремнійорганічний препарат, який є комерційно доступним, як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77 під номером CAS 27306-78-1 та номером EPA: CAL.REG.NO. 5905-50073-AA і нині постачається компанією Momentive Performance Materials, Олбані, штат Нью-Йорк, можна використовувати для виготовлення полінуклеотидної композиції. У деяких варіантах реалізації, в яких кремнійорганічний препарат Silwet L-77 використовується для попередньої обробки (перед розпиленням) листя рослини або інших поверхонь рослини, свіжоприготовані концентрації в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків за вагою (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %) є ефективними в підготовці листка або іншої поверхні рослини до перенесення молекул полінуклеотиду в клітини рослини при місцевому застосуванні на поверхні. У деяких варіантах реалізації способів та композицій, наведених у цьому винаході, використовується або надається композиція, яка містить полінуклеотидну молекулу і кремнійорганічний препарат, який містить Silwet L-77 в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків за вагою (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %). 13 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 У деяких варіантах реалізації будь-який із комерційно доступних кремнійорганічних препаратів, що надаються під наступними товарними знаками: Breakthru S 321, Breakthru S 200 Cat# 67674-67-3, Breakthru OE 441 Cat#68937-55-3, Breakthru S 278 Cat #27306-78-1, Breakthru S 243, Breakthru S 233 Cat#134180-76-0, виробництва компанії Evonik Goldschmidt (Німеччина), Silwet® HS 429, Silwet® HS 312, Silwet® HS 508, Silwet® HS 604 (виробництва компанії Momentive Performance Materials, Олбані, штат Нью-Йорк), може використовуватися як агент перенесення в полінуклеотидній композиції. У деяких варіантах реалізації, в яких кремнійорганічний препарат використовується для попередньої обробки (перед розпиленням) листя рослини або інших поверхонь рослини, свіжоприготовані концентрації в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків за вагою (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %) є ефективними в підготовці листка або іншої поверхні рослини до перенесення молекул полінуклеотиду в клітини рослини при місцевому застосуванні на поверхні. У деяких варіантах реалізації способів та композицій, наведених у цьому винаході, використовується або надається композиція, яка містить полінуклеотидну молекулу і кремнійорганічний препарат в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків за вагою (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %). Кремнійорганічні препарати, використовувані в способах та композиціях, наведених у цьому винаході, можуть містити одну або більше ефективних кремнійорганічних сполук. Як використовується в цьому документі, вираз "ефективна кремнійорганічна сполука" використовується для опису будь-якої кремнійорганічної сполуки, яка міститься в кремнійорганічному препараті, який дозволяє полінуклеотиду потрапити в клітину рослини. У деяких варіантах реалізації ефективні кремнійорганічні сполуки можуть дозволити полінуклеотиду потрапити в клітину рослини таким чином, щоб дозволити полінуклеотидоопосередковане пригнічення експресії гена-мішені в клітині рослини. В цілому, ефективні кремнійорганічні сполуки включають, без обмеження ними, сполуки, які можуть містити: i) трисилоксанову головну групу, сполучену ковалентним зв'язком з, ii) алкільним лінкером, який включає, без обмеження ним, н-пропіловий лінкер, сполучений ковалентним зв'язком з, iii) полігліколевим ланцюгом, сполученим ковалентним зв'язком з, iv) кінцевою групою. Трисилоксанові головні групи таких ефективних кремнійорганічних сполук включають, без обмеження ним, гептаметилтрисилоксан. Алкільні лінкери можуть включати, без обмеження ним, н-пропіловий лінкер. Полігліколеві ланцюги включають, без обмеження ними, поліетиленгліколь або поліпропіленгліколь. Полігліколеві ланцюги можуть містити суміш, яка забезпечує середню довжину ланцюга "n" близько "7,5". У деяких варіантах реалізації середня довжина ланцюга "n" може варіюватися від близько 5 до близько 14. Кінцеві групи можуть включати, без обмеження ними, алкільні групи, такі, як метильна група. Вважається, що ефективні кремнійорганічні сполуки включають, без обмеження ними, трисилоксанетоксильовані поверхнево-активні речовини або поліалкіленоксид, модифікований гептаметилтрисилоксаном. (Сполука I: поліалкіленоксид гептаметилтрисилоксан, середня довжина n=7,5). У деяких варіантах реалізації кремнійорганічний препарат, що містить кремнійорганічну сполуку, яка включає трисилоксанову головну групу, використовується в способах та композиціях, наведених у цьому винаході. У деяких варіантах реалізації кремнійорганічний препарат, що містить кремнійорганічну сполуку, яка включає гептаметилтрисилоксанову головну групу, використовується в способах та композиціях, наведених у цьому винаході. У деяких варіантах реалізації кремнійорганічна композиція, яка містить Сполуку I, використовується в способах та композиціях, наведених у цьому винаході. У деяких варіантах реалізації способів та композицій, наведених у цьому винаході, використовується або надається 14 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 композиція, яка містить полінуклеотидну молекулу та одну або більше ефективну кремнійорганічну сполуку в діапазоні від близько 0,015 до близько 2 відсотків за вагою (мас. %) (наприклад, близько 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %). Композиції згідно з цим винаходом містять, без обмеження ними, компоненти, в яких один або більше полінуклеотидів практично ідентичні або практично комплементарні до послідовності гена GS (промотор, інтрон, екзон, 5'-нетрансльована область, 3'-нетрансльована область), агент перенесення, який забезпечує полінуклеотиду потрапляння в клітину рослини, гербіцид, який доповнює дію полінуклеотиду, один або декілька додаткових гербіцидів, які додатково посилюють гербіцидну дію композиції або забезпечують додатковий механізм дії, відмінний від механізму дії доповнюючого гербіциду, різні солі та стабілізуючі агенти, які збільшують корисність композиції у вигляді домішки компонентів композиції. Способи включають одну або декілька обробок полінуклеотидною композицією та одну або декілька обробок агентом перенесення для готування рослини з метою проникнення полінуклеотидів. Якщо агент для готування з метою проникнення являє собою кремнійорганічну сполуку або сполуку, що міститься в ньому, варіанти реалізації полінуклеотидних молекул являють собою дволанцюгові РНК олігонуклеотиди, одноланцюгові РНК олігонуклеотиди, дволанцюгові РНК полінуклеотиди, одноланцюгові РНК полінуклеотиди, дволанцюгові ДНК олігонуклеотиди, одноланцюгові ДНК олігонуклеотиди, дволанцюгові ДНК полінуклеотиди, одноланцюгові ДНК полінуклеотиди, хімічно модифіковані РНК або ДНК олігонуклеотиди або полінуклеотиди або їх суміші. Композиції та способи використовуються для модуляції експресії ендогенного гена GS (наприклад, Pest Manag Sci 2009; 65: 216–222, GS249 мутанти) або трансгенного гена GS (наприклад, патенти США за номером 7,910,805; 5,969,213; 5,489,520; 5,550,318; 5,874,265; 5,919,675; 5,561,236; 5,648,477; 5,646,024; 6,177,616 та 5,879,903) у клітині рослини. У різних варіантах реалізації ген GS містить кодуючу (білок-кодуючу або трансльовану) послідовність, некодуючу (нетрансльовану) послідовність або як кодуючу, так і некодуючу послідовність. Композиції згідно з цим винаходом можуть містити полінуклеотиди та олігонуклеотиди, призначені для націлювання декількох генів або декількох сегментів одного або більше генів. Ген-мішень може містити декілька послідовних сегментів гена-мішені, декілька непослідовних сегментів гена-мішені, декілька алелей гена-мішені або декілька генів-мішені з одного або більше видів. У одному аспекті це спосіб для модуляції експресії гена GS у рослині, який включає: (а) готування рослини для проникнення полінуклеотидів та (б) обробку рослини полінуклеотидними молекулами, в якій полінуклеотидні молекули містять щонайменше один сегмент із 18 або більше безперервних нуклеотидів, клонованих або іншим чином отриманих із гена-мішені GS в антисмисловій або смисловій орієнтації, при якій полінуклеотидні молекули потрапляють всередину рослини та стимулюють модуляцію гена-мішені. Готування та застосування полінуклеотиду можна виконати окремо або за один етап. Коли готування та застосування полінуклеотиду виконують на окремих етапах, готування може передувати або може виконуватися після застосування полінуклеотиду впродовж декількох хвилин, годин або днів. У деяких варіантах реалізації на одній і тій же рослині можна здійснювати більше, ніж один етап готування, або застосовувати більше ніж, одну молекулу полінуклеотиду. У варіантах реалізації способу сегмент можна клонувати або отримати з (а) кодуючої (білок-кодуючої), (б) некодуючої (промотор та інші молекули, які стосуються гена) або (в) і кодуючих, і некодуючих частин гена-мішені. Некодуючі частини включають ДНК, наприклад, промоторні області або РНК, що транскрибується за допомогою ДНК, яка забезпечує регуляторні молекули РНК, включаючи, без обмеження ними: інтрони, 5'- або 3'нетрансльовані області та мікроРНК, транс-діючі (міРНК), природні антисмислові сіРНК та інші малі сіРНК із регуляторною функцією або РНК, які виконують структурну або ферментативну функцію, включаючи, без обмеження ними, рибозими, рибосомні РНК, т-РНК, аптамери та рибосвітчі. Усі публікації, патенти та патентні заявки включені в цей документ у вигляді посилання так, як якби кожна окрема публікація або патентна заявка була б конкретно і окремо включена за допомогою окремого посилання. Наступні приклади включені для демонстрації прикладів деяких переважних варіантів реалізації. Фахівцями в цій галузі техніки повинне оцінитися те, що технології, розкриті в прикладах, відповідають підходам, які винахідники успішно застосували на практиці, і, отже, можуть розглядатися як зразки переважних варіантів реалізації для його практичного застосування. Проте, фахівці в цій галузі техніки, відповідно до цього опису, повинні оцінити 15 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 можливість виконання багатьох змін у конкретних варіантах реалізації, які були розкриті, і все ж таки отримати схожий або аналогічний результат без відхилення від суті і обсягу. Приклади Приклад 1. Полінуклеотиди, що належать до послідовностей гена GS. Полінуклеотидна молекула-мішень GS в природі зустрічається в геномі Abutilon theophrasti, Amaranthus albus, Amaranthus chlorostachys, Amaranthus graecizans, Amaranthus hybridus, Amaranthus lividus, Amaranthus palmeri, Amaranthus rudis, Amaranthus spinosus, Amaranthus thunbergii, Ambrosia trifida, Ambrosia artemisiifolia, Chenopodium album, Commelina diffusa, Convulvulus arvensis, Conyza candensis, Lolium multiflorum, Euphorbia heterophylla, Kochia scoparia, Sorghum halepense та Digitaria sanguinalis, та включає полінуклеотидні молекули, пов'язані з експресією поліпептиду, який визначається як GS, що містить регуляторні молекули, кДНК, які містять кодуючі і некодуючі області гена GS і його фрагментів, як показано в Таблиці 1. Полінуклеотидні молекули екстрагують із цих видів рослин за допомогою стандартних для цієї галузі техніки способів, наприклад, тотальну РНК екстрагують із використанням реагенту Trizol (Invitrogen Corp, Карлсбад, штат Каліфорнія, Cat. No. 15596-018) з дотриманням фахівцями в галузі екстракції полінуклеотиду протоколу виробника або його модифікацій, що може поліпшити відновлення або чистоту екстрагованої РНК. Коротко, розпочинають із 1 граму подрібнених тканин рослини для екстракції. Розподіляють на аліквоти 10 мілілітрів (мл) реагенту Trizol у 15 мл конічні пробірки. Додають подрібнений порошок у пробірки і струшують, щоб гомогенізувати. Інкубують гомогенізовані зразки впродовж 5 хвилин (хв.) при кімнатній температурі (КТ) та потім додають 3 мл хлороформу. Енергійно трясуть пробірку вручну впродовж 15-30 секунд (сек.) і інкубують при КТ впродовж 3 хв. Центрифугують пробірку при 7000 оборотах за хвилину (об./хв.) впродовж 10 хв. при 4 °C. Переливають водну фазу в нову 1,5 мл пробірку і додають 1 об'єм холодного ізопропанолу. Інкубують зразки впродовж 20-30 хв. при КТ і центрифугують при 10000 об./хв. впродовж 10 хв. при 4 °C. Промивають гранули 80 відсотковим етанолом Sigma-класу. Видаляють супернатант і швидко висушують гранули на повітрі. Розчиняють РНК гранулу в близько 200 мікролітрах води, очищеної діетилпірокарбонатом. Недовго нагрівають при 65 градусах С, щоб розчинити гранулу, і перемішують на вортексі або відмірюють піпеткою, щоб ресуспендувати РНК гранулу. Корегують концентрацію РНК до 1-2 мікрограмів/мікролітр. ДНК екстрагують за допомогою набору EZNA SP Plant DNA Mini kit (Omega Biotek, Норкросс, штат Джорджія, Cat#D5511) і пробірки Lysing Matrix E (Q-Biogen, Cat#6914) з дотриманням фахівцями в галузі екстракції полінуклеотиду протоколу виробника або його модифікацій, що може поліпшити відновлення або чистоту екстрагованої ДНК. Коротко, до аліквоти подрібненої тканини в пробірці Lysing Matrix E на сухому льоді додають 800 мкл Buffer SP1 в кожен зразок, гомогенізують за допомогою міні-гомогенізатора типу beadbeater, який руйнує клітини, впродовж 35-45 сек., інкубують на льоду впродовж 45-60 сек., центрифугують при ≥ 14000 об./хв. впродовж 1 хв. при КТ, додають 10 мікролітрів РНКази А в лізат, інкубують при 65 °C впродовж 10 хв., центрифугують впродовж 1 хв. при КТ, додають 280 мкл Buffer SP2 і перемішують на вортексі, інкубують зразки на льоду впродовж 5 хв., центрифугують при ≥ 10000 об./хв. впродовж 10 хв. при КТ, переносять супернатант у колонку-гомогенізатор у 2 мл пробірці для збирання зразків, центрифугують при 10000 об./хв. впродовж 2 хв. при КТ, переносять очищений лізат у 1,5 мл мікроцентрифугальну пробірку, додають 1,5 об'єму Buffer SP3 до очищеного лізату, негайно перемішують на вортексі для отримання гомогенної суміші, переносять до 650 мкл супернатанту до колонки Hi-Bind, центрифугують при 10000 об./хв. впродовж 1 хв., повторюють, застосовують 100 мкл 65 °C Elution Buffer до колонки, центрифугують при 10000 об./хв. впродовж 5 хв. при КТ. Секвенсори ДНК нового покоління, такі, як 454-FLX (Roche, Бренфорд, штат Коннектикут), SOLiD (Applied Biosystems), а також Genome Analyzer (HiSeq2000, Illumina, Сан-Дієго, штат Каліфорнія) використовують, щоб забезпечити екстракцію з тканин рослини полінуклеотидної послідовності ДНК та РНК. Первинні дані секвенування збирають у контиги. Послідовність контигів використовують для визначення тригерних молекул, які можуть застосовуватися до рослин, щоб дозволити регуляцію експресії генів. Послідовність ДНК-мішені виділяють із геномної (гДНК) та кодуючої ДНК (кДНК) із різних видів бур'янистих рослин для гена GS, і зібрані контиги представляють у послідовності SEQ ID NO: 1-59 та в Таблиці 1. Приклад 2. Полінуклеотиди, які згідно з винаходом належать до тригерних молекул. Послідовності генів та фрагментів із Таблиці 1 розділяють на довжини по 200 полінуклеотидів (200-мер) з 25 полінуклеотидними областями, що перекриваються (SEQ ID NO: 37-1056). Ці полінуклеотиди випробовують, щоб вибрати найбільш ефективні тригерні області 16 UA 115535 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 по усій довжині будь-якої послідовності-мішені. Тригерні полінуклеотиди виконують у вигляді смислової або антисмислової олДНК або олРНК, длРНК або длДНК, або длДНК/РНК гібридів і об'єднують з агентом перенесення на кремнійорганічній основі, щоб забезпечити створення полінуклеотидного препарату. Полінуклеотиди об'єднують у набори з від двох до трьох полінуклеотидів у наборі, використовуючи по 4-8 нмоль кожного полінуклеотиду. Кожен набір полінуклеотидів готують з агентом перенесення і застосовують до рослини або поля рослин у комбінації з гербіцидом, який містить інгібітор GS, або з подальшою обробкою інгібітором GS на перший-третій день після застосування полінуклеотиду, щоб визначити вплив на сприйнятливість рослини до інгібітора GS. Вплив визначають як затримку росту і/або загибель рослини та визначають на 8-14 день після обробки набором полінуклеотиду і інгібітором GS. Виявляють найбільш ефективні набори і випробовують окремі полінуклеотиди тими ж способами, як і набори, та виявляють окремий 200-мерний найбільш ефективний полінуклеотид. 200-мерну послідовність розділяють на дрібніші послідовності з 50-70-мерних областей із 10-15 полінуклеотидними областями, що перекриваються, і випробовують полінуклеотиди в індивідуальному порядку. Найбільш ефективний 50-70-мерний полінуклеотид додатково розділяють на дрібніші послідовності з 25-мерних областей із 12-13 полінуклеотидними областями, що перекриваються, і випробовують на ефективність у комбінації з обробкою інгібітором GS. За допомогою цього способу можна визначити олігонуклеотид або декілька олігонуклеотидів, які є найбільш ефективними тригерними молекулами для впливу на сприйнятливість рослини до інгібітора GS або на модуляцію експресії гена GS. Модуляцію експресії гена GS визначають за допомогою виявлення міРНК молекул GS, характерних для гена GS, або за допомогою вивчення зменшення кількості РНКтранскрипту GS, що виробляється, порівняно з необробленою рослиною, або за допомогою простого вивчення очікуваного фенотипу застосування тригеру з гербіцидом, що є інгібітором GS. Виявити міРНК можна, наприклад, із використанням наборів, таких, як mirVana (Ambion, Остін, штат Техас) і mirPremier (Sigma-Aldrich, Сент-Луїс, штат Міссурі). Послідовність ДНК-мішені, виділена з геномної (гДНК) та кодуючої ДНК (кДНК) з різних видів бур'янистих рослин для гена GS, та зібрані контиги, представлені в послідовності SEQ ID NO: 159, розділяють на полінуклеотидні фрагменти, як представлено в SEQ ID NO: 60-1444. Послідовності генів та фрагментів із Таблиці 1 порівнюють та виявляють 21-мери безперервних полінуклеотидів із гомологією по усіх різних послідовностях гена GS. Мета полягає в тому, щоб визначити тригерні молекули, які застосовуються як гербіцидні молекули або в комбінації з гербіцидом, що є інгібітором GS, до широкого діапазону видів бур'янів. Послідовності SEQ ID NO: 1444-2045 показують 21-мери, які присутні в гені GS щонайменше восьми видів бур'янів із Таблиці 1. Передбачається, що додаткові 21-мер можна обрати з послідовностей Таблиці 1, які є характерними для одного виду бур'янів або декількох видів бур'янів у межах роду, або тригерних молекул, які складаються із щонайменше 18 безперервних нуклеотидів, щонайменше 19 безперервних нуклеотидів, щонайменше 20 безперервних нуклеотидів або щонайменше 21 безперервного нуклеотиду у довжину і щонайменше на 85 відсотків ідентичні до послідовності гена GS, обраної із групи, яка складається з послідовності SEQ ID NO: 1-59 або їх фрагмента. За допомогою цього способу можна визначити олігонуклеотид або декілька олігонуклеотидів, які є найбільш ефективними тригерними молекулами для впливу на сприйнятливість рослини до інгібітора GS або на модуляцію експресії гена GS. Модуляцію експресії гена GS визначають за допомогою виявлення міРНК молекул GS, характерних для гена GS, або за допомогою вивчення зменшення кількості РНК-транскрипту GS, що виробляється, порівняно з необробленою рослиною, або за допомогою простого вивчення очікуваного фенотипу застосування тригеру з гербіцидом, що містить інгібітор GS. Виявити міРНК можна, наприклад, із використанням наборів, таких, як mirVana (Ambion, Остін, штат Техас) і mirPremier (Sigma-Aldrich, Сент-Луїс, штат Міссурі). Послідовність ДНК-мішені, виділена з геномної (гДНК) та кодуючої ДНК (кДНК) із різних видів бур'янистих рослин для гена GS, та зібрані контиги, представлені в послідовності SEQ ID NO: 159, розділяють на фрагменти, як представлено в SEQ ID NO: 1444-2045. Приклад 3. Способи, використовувані у винаході, які пов'язані з обробкою рослин або частин рослин сумішами тригерних молекул зовнішнього застосування. Рослини щириці Палмера (A. palmeri R-22), сприйнятливі до гліфосату, вирощують у теплиці (30 / 20 С денна/нічна температура (T); при довжині світлового дня 14 годин) у 4-дюймових 3 квадратних горщиках із земляною сумішшю Sun Gro® Redi-Earth та 3,5 кг/м добрива Osmocote® 14-14-14. Кожну рослину щириці Палмера висотою від 5 до 10 см обробляють сумішшю з 5 коротких (40-мер) одноланцюгових антисмислових ДНК полінуклеотидів (олДНК), 17 UA 115535 C2 5 10 15 націлюючих кодуючі області GS при 4 нм (нмоль), які додали до складу 20-мілімолярного натрійфосфатного буфера (рН 6,8), що містить 2 відсотки сульфату амонію і 1 відсоток Silwet L-77. Випробовують три пули полінуклеотидів олДНК. Один пул, позначений GS CpGS1, містить 5 полінуклеотидів (SEQ ID NO: 2046-2050), які обирають, щоб виявити ген, який кодує ген-мішень хлоропластної глутамінсинтетази1. Другий пул, позначений GS CytGS1, містить 5 полінуклеотидів (SEQ ID NO: 2051-2055), які обирають, щоб виявити ген цитозольної глутамінсинтетази1. Третій пул (GS Mix) є комбінацією тригерних молекул олДНК, по одній із пулів GS CpGS1 та GS CytGS1, а також однієї олДНК (SEQ ID NO: 2056), яка спрямована на ген цитозольної глутамінсинтетази2. Рослини обробляють вручну шляхом капання піпеткою по 10 мкл розчину полінуклеотиду на чотири повністю зрілі розкриті листки, загалом використовують 40 мкл розчину на одну рослину. Через три дні після обробки тригерним полінуклеотидом рослини обробляють Ignite® (Bayer Cropscience) при нормі внесення 1/32X (23 грамів/гектар), повторюючи кожну обробку чотири рази. Висоту рослин візуально оцінюють через шістнадцять днів після обробки гербіцидом, щоб визначити ефект від обробок полінуклеотидним пулом та гербіцидом. Результат, показаний у Таблиці 2, є середнім відсотковим зниженням висоти, яке спостерігається після чотирьох повторів обробки порівняно з необробленою рослиною. Таблиця 2 Вплив тригерного полінуклеотиду олДНК на щирицю Палмера, відсоткове зниження висоти Контрольний зразок (без обробки) 3 20 25 30 35 40 45 GS CpGS1 19 GS CytGS1 15 GS Mix 36 Приклад 4. Спосіб боротьби з бур'янами на полі. Спосіб для боротьби з бур'янами на полі включає використання тригерних полінуклеотидів, які можуть модулювати експресію гена GS в одному або декількох видах бур'янистих рослинмішеней. У SEQ ID NO: 1444-2045 аналіз послідовностей GS двадцяти двох видів рослин забезпечив збір 21-мерних полінуклеотидів, які можна використати в композиціях для впливу на ріст або розвиток, або сприйнятливість до гербіциду, що є інгібітором GS, для регулювання зростання декількох видів бур'янів на полі. Композиція, яка містить 1 або 2, або 3, або 4, або більше полінуклеотидів із SEQ ID NO: 1444-2045, забезпечить широкий спектр дій композиції відносно декількох видів бур'янів, які зустрічаються в середовищі поля. Спосіб включає створення композиції, яка містить компоненти, які включають щонайменше один полінуклеотид із SEQ ID NO: 1444-2045 або будь-який інший полінуклеотид, що ефективно модулює експресію гена, практично ідентичний або практично комплементарний до SEQ ID NO: 1-59 або їх фрагмента, агент перенесення, яке мобілізує полінуклеотид у клітину рослини, і гербіцид, який інгібує GS, і необов'язково полінуклеотид, який модулює експресію основного гена, і необов'язково гербіцид із відмінним механізмом дії порівняно з інгібітором GS. Полінуклеотид композиції містить длРНК, олДНК або длДНК, або їх комбінацію. Робоча концентрація композиції, яка містить полінуклеотид, може бути від близько 1 до 30 грамів на акр або більше, залежно від розміру полінуклеотиду і кількості полінуклеотидів у композиції. Композиція може містити один або більше додаткових гербіцидів, кількість яких потрібна для забезпечення ефективної боротьби з бур'янами декількох видів. Поля культурних рослин, які потребують боротьби із бур'янистими рослинами, обробляють за допомогою розпилення композиції. Композиція може бути надана у вигляді бакової суміші, послідовної обробки компонентів (зазвичай полінуклеотидом, а потім гербіцидом), одночасної обробки або змішування одного або більше компонентів композиції з окремих контейнерів. Обробка поля може проводитися в міру необхідності для забезпечення боротьби з бур'янами, а компоненти композиції можна скорегувати для боротьби з конкретними видами бур'янів або сімействами бур'янів. Таблиця 1 Послідовності гену глутамінсинтетази, виділені з різних видів бур'янів SEQ ID NO 1 Вид Тип Довжина Послідовність Щириця Палмера кДНК Контиг 1759 ATTATTCCACACTCCACACTACCCATTTCATTCTGCTC GCTCTCCTTCCTTCTTTCTCACTCCTTTATCTCTCTAT 18 UA 115535 C2 2 Щириця Палмера гДНК Контиг 8486 ATTCATCTCTCTCTCTAGCTTGTTCACGACGCCGACC ACCCTTTTCCGATCCCAGGTAAAAGTGACCAAACATG GCACAAATACTTGCACCTTACATGCAATGTCAGATGA AGTTTTCAAAAGGCTCCACAAGTTCAATGACATCAAA TCCTTGGACTTCAATATTTCTTAAAGAAAATAAAAAGG GATCAATTAAATGCTCTAGTAAGTTCAGAGTATGTGC TTCTCTCCAATCTGATAATAGCACAGTAAACAGGGTG GAGCAGCTACTCAACTTGGATGTCACTCCATACACTG ACAAGATAATTGCAGAGTACATTTGGATTGGAGGATC TGGCATTGATGTTCGTAGCAAATCAAGGACAATCTCT AAACCTGTTGAGCACCCATCTGAGCTTCCCAAGTGG AATTATGATGGCTCAAGCACTGGACAAGCGCCAGGA GAGGACAGTGAAGTAATCTTATACCCTCAAGCAATTT TCAAGGATCCATTCCGTGGTGGTAATAATATCCTTGT AATCTGTGACACATACACACCAGCAGGCGAACCCAT CCCCACTAATAAAAGATACAGGGCTGCACAGATCTTT AGCGACCCAAAGGTTGTTTCTGAGATTCCATGGTTTG GAATAGAGCAGGAATACACGTTGCTCCAACAAAATGT TAAATGGCCTTTGGGATGGCCTGTGGGAGCCTATCC TGGTCCTCAGGGTCCATACTATTGTGGTGCTGGTGC TGACAAATCTTTTGGACGTGACATATCTGATGCTCAT TACAAAGCTTGCTTGTATGCTGGCATCAACATTAGTG GCACAAATGGGGAAGTTATGCCTGGCCAGTGGGAAT TCCAAGTTGGCCCAAGTGTTGGTATTGAAGCTGGAG ATCATATCTGGTGTGCGAGATATATTCTTGAGAGAAT TACTGAACAAGCTGGTGTGGTTCTGACTCTTGATCCA AAGCCTATTGAGGGTGATTGGAACGGTGCAGGTTGC CATACCAATTACAGTACAAAGACCATGAGAGAAGATG GTGGTTATGAAGCAATTAAGAAGGCAATTTTGAATCT TTCATTACGCCACAAGGACCATATCAGTGCATATGGA GAAGGAAATGAACGAAGGTTGACAGGGAAGCACGA GACCGCCAGCATCGACACATTCTCTTGGGGTGTTGC CAATCGTGGTTGCTCTATCCGTGTGGGTCGTGACAC GGAAAAGGCAGGAAAAGGTTATCTGGAAGATAGACG GCCTGCCTCAAACATGGACCCATACGTGGTAACAGG TTTGCTCGCAGAAACTACAATACTTTGGGAGCCAACA CTTGAGGCTGAGGCACTCGCAGCCCAAAAACTCGCT CTTAATGTGTAATTCATTCATAAATCGTACCAGAGTAT CGCATATTCATGAACGAGGGAACTCTTTCACGTGCC CAGAATTCGCTTATTTTTAGTTTTTAGTATCCTGGGTA TGTGAGTGTTTTCATTCATGACATTTGCTTCCGATCAT TGTTTGTTTTGGGAATTCTAGAGAATAATTTGTAACTG TTGCCTTTATTTTTGCTCTTATGAAGCTCAAGCTCAGT ATTAGTTATATTCCAGTTTAAGGAATGAACTTCAAAAT CGTTTGTTACTCATCTTCAACTCCATTGAATACAAACT TAATAACTTATGTCTTAGTTTGCTAC CATGTAAAAATCAATGTGAACACAAAACCCGATTTTG AACCTACCCGAAACACCTGACCCTAAATCAACTCGAT GACCCGAATGAACATCTGTAGGTGGGAGTAACAATC ACGTTTTATGAGTCCATTTCCCCTTTAGGATATTGTTT TCTCTATTTGGCTTTCCCAAAAAGTCAATGCTTGGCT TTAGATTGATACAAACAATGAGCATGCATGTGAGTGA CAGAATGAGTAGACACAAACAAGAACCCTAATTAAAT ATCTAAATCATTACATACAATTTGATTTTCCATTAATTT AGTCCAGAGATTCTTTTGCATTCTCCAAATCTTGTTCA GATTGTTTATTCACCACTCAATTTCAGCATCCCTATCC TCTATGGAAGAGCCACACTTCATTTTCAACCATTATTC CACACTCCACACTACCCATTTCATTCTGCTTACTCTC CTTCCTTCTTTCTCACTCCTTTATCTCTCTATATTCAT CTTTCTCTCTCTAGTTTGTTCACGACGCCGACCACCC 19 UA 115535 C2 TTTTCCGATCCCAGGTTCTGCTGTTTATTTAGCTTTTT TTGGTTATGTTTGCAATTGACTGTTGTGCTGCTTGTA GTATCAGATTTGTGGAATTATCAGTGTTTTGTGTTTGT GTGTTGAAACATGGCAAATGGGTTTGCATTGTGTTAA TTTTTTCTTACTCGGATTGACATTGACCGATCAACTCA TTACCGCTAAAACACCCTTTTTTTTAATGGTGGAATG GCATTTGTTAAATGTTAGTCGTTTTGGTATAGTAGCTT CAGATTAAGACTGCATAATGTTTACTGGAGCTGTATT AAGATGCTATATTAGGGTTTTTGCTACACTTGAACAT GGGTAAATGGTACCCAATTGGTTGAAACTTGAAACTA GGATATTTCAATTGTGATTTTTCCCTTTGTTTGACTTT CCCCGGATGCTTTGTGGGTTGATATTGGCGTGGTAA TGGGGAAGATCAATTGTTTTAGGATCAGGATTTAGGT ATTCATTACCTCTAAACTCCCTTTATGGTATGATTTGT CGCCTTCCTTCCCTTTCCAGACCCTGATCATAGTTTC CTTATGAGTGGGATACACTAGTCAAGATGATCATGAT GATGATGATAATTTTAGCTATTCCTTGTGCTAGAGTC ATTGATCAGTGTTACAAATTTCCCAAACAAATTTGATG AGATGGAAGATAATTATTAAAGCTACATTTTGTCGGA ATACTATTGAAATTAATCACTTGTTAGAATATGTAAGT AGGTTATTACATTACTAATCACTTGTTAATGTCATTTT AATATGGAGGGAGTATGGTTTTGTGGTTTTCCTAGCT AACAATCTATACCTGCGGTCCTGCTGGCTATTTCTTT CCAGGCTCATGTTAGTATAGTGTATAAGTGGCCCCAA CTTATCAGAAAGATGGATTTTGGCATTAACTATGTGA CTATGTCCAAGTATATTGAACACTTTTATTTCTAGTTT CATTTATCTCCTGTACTTATTTGAGACCTGCTCTTGTG CTTCATATAAAAAATTACACAAAGGTTACAAAACACTG TTGGACTAAAACATAAGGAACTCGCCTTTACAACAAT TGAAATTTTCTCATCTCATTCATATAGTGAGCTACTAT TTGTGCGCGAGCGATTACCGAATAGTGATTACATCAT CTCTTTTGCCTATGTGTTTGTATTACTTGCATTTGCAT ACTCATGTCATGTACATGTGGATTTTCATGCTCAAAC TTGAATACTTTATGAAGACATATCTGAAACACATGTG CATTTGTATTACCACATTTTTTTATCCAAAATGATATTC CAAATGTATTGTATGTCGGGGTGCCCAGCATTTAATC CAAAAGTTTCATAAACCTTGAGTGACCGAGATGCAAA TCTGTGGCAATCTGATCTAAAGGTTTCATAAATCCTA GAATTCAAAGCAGACATATCTGAAACACATAAATTAA CGTGTTATGCCCATGTACTCGAAAATGTTTCCTGGAA ACTGAGATTGGTTTTTCAACATAAGTTGACTCTTGAC CATTGTGTGTTTGGTTAGCAATCTACCTGAGTAACCC ACATATGTAAAACCCTAACATATTTTATTTGTGTTGTA GGTAAAAGTGACCAAACATGGCACAAATACTTGCACC TTACATGCAATGTCAGATGAAGTTTTCAAAAGGCTCC ACAAGTTCAATGACATCAAATCCTTGGACTTCAATATT TCTTAAAGAAAATAAAAAGGGATCAATTAAATGCTCTA GTAAGTTCAGAGTATGTGCTTCTCTCCAATCTGATAA TAGCACAGTAAACAGGGTGGAGCAGCTACTCAACTT GGATGTCACTCCATACACTGACAAGATAATTGCAGAG TACATTTGGTATATGGTTTTCCTTTCTATAGGCCAGAT GTCACATTAATTTTTTTTAGCTAATGTTTGTGCTACTT TTAGTTTTTTCTCATCTGTAGATAAGACATTCTTGGTG GTTTCTACTTTCAATCTGATTATAGAACTAATTGATCT ACGATTGTTCTTTGGAACAGGATTGGAGGATCTGGTA TTGATGTCCGTAGCAAATCAAGGGTACAATAACACTG ATGCTGTCGATTTATTGTTAAACCAGCATTTAGATGTT AAGTTTACTTCATTTTTTCCCTGACCGATGTTTCTTAA TATACCAGACAATCTCTAAACCTGTTGAGCACCCATC TGAGCTTCCCAAGTGGAATTATGATGGCTCAAGCACT 20 UA 115535 C2 GGACAAGCGCCAGGAGAGGACAGTGAAGTAATCTTA TAGTAAGATCTTGGGGCAGCTATAAACCTTTATTACT TTGCTCAATTATTGTTGTCCTTGTTTTTGCTTGACTAT CTTTTGGGGCTTGAGAGTTCTTGTCACTGAACTAACT CAAAAAGCTTAAGCTTTCATTTGAGTCGATTCCTTGA CATGGTATGGGAAGGTTAGCTTACGGGTTTGAATCTC ATTTACCCTCCGGGAATTATTATTACTAAGTAAATGTG TCGTGTCCACACTTCTAGTTAGGGCTTTCGTGTGAGG GGGCGTAGTAGGACCTCAACCATCAACTTAAGATTTA TTTGAGTTGATTCCTAGAAAATTCTTGTCACTCATTAA TTCGTAATCATGTCATTCATATGCAGCCCTCAAGCAA TTTTCAAGGATCCATTCCGTGGTGGTAATAATATCCT TGTGAGTCATATTCTTTCTGACTGTTGTGAAACTCAAT ATTTATTCCAAAATTATGATGTTACCTCAATTGTTGAG ATTAGAATTTTAATTATGCATTGCCATGTAAATTTAGG TAATCTGTGACACATACACACCAGCAGGCGAACCCA TCCCCACTAATAAAAGATACAGGGCTGCACAGATCTT TAGCGACCCAAAGGTTGTTTCTGAGATTCCATGGTAA GAAATTCCCATCATTGACAATATTTTGTTCCTAATCAT ATTTCCTAATTTAACACTCTCCACTGCAAGGGTGAAC TTTATAGAAAGTTGACCCACTATCTGAGAAATGACAA ATTAAAAACTGATTTCTCTAGTTTTCTAATAAAAGACA ATGCATAAATTATGTGATGGATACCACTAAGGGAATA ACCTCACCAAAGTTCACTTAAATTTGAAGGTTAAATTG TGGGATGTACAATCTAAACTCTCAATGTTTCTTTTGGA TTCTAGGGAATGCTTATCCAAGCTTAAAACTGATCTTT TTGAATTTTGAGTAAGATTGAACTCCGAATTCATTCAA AATTTTCAAGAGCTCGTCAATATTACAACTCAAGCTTT GACAAAATCAAAACAATCATTCGTGTAAACACAATGA ATTTGTTTAAGGTGTTCAACTTTGTATTCTCTAAATAA TGCATACAACCTAGGGCCCCAGGCTACTTCAACGAG AACATACCTCTAGTCCGACTCTTACTAGGAATTTCCT AAATAATGCTAAATCAAATATCTTCTGGATTGATTTAG CTGCAAGTATCAAACAATATATTACTATTACTCGAATT AAAAAGTAATCCTACCCTTATCCGGAGTGTAAAAATA TCCGGCTATCCTGTAAGAAAACCATAACCTAAACCTA CGTCTACTAGGATATGGTCAAACTATGAAGAAGCTTC CAAGGATATTTGACATGGATAGAACTTTGACTTTTAA CTCATACAAGCCAACATCACTTTGCAAACAAGTGAAT AAATGATCCAAGCTGGGACTACGGAGAGGACAAAAT GCGCACTTGTTCACATTAGAAAAATTACTAACAGGAA GTATTCATTTGAACAAGCTAGGACTTCAAGTAATGCC TTTGATCTTGTGTCAATGGTTAGCAGTCGTAATACAG TATGTCACACTTGTAATTAACATAACAAATCTGTTGTT TTAAATATGACGGTTTGAATACCCATGTTCTACGGGA GGCATTTCACTATAAAGGTCAACCGTTTTTGCCTAGT TTGGAGCTTGACAATTGCAAAAGTAATTCAGGGGTCT GCTTTTCTAGAATTCTGGATCATTATGAGTCTCTTCTG CTCTTTGTTTTCGCCTTTCTTTTTTCACTCTCTAGTCT CTACTTTTGGGTTTATTCTTTATATTATACTTTTGTAG GTTTGGAATAGAGCAGGAATACACTTTGCTCCAACAA AATGTTAAATGGCCTTTGGGATGGCCTGTGGGAGCA TATCCTGGTCCTCAGGTGTGTTAATTCCCCATATTAT CAACAGTTTCTTTGAAGATAATGCTTTGTTTCTGTTAT ATAATATGATTTTTTTGATATGTCTAGGGTCCATACTA TTGTGGTGCTGGTGCTGACAAGTCTTTTGGACGTGA CATATCTGATGCTCATTACAAAGCTTGCTTGTATGCT GGCATCAACATTAGTGGCACAAATGGGGAAGTTATG CCTGGCCAGGTGTCCTCTCGTATCATTCTTATGTCTT ATTGCTATTTAATATGTCTTTGAAGTTGGTTATGAATA 21 UA 115535 C2 GCTACATCTGCTTACACCTGCAGTGGGAATTCCAAGT TGGTCCAAGTGTTGGCATTGAAGCTGGAGATCATATC TGGTGTGCTAGATATATTCTTGAGGTATTCTCCTGAA ATTTGTATGTTTGCCCCTTTCAAGTTATATTGTGGCAA CTTTGAGTACATTCGAATGATCAGGAATTCAGTCTTA GTGGTTAATTTTATAATTTTTACTAAGAGAACTGATAA ATTAATCGACCTGACATTGAAATTGTGCGTGATTCTC TGATCAAATGGGGACCACATTATGATAGAAATAATAT GCATTATTATGACCCATATTTAGTCTACAATTGATTCA ATCAAAAATCCTTATGGACCAGAAAAAGAAATTGTAA TAATGATTCTCTAAAAATTTAGTTGAAATGTTGAATAT AGGATCAAGCGTGATCCAAACCCAATCAAGATGGTAT AAGGTGTCTTATCATCTATGTTTGTGAGAAAATGAGT TGTATCAGATTAATGGGAAACAACGGATGGAAGTTGA TCACTTTTAGGCACATAAACAACAAACTTTCTTATATA ATGTATATACTCCTTCGGATGCGTAATTTTATTCAATC AAGCTGTTCAACAAGATTAAGCTACATGTCCTTTTGTT TTGTATGGGATGAACCAGAAAACTCTCATCTTTTTAT GACCCTCACAAACCATTAACAATGTCTATTTATAGAG CATGTGTGAATCTTAGGGCCTAGGGGTGTTAACGAG CTAAACCAAGCCAAGTCGGGCTAGTGTGAGTGCTCA ACTTGACTTCATGTTTTTCAAACTCAAGCTAAATATTT GGATGTTTTAGCTCAAAATTTAAGCTTCAAATCTCTAT TTGGTGTGATACTTTATATATATTAAGAGTTAAAAAGT TTCACTAACTACATATTAGAATATGCATTCGTATTGTA TAAAACTTTAATAAGATTTTAAAATCTATTTAAAAACGA TTCTAATTCTCAAAACGAATATTGATAAAACCATTTTG AGTATATTCACGAGCATATCAAGCTGAATGAGTTGGT TTGCCTCTTAATCTTAGTTTCTTAAATGCTCGATAAGC ACCGAGGCACACAAGGTCCTCGGAGCCTAGGCGCA TATCACAAGGCAAAAATGCGAGTTTTTTGTAGGCAAG GAGCAAATCTTCACTAAAAAAATATTAAATATCAAATT TAAAACATAAATATACTTATATTCATATTATAATAGCAA CAAGCTTGAAAATATTCGTTATCATTGTTGTAAACACT AATTTAGCATATAAGTGATATGTTTGAAAATGTGAAAA TACCCAGTTATATTCTTCTTCTTCATGTGGTTGTCTAG CCTATTTATTATGCAAGCAATAATTTCTCGAACTTCAT ATTCAAGTGAATTTGGGTTTCTATGTTTTATTTATTTTC AAACAAACAAGTTTAAGTTAATGTCCAAGCCCAACAA GGAGGTGTATTGAGCGCACATGGCCCGAAACGCGT CGAGGCACACCAAGATGCGCGCCTCTTATAGTGGTT TTTGCCTCACCTTGCTAAGGCGTCTTCGGCCGTGCA AAGCAATGCACACTTTTTAAAACTAAGCTCTTGATAAT CTGAGTTGTGCTCAAATAGTTTGCAAATCGTGTGGGA TCATAAATACCCCTCCATTAAGCAGTAGAGATTCACA ATTTCATTTCATTTGCGGTGTATCCTCAAATCGCTGC ACCTGTAAAGGCAGCTGAACCAAGATCTCAGTTTTTT ATTGACTGTCTAGTCTGTAGAAAAATTAAGAGATATC ACCATTCAAGCTATTTTAATTGAATTTAACAAGCTTTC TCTCCTTCAAACAGAGAATTACTGAACAAGCTGGTGT GGTTCTGACTCTTGATCCAAAGCCTATTGAGGTACTG CCTTGTCCTTTTGTATTTCTTATGAGCAGCTGTCTTTT CTAAAGAACCAGACTGAATTCCTCTCCAATATCTGCT TTTTTCAACAGGGTGATTGGAATGGTGCAGGTTGTCA TACAAATTACAGGTATCTCGAATGTTTTAAATATTTTA TACTGGTTATAATACACGTAGCCCCTTGAACAGGATA TATTACTCGAAATGGTATTAAATTTGTAATTCATGGCA AACCACACGTCAATTTATTTTGTAAATGACAAATACTT CTTTTAGCATTATGGCATATCCATCTTAATGCAGCAC AGTACACTATTGAATTAGCATTCCAAAACTTCGAATAT 22 UA 115535 C2 3 Щириця Палмера гДНК Контиг 6862 CGCCTGGCTGTCTTAAGTACCCTTATATAGACATTTA AATCTATACTTGTTACTGTAATTGCTAGTGTCTATGGA ATTCACTATACTTCACATAGCTGAGTTGAAGTTGATG TTAGTGTCTGTGATTTTTGTAGTACAAAGACCATGAG AGAAGATGGTGGTTATGAAGCAATTAAGAAGGCAATT TTGAATCTATCATTACGCCACAAGGACCATATCAGTG CATATGGAGAAGGAAATGAACGAAGATTGACAGGGA AGCACGAGACCGCCAGCATCGACACTTTCTCTTGGG TATACAGATATATATGCCTTTTCTTGACGTCATGTTGA ATATATTATTTTGCATATTATCTAACAAAAATATGATTT TTTTTGTAACTTTCAGGGTGTTGCCAATCGTGGTTGC TCTATCCGTGTGGGTCGTGACACGGAAAAGGCAGGA AAAGGTAATAGTATCCTCTTGGACCTTGGTTAAAGAC TATGACTACTGATTGGATGTTCTTTTTGTTTGCATTTT GCTCCCCGGATTTAGAAATAACTCTTTCTCCCATTTC CGTGCTCTGCAGTGAGTAACAACCAAATAGAATTCAC TCCTTCCGTTTTTCTCAATTCACCGCACCTTCTATTTT TGTCTATCCCCACGAAACTGCCCCATTACTATTTTCG GACATGACTCACTACTTTAACACATCTTTACTCTCGAT ATTCTCTCTCTTATTTGCAAATGACCCCACCATTAACC CATTCAACCCAACTTTTAATCGCCGTCCCATTCCCAC TTGGGGCAAAATCACAAGGACAAAGGAGTACAAATC AATTGCAATCCTGGCTAGTTCTGATTTCCAATCTCCG ATTTCTCTGCAGGTTATCTAGAAGATAGGCGACCTGC CTCAAACATGGACCCATACGTGGTAACAGGTTTGCTC GCCGAAACTACAATACTTTGGGAACCCACGCTTGAG GCCGAGTCACTTGCAGCTCAAAAACTCGCTCTTAATG TGTAATTCCAACCATAAAATGAACCAGAATATCGCAT ATTCTTGAGCGAAGAAACTGTTTCATGTGCCCAGAAT TTGCTTGTTTTTAGTTTTTAGTATCCTGGGACTGAGAC TGGCACTGGGGCTCAAAAACCTTTGCTTCTGGTAGTT TGTTTTGGGAGTTAGAAGAGAAGAATAGTTTGTGATT GTTACTAATTTATGAAGCTCAAGCTCAGCATTAGTTCT ATTCCAGTTTAAGG AGCTGTATTAAGATGCTATATTAGGGTTTTTGCTACA CTTGAACATGGGTAAATGGTACCCAATTGGTTGAAAC TTGAAACTAGGATATTTCAATTGTGATTTTTCCCTTTG TTTGACTTTCCCCGGATGCTTTGTGGGTTGATATTGG CGTGGTAATGGGGAAGATCAATTGTTTTAGGATCAG GTTTTAGGTATTCATTACCTCTAAACTCCCTTTATGGT ATGATTTGTCGCCTTCCTTCCCTTTCCAGACCCTGAT CATAGTTTCCTTATGAGTGGGATACACTAGTCAAGAT GATCATGATGATGATGATAATTTTAGCTATTCCTTGTG CTAGAGTCATTGATCAGTGTTACAAATTTCCCAAACA AATTTGATGAGATGGAAGATAATTATTAAAGCTACATT TTGTCGGAATACTATTGAAATTAATCACTTGTTAGAAT ATGTAAGTAGGTTATTACATTATTAGTCACTTGTTAAT GTCATTTTAATATGGAGGGAGTATGGTTTTGTGGTTT TCCTAGCTAACAATCTATACCTGCGGTCCTGCTGGCT ATTTCTTTCCAGGCTCATGTTAGTATAGTGTATAAGTG GCCCCAACTTATCAGAAAGATGGATTTTGGCATTAAC TATGTGACTATGTCCAAGTATATTGAACACTTTTATTT CTAGTTTCATTTATCTCCTGTACTTATTTGAGACCTGC TCTTGTGCTTCATATAAAAAATTACACAAAGGTTACAA AACACTGTTGGACTAAAACATAAGGAACTCGCCTTTA CAACAATTGAAATTTTCTCATCTCATTCATATAGTGAG CTACTATTTGTGCGCGAGCGATTACCGAATAGTGATT ACATCATCTCTTTTGCCTATGTGTTTGTATTACTTGCA TTTGCATACTCATGTCATGTACATGTGGATTTTCATGC TCAAACTTGAATACTTTATGAAGACATATCTGAAACAC 23 UA 115535 C2 ATGTGCATTTGTATTACCACATTTTTTTATCCAAAATG ATATTCCAAATGTATTGTATGTCGGGGTGCCCAGCAT TTAATCCAAAAGTTTCATAAACCTTGAGTGACCGAGA TGCAAATCTGTGGCAATCTGATCTAAAGGTTTCATAA ATCCTAGAATTCAAAGCAGACATATCTGAAACACATA AATTAACGTGTTATGCCCATGTACTCGAAAATGTTTC CTGGAAACTGAGATTGGTTTTTTAACATAAGTTGACT CTTGACCATTGTGTGTTTGGTTAGCAATCTACCTGAG TAACTCACATATGTAATACCCTAACATATTTTATTTGT GTTGTAGGTAAAAGTGACCAAACATGGCACAAATACT TGCACCTTACATGCAATGTCAGATGAAGTTTTCAAAA GGCTCCACAAGTTCAATGACATCAAATCCTTGGACTT CAATATTTCTTAAAGAAAATAAAAAGGGATCAATTAAA TGCTCTAGTAAGTTCAGAGTATGTGCTTCTCTCCAAT CTGATAATAGCACAGTAAACAGGGTGGAGCAGCTAC TCAACTTGGATGTCACTCCATACACTGACAAGATAAT TGCAGAGTACATTTGGTATATGTTTTTTCTTTGCTATA TGATCAAAAATGTCGCTGACTCTAGGCCAGACGTAAC ATTAATTTTTTTTAGCTAATGTTTGTGCTACTTTTGGTT TTTTCTCATCTGTAGATAAGACATTCTTGGTGGTTTCT ACTTTCAATCTGATTATAGAACTAATTGATCTACGATT GTTCTTTGGAACAGGATTGGAGGATCTGGTATTGATG TCCGTAGCAAATCAAGGGTACAATAACACTGATGCTG TCGATTTATTGTTAAACCAGCATTTAGATGTTAAGTTT ACTCCATTTTTTCCCTGACCGATGTTTCTTAATATACC AGACAATCTCTAAACCTGTTGAGCACCCATCTGAGCT TCCCAAGTGGAATTATGATGGCTCAAGCACTGGACA AGCGCCAGGAGAGGACAGTGAAGTAATCTTATAGTA AGATCTTGGGGCAGCTATAAACCTTTATTACTTTGCT CAATTATTGTTGTCCTTGTTTTTGCTTGACTATCTTTT GAGGCTTGAGAGTTCTTGTCACTGAACTAACTCAAAA AGCTTAAGCTTTCATTTGGTTCGATTCCTTGACATGG TATCGGAAGGTTAGCTTACGGGTTTGAATCTCATTTA CCCTCCGGTAATTATTATTACTAAGTATTTGTGTCGTG TCCACACTTCTAGTTAGGGCTTTCGTGTGAGGGGGC GTGGTAGGACCTCAACCATCAACTTAAGATTTGTTTG AGTTGATTCCTAGACAATTCTTGTCACTCATTAATTCA TAATCATGTCATTCATATGCAGCCCTCAAGCAATTTTC AAGGATCCATTCCGTGGTGGTAATAATATCCTTGTGA GTCATATTCTATCTGACTGTTATGAAACTCAATATTTA TTCCAAAATTATGATGTTACCTCAATTGTTGAGATTAG AATTTTAATTATGCATTGCCATGTAAATTTAGGTAATC TGTGACACATACACACCAGCAGGCGAACCCATCCCC ACTAATAAAAGATACAGGGCTGCACAGATCTTTAGCG ACCCAAAGGTTGTTTCTGAGATTCCATGGTAAGAAAT TCCCATCATTGACAATATTTTGTTCCTAATCATATTTC CTAATTTAACACTCTCCCTTGCAAGGGTGAACTTTAT AGAAAGTTGACCCACTATCTGAGAAATGACAAATTAA AAACTGATTTCTCTAGTTTTCTAATAAAAGACAATGCA TAAATTATGTGATGGATACCACTAAGGGAATAACCTC ACCAAAGTTCACTTAAATTTGAAGGTTAAATTGTGGG ATGTACAATCTAAACTCTCAATGTTTCTTTTGGATTCT AGGGAATGCTTATCCAAGCTTAAAACTGATCTTTTTG AATTTTGAGTAAGATTGAACTCCGAATTCATTCAAAAT TTTCAAGAGCTCGTCAATATTACAACTCAAGCTTTGA CAAAATCAAAACAATCATTCGTGTAAACACAATGAATT TGTTTAAGGTGTTCAACTTTGTATTCTCTAAATAATGC ATACAACCTAGGGCCCCAGGCTACTTCAACGAGAAC ATACCTCTAGTCCGACTCTTACTAGGAATTTCCTAAAT AATGCTAAATCAAATATCTTCTGGATTGATTTAGCTGC 24 UA 115535 C2 AAGTATCAAACAATATATTACTATTACTCGAATTAAAA AGTAATCCTACCCTTATCCGGAGTGTAAAAATATCCG GCTATCCTGTAAGAAAACCATAACCTAAACCTACGTC TACTAGGATATGGTCAAACTATGAAGAAGCTTCCAAG GATATTTGACATGGATAGAACTTTGACTTTTAACTCAT ACAAGCCAACATCACTTTGCAAACAAGTGAATAAATG ATCCAAGCTGGGACTACGGAGAGGACAAAATGCGCA CTTGTTCACATTAGAAAAATTACTAACAGGAAGTATTC ATTTGAACAAGCTAGGACTTCAAGTAATGCCTTTGAT CTTGTGTCAATGGTTAGCAGTCGTAATACAGTATGTC ACACACTTGTAATTAACATAACAAATCTGTTGTTTTAA ATATGACGGTTTGAATACCCATGTTCTACGGGAGGCA TTTCACTATAAAGGTCAACCGTTTTTGCCCAGTTTGG AGCTTGACAATTGCAAAAGTAATTCAGGGGTCTGCTT TTCTAGAATTCTAGATCATAAAAGCCTCTTTGATCTGT GTTTTCTCTTTTTTTTTTCCCTCTCTACTCTTCGATTTA TTCTGTTAATTTTACTTCTACAGGTTTGGAATAGAGCA GGAATACACGTTGCTCCAACAAAATGTTAAATGGCCT TTGGGATGGCCTGTGGGAGCCTATCCTGGTCCTCAG GTGTGTTAATTCCCCATATTATCAACAGTTTCTTTGAA GATAATGCTTTGTTTCTGTTATATAATATGATTTTTTTG ATATGTCTAGGGTCCATACTATTGTGGTGCTGGTGCT GACAAGTCTTTTGGACGTGACATATCTGATGCTCATT ACAAAGCTTGCTTGTATGCTGGCATCAACATTAGTGG CACAAATGGGGAAGTTATGCCTGGCCAGGTTTCGTC TTGCATCACTCTCATGTGTTATTGTTAATTAATATGTC TTTGAAGTTGGTTACGAATAGCTACCTCCACTTGCCC CTGCAGTGGGAATTCCAAGTTGGCCCAAGTGTTGGT ATTGAAGCTGGAGATCATATCTGGTGTGCGAGATATA TTCTTGAGGTACTCTCCTGATAGTTTTATGTTTGTCGA TTTTGTGTTAAATTGTGGTAAACCATAAAGTACATTTG TTTAATTAAAAATTTGGCCTTAGTGGTTAAAATTATAT AATTAACCTTCAAACTAATAAGTCAATAGATTTGACAT TGAAGTTGTGGCTGATCAAGATCAAACTAGGACCATA TTATGATGGAAACAAAAACATAATTTTGACCCATATTC GGTATGCGATTGATTCAATCAAGAAACTTAATGGACT TTCGAAAGTAAATAAAATAATCCTTCTTTATGAAGAAA ATTTGAATACAGGTTTATAAGTGATCCAAATTCAAGC CCAATCAATGGAAGAAAGCCTATTACACTTCTAGGAA CATAGACACGGCAGTTTTCTTATAGAATGTTATTGAC TCATCGAGAGTTGCAATTAAACTTGGTTGTTCAACAA GATTAAGCTACATGTCTTTTGGTTTTGTATGGGATGC ACCGTAAATTCTGGTTTTTCCTATGACCCTCACAAGC CAAGCCTATTGAGGGGATCAGATCTCAGTTCTTTTAA TGATTGTATACTCTGTAGAAAAATTGAGGAGATATCA CCATTTACAAGCTATTTTCATTGAATTTAACAAGTTTT CTCTCCTTCAAACAGAGAATTACTGAACAAGCTGGTG TGGTTTTGACTCTTGATCCAAAGCCTATTGAGGTACC GCCTTGTGCTTTTGTATATGTAATGATCAGCTGTCTTT CCTGAAGAACCAGACTGAATTCCTCTCCAATATCTGC CTTTTTCAACAGGGTGATTGGAATGGTGCAGGTTGC CATACAAATTACAGGTATCTCGAATGTTTTAAATATTT TATACTGGTTATAATACACGTAGCCCTTGAACAGGAT ATATTACTCGAAATGGTATTAAATTTGTAATTCATGGC AAACCACACGTCAATTTATTTTGTAAATAACAAATATC TCTTCTTTTAGCTTCTTATGCATATTCCTTAGTGCAAC AAATATCATTTGCCTTTTGTTTTAGTACTAATATATGTT ACTGATTTTGTAAGACATTATGGGATATCCGTGTAAA TGTAGCACAGTATCTAATGAATCAGCATCCAAGTGTT CGAATTTTGGTTAACTGCCTCAAATCTGATTTTTCTGT 25 UA 115535 C2 4 Щириця смітна кДНК Контиг 1618 TGGCGCTCAACCAAAATTGTAAAATGAATGATGTTCT CATGTACACGCTAGCCTGTAGCTTCAGCCACAAGTTT GAACGAGCTACCCATATTTTCTCACTGTACCTTTTTG ATATAGATTTTATGCTCCGTATAACCAATATTTCTGAG ATATGAGATGAGGCCTATCTAGTGTGGGGTGGATAA AAAGATTTTCACCGCAATTCTTTTTAAAGCGTTAGTAA CACTAACATAGACCTTTTAAACTATTCTTGTAAGCGTA AGTACTGTAGTTGAGTTGAAACATTCCGAGAGCTTAA TTGTCTCATTTTGCCAACGCTAAGAAAATTGATGAGC AAGGTTGTAATTTTTGTAGTACAAAGACCATGAGAGA AGATGGTGGTTATGAAGCAATTAAGAAGGCAATTTTG AATCTTTCATTACGCCACAAGGACCATATCAGTGCAT ATGGAGAAGGAAATGAACGAAGGTTGACAGGGAAGC ACGAGACCGCCAGCATTGACACATTCTCTTGGGTATA CTGATATATATGCCTATTCTTGACGTCATGTTGAATAT ATTATTTTGCATATTATCTAACAAAAATATGATTTTTTT TGTAACTTTCAGGGTGTTGCCAATCGTGGTTGCTCTA TCCGTGTGGGTCGTGACACGGAAAAGGCAGGAAAA GGTAATATTATTCTCTCGTTGGAAGACTATGACTGTC TCACATTGTCGTTGTCTGTAGTAAGTAATGTCCAAAT ATAAAATCATCATCATACCCAATATCCCGCTCGAAAG CAGGGTTGGGTGAGGGAAGGTGACGGACAATCCAT ACCCGTAATCCCTTCACAGGGAGGACTAGAACATAC TACTCATTTACACATCTTGAATGAAGCAGTCTCGTTTC ATGGGGTGACATCATAATAGTCGGATATAAAGCAATA TTTATGATTTCCAAGGTTTGATTTCTCTACAGGTTATC TGGAAGATAGACGGCCTGCCTCAAACATGGACCCAT ACGTGGTAACAGGTTTGCTCGCAGAAACTACAATACT TTGGGAGCCAACACTTGAGGCTGAGGCACTCGCAGC CCAAAAACTCGCCCTTAATGTGTAATTCATTCATAAAT CGTACCAGAGTATCGCATATTCATGAACGAGGGAAC TCTTTCACGCGCCCAGAATTCGCTTTTTTTTAGTTTTT AGTATCCTGGGTATGTGAGTGTTTTCATTTGTGACCT TTGCTTCTGATCATTGTTTGTTTTGGGAGTTCAAGAG AAGAATAATTTGTAACAGTTGCCTTCTTTATTTTTGCT CTTATGAAGCTCAAGCTCAGTATTAGTTATATTCCAG ATTAAGGAATGAACTTCAAAATCCTTTGTTACTCATCT TCAACTCCATTGAATATACACTTATGTCCCGTTGG GGGACAATCATACTCCTATAACAACTTTAATCATACA CTCTCTCTTCTTTATCTCTCTATATTCTTCACTCTCTCT CTAGTTAGTTGACGCCGCCGACCACCTTTTCCGAAC CCAGTGACCAATTATGGCACAGATACTTGCACCTTAC ATGCAATGTCAGATGAAGTTTTCCAAAGGCTCGACTA GTTCAATGACATTAAGTCCTTGGACTTCCATATTTCTG AAAGAAAACCAAAAGAAATCGATTAAATGTTCTAGTA AGTTCAGAGTATGTGCTTCTCTCAAGTCTGAAAACGG CACTGTAAACAGGGTGGAGCAGCTACTCAACTTGGA TGTCACTCCATACACTGACAAGATAATTGCGGAGTAC ATTTGGATTGGAGGATCTGGTATTGATGTCCGTAGCA AATCAAGGACAATCTCTAAACCTGTTGAGCACCCATC TGAGCTTCCCAAGTGGAATTATGATGGCTCAAGCACT GGACAAGCGCCAGGAGAGGACAGTGAAGTAATCTTA TACCCTCAAGCAATTTTCAAGGATCCATTCCGTGGTG GTAATAATATCCTTGTAATCTGTGACACATACACCCC AGCAGGCGAACCTATTCCCACTAATAAAAGATACAGG GCTGCACAGATATTCAGCGACCCAAAGGTTGTATCT GAGGTTCCATGGTTTGGAATAGAGCAGGAATACACTT TGCTCCAACAAAATGTTAAATGGCCTTTGGGGTGGC CAGTGGGAGCTTATCCTGGTCCTCAGGGTCCATACT ACTGTGGTGCTGGTGCTGACAAGTCTTTTGGACGTG 26 UA 115535 C2 5 Щириця смітна кДНК Контиг 1550 ACATATCTGATGCTCATTACAAAGCTTGCTTGTATGC TGGCATCAACATTAGTGGCACAAATGGGGAAGTTAT GCCTGGCCAGTGGGAATTCCAAGTTGGCCCAAGTGT TGGTATTGAAGCTGGAGATCATATCTGGTGTGCGAG ATATATTCTTGAGAGAATTACTGAACAAGCTGGTGTG GTTCTAACTCTTGATCCAAAGCCTATTGAGGGTGATT GGAACGGTGCAGGTTGCCATACAAATTACAGTACAA AGACCATGAGAGAAGATGGTGGTTATGAAGCAATTAA GAAGGCAATTTTGAATCTATCATTACGCCACAAGGAC CATATCAGTGCATATGGAGAAGGAAATGAACGAAGAT TGACAGGGAAGCACGAGACCGCCAGCATCGACACTT CTCTTGGGGTGTTGCCAATCGTGGTTGCTCTATCCGT GTGGGTCGTGACACGGAAAAGGCAGGCAAAGGTTAT CTGGAAGATAGGCGGCCTGCCTCAAACATGGACCCA TACGTGGTAACAGGTTTGCTCGCAGAAACTACAATAC TTTGGGAACCAACACTTGAGGCTGAGGCACTAGCAG CCCAAAAACTCGCTCTTAATGTGTAATTCAATCATAAT CGTGCCAGAATATCGCATATTCATGAACGAGGGAAC TCTTTCACGTGCCCAGAATTTGCTTATTTTTAGTTTTT AGTATCCTGGGTATGTGAGTGTTTTCATTCATGACCT TTGCTTCTGATCATTGTTTGTTTTGGGAGTTCAAGAG AAGAATAATTTGTAACTGTTGCCTTCATTATTTTTGCT GATTTCTTAATTGAAGTTCCCAAAAACAAATAACATAC TCATCTTCCTCTTCTCTTATTCATCCAATTTTATTCTTC CCCAAAAAACATGTCTCTTCTTACAGATCTCATCAATC TTAACCTCTCTGACTCCACTGAGAAGATCATTGCTGA ATACATATGGATTGGTGGATCTGGTATGGACATGAGA AGTAAAGCAAGAACACTTGATGAACCTGTGAGTGATC CTAAAAAGCTTCCAAAATGGAATTATGATGGATCTAG CACTAATCAGGCTCCTGGTGAAGATAGTGAAGTCATT CTATACCCACAAGCTATCTTTAGAGATCCATTCAGGA GGGGCAACAATATCCTTGTTATGTGTGATGCCTATAC TCCACAAGGAGAGCCAATCCCAACCAACAAGAGACA TAATGCTGAAAAGATATTCAGCCATCCAGATGTTGTT GCCGAGGAACCATGGTACGGTATCGAACAGGAGTAC ACCTTGCTGCAAAAGGATGTTAACTGGCCCCTTGGT GGCCTGTAGGGGGTTTCCCTGGTCCACAGGGCCCG TACTACTGTGGTGTTGGTGCTGATAAAGCTTTTGGAA GGGACATTGTTGATTCACACTACAAGGCTTGCCTCTA TGCAGGAATCAACATTAGTGGAATCAATGGAGAAGTT ATGCCCGGACAGTGGGAATTTCAAGTCGGCCCGTCT GTTGGAATCTCTGCTGGAGACGAGTTGTGGGTTGCT CGTTACATTTTGGAGAGGATTACCGAGATTGCTGGA GTAGCTCTTTCTTTTGATCCGAAACCAATTCCAGGTG ACTGGAATGGTGCTGGTGCTCACACCAATTACAGCA CCAAGTCGATGAGGGAAGATGGGGGCTACGAGGTG ATTAAGAAGGCCATCGAGAAGCTCGGGTTGAGGCAC AAAGAGCACATCTCTGCTTATGGAGAAGGAAACGAA CGTCGTCTCACTGGTAGACACGAAACCGCCAGCATT TCCACTTTCTTGTGGGGGGTAGCCAACCGAGGAGCA TCAGTTCGTGTTGGACGAGACACGGAGAAGAATGGC AAAGGATATTTTGAAGACAGGAGGCCGGCTTCTAAC ATGGACCCATATGTCGTTACATCAATGATCGCAGAAA CTACTCTTCTTTGGAAGCCATAGAGCGGCCACGAGC TTAATCAAGTAATTTGCTATTAACCAGCAGATCGATTC GCCTCTTGTGTTCTGCATCTGCCTATTCAAGTTGTTC GCCTTTTTGTTCATTTTTTACACTTCCATTCAGACCGA TTATCATGTACAAACCGTCGCTTGCTGTTTGCTGTGC GCGGGTAATAACATCAAATCCTTTGTCGCTTCGACAA TATTGAAAATAACATTGTACCCTTCTTATTTCTTCCTA 27 UA 115535 C2 6 Щириця смітна гДНК Контиг 2000 7 Щириця гДНК 208 GAAAATATGGAAAGTCGGAGAGGATCATTTCTCTGCC ATTATTGTGATGAATTTTTTTTGCATTGTTTGCAATTTA TTGTCTTCAAATCTTTGAGCCTTATCTCGATCATCTCG ATCTTAATAAGCTATTAATCGTATGTGGGTGTTTTCAA GCA TGTAATACCCTAACATATTTTTTTTGTCGTTGGGAGAA GTGACCAATTATGGCACAGATACTTGCACCTTACATG CAATGTCAGATGAAGTTCTCAAAAGGCTCAACAAGTT CAATGACATCAAATCCTTGGACTTCAATATTTCTTAAA GAAAATAAAAAGGGATCAATTAAATGCTCTAGTAAGT TCAGAGTATGTGCTTCTCTCCAATCTGAAAATAGCAC AATAAACAGGGTGGAGCAGCTACTCAACTTGGATGT CACTCCATACACTGACAAGATAATTGCAGAGTACATT TGGTATATGTTTTTTCTTTGTTATATGATCAAAAGTGT TGATGACTTTAGGCCAGATGTCACATTAATTATTTCAA GCTAATGGTTGTACCAATATGAGTTTCTGCTCATCTG TAGATAAGGCATTCTTGGTGTTTCCTACTTTCAATCTG ATTATAGAACTAATTGATCTACGATTGTGCTTTGGAAC AGGATTGGAGGATCTGGTATTGACGTCCGTAGCAAA TCAAGGGTACAATAACACTGATGCTGTTGATTGATTG TTAAACCAGCATTTAGATGCTGAGCATACTTCATTTTT TCTCTGACCAATGTTTCTTAATATACCAGACTATCTCT AAACCTGTTGAGCACCCATCTGAGCTTCCCAAGTGG AATTATGATGGGTCAAGCACTGGACAAGCGCCAGGA GAGGATAGTGAAGTAATCTTATAGTAAGATTTTGGGG AAGCTACAAACCTTATTACATTTGCTTGATAATTATTG TCCTTGTTTTTGAGTGATTATCTTTTGAGGCTTGAGA GTTATTGTGACTGATCATTAATTCATTATTGTGTGTCA TATTTTCATATACAGCCCTCAAGCAATTTTCAAGGATC CATTCCGTGGTGGTAATAATATCCTTGTGAGTCATAG TCTCTGACTTAGTCATGAATCAGAATATTTATTCCAAC GCTTTTGATGTTACCTCAATTGTTGAGAATATCAATAT AATTTTGCTATGCAATGTAAACTTAGGTAATCTGTGAC ACATACACCCCAGCAGGCGAACCTATTCCCACTAATA AAAGATACAGGGCTGCACAGATATTCAGCGACCCAA AGGTTGTATCTGAGGTTCCATGGTAAGAAATTCCCAT CATTGACAATATTTTGGTCTTAATTGCATTTCATAGTT AACACTTTGCACTGCAAGGATGAATTTTATAGAAAGT TGACACACTATGAGAAATGACAAATGAAAAATTGATT TCTCTCGTCTTTTTTTAAAAGACAATGCATAGACAAAT GAAAAATTGATTTCTCTCGTCTTCTTCTAAAAGACAAT GCATAGATTATGTGATGGGTACCACTAAGGGAATAAC TTAACCAAAGTTCACATAAATTTGAAGGGTAAATTGT GGGATGTACAATCTAATCTCTCAATGGTTCTTCTGGT GTCTAGGGTTAAAACTAATCTTTTTGAGTAAGATAAG ATTGAACTCTCCGAATTCATTAAAAATTTTCAAGAACT CGTCAATGTTACAACTCAAGGTTGGACAAAATCAACA CAATCATTCGTGTAAACACAGCGAATTTGCTTAAGGT GTTCAACTTTGTATTCTCTAAATAATGCATACAATCTA GGGCCCTCGGCTACTTCGACGAGAACATACCTCTAG TATGACTCTTATTAGGATTTTCCTGAATATTGCTAAAT CAAATGTCTTTTGATTTAAAAGTAATCCTACCCTTATC TGGAGTGTAAAAATATCCGGCAATCCAACAAGAAAAC CACAACCTAAACCTACTTCTACTAGGATATGGTCAAA CGATGAAGAAGCTTCCAAGGACATTTGACATGGATA GAACTTTGAGTATTAACTCATGCAATCCAAGATCAATT TGCAAACAAGTGAATAAAGGATCCAAGTTGGGACTTA GGAGAGGACAAAATGCACACTTGTCCACCTTAGAGA AATTACTAACAGGAAATATTTCATT TGCAGGGGGTAGCCAACCGAGGAGCATCGGTTCGT 28