Спосіб якісного і/або кількісного виявлення аналітів (варіанти), спосіб магніторелаксометричного виявлення феромагнітних чи феримагнітних колоїдальних частинок та спосіб імуномагнітографії

1 Спосіб якісного і/або КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і/або твердих фазах, який відрізняється тим, що в імунних методах або інших методах зв'язування як магнітний маркер, що може бути виявлений, використовують феромагнітні або феримагнітні колоїдальні частинки, а релаксацію їх намагнічування визначають як вимірювану величину 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що для виявлення використовують вимірювання комплексної сприйнятливості як функції частоти 3 Спосіб за одним з пп 1 або 2, який відрізняється тим, що як сенсори магнітного поля використовують Superconducting Quantum Interference Devices (SQUIDs), індукційні котушки, магнітометр Fluxgate, сенсори Giant-Magnetoresistance або магніторезистивні перетворювачі 4 Спосіб за одним з пп 1-3, який відрізняється тим, що проводять визначення двох чи декількох різних аналітів у пробі 5 Спосіб за п 4, який відрізняється тим, що застосовують дві або декілька феромагнітних чи феримагнітних речовин з різним часом релаксації за методом Брауна або Неєля 6 Спосіб за одним з пп 1-5, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини мають розмір частинок у діапазоні від 1 до 400нм 7 Спосіб за одним з пп 1-5, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів і/або ЛІПІДІВ 8 Спосіб за одним з пп 1-5, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні чи феримагнітні речовини, розмір частинок яких знаходиться в діапазоні від 1 до 400нм 9 Спосіб за одним з пп 1-5, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні і феримагнітні речовини, стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів, тензидів, полімерів і/або ЛІПІДІВ 10 Спосіб за одним з пп 1-5, який відрізняється тим, що використовують сполуки, які містять речовини зі специфічною структурою, якими є антитіла, фрагменти антитіл, біотин чи речовини, які зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їх антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 11 Спосіб за одним з пп 1-5, який відрізняється тим, що його використовують у визначенні репродуктивної здатності, визначенні пстосумісності, в алергологи, інфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, вірусологи, бактеріологи, токсикології, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній діагностиці 12 Спосіб за п 10, який відрізняється тим, що зв'язаними з рецепторами агоністами є цитокши, лімфокши або ендотеліни 13 Спосіб за одним з пп 10 або 12, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну О 00 со ю 54384 структуру, мають постійну зв'язування в діапазоні 105 -10 Ї 5 (моль/л)1 14 Спосіб за одним з пп 1-13, який відрізняється тим, що використовують комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з речовинами, що мають специфічну структуру, чи комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з аналітами, які виявляються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин чи речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи або їх антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 15 Спосіб КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах за допомогою виміру магнітної релаксації магнітних частинок, який відрізняється тим, що в імунних методах або інших методах зв'язування як магнітний маркер, що може бути виявлений, використовують феромагнітні чи феримагнітні колоїдальні частинки, релаксація яких за методом Брауна в умовах вимірювання протікає швидше, ніж релаксація за методом Неєля 16 Спосіб за п 15, який відрізняється тим, що як сенсори магнітного поля використовують Superconducting Quantum Interference Devices (SQUIDs), індукційні котушки, магнітометр Fluxgate, сенсори Giant-Magnetoresistance або магніторезистивні перетворювачі 17 Спосіб за одним з пп 15 або 16, який відрізняється тим, що роблять визначення двох чи декількох різних аналітів у пробі 18 Спосіб за п 17, який відрізняється тим, що застосовують дві або декілька феромагнітних чи феримагнітних речовин з різним часом релаксації за методом Брауна або Неєля 19 Спосіб за одним з пп 15-18, який відрізняється тим, що для КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах за допомогою магнітних вимірювань релаксації використовують сполуки, що складаються з комбінації феримагнітних чи феромагнітних колоїдальних частинок з речовинами, що мають специфічну структуру, чи з речовинами, які визначаються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин чи речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи або їх антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 20 Спосіб за одним з пп 15-18, який відрізняється тим, що для КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах за допомогою магнітних вимірювань релаксації використовують сполуки, що складаються з комбінацій феромагнітних чи феримагнітних колоїдальних частинок з речовинами, що мають специфічну структуру, або з речовинами, що визначаються, час релаксації яких за методом Брауна в умовах вимірювання менший, ніж час релаксації за методом Неєля, при цьому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи або їх антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 21 Спосіб за одним з пп 19 або 20, який відрізняється тим, що зв'язаними з рецепторами агоністами є цитокши, лімфокіни або ендотеліни 22 Спосіб за одним з пп 19-21, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну структуру, мають постійну зв'язування в діапазоні 105 10 1б (моль/л) 1 23 Спосіб за одним з пп 15-22, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини мають розмір частинок у діапазоні від 1 до 400нм 24 Спосіб за одним з пп 15-22, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних або полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів і/або ЛІПІДІВ 25 Спосіб за одним з пп 15-22, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні або феримагнітні речовини, розмір частинок яких знаходиться в діапазоні від 1 до 400нм 26 Спосіб за одним з пп 15-22, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні і феримагнітні речовини, стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних або полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів, тензидів, полімерів і/або ЛІПІДІВ 27 Спосіб за одним з пп 15-22, який відрізняється тим, що використовують сполуки, які містять речовини зі специфічною структурою, якими є антитіла, фрагменти антитіл, біотин чи речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їх антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 28 Спосіб за одним з пп 15-22, який відрізняється тим, що його використовують у визначенні репродуктивної здатності, визначенні пстосумісності, в алергологи, шфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, вірусологи, бактеріологи, токсикологи, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній діагностиці 29 Спосіб за одним з пп 15-22, який відрізняється тим, що використовують комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з речовинами, що мають специфічну структуру, чи комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з аналітами, що виявляються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин чи речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, агоністи, специфічно зв'язані з рецепторами, або їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 30 Спосіб КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах за допомогою комплексної сприйнятливості як функції частоти, який відрізняється 54384 тим, що в імунних методах або інших методах зв'язування як магнітний маркер, що може бути виявлений, використовують феромагнітні чи феримагнітні колоїдальні частки, релаксація яких в умовах виміру за методом Брауна протікає швидше, ніж релаксація за методом Неєля 31 Спосіб за п ЗО, який відрізняється тим, що як сенсори магнітного поля використовують Superconducting Quantum Interference Devices (SQUIDs), індукційні котушки, магнітометр Fluxgate, сенсори Giant-Magnetoresistance чи магніторезистивні перетворювачі 32 Спосіб за одним з пп ЗО або 31, який відрізняється тим, що роблять визначення двох чи декількох різних аналітів у пробі 33 Спосіб за п 32, який відрізняється тим, що застосовують дві або декілька феромагнітних чи феримагнітних речовин з різним часом релаксації за методом Брауна чи Неєля 34 Спосіб за одним з пп 30-33, який відрізняється тим, що для КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах за допомогою вимірювань комплексної сприйнятливості як функції частоти використовують сполуки, що складаються з комбінацій феромагнітних чи феримагнітних колоїдальних частинок з речовинами, що мають специфічну структуру, або з речовинами, що визначаються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди або протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 35 Спосіб за одним з пп 30-33, який відрізняється тим, що для КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах за допомогою вимірювань комплексної сприйнятливості як функції частоти використовують сполуки, що складаються з комбінацій феромагнітних чи феримагнітних колоїдальних частинок з речовинами, що мають специфічну структуру, або з речовинами, що визначаються, час релаксації яких за методом Брауна в умовах виміру менший, ніж час релаксації за методом Неєля, при цьому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 36 Спосіб за одним з пп 34 чи 35, який відрізняється тим, що зв'язаними з рецепторами агоністами є цитокіни, лімфокши або ендотеліни 37 Спосіб за одним з пп 34-36, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну структуру, мають постійну зв'язування в діапазоні 105 10 1б (моль/л) 1 38 Спосіб за одним з пп 30-37, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини мають розмір частинок у діапазоні від 1 до 400нм 39 Спосіб за одним з пп 30-37, який відрізняєть ся тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів і/або ЛІПІДІВ 40 Спосіб за одним з пп 30-37, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні чи феримагнітні речовини, розмір частинок яких знаходиться в діапазоні від 1 до 400нм 41 Спосіб за одним з пп 30-37, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні і феримагнітні речовини, стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів, тензидів, полімерів і/або ЛІПІДІВ 42 Спосіб за одним з пп 30-37, який відрізняється тим, що використовують сполуки, які містять речовини зі специфічною структурою, якими є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 43 Спосіб за одним з пп 30-37, який відрізняється тим, що його використовують у визначенні репродуктивної здатності, визначенні пстосумісності, в алергологи, шфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, вірусологи, бактеріологи, токсикологи, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній діагностиці 44 Спосіб за одним з пп 30-39, який відрізняється тим, що використовують комбінації з феримагнітних чи феромагнітних речовин з речовинами, що мають специфічну структуру, чи комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з аналітами, які визначаються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, агоністи, специфічно зв'язані з рецепторами, чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 45 Спосіб КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах, який відрізняється тим, що речовини, які зв'язують аналіти і мають специфічну структуру, спочатку - маркують феромагнітними чи феримагнітними колоїдальними частинками, а потім - ці марковані речовини, що мають специфічну структуру, використовують у вимірюваній рідкій чи іммобілізованій пробі, вимірювану пробу намагнічують за допомогою прикладеного ззовні магнітного поля, а після відключення зовнішнього поля вимірюють релаксацію намагнічування магнітних маркерів за допомогою сенсорів магнітного поля, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди чи протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, 54384 дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 46 Спосіб за п 45, який відрізняється тим, що для виявлення використовують вимірювання комплексної сприйнятливості як функції частоти 47 Спосіб за п 45, який відрізняється тим, що зв'язаними з рецепторами агоністами є цитокши, лімфокши або ендотеліни 48 Спосіб за одним з пп 45 або 47, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну структуру, мають постійну зв'язування в діапазоні 105 -10 ї 5 (моль/л)1 49 Спосіб за одним з пп 45-48, який відрізняється тим, що як сенсори магнітного поля використовують Superconducting Quantum Interference Devices (SQL)IDs), індукційні котушки, магнітометр Fluxgate, сенсори Giant-Magnetoresistance або магніторезистивні перетворювачі 50 Спосіб за одним з пп 45-49, який відрізняється тим, що роблять визначення двох чи декількох різних аналітів у пробі 51 Спосіб за п 50, який відрізняється тим, що застосовують дві чи більше феромагнітні або феримагнітні речовини з різним часом релаксації за методом Брауна чи Неєля 52 Спосіб за одним з пп 45-51, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини мають розмір частинок у діапазоні від 1 до 400нм 53 Спосіб за одним з пп 45-51, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів і/або ЛІПІДІВ 54 Спосіб за одним з пп 45-51, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні чи феримагнітні речовини, розмір частинок яких знаходиться в діапазоні від 1 до 400нм 55 Спосіб за одним з пп 45-51, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні і феримагнітні речовини, стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів, тензидів, полімерів і/або ЛІПІДІВ 56 Спосіб за одним з пп 45-51, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять речовини зі специфічною структурою, якими є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 57 Спосіб за одним з пп 45-51, який відрізняється тим, що його використовують у визначенні репродуктивної здатності, визначенні пстосумісності, в алергологи, інфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, вірусологи, бактеріологи, токсикологи, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній діагностиці 58 Спосіб за одним з пп 45-51, який відрізняється тим, що використовують комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з речовинами, що мають специфічну структуру, чи комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з аналі 8 тами, які визначаються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, агоністи, специфічно зв'язані з рецепторами, чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 59 Спосіб КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах, який відрізняється тим, що аналіти спочатку - маркують феримагнітними чи феромагнітними колоїдальними частинками, а потім - ці магнітно марковані аналіти використовують у вимірюваній рідкій чи іммобілізованій пробі, до якої додають речовини, що специфічно зв'язують аналіти, вимірювану пробу намагнічують за допомогою прикладеного ззовні магнітного поля, і після відключення зовнішнього поля вимірюють релаксацію намагнічування магнітних маркерів за допомогою сенсорів магнітного поля 60 Спосіб за п 59, який відрізняється тим, що для виявлення використовують вимірювання комплексної сприйнятливості як функції частоти 61 Спосіб за одним з пп 59 або 60, який відрізняється тим, що як сенсори магнітного поля використовують Superconducting Quantum Interference Devices (SQUIDs), індукційні котушки, магнітометр Fluxgate, сенсори Giant-Mag netoresistance або магніторезистивні перетворювачі 62 Спосіб за одним з пп 59-61, який відрізняється тим, що роблять визначення двох чи декількох різних аналітів у пробі 63 Спосіб за п 62, який відрізняється тим, що застосовують дві чи більше феромагнітні чи феримагнітні речовини з різним часом релаксації за методом Брауна чи Неєля 64 Спосіб за одним з пп 59-63, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини мають розмір частинок у діапазоні від 1 до 400нм 65 Спосіб за одним з пп 59-63, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів і/або ЛІПІДІВ 66 Спосіб за одним з пп 59-63, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні чи феримагнітні речовини, розмір частинок яких знаходиться в діапазоні від 1 до 400нм 67 Спосіб за одним з пп 59-63, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні і феримагнітні речовини, стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів, тензидів, полімерів і/або ЛІПІДІВ 68 Спосіб за одним з пп 59-63, який відрізняється тим, що використовують сполуки, які містять речовини зі специфічною структурою, якими є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибо 54384 нуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 69 Спосіб за одним з пп 59-63, який відрізняється тим, що його використовують у визначенні репродуктивної здатності, визначенні пстосумісності, в алергологи, інфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, вірусологи, бактеріологи, токсикологи, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній діагностиці 70 Спосіб за п 68, який відрізняється тим, що зв'язаними з рецепторами агоністами є цитокши, лімфокши чи ендотеліни 71 Спосіб за одним з пп 68 або 70, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну структуру, мають постійну зв'язування в діапазоні 105 -10 Ї 5 (моль/л)1 72 Спосіб за одним з пп 59-63, який відрізняється тим, що використовують комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з речовинами, які мають специфічну структуру, або комбінацію з феримагнітних чи феромагнітних речовин з аналітами, які визначаються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, агоністи, специфічно зв'язані з рецепторами, чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 73 Спосіб КІЛЬКІСНОГО виявлення прив'язаних до твердої фази аналітів, який відрізняється тим, що речовини, які зв'язують аналіти і мають специфічну структуру, або аналіти, що зв'язуються речовинами, які мають специфічну структуру - маркують феромагнітними чи феримагнітними колоїдальними частинками, які релаксують в діапазоні часу вимірювання, причому феромагнітні чи феримагнітні колоїдальні частинки вибирають таким чином, щоб час релаксації за методом Брауна в умовах виміру був менший, ніж час релаксації за методом Неєля, а потім - вказані речовини, які мають специфічну структуру, використовують у вимірюваній іммобілізованій пробі, вимірювану пробу намагнічують за допомогою прикладеного ззовні магнітного поля відповідної напруженості, і після відключення зовнішнього поля за допомогою сенсорів магнітного поля вимірюють релаксацію намагнічування магнітних маркерів, причому до аналізу залучають різні параметри релаксації зв'язаних з аналітами відносно незв'язаних магнітних маркерів, при цьому речовинами, що мають специфічну структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди або протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеїни 74 Спосіб за п 73, який відрізняється тим, що аналіти, які визначають, маркують феромагнітними чи феримагнітними колоїдальними частинками, що релаксують в діапазоні часу вимірювання і які вибирають таким чином, щоб час релаксації за методом Брауна в умовах вимірювання був мен 10 ший, ніж час релаксації за методом Неєля, і до вимірюваних проб додатково додають речовини, що специфічно зв'язують аналіти, або речовини, які специфічно зв'язують аналіти, присутні в пробі в іммобілізованому стані 75 Спосіб за одним з пп 73 або 74, який відрізняється тим, що для виявлення використовують вимірювання комплексної сприйнятливості як функції частоти 76 Спосіб за одним з пп 73-75, який відрізняється тим, що зв'язаними з рецепторами агоністами є цитокши, лімфокши або ендотеліни 77 Спосіб за одним з пп 73-76, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну структуру, мають постійну зв'язування в діапазоні 103 1O1S (моль/л)1 78 Спосіб за одним з пп 73-77, який відрізняється тим, що як сенсори магнітного поля використовують Superconducting Quantum Interference Devices (SQL)IDs), індукційні котушки, магнітометр Fluxgate, сенсори Giant-Magnetoresistance або магніторезистивні перетворювачі 79 Спосіб за одним з пп 73-78, який відрізняється тим, що проводять визначення двох чи декількох різних аналітів у пробі 80 Спосіб за п 79, який відрізняється тим, що застосовують дві або декілька феромагнітних чи феримагнітних речовин з різним часом релаксації за методом Брауна чи Неєля 81 Спосіб за одним з пп 73-80, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини мають розмір частинок у діапазоні від 1 до 400нм 82 Спосіб за одним з пп 73-80, який відрізняється тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів і/або ЛІПІДІВ 83 Спосіб за одним з пп 73-80, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні чи феримагнітні речовини, розмір частинок яких знаходиться в діапазоні від 1 до 400нм 84 Спосіб за одним з пп 73-80, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять феромагнітні і феримагнітні речовини, стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеотидів, тензидів, полімерів і/або ЛІПІДІВ 85 Спосіб за одним з пп 73-80, який відрізняється тим, що використовують сполуки, що містять речовини зі специфічною структурою, якими є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 86 Спосіб за одним з пп 73-80, який відрізняється тим, що його використовують у визначенні репродуктивної здатності, визначенні пстосумісності, в алергологи, інфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, вірусологи, бактеріологи, токсикологи, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній діагностиці 87 Спосіб за одним з пп 73-80, який відрізняєть 12 11 54384 ся тим, що використовують комбінацію з феримаг94 Спосіб за одним з пп 88-93, який відрізняєтьнітних чи феромагнітних речовин з речовинами, ся тим, що роблять визначення двох чи декількох що мають специфічну структуру, або комбінацію з різних аналітів у пробі феримагнітних чи феромагнітних речовин з аналі95 Спосіб за п 94, який відрізняється тим, що тами, які визначають, причому речовинами, що застосовують дві чи більше феромагнітні чи фемають специфічну структуру, є антитіла, фрагменримагнітні речовини з різним часом релаксації за ти антитіл, біотин або речовини, які специфічно методом Брауна або Неєля зв'язують біотин, такі як авідин чи стрептавідин, 96 Спосіб за одним з пп 88-95, який відрізняєтьагоністи, специфічно зв'язані з рецепторами, чи ся тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, мають розмір частинок у діапазоні від 1 до 400нм рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеоти97 Спосіб за одним з пп 88-95, який відрізняєтьди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові ся тим, що феромагнітні і феримагнітні речовини кислоти, вуглеводи або ліпопротеши стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, 88 Спосіб КІЛЬКІСНОГО виявлення присутніх у рідкій нуклеотидів і/або ЛІПІДІВ фазі аналітів, який відрізняється тим, що речовини, які зв'язують аналіти і мають специфічну струк98 Спосіб за одним з пп 88-95, який відрізняєтьтуру, або аналіти, що зв'язуються речовинами, які ся тим, що використовують сполуки, що містять мають специфічну структуру феромагнітні чи феримагнітні речовини, розмір частинок яких знаходиться в діапазоні від 1 до - маркують феромагнітними чи феримагнітними 400нм колоїдальними частинками, що вибирають таким чином, щоб час релаксації за методом Брауна в 99 Спосіб за одним з пп 88-95, який відрізняєтьумовах виміру був менший, ніж час релаксації за ся тим, що використовують сполуки, що містять методом Неєля, а потім феромагнітні і феримагнітні речовини, стабілізовані за допомогою оболонки з олігомерних чи по- вказані речовини, які мають специфічну структулімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нуклеору, використовують у вимірюваній іммобілізованій тидів, тензидів, полімерів і/або ЛІПІДІВ пробі, вимірювану пробу намагнічують за допомогою прикладеного ззовні магнітного поля, і після 100 Спосіб за одним з пп 88-95, який відрізнявідключення зовнішнього поля за допомогою сенється тим, що використовують сполуки, що міссорів магнітного поля вимірюють релаксацію наматять речовини зі специфічною структурою, якими є гнічування магнітних маркерів, причому до аналізу антитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, залучають різні параметри релаксації зв'язаних з які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи аналітами відносно незв'язаних магнітних маркестрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторами рів, причому речовинами, що мають специфічну агоністи чи їхні антагоністи, специфічні пептиди і структуру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, або речовини, які специфічно зв'язують біотин, такі нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибояк авідин чи стрептавідин, специфічно зв'язані з нуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши рецепторами агоністи чи їхні антагоністи, специфі101 Спосіб за одним з пп 88-95, який відрізнячні пептиди або протеїни, рецептори, ензими, субється тим, що його використовують у визначенні страти ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислорепродуктивної здатності, визначенні пстосумісноти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або сті, в алергологи, шфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, ліпопротеши вірусологи, бактеріологи, токсикологи, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній 89 Спосіб за п 88, який відрізняється тим, що діагностиці аналіти, які визначають, маркують феромагнітними чи феримагнітними колоїдальними частинками, 102 Спосіб за одним з пп 88-95, який відрізняякі вибирають таким чином, щоб час релаксації за ється тим, що використовують комбінацію з феметодом Брауна в умовах виміру був менший, ніж римагнітних чи феромагнітних речовин з речовичас релаксації за методом Неєля, і до вимірюванами, що мають специфічну структуру, чи них проб додатково додають речовини, що специкомбінацію з феримагнітних чи феромагнітних рефічно зв'язують аналіти човин з аналітами, які визначаються, причому речовинами, що мають специфічну структуру, є ан90 Спосіб за одним з пп 88 або 89, який відрізтитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, няється тим, що для виявлення використовують які специфічно зв'язують біотини, такі як авідин чи вимірювання комплексної сприйнятливості як фунстрептавідин, агоністи, специфічно зв'язані з рекції частоти цепторами, чи їхні антагоністи, специфічні пептиди 91 Спосіб за одним з пп 88-90, який відрізняєтьі протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, ся тим, що зв'язаними з рецепторами агоністами є нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибоцитокіни, лімфокши або ендотеліни нуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши 92 Спосіб за одним з пп 88-91, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну струк103 Спосіб магніторелаксометричного виявлення туру, мають постійну зв'язування в діапазоні 105 феромагнітних чи феримагнітних колоїдальних 10 16 (моль/л) 1 частинок, введених у людське тіло, який відрізняється тим, що визначення релаксації намагнічу93 Спосіб за одним з пп 88-92, який відрізняєтьвання цих частинок за методом Неєля або виміся тим, що як сенсори магнітного поля використорювання комплексної сприйнятливості як функції вують Superconducting Quantum Interference Deчастоти для обробки результатів проводять після vices (SQL)IDs), індукційні котушки, магнітометр відключення намагнічувального поля Fluxgate, сенсори Giant-Magnetoresistance або магніторезистивні перетворювачі 104 Спосіб за п 103, який відрізняється тим, що 14 13 54384 як сенсори магнітного поля використовують стовують Superconducting Quantum Interference Superconducting Quantum Interference Devices Devices (SQUIDs), індукційні котушки, магнітометр (SQUIDs), індукційні котушки, магнітометр Fluxgate, сенсори Giant-Mag netoresistance або маFluxgate, сенсори Giant-Magnetoresistance чи маггніторезистивні перетворювачі ніторезистивні перетворювачі 110 Спосіб за одним з пп 106-109, який відрізняється тим, що замість вимірювання релаксації 105 Спосіб за одним з пп 103 або 104, який відрівикористовують вимірювання комплексної сприйзняється тим, що використовують вимірювання нятливості як функції частоти для обробки резулькомплексної сприйнятливості як функції частоти татів 106 Спосіб імуномагнітографм, який відрізняється тим, що речовини, які мають специфічну струк111 Спосіб за одним з пп 106-110, який відрізнятуру і якими є антитіла, фрагменти антитіл, біотин ється тим, що використовують комбінацію з феабо речовини, які зв'язують біотин, такі як авідин римагнітних чи феромагнітних речовин з речовичи стрептавідин, специфічно зв'язані з рецепторанами, що мають специфічну структуру, причому ми агоністи або їхні антагоністи, специфічні пептиречовинами, що мають специфічну структуру, є ди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензиантитіла, фрагменти антитіл, біотин або речовини, мів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, які специфічно зв'язують біотин, такі як авідин чи дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або стрептавідин, агоністи, специфічно зв'язані з реліпопротеши, спочатку цепторами, або їхні антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензи- маркують феромагнітними чи феримагнітними мів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, колоїдальними частинками, а потім дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або - ці марковані речовини, що мають специфічну ліпопротеши структуру, вводять у живий організм, намагнічують досліджувану ділянку організму за допомогою при112 Спосіб за одним з пп 106-110, який відрізнякладеного ззовні магнітного поля, а після відклюється тим, що використовують сполуки, що склачення зовнішнього поля вимірюють релаксацію даються з комбінацій здатних біологічно розкладанамагнічування магнітних маркерів за допомогою тися феримагнітних або феромагнітних речовин з сенсорів магнітного поля речовинами, що мають специфічну структуру, причому речовинами, що мають специфічну структу107 Спосіб за п 106, який відрізняється тим, що ру, є антитіла, фрагменти антитіл, біотин або резв'язаними з рецепторами агоністами є цитокши, човини, які специфічно зв'язують біотин, такі як лімфокши або ендотеліни авідин чи стрептавідин, агоністи, специфічно зв'я108 Спосіб за п 106 або 107, який відрізняється зані з рецепторами, чи їхні антагоністи, специфічні тим, що речовини, які мають специфічну структупептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ру, мають постійну зв'язування в діапазоні 105 ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, де10 15 (моль/л) 1 зоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпо109 Спосіб за одним з пп 106-108, який відрізняпротеши ється тим, що як сенсори магнітного поля викори Винахід стосується предмета, який охарактеризований у формулі винаходу, тобто способу магніторелаксометричного якісного і/ або КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах, сполук для магніторелаксометричного виявлення і їх застосування в аналітиці і імуномагнітографм Відомо, ЩО імунна сцинтиграфія дозволяє виявляти патологічні структури у живому організмі за допомогою радіоактивне маркованих речовин, що мають специфічну структуру, які нижче позначаються як маркери Звичайно для цих цілей використовуються марковані у-променями антитіла або фрагменти антитіл Поряд з цим використовуються або ж випробовуються з метою дослідження і ІНШІ речовини, що мають специфічну структуру, як, наприклад, пептиди або оліго- або полшуклешові кислоти Проте, в усіх цих способах частка специфічно зв'язаної радіоактивності взагалі мала ВІДПОВІДНО до цього при таких дослідженнях рівень маркерів, що неспецифічне зв'язані і тим самим циркулюють у крові або акумулюються в таких органах, як печінка, нирки, сечовивідні шляхи або сечовий міхур, дуже високий Це високе фонове випромінювання перешкоджає в багатьох випадках достатньому ступеню виявлення патологічних структур Панхапакезан [Immunol Cell BioL, 70 (1992)295 ] і Ціглер [New England-Journal of Medicine, 324 (1991) 430 ] вказують тому на можливості поліпшення імунної сцинтиграфм Подібні можливості описуються також і в ЕР 0 251 494 БІЛЬШІСТЬ ІЗ ЦИХ способів мають своєю метою прискорення виділення неспецифічне зв'язаної радіоактивності Далі, неодноразово пропонувалося застосування супряжених із парамагнітними або суперпарамагнітними речовинами антитіл або фрагментів антитіл для локалізації патологічних структур живому організмі Як спосіб виявлення для подібних маркованих антитіл дотепер у намір приймалися ядерна спінтомографія або заснована на змінах сприйнятливості магнітометрія (WO 93/05818 і WO 91/15243) Але і при цих способах виявлення проблема змінної складової сигналу внаслідок незв'язаних компонентів маркера, а також внаслідок природних варіацій сприйнятливості і релаксивності тканини зберігається Далі, методи найчастіше являються недостатньо чутливими для того, щоб виявляти незначні КІЛЬКОСТІ специфічно зв'язаних маркерів Спосіб, що дає можливість лише виявлення 16 15 54384 частини зв'язаних маркерів і в результаті цього не переборювали недоліки рівня техніки і які були б, підпадає під вплив КІЛЬКОСТІ незв'язаних маркерів, зокрема, у змозі без використання радіоактивних навпаки, невідомий речовин виявляти місце знаходження й об'єм зв'язаних маркерів без попереднього відділення неДалі, відомо, що КІЛЬКІСНІ методи імунного зв'язаного маркера аналізу, а також ІНШІ методи аналізу зв'язування (наприклад, методи блокування рецептора) доЦя задача вирішується за допомогою цього зволяють визначати в пробах різного складу значвинаходу не число речовин, що можуть мати також біологічБуло виявлено, що якісне і/ або кількісне вину ВІДПОВІДНІСТЬ Проте, як правило, одним явлення аналітів в рідкій і/ або твердій фазі вдаметодом визначається лише один параметр на ється, якщо феромагнітні або феромагнітні колоїпробу Актуальний огляд різних способів дає Т дальні частинки використовуються як магнітні Chard [An Introduction to Radio-immunoassay and маркування, що визначаються, в імунних методах Related Techniques Laboratory Techniques in Bioаналізу або в інших методах аналізу зв'язування, а chemistry and Molecular Biology, 4 ed , Eisevier Sciрелаксація їх намагнічування визначається як паence Publishers, Amsterdam (1990)] Основою усіх раметр, що вимірюється цих методів зв'язування є висока чутливість індиНижче спочатку описуються способи, що докації маркованих ізотопами або іншим чином сполають недоліки відомих способів здійснення імунлук з високою специфічністю рецепторних реакцій них методів аналізу або інших методів аналізу ліганд зв'язування ВІДОМІ способи проведення аналізу мають, Способи згідно до винаходу засновані на випроте, наступні недоліки користанні колоїдальних феромагнітних або феримагнітних речовин, що нижче називаються таСпособи одночасного визначення різних анакож магнітними маркуваннями, що комбінуються з ЛІТІВ усередині однієї і тієї ж проби базуються на індукованими речовинами, які позначаються нижче зв'язуванні по-різному маркованих радіологічно, також аналітами, або з речовинами, що мають флюоресцентно або ензімолопчно проб до аналіспецифічну структуру Подібні комбінації, згідно з тів При цьому, як правило, після наступної сепавинаходом, магнітних маркувань з аналітами або з рації і промивання заміряється незв'язана або ж речовинами, що мають специфічну структуру, які у зв'язана активність зонду для КІЛЬКІСНОГО визнаданому описі винаходу описуються ще докладнічення аналіта При цьому КІЛЬКІСТЬ використаних ше, нижче називаються магнітними маркерами За різних мічених атомів зонду дуже обмежена Так, рахунок використання поняття колоїдальні речонаприклад, у випадку різних радіоізотопів у якості вини або колоїдальні частинки описується як діазондового маркування виступають так звані явища пазон розмірів частинок або речовин у діапазоні перекривання, які призводять до швидкої втрати величин колоїдів, тобто діапазон від 1нм до прикількісної точності індивідуальних сигналів Комбіблизно ЮООнм, так і їх застосування як диспергонація різних ензимів як зондових мічених атомів є ваної фази у відповідному дисперсійному середопричиною співставлюваних проблем, причому вищі, яке у більшості випадків є водним здійсненність тут утруднена тим, що додатково Колоїдальні речовини або частинки для цілей понеобхідно шукати умови реакції, які дозволяють ліпшення здатності до зберігання або транспортупроводити одночасне визначення ензимних реаквання можуть бути присутніми у висушеній або цій в одній системі замороженій формі, у той час як для проведення Чутливість способів обмежена, наприклад, невимірів вони, проте, присутні в стані, дисперговаспецифічними взаємодіями між матрицею і зондом ному у рідкій фазі або ж лімітованою спроможністю маркування зонда (мала питома активність) Далі, способи базуються на спеціальних технологіях вимірів, що дозволяють після намагнічуУспішне здійснення способів часто припускає вання магнітного маркування або ВІДПОВІДНО магніпереробку отриманого матеріалу проб (наприклад, тних маркерів визначати релаксацію виготовлення сироватки або плазми з цільної кронамагнічування Подібні способи вимірів, що більш ві, екстракцію проб за допомогою органічних роздокладно описані в цьому описі винаходу до патечинників, збагачення аналіту за допомогою хроманту, нижче позначаються у вигляді магнітної релатографічних способів і так далі) ксометрм або магніторелаксометрм або магнітореДля успішного здійснення способів здебільшолаксометричного виявлення го неприпустимі операції сепарації і промивання, що служать для розподілу зв'язаних і незв'язаних Суттєва основа винаходу полягає в тому, що рецепторів або ж лігандів намагнічування феро- або феримагнітних колоїдальних частинок, які вільно пересуваються, після Для здійснення радюімунних методів необхідвідключення зовнішнього намагнічуючого поля у не використання дорогих випромінюючих нуклідів, межах часу виміру з допомогою двох різних мехащо зв'язано із великими витратами при роботі з нізмів релаксує ними Зберігання використаних до цього маркерів на (і) обертання усієї колоїдальної частинки ціпрактиці нерідко доставляє проблеми, оскільки лою усередині рідини, що и оточує, причому повони або нестабільні (радюімунні методи аналізу) і стійна часу залежить від гідродинамічного діаметтому повинні постійно наново створюватися, або ж ру частинок, включаючи оболонку, в'язкість рідиничутливо реагують на впливи навколишнього сереносія і температуру, що відображає, в основному, довища параметри оточення частинок, цей механізм позначається нижче як релаксація за методом БрауЗадача цього винаходу полягала через це в на або екстринзичний суперпарамагнетизм, та тому, щоб розробити нові способи і речовини, які б 17 54384 (м) обертання внутрішнього вектора намагнічування в межах колоїдальних частинок, причому постійна часу дуже чутливо залежить від матеріалу і форми (постійної анізотропії використаного матеріалу частинок), об'єму і температури використаних частинок Це, в основному, штринзичні параметри частинок, цей механізм нижче називається релаксацією за методом Неєля або штринзичним суперпарамагнетизмом Задача згідно з винаходом вирішується за рахунок того, що в процесі імунних методів аналізу або ж інших методів зв'язування феромагнітні або феримагнітні колоїдальні частинки використовуються як магнітні маркування, що визначаються, чия релаксація за методом Брауна в умовах вимірів у незв'язаному стані протікає швидше, ніж релаксація за методом Неєля Застосування подібних феромагнітних або феримагнітних колоїдальних частинок дозволяє шляхом зміни домінуючого механізму релаксації або ж шляхом збільшення об'єму частинок, що виникає за рахунок зв'язування, проводити специфічне визначення частки зв'язаних магнітних маркерів поряд із незв'язаними магнітними маркерами, які одночасно присутні у пробі, що вимірюється За рахунок застосування чутливих способів виміру при виконанні дій згідно з винаходом при використанні феромагнітних або феримагнітних колоїдальних частинок можуть бути створені високочутливі імунні методи аналізу, що мають специфічний зв'язок, або ж ІНШІ методи зв'язування, які можуть бути реалізовані як у рідкій, так і у твердій фазі Як особливий чутливий спосіб виміру після намагнічування проби в намагнічуючому полі і після відключення поля можливо визначити релаксацію намагнічування за допомогою високочутливих детекторів магнітного поля (як, наприклад, Superconducting Quantum Interference Devices (SQUIDs), індукційних котушок, магнітометра "Fluxgate", сенсорів "Giant- Magnetoresistance" або магніторезистивних перетворювачів) або ж комплексну сприйнятливість проби як функцію частоти намагнічуючого поля У передбаченому у винаході способі магніторелаксометричного КІЛЬКІСНО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах речовини, що мають специфічну структуру, які зв'язують аналіти, спочатку маркують феромагнітними або феримагнітних колоїдальними частинками Ці магнітно марковані речовини, що мають специфічну структуру, додають до рідкої або іммобілізованої проби, що заміряється, а проба, що заміряється, намагнічується за допомогою магнітного поля, що прикладене ззовні Після відключення зовнішнього поля заміряється релаксація намагнічування магнітних маркерів за допомогою сенсорів магнітного поля Обробка результатів вимірів відбувається тут, як і в описаному нижче безпосередньому способі проведення аналізу, за методикою, відомою фахівцю Спосіб магніторелаксометричного КІЛЬКІСНОГО виявлення аналітів у рідких і твердих фазах згідно з винаходом може бути здійснений так, що аналіти спочатку (і) маркують феримагнітними або феромагніт 18 ними колоїдальними частинками, а потім - (м) ці магнітно марковані аналіти використовуються в рідкій або іммобілізованій пробі, що заміряється, до якої додаються речовини, що специфічно зв'язують аналіти, а проба, що заміряється, намагнічується за допомогою прикладеного ззовні магнітного поля, і після відключення зовнішнього поля заміряється релаксація намагнічування магнітних маркерів за допомогою сенсорів магнітного поля Обробка результатів вимірів проводиться тут, як і в описаному нижче конкурентному способі проведення випробування, за методикою, відомою фахівцю, тобто аналогічно способам, що застосовуються в імунних або радіологічних методах аналізу У обох названих вище випадках для проведення аналізу може бути залучено також вимір зміненої внаслідок зв'язування комплексної сприйнятливості магнітної маркуючої речовини або ж магнітного маркеру як функції частоти Можливе лише у виняткових випадках дискримшування між зв'язаними і незв'язаними маркерами стає можливим завдяки використанню їх різних механізмів релаксації або завдяки впливу часу релаксації магнітного маркеру, причиною якого є зв'язування Зв'язані з твердою фазою аналіти згідно з винаходом можуть, зокрема, бути виявлені за рахунок того, що речовини, які мають специфічну структуру, які зв'язують аналіти, спочатку (і) маркують релаксуючими в діапазоні часу виміру феримагнітними або феромагнітними колоїдальними частинками, причому феримагнітні або феромагнітні колоїдальні частинки вибирають таким чином, що релаксація за методом Брауна в умовах виміру має коротший час релаксації, ніж релаксація за методом Неєля, а потім (м) ці магнітно марковані речовини використовуються в іммобілізованій пробі, що заміряється, проба, що заміряється, намагнічується за допомогою прикладеного ззовні магнітного поля відповідної напруженості, і після відключення зовнішнього поля за допомогою сенсорів магнітного поля заміряється релаксація намагнічування магнітних маркерів, причому до аналізу залучаються різні параметри релаксації зв'язаних твердою фазою і незв'язаних магнітних маркерів Як величина, що вимірюється, може визначитися комплексна сприйнятливість проб як функція частоти Також і в цьому випадку є можливість замість речовин із специфічною структурою комбінувати виявлені аналіти з магнітними маркувальними речовинами У рідкій фазі аналіти згідно з винаходом можуть, зокрема, бути виявлені за рахунок того, що речовини, які мають специфічну структуру, що зв'язують аналіти спочатку (і) маркують феримагнітними або феромагнітними колоїдальними частинками, причому феримагнітні або феромагнітні колоїдальні частинки вибирають таким чином, що релаксація за методом Брауна в умовах виміру має коротший час релаксації, ніж за методом Неєля, а потім (м) ці магнітно марковані речовини використо 19 54384 вують в іммобілізованій пробі, що заміряється, пробу, що заміряється, намагнічують за допомогою прикладеного ззовні магнітного поля відповідної напруженості, і після відключення зовнішнього поля за допомогою сенсорів магнітного поля заміряють релаксацію намагнічування магнітних маркерів, причому до аналізу залучають різні параметри релаксації зв'язаних твердою фазою і незв'язаних магнітних маркерів Як величина, що вимірюється, може визначатися комплексна сприйнятливість проб як функція частоти Також і в цьому випадку є можливість замість речовин із специфічною структурою аналіти, що виявляються, комбінувати з магнітними маркіруючими речовинами Під речовинами зі специфічною структурою слід розуміти усі речовини, що специфічно здійснюють прив'язку до певних структур Під речовинами зі специфічною структурою слід розуміти, зокрема, антитіла, фрагменти антитіл, біотин або зв'язуючі біотин речовини, як, наприклад, авідин і стрептавідин, агоністи, що специфічно зв'язуються з рецепторами, як наприклад цитокши, лімфокіни, ендотеліни або їх антагоністи, специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи, ліпопротеши і т п Серед речовин, що мають специфічну структуру, перевага віддається речовинам, константа зв'язування яких лежить у діапазоні 105 - 10 15 (моль/л)1 Зокрема, перевага віддається речовинам, що мають константу зв'язування, що складає від 107 до 1015моль/л)1 Речовини, що мають специфічну структуру, або аналіти, що підлягають виявленню, можна маркувати за допомогою феримагнітних і феромагнітних частинок, використовуючи способи, що традиційно застосовуються в імунній, пептидній і білковій хімії Переважними є ковалентні зв'язки між речовинами, що мають специфічну структуру, або аналітами, що ВІДПОВІДНО підлягають виявленню, з речовинами, що утворюють оболонку феримагнітних або феромагнітних частинок Приклади особливо придатних методів - це активування і зв'язок за допомогою карбодиімідів [Jakoby and Wilchek, eds , Methods Enzymol, (1974) 34], утворення Шиффових основ після впливу періодатів на сполуки, що містять вуглеводи (Wichek and Bauer eds Methods Enzym 184 177), які далі - при необхідності - ще і підлягають відновленню для подальшої стабілізації, і зв'язок за допомогою глютардіальдепду (Heitzmann and Richards, Proc Nati Acad Sei USA 71 (1974) 3537), утворення МІСТКІВ МІЖ бромацетильованими частинками з тюлильованими речовинами [Angerer et al , Cell 9 (1976) 81], а також відновлюване алкілювання (Bayer et al J Histochem Cytochem 24(1976)933) Можуть бути також одержані феромагнітні або феримагнітні колоїдальні частинки зі стабілізованою оболонкою з речовини, що має специфічну структуру, або з аналіту, який підлягає виявленню, при цьому частинки після одержання вводяться безпосередньо в розчин речовини, що має специфічну структуру, при необхідності в присутності інших допоміжних речовин, як, наприклад, протеї 20 ни, вуглеводи, а також натуральні, синтетичні або частково синтетичні поверхнево-активні речовини і т д або ж одержують безпосередньо в присутності речовин, що мають специфічну структуру ВІДПОВІДНІ колоїдальні частинки і суспензії, що містять ці частинки, описані, наприклад, у WO 92/12735, WO/92/22586, ЕР 0 186 616 і в US 4,101,435 Спосіб ВІДПОВІДНО до винаходу може знаходити -застосування, наприклад, у визначенні репродуктивної спроможності, пстосумістності, а також алергологи, інфекцюлопі, ГІГІЄНІ, генетиці, вірусологи, бактеріологи, токсикологи, патологи, аналітиці навколишнього середовища і медичній діагностиці Наступним предметом цього винаходу є сполуки для магніторелаксометричного виявлення, що складаються з колоїдальних суспензій феримагнітних або феромагнітних частинок, що вільно рухаються, і речовин, що мають специфічну структуру, або ж аналітів, що ВІДПОВІДНО підлягають виявленню, причому під речовинами зі специфічною структурою варто розуміти, зокрема, антитіла, фрагменти антитіл, біотин або зв'язуючі біотин речовини як, наприклад, авідин і стрептавідин, агоністи , що специфічно зв'язуються з рецепторами, як, наприклад, цитокши, лімфокіни, ендотеліни або їхні антагоністи, ІНШІ специфічні пептиди і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибонуклеїнові кислоти, вуглеводи, ліпопротеши і т п Сполуки для магніторелаксометричного виявлення можуть складатися також із комбінацій великої КІЛЬКОСТІ феромагнітних або феримагнітних частинок з різним часом релаксації, оскільки при використанні різноманітних магнітних маркувань із ВІДПОВІДНИМ дуже вузьким розподілом часу релаксації і/або магнітних моментів для різних речовин, що мають специфічну структуру, або ж аналітів усередині проби, можна одержувати індивідуально дискриміновані результати вимірів У результаті цього стає можливим безпосереднє одночасне кількісне визначення декількох аналітів Як суспензійні середовища до уваги приймаються усі рідини, у яких колоїдальні частинки мають можливість вільно рухатися Особливо придатними є вода, водні розчини поверхнево-активних допоміжних речовин, як, наприклад, тензіди або олігомерні або полімерні вуглеводи і білок, а також суміші з води зі спиртами, як, наприклад, гліцерол і поліетиленгліколь Суспензійні середовища можуть додатково містити ДОПОМІЖНІ речовини, що змінюють осмотичний тиск, як, наприклад, кухонну сіль Далі, можуть міститися буферні речовини, що визначають значення рН, як, наприклад, фосфати Сполуки з феромагнітних або феримагнітних колоїдальних частинок із речовинами, що мають специфічну структуру, або з аналітами, що підлягають виявленню, можуть бути присутніми також і у висушеній формі, при необхідності в комбінації з допоміжними речовинами, що полегшують, наприклад, висушування або підвищують стабільність висушеного продукту (наприклад, яклюфілізати) Визначення аналіту можна здійснювати з застосуванням або без застосування операцій сепарації або промивання При проведенні вимірів за 21 54384 допомогою операцій сепарації між зв'язаними і незв'язаними магнітними маркерами згідно з винаходом як магнітні маркуючі речовини для магніторелаксометричного виявлення можуть використовуватися всі феромагнітні і феримагнітні колоїдальні речовини У цих випадках немає необхідності в особливих вимогах до часу релаксації за методом Брауна і часу релаксації за методом Неєля На підставі високої здатності до індикування зв'язку, що заснована на фізичних механізмах, можуть бути виключені неспецифічні сигнали виміру (феномени матриці) Специфічність способу залежить, таким чином, ще і від «істинної» специфічності речовини, що має специфічну структуру, (перехресна реактивність антитіл, неспецифічне зв'язування ліганд) На основі високої сенситивності способу згідно з винаходом без зусиль знижуються звичні граничні значення чутливості методу зв'язування Які речовини для магнітного маркування можуть використовуватися всі феромагнітні або феримагнітні матеріали, які можуть колоїдально диспергуватися в середовищі, придатному для магніторелаксометричного визначення При використанні речовин для магніторелаксометричного виявлення, що проводиться без операцій сепарації між зв'язаними і незв'язаними магнітними маркерами, час релаксації за методом Неєля для магнітних маркувань, в умовах виміру повинен бути більше, ніж час релаксації магнітних маркерів за методом Брауна Найбільш придатними є усі феромагнітні або феримагнітні колоїдальні частинки з часом релаксації за методом Брауна у водних середовищах у діапазоні від 10 8 - 10 1 сек і часом релаксації за методом Неєля більш ніж 10 8 сек Для проведення вимірів без операцій сепарації в'язкість використаного середовища диспергування повинна бути приведена у ВІДПОВІДНІСТЬ ІЗ часом релаксації феромагнітних і феримагнітних частинок і часом виміру, оскільки суспензійне середовище істотно визначає постійну часу релаксації за методом Брауна Кращими є, зокрема, феромагнітні або феримагнітні колоїдальні частинки з заліза, окислів заліза, феритів барію, феритів стронцію, кобальту, нікелю, феритів нікелю, феритів кобальту і двоокису хрому, у яких час релаксації за методом Неєля більше, ніж час релаксації за методом Брауна Застосування магнітних маркувань із щільно розподіленими розмірами частинок і/або магнітними моментами являється в цілому кращим Поділ магнітних маркувань на фракції з щільним розподілом розмірів частинок може бути досягнутий, наприклад, за допомогою хроматографічних методів або при використанні спеціальних методів фільтрації (наприклад, склокапілярні системи або тангенційна фільтрація) шляхом використання молекулярних сит або за допомогою центрифугування Магнітні маркування по можливості з уніфікованими моментами можна одержувати, наприклад, шляхом відсівання в магнітному градієнтному полі Феромагнітні і феримагнітні речовини можуть бути стабілізовані оболонкою з олігомерних або полімерних вуглеводів, протеїнів, пептидів, нукле 22 отидів, текзидів, інших мономерів, олігомерів або полімерів і/або ЛІПІДІВ Розміри частинок феромагнітних і феримагнітних речовин складають, переважно, від 1нм до 400нм Зокрема, розміри частинок складають переважно від 1нм до ЮОнм ВІДПОВІДНО ДО способу магніторелаксометричне виявлення відбувається за допомогою вимірювальних пристроїв, що спочатку дозволяють здійснювати намагнічування досліджуваної проби за допомогою ВІДПОВІДНОГО магнітного поля, а потім вимір магнітної релаксації магнітних маркерів Вимірювальний пристрій для магніторелаксометричного виявлення аналітів, що застосовувався в прикладах, подано на фіг 1 На противагу усім іншим уже відомим способам (JP-235774 і WO 91/15243) у способі згідно з винаходом для виміру релаксації намагнічування заміряється не статичне намагнічування при наявності намагнічуючого поля, а його тимчасова зміна у відсутності намагнічуючого поля Тільки завдяки цьому стає доступною інформація про стан зв'язування маркерів Далі, завдяки цьому запобігається вплив сигналу виміру з боку діа- або парамагнітних компонентів або ж забруднень Далі, рішучим чином підвищується чутливість виміру Крім того, є можливість здійснювати вимір намагнічування маркера в залежності від частоти внаслідок ВІДПОВІДНОГО магнітного змінного поля (визначення комплексної сприйнятливості як функції частоти) за допомогою високочутливих сенсорів, як, наприклад, SQUIDs, в присутності поля При цьому використовується специфічна залежність частоти сприйнятливості магнітного маркера на противагу частотній залежності пара- або діамагнітних компонентів, що визначається окремо Також і цей спосіб дії знаходиться в протиріччі запропонованому в WO 91/15243 способу визначення сприйнятливості суперпарамагнітних речовин У WO 91/15243 не описана ні частотна залежність сприйнятливості магнітних маркерів, ні спосіб використання цієї властивості Наступний аспект винаходу стосується способів, що дозволяють виявляти місцезнаходження і КІЛЬКІСТЬ специфічно зв'язаних маркерів без впливу маркерів, що циркулюють у крові При цих способах виключається застосування радіоактивних речовин, без яких неможливо було обходитися при здійсненні сцинтиграфічного способу рівня техніки Способи згідно з винаходом засновані на тому, що різниця в релаксації між зв'язаними і незв'язаними магнітними маркерами в рідинах, а також зміна домінуючого механізму релаксації за рахунок зв'язування магнітних маркерів з твердими фазами можуть бути використані також і для магніторелаксометричного виявлення речовин або структур на живому організмі Подібні способи називаються нижче імунною магнітографією або імунномагнітографією Виміри в живому організмі просторового розподілу придатних для людини, релаксуючих у часовому діапазоні маркерів можуть здійснюватися двома різними методами виміру 1 Утворенням по можливості гомогенного магнітного поля в об'ємі, відключенням поля і виміром просторового розподілу релаксуючого магніт 54384 24 23 ного поля за допомогою багатоканального сенсодо 10 15 (моль/)1 ра Він повинен охоплювати по можливості весь Приклади, що наводяться нижче, служать для об'єкт виміру Для створення достатньої інформабільш докладного пояснення предмету винаходу ції про виміри можливе також багаторазове провеале він ними не обмежується дення вимірів при послідовному раструванні об'єкПриклад 1 ту виміру ЮОмкг моноклонального антитіла, спрямованого проти Collagen III, що нижче називається ан2 Послідовним формуванням просторово обти-Collagen III, розчиняють у 500мкл 0,1 М розчину меженого локального поля, відключенням поля і бікарбонату натрію 1мл суспензії магнетиту з довиміром просторового розподілу релаксуючого бавкою декстрану (Meito Sangyo) з 1 моль Fe/л і магнітного поля за допомогою одноканального розміром частинок приблизно 40нм пропускають сенсора Застосування мультиканального сенсору через колонку «Sephadex» (Pharmacia PD 10) з є теж можливим 0,1 М бікарбонату натрію з наданням розчину буПри використанні обох методів для одержання ферних властивостей До суспензії додають 0,5мл максимальної інформації слід перевагу віддавати 10 ммоль розчину перюдату натрію Розчин лияк намагнічуванню об'єкта виміру, так і виміру решають настоюватися в темряві протягом 2 годин зультуючого магнітного поля в усіх трьох простоПотім через PD 10 проводять вимивання 0,1 М рових напрямках розчину бікарбонату натрію До суспензії додають Вимір описується моделлю так, як це відбуварозчин анти-Collagen III Суміш настоюють 3 годиється при аналізі магнітних полів біоелектричних ни при 4°С у темряві Після ЦЬОГО додають 5мг потоків За основу там приймається модель магніІЧаВЬЦ у вигляді твердої речовини і трохи погойтного диполя, мультиполюсу або мультидиполя дують Суміш настоюють 8 годин при 4°С у темряСпеціальні параметри моделі, зокрема, місця розві Після ЦЬОГО марковані магнетитом антиташування диполів або мультиполів, визначають Collagen III (що нижче називають маг-антиВІДПОВІДНИМ методом апроксимації, який зводить Collagen III) елюють через колонку PD 10 із розчидо мінімуму відхилення між даними виміру і параном кухонної солі, що має буферні властивості метрами моделі Ці параметри дозволяють судити фосфату (нижче це - PBS, рН 7,4) Розчин 5мкг про просторовий розподіл намагнічених частинок Collagen III у 200мкл буферу (розчин кухонної солі Аналогічна технологія відома і доказує на ДІЛІ з буферними властивостями фосфату (PBS)) інкупридатність м для аналізу магнітних полів біоелекбують у ємності з полістиролу, призначеної для тричних потоків проб Потім скидають рідку фазу Ємність, що приЯк способи і сполуки, що придатні для імунної значена для проб, промивають три рази розчином магнітографи, можуть застосовуватися усі привекухонної солі з буферними властивостями фосфадені для магніторелаксометричного виявлення ту, що містить 0,1% Tween® 20 (що нижче називаспособи і речовини ється PBST) До проби додають 5мкл маг-антиОсобливо придатними для здійснення імунної Collagen III у 200мкл PBST Інкубують 1 годину при магнітографи є магнітні маркуючі речовини, які кімнатній температурі Потім пробу намагнічують у можуть біологічно розщеплюватися і являються магнітно екранованій камері в полі з напруженістю біологічно сумісними Це стосується, зокрема, ма2мТ 4см під детектором Squid (див фіг 1) Через гнітних маркуючих речовин, що складаються з оки400 мілісекунд після відключання магнітного поля сів заліза протягом 100 секунд проводять вимір релаксації Для проведення специфічного в частині зв'яНа пробі релаксацію визначають по згасаючому зування магніторелаксометричного виявлення на полю Проба, що містить сигнал релаксації присуживому об'єкті необхідно, щоб час релаксації за тності Collagen III, подана на фіг 2 методом Брауна введених у людський організм комбінацій із феримагнітних або феромагнітних Приклад 2 речовин із речовинами, що мають специфічну Розчин 5мкг Collagen V у 200мкл PBS буферструктуру, при температурі тіла в рідинах, що місного розчину рН 7,4 інкубують у ємності з поліститяться в організмі, був коротший, ніж час релаксаролу, призначеної для проб Потім скидають рідку ції за методом Неєля фазу Ємність, призначену для проб, промивають три рази PBST промиваючим буферним розчином, Під речовинами зі специфічною структурою в що має рН 7,4 До проби додають 5мкл маг-антиімунній магнітографи варто розуміти, зокрема, усі Collagen III, що виготовлений ВІДПОВІДНО ДО приречовини, що специфічно зв'язуються зі структукладу 1, у 200мкл PBST Інкубують 1 годину при рами людського організму, що ідентифікуються кімнатній температурі Потім пробу намагнічують у Особливо придатними є антитіла, фрагменти анмагнітно екранованій камері в полі з напруженістю титіл, агоністи, що специфично зв'язуються з ре2мТ 4см під детектором Squid (див фіг 1) Після цепторами, або їх антагоністи, специфічні пептиди відключення магнітного поля пробу заміряють і протеїни, рецептори, ензими, субстрати ензимів, Через 400 мілісекунд після відключення магнітного нуклеотиди, рибонуклеїнові кислоти, дезоксирибополя протягом 100 секунд проводять вимір релакнуклеїнові кислоти, вуглеводи або ліпопротеши З сації На пробах, що містять Collagen V, у рамках агоністів, що зв'язуються з рецепторами придатні, надійності виміру не може бути виявлене згасаюче зокрема, цитокіни, лімфокши або ендотеліни магнітне поле (див фіг 3) Добре придатні всі речовини, що мають специфічну структуру, які мають ПОСТІЙНІ зв'язування в діапазоні від 105 до 10 15 (моль/л)1 Зокрема, придатними є усі речовини, що мають специфічну структуру, які мають постійне зв'язування від 10 Приклад З До розчину, що містить ЮОмкг Collagen III у 1мл PBS, додають ЮОмкл розчину глутардіальдепду (3% у воді) РОЗЧИН перемішують 24 годин при 25 26 фосфату з рН 7,4, який містить додатково 0,1% PBST, і розливають утри ємності для проб із поліакрилової кислоти, що мають МІСТКІСТЬ ВІДПОВІДНО 500мкл кожна До першої ємності для проб додають ЮОмкл водного розчину сироваткового альбуміну (1мг альбуміну/мл) (проба 1) До другої ємності для проб додають ЮОмкл розчину Collagen V у PBST (1мкг Collagen V/мл) ( проба 2) До третьої ємності для проб додають ЮОмкл розчину Collagen III у PBST (1мкг Collagen Ill/мл) (проба 3) Протягом 200 секунд після додавання протеїнових розчинів проби намагнічуються за допомогою вимірювального пристрою, схематичне зображення якого дається на фіг 1, (2мТ), і протягом 20 мілісекунд після відключення намагнічуючого поля, починаючи через 1 секунду, визначається ВІДПОВІДНО магнітна релаксація У пробах 1 і 2 у рамках надійності вимірів не може виявлятися згасаюче магнітне поле У пробі 3, навпаки, може виявлятися згасаюче магнітне поле Виміри повторюються після спустошення ємності для проб і після триразового промивання - щораз 500мкл PBST Зараз у жодній з ємностей для проб у рамках надійності виміру не може виявлятися загасаюче магнітне поле 54384 4°С і після цього центрифугують Осад після центрифугування містить сітчастий Collagen III, що випав у осад Сітчастий Collagen III суспендують в 1мл PBS (Проба 1) До розчину ЮОмкг Collagen V в 1мл P5S додають ЮОмкл розчину глутардіальдепду (3% у воді) РОЗЧИН перемішують протягом 24 годин при 4°С і центрифугують Осад після центрифугування містить сітчастий Collagen V, що випав у осад Сітчастий Collagen V суспендують в 1 мл PBS (Проба 2) До проб 1 і 2 додають по 5мкл суспензії маг-анти-Collagen III із приклада 1 Інкубують протягом 1 години при 37°С Потім обидві проби намагнічують в екранованій камері в магнітному полі з напруженістю 2мТ під детектором SQUID Замір релаксації проводять протягом 400 мілісекунд після відключення намагнічуючого поля У випадку проби 1 заміряють згасаюче поле У випадку проби 2 згасаюче поле не визначається Приклад 4 З Юмл розчину 1,9мг/мл Collagen III в PBS (pH 7,4) одержують ВІДПОВІДНО 5мл приведених нижче розбавлених розчинів 10000нг/мл, 1000нг/мл, 100нг/мл, Юнг/мл, 1нг/мл 3 кожного розведеного розчину в трубочку з полістиролу капають з піпетки три рази по 1мл (МІСТКІСТЬ 2,5МЛ) Інкубують 1 годину при 37°С, Після ЦЬОГО ВМІСТ трубочок скидають Трубочки промивають 3 рази щораз по 1мл PBST У кожну трубочку додають 1мл розведеного в співвідношенні 1 100 розчину маркованого магнетитом антитіла, одержаного згідно з прикладом 1 Трубочки лишають протягом 1 години при кімнатній температурі Після ЦЬОГО проби намагнічуються за допомогою вимірювального пристрою, схематичне зображення якого дається на фіг 1, (2мТ), і після відключення намагнічуючого поля на протязі 100 секунд проводять вимір релаксації Визначення різниці виміряних величин густини В магнітних потоків, 200 мілісекунд і 100 секунд після відключення намагнічуючого поля в залежності від концентрації Collagen у пробі представлено на фіг 4 Приклад 5 ЮОмкг моноклонального антитіла, спрямованого проти Collagen III, що нижче називається анти-Collagen III, розчиняють у 500мкл 0,1 М розчину бікарбонату натрію 1мл суспензії магнетиту з добавкою декстрану 1 моль Fe/л і розміром частинок приблизно 40нм пропускають через колонку "Sephadex" (Pharmacia PD 10) з 0,1М бікарбонату натрію з наданням розчину буферних властивостей До суспензії додають 0,5мл 10 ммоль розчину перюдату натрію Розчин лишають настоюватися в темряві протягом 2 годин Потім через PD 10 проводять вимивання 0,1 М розчину бікарбонату натрію До суспензії додають розчин анти-Collagen III Суміш настоюють протягом 3 годин при 4°С у темряві Після ЦЬОГО додають 5мг ІЧаВЬЦ у вигляді твердої речовини і трохи погойдують Суміш настоюють 8 годин при 4°С у темряві Після цього марковані магнетитом анти-Collagen III (що нижче названі маг-анти-Collagen III) елююють через колонку PD 10 з розчином кухонної солі, що має буферні властивості фосфату (PBS, рН 7,4) Кожні 20мкл суспензії маг-анти-Collagen III розбавляють 390мкл розчину кухонної солі з буферними властивостями Приклад 6 ЮОмкг авідину розчиняють у 500мкл 0,1М розчину бікарбонату натрію 1мл суспензії магнетиту з добавкою декстрану з 1 моль Fe/л і розміром частинок приблизно 40нм пропускають через колонку "Sephadex" (Pharmacia PD 10) з 0,1М бікарбонату натрію з наданням розчину буферних властивостей До суспензії додають 0,5мл 10 ммоль розчину перюдату натрію Розчин лишають настоюватися в темряві протягом 2 годин Потім через PD 10 роблять вимивання 0,1 М розчину бікарбонату натрію До суспензії додають розчин авідину Суміш настоюють протягом 3 годин при 4°С у темряві Після цього додають 5мг ІЧаВЬЦ у вигляді твердої речовини і трохи погойдують Суміш настоюють 8 годин при 4°С у темряві Після ЦЬОГО маркований магнетитом авідин (що нижче називається маг-авідин) елююють через колонку PD 10 із розчином кухонної солі, що має буферні властивості фосфату (PBS, рН 7 ,4) 1мг альбуміну сироватки крові великої рогатої худоби зв'язується з бютин-Nпдроксисукцинімідом (Sigma) (що нижче позначається як бютин-альбумін) і разводиться до концентрації 1 мкг/мл у PBS 1мл розведеного розчину бютин-альбуміну інкубують протягом 3 годин при кімнатній температурі в ємності для проб з полістиролу Після ЦЬОГО відганяєтся рідка фаза Ємність для проб три рази промивається розчином кухонної солі, що має буферні властивості фосфату, який містить 0,1% Tween 20® (PBST) До проби додають 5мкл магавідину Протягом 1 години проводять інкубацію при кімнатній температурі Потім проба намагнічується в магнітно екранованій камері в полі напруженістю 2мТ 4см під детектором SQUID (див фіг 1) Через 400 мілісекунд після відключення магнітного поля протягом 100 секунд провадиться вимір релаксації На пробі заміряється згасаюче магнітне поле 1мл розведеного розчину альбуміну великої рогатої худоби в PBS (0,1мг/мл) інкубують протя 27 54384 гом 3 годин при кімнатній температурі в ємності для проб із полістиролу Після ЦЬОГО відганяється рідка фаза Ємність для проб три рази промивається розчином кухонної солі, що має буферні властивості фосфату, який містить 0 , 1 % Tween 20® (PBST) До проби додають 5мкл маг- авідину Протягом 1 години проводять інкубацію при кімна 28 тній температурі Потім проба намагнічується в магнітно екранованій камері в полі напруженістю 2мТ 4см під детектором SQUID (див фіг 1) Через 400 мілісекунд після відключення магнітного поля протягом 100 секунд проводиться вимір релаксації На пробі в рамках надійності виміру не заміряється згасаюче магнітне поле 15,0 п Зразок Фіг.2 ФІГ.1 15,0 100 с 10.0 8(рТ| L 5.0 tOO 1000 Концентрація [иг/мп] Фіг.4 I00OQ 29 54384 ЗО Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044) 236 - 47 - 24