Посилення ефективності хіміотерапії раку

1. Застосування 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jk]-[1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату для виготовлення лікарського засобу, призначеного для застосування у комбінації із хіміотерапевтичним засобом, вибраним із групи, яку складають СРТ11, пеметрексед, гемцитабін, етопозид, доксорубіцин та платиновмісні хіміотерапевтичні засоби, для лікування раку яєчників, недрібноклітинного раку легенів або раку ободової та прямої кишки. 2. Застосування за п. 1, яке відрізняється тим, що хіміотерапевтичним засобом є платиновмісний хіміотерапевтичний засіб. 3. Застосування за п. 1 або п. 2, яке відрізняється тим, що платиновмісним хіміотерапевтичним засобом є цисплатин або карбоплатин. 4. Застосування 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jk]-[1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату для виготовлення лікарського засобу, призначеного для застосування у комбінації з хіміотерапевтичним засобом, вибраним із групи, яку складають 5фторурацил та платиновмісні хіміотерапевтичні засоби, для лікування раку шлунка. 5. Комбінація 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3-іл)-9-фтор 2 (19) 1 3 97400 4 11. Застосування за п. 9 або 10, яке відрізняється тим, що платиновмісним хіміотерапевтичним засобом є цисплатин або карбоплатин. 12. Комбінація 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jk]-[1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату та пеметрекседу і платиновмісного хіміотерапевтичного засобу, призначена для застосування при лікуванні раку яєчників, недрібноклітинного раку легенів або раку ободової та прямої кишки. 13. Комбінація за п. 12, причому платиновмісним хіміотерапевтичним засобом є цисплатин або карбоплатин. 14. Комбінація 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jk]-[1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату та пеметрекседу і платиновмісного хіміотерапевтичного засобу, призначена для застосування при лікуванні раку шлунка. 15. Комбінація за п. 14, причому платиновмісним хіміотерапевтичним засобом є цисплатин або карбоплатин. Ефективність будь-якої хіміотерапії раку обмежується чутливістю окремих типів раку до конкретного впливу. Навіть якщо певний тип раку реагує на конкретну хіміотерапію, гострі та хронічні токсичні ефекти, пов'язані з хіміотерапією, часто примушують знижувати дозу або взагалі припиняти лікування. Один із підходів до лікування нечутливих видів раку або подолання впливу токсичності, яка вимагає зменшення доз, полягає в комбінуванні засобів, які діють за різними механізмами. Хоча на цей час виявлено деякі ефективні комбінації для хіміотерапії, підхід до ідентифікації комбінацій засобів, які забезпечують підвищену ефективність щодо конкретних видів раку або краще переносяться пацієнтами, залишається по суті емпіричним. Глікогенсинтаза-кіназа 3 (GSK3) є серин/треонінкіназою, яка бере участь у різноманітних системах передавання сигналів, які, як відомо, регулюють різноманітні клітинні функції. Роль GSK3 у лікуванні раку не ясна. Наприклад, сповіщається, що рапаміцин різко посилює внаслідок активації GSK3 дію паклітакселю, вінорельбіну та карбоплатину, але не впливає на дію доксорубіцину або гемцитабіну у клітинах раку молочної залози. Це посилення інгібується широко відомими інгібіторами GSK3 — хлоридом літію, SB216763 та SB415286 (Dong, et al., Cancer Research, 65(5), 1961-1972 (2005)). Навпаки, показано, що хлорид літію та SB216763 (інгібітори GSK3) у субтоксичних концентраціях різко посилюють протипухлинну ефективність пов'язаного з фактором некрозу пухлин ліганду, що індукує апоптоз, (TRAIL) як у р53позитивних, так і в р53-негативних клітинах раку простати (Liao, et al., Molecular Cancer Therapeutics. 2, 1215-1222 (2003)). Аналогічно, показано, що хлорид літію підвищує чутливість пухлинних клітин до фактора некрозу пухлин (TNF) у клітинах людської рабдоміосаркоми та фібросаркоми мишей, але інгібітори GSK3, такі як Ro318220, вальпроєва кислота та індирубін-3'моноксим, не посилюють той самий ефект (Schoette, et al., The Journal of Biological Chemistry. 276(28), 25939-25945 (2001)). Нарешті, є відомості, що інгібітори GSK3, такі як хлорид літію та LY2119301, посилюють дію адріаміцину, етопозиду та 5-фторурацилу у р53-позитивних клітинах раку ободової кишки, але ні SB216763, ані SB415286 не посилюють вплив жодного з випробуваних засобів, і всі випробувані інгібітори GSK3 не спричиняють бажаного посилення дії у р53-негативних лініях клітин раку ободової кишки (Tan, et al·, Cancer Research. 65(19), 9012-9020 (2005)). Існує потреба у специфічних комбінаціях засобів, які виявляють підвищену ефективність лікування хворого на рак пацієнта з конкретною формою раку або уможливлюють краще перенесення хіміотерапії хворим на рак. Інгібітор GSK3 7-(2,5дигідро-4-імідазо[1,2-а]-піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Нпірол-3-іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидиніл-карбоніл)піроло[3,2,1jк][1,41бензодіазепін посилює дію деяких хіміотерапевтичних засобів при конкретних формах раку. Цей винахід пропонує спосіб лікування раку яєчників, недрібноклітинного раку легенів або раку ободової та прямої кишки, який включає введення в організм хворого на рак, який потребує такого лікування, ефективної кількості хіміотерапевтичного засобу, вибраного з групи, яку складають СРТ11, пеметрексед, гемцитабін, етопозид, доксорубіцин та платиновмісні хіміотерапевтичні засоби, у комбінації з ефективною кількістю 7-(2,5-дигідро-4імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1H-пірол-3-іл)9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)-піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату. Крім того, цей винахід пропонує спосіб лікування раку шлунка, який включає введення в організм хворого на рак, який потребує такого лікування, ефективної кількості хіміотерапевтичного засобу, вибраного з групи, яку складають 5фторурацил та платиновмісні хіміотерапевтичні засоби, у комбінації з ефективною кількістю 7-(2,5дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1 Нпірол-3-іл) -9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2- (1 піперидинілкарбоніл) -піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату. Цей винахід пропонує також застосування 7(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо1Н-пірол-3-іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату для виготовлення лікарського засобу, призначеного для застосування у 5 комбінації з хіміотерапевтичним засобом, вибраним із групи, яку складають СРТ-11, пеметрексед, гемцитабін, етопозид, доксорубіцин та платиновмісні хіміотерапевтичні засоби, для лікування раку яєчників, недрібноклітинного раку легенів або раку ободової та прямої кишки. Цей винахід пропонує також застосування 7(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо1H-пірол-3-іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату для виготовлення лікарського засобу, призначеного для застосування у комбінації з хіміотерапевтичним засобом, вибраним з групи, яку складають 5-фторурацил та платиновмісні хіміотерапевтичні засоби, для лікування раку шлунка. Крім того, цей винахід пропонує фармацевтичну композицію, одержану шляхом виконання таких стадій: a) додання 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1H-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату до водного розчину при рН нижче ніж 5,5, який містить щонайменше 1 молярний еквівалент SBE7--CD та факультативно фармацевтично прийнятний буфер; b) встановлення рН одержаного розчину в межах від 2,5 до 3,5 доданням фармацевтично прийнятної кислоти або основи; та c) факультативна ліофілізація одержаного розчину. Цей винахід пропонує також фармацевтичну композицію, придатну для відновлення водою до розчину, придатного для введення в організм хворого шляхом ін'єкції або інфузії, яка містить 1 молярний еквівалент 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]тридин-3-іл-2,5-діоксо-1H-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату, щонайменше 1 молярний еквівалент SBE7--CD та факультативно фармацевтично прийнятний буфер. Іншим аспектом цього винаходу є фармацевтична композиція, яка містить 1 молярний еквівалент 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5діоксо-1H-пірол-3-іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну та щонайменше 1 молярний еквівалент SBE7- -CD. Крім того, цей винахід пропонує спосіб виготовлення фармацевтичної композиції, яка містить 7(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо1H-пірол-3-іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидиніл-карбоніл)піроло-[3,2,1jк][1,4]бензодіазепін, придатної для відновлення водою до розчину, придатного для введення в організм хворого шляхом ін'єкції або інфузії, який включає стадії: a) додання 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо1Н-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1 97400 6 jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату до водного розчину при рН нижче ніж 5,5, який містить щонайменше 1 молярний еквівалент SBE7- в -CD та факультативно фармацевтично прийнятний буфер; b) встановлення рН одержаного розчину в межах від 2,5 до 3,5 доданням фармацевтично прийнятної кислоти або основи; та c) ліофілізація одержаного розчину. Цей винахід пропонує також вдосконалений спосіб застосування СРТ-11, пеметрекседу, гемцитабіну, етопозиду, доксорубіцину та платиновмісних хіміотерапевтичних засобів при лікуванні раку яєчників, недрібноклітинного раку легенів або раку ободової та прямої кишки у хворого на рак, який потребує такого лікування, де вдосконалення включає комплексне застосування 7-(2,5-дигідро4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату. Цей винахід пропонує також вдосконалений спосіб застосування 5-фторурацилу та платиновмісних хіміотерапевтичних засобів при лікуванні раку шлунка у хворого на рак, який потребує такого лікування, де вдосконалення включає комплексне застосування 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату. Детальний опис винаходу Сполука СРТ-11 відома також під назвою іринотекан і надходить у продаж під торгівельною назвою CAMPTOSAR®. СРТ-11 є хіміотерапевтичний лікарський засіб, який застосовується для лікування хворих на прогресуючий рак ободової та прямої кишки. Цей засіб вживається періодично у формі болюсів або шляхом інфузійного впорску2 вання в дозі 120-180 мг/м протягом шеститижневих циклів лікування. СРТ-11, як правило, застосовується у комбінації з 5-фторурацилом (5-FU) та лейковорином (LV). Сполука пеметрексед надходить у продаж під торгівельною назвою ALIMTA®. Пеметрексед — хіміотерапевтичний лікарський засіб, який застосовується для лікування хворих на локально прогресуючий або метастатичний недрібноклітинний рак легенів після попередньої хіміотерапії. Пеметрексед у комбінації із цисплатином показаний для застосування при лікуванні хворих на злоякісну плевральну мезотеліому, захворювання яких є неоперабельним або які не є в іншому випадку кандидатами на зцілювальне хірургічне втручання. Як правило, пеметрексед вводять хворому в дозі 2 500 мг/м шляхом інфузії протягом 10 хв через кожну 21 добу після попереднього лікування фолієвою кислотою, вітаміном B12 та дексаметазоном. Термін "платиновмісний хіміотерапевтичний засіб" вживається для позначення засобу для хіміотерапії раку, який містить платину. До конкретних платиновмісних хіміотерапевтичних засобів, які маються на увазі стосовно до способу за цим винаходом, належать цисплатин, карбоплатин та 7 оксаліплатин. Перевага віддається застосуванню цисплатину або карбоплатину. Сполука цисплатин надходить у продаж під ® торгівельною назвою PLATINOL -AQ. Цисплатин застосовують при лікуванні хворих на метастатичні пухлини яєчників, які вже одержали відповідні хірургічні та/або радіотерапевтичні процедури. Як єдиний засіб цисплатин застосовується, як прави2 ло, внутрішньовенно у дозі 100 мг/м на цикл один раз на чотири тижні. Цисплатин може застосовуватися також у ® комбінації із засобом CYTOXAN . Сполука карбоплатин надходить у продаж під ® торгівельною назвою PARAPLATIN . Карбоплатин застосовують при лікуванні хворих на карциному яєчників. Як єдиний засіб карбоплатин застосовується, як правило, внутрішньовенно у дозі 360 2 мг/м на цикл один раз на чотири тижні. Карбоплатин може застосовуватися також у комбінації із циклофосфамідом. Сполука оксаліплатин надходить у продаж під ® торгівельною назвою ELOXATIN . Оксаліплатин застосовується при лікуванні хворих на рак ободової та прямої кишки. Він застосовується, як прави2 ло, внутрішньовенно у дозі 85 мг/м на цикл один раз на два тижні у комбінації з 5-FU та LV. Сполука доксорубіцин надходить у продаж під ® ® торгівельними назвами ADRIAMYCIN та RUBEX . Доксорубіцин успішно застосовувався для забезпечення регресії розсіяних неопластичних станів, таких як гостра лімфобластна лейкемія, гостра мієлобластна лейкемія, пухлина Вілмса, нейробластома, саркоми м'яких тканин та кісток, карцинома молочної залози, карцинома яєчників, перехідно-клітинна карцинома сечового міхура, карцинома щитоподібної залози, карцинома шлунка, хвороба Ходжкіна, злоякісна лімфома та бронхогенна карцинома. Він застосовується, як прави2 ло, внутрішньовенно у дозі 60-75 мг/м через 21добові інтервали. Сполука етопозид надходить у продаж під тор® ® гівельними назвами ETOPOPHOS , TOPOSAR та ® VEPESID . Етопозид застосовується для лікування хворих на рак яєчок або легенів. Він застосовуєть2 ся, як правило, шляхом ін'єкції в дозах від 5 мг/м 2 до 100 мг/м . Сполука 5-фторурацил (5-FU) надходить у ® продаж під торгівельною назвою ADRUCIL . Він застосовується для лікування хворих на карциному ободової кишки, прямої кишки, молочної залози, шлунка та підшлункової залози. 5-FU застосовується, як правило, внутрішньовенно у дозі 12 мг/кг один раз на добу протягом чотирьох послідовних діб. Гемцитабін надходить у продаж під торгівель® ною назвою GEMZAR . Він застосовується найчастіше для лікування недрібноклітинного раку легенів, раку підшлункової залози, раку сечового міхура та раку молочної залози. Він застосовується, як правило, шляхом внутрішньовенної інфузії у 2 дозі 1000 мг/м протягом 30 хв один раз на тиждень протягом 3 послідовних тижнів із 4 тижнів. Для досвідченого фахівця у галузі зрозуміло, що точні дози та кількість циклів лікування будьяким із вищезгаданих засобів, необхідні для ліку 97400 8 вання хворого, визначаються лікарем з урахуванням стадії розвитку та тяжкості захворювання, а також конкретних потреб та індивідуальної реакції хворого. Сполука 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин3-іл-2,5-діоксо-1H-пірол-3-ш)-9-фтор-1,2,3,4тетрагідро-2-(1-піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1jк][1,4]-бензодіазепін вказана як інгібітор GSK-3 в в WO 03/076442, де вона згадана під назвою 3-(9фтор-6-(піперидин-1-іл)карбоніл)-6,7-дигідро-6Н[1,4]діазепіно-[6,7,1-hi]індол-1-іл)-4-(імідазо[1,2а]піридин-3-іл)-2,5-діоксопірол (Приклад 365, стор. 113). Дві вищезгадані назви розглядаються як синоніми, і кожна з них вживається для позначення поданої нижче структури: Сполука І є основою і, відповідно, може реагувати з будь-якою із численних неорганічних та органічних кислот з утворенням фармацевтично прийнятних солей. Перевага серед фармацевтично прийнятних солей віддається солям з НСl, НВr, сірчаною кислотою та метансульфоновою кислотою. Сполука І утворює сольвати, наприклад, із водою, метанолом та етанолом. Перевага віддається сольвату з етанолом. Сполука І сама по собі не виявляє корисної протипухлинної активності, однак при її застосуванні у комбінації з СРТ-11, пеметрекседом, гемцитабіном, етопозидом, доксорубіцином або з платиновмісними хіміотерапевтичними засобами досягається значна терапевтична перевага при лікуванні раку яєчників, недрібноклітинного раку легенів або раку ободової та прямої кишки у порівнянні з лікуванням тільки СРТ-11, пеметрекседом, гемцитабіном, етопозидом, доксорубіцином або платиновмісними хіміотерапевтичними засобами. Одна з переваг такої комбінації полягає в тому, що терапевтичний ефект СРТ-11, пеметрекседу, гемцитабіну, етопозиду, доксорубіцину та платиновмісних хіміотерапевтичних засобів посилюється при їх застосуванні у комплексі зі Сполукою І. Тобто доза СРТ-11, пеметрекседу, гемцитабіну, етопозиду, доксорубіцину або платиновмісних хіміотерапевтичних засобів, зменшена у порівнянні з дозою, застосовуваною у типових випадках, забезпечує аналогічний терапевтичний вплив на пацієнта. Крім того, при застосуванні типових доз СРТ-11, пеметрекседу, гемцитабіну, етопозиду, доксорубіцину або платиновмісних хіміотерапевтичних засобів у комбінації зі Сполукою І у пацієнта досягається посилений терапевтичний ефект. Цей спосіб лікування 9 забезпечує додаткову перевагу, яка полягає у зручності для пацієнта та лікаря застосування Сполуки І за тією самою схемою лікування, яка застосовується для СРТ-11, пеметрекседу, гемцитабіну, етопозиду, доксорубіцину або платиновмісних хіміотерапевтичних засобів. Комплексна терапія за цим винаходом є вдосконаленим способом лікування хворих, що страждають на рак яєчників, недрібноклітинний рак легенів або рак ободової та прямої кишки. Хворим є ссавець, а хворим, якому віддається перевага, є людина. Хоча всі описані комбінації Сполуки І або її фармацевтично прийнятної солі чи сольвату з хіміотерапевтичними засобами є корисними, деяким комбінаціям віддається перевага. Однією з комбінацій, яким віддається перевага, є комплексне застосування 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1H-пірол-3-іл)-9-фтор1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату з платиновмісним хіміотерапевтичним засобом. Іншим варіантом здійснення цього винаходу є комплексне застосування 7-(2,5-дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл2,5-діоксо-1H-пірол-3-іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро2-(1-піперидинілкарбоніл)-піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату із цисплатином або карбоплатином. Ще одним варіантом здійснення цього винаходу є застосування 7-(2,5-дигідро-4імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1H-пірол-3-іл)9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)-піроло[3,2,1jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату з пеметрекседом та платиновмісним хіміотерапевтичним засобом. Перевага віддається застосуванню 7-(2,5-дигідро-4імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Н-пірол-3-іл)9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)-піроло[3,2,jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату з пеметрекседом та карбоплатином. Термін "ефективна кількість хіміотерапевтичного засобу" означає дозу конкретного хіміотерапевтичного засобу, необхідну або для руйнування ракових клітин-мішеней, або для уповільнення чи припинення розвитку раку у хворого в разі застосування цього хіміотерапевтичного засобу у комбінації зі Сполукою І або її фармацевтично прийнятною сіллю чи сольватом. Термін "ефективна кількість 7-(2,5-дигідро-4імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1H-пірол-3-іл)9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)-піроло[3,2,jк][1,4]бензодіазепіну або його фармацевтично прийнятної солі чи сольвату" означає дозу Сполуки І або її фармацевтично прийнятної солі чи сольвату, необхідну для посилення ефекту певної дози конкретного хіміотерапевтичного засобу з метою або руйнування ракових клітин-мішеней, або уповільнення чи припинення розвитку раку у хворого. Ймовірний діапазон доз Сполуки І або її 97400 10 фармацевтично прийнятної солі чи сольвату для одного пацієнта становить від 5 мг/доба до 600 мг/доба. Перевага віддається діапазону доз від 50 мг/доба до 400 мг/доба. Найбільша перевага віддається діапазону доз від 100 мг/доба до 400 мг/доба. Точні дози, необхідні для лікування хворого, визначає лікар з урахуванням стадії та тяжкості захворювання, а також конкретних потреб та індивідуальної реакції хворого. Термін "посилення ефекту певної дози конкретного хіміотерапевтичного засобу" означає, що ефективною дозою хіміотерапевтичного засобу є доза, менша від типової застосовуваної дози, або що при застосуванні типової дози хіміотерапевтичного засобу в комплексі зі Сполукою І або її фармацевтично прийнятною сіллю чи сольватом досягається посилений терапевтичний вплив на пацієнта. Терміни "застосування в комплексі" та "комплексне застосування", а також терміни "у комбінації з" та "застосовуваний у комбінації з" у значеннях, вживаних у цьому описі, означають, що Сполука І або її фармацевтично прийнятна сіль чи сольват вводяться в організм хворого протягом того самого циклу лікування, у якому застосовуються СРТ-11, пеметрексед або платиновмісний хіміотерапевтичний засіб. Тобто Сполуку І або її фармацевтично прийнятну сіль чи сольват можна вводити в організм хворого на розсуд лікаря перед введенням, під час введення або після введення СРТ-11, пеметрекседу або платиновмісного хіміотерапевтичного засобу, з урахуванням типу пухлини, стадії захворювання, конкретного застосовуваного хіміотерапевтичного засобу та стану й чутливості хворого. Подані нижче результати досліджень in vitro та in vivo ілюструють переваги вищезазначених комбінацій. Приклади ефективності in vitro Апоптоз або програмований некроз клітин характеризується сукупністю біохімічних реакцій, однією з яких є індукування каспаз. Активовані каспази являють собою протеази, які беруть участь у каскаді актів розщеплення, внаслідок яких деактивуються ферменти відповідальні за гомеостаз та регенерацію клітин. Каспаза 3 та каспаза 7 відіграють ключову роль ефекторів при апоптозі, і можуть бути виявлені та кількісно визначені способами флуоресцентного біохімічного аналізу. Підвищення активності каспази 3/7 у клітинах безпосередньо корелює з апоптичною активністю (D.W. Nicholson, et al., Nature. 376, 37-43 (1995)). Для випробування застосовується комплект для аналізу на каспазу 3/7 фірми Promega (Apo-ONE Homogeneous Caspase-3/7 Assay Kit, Catalog #G7791). Випробувальний буфер включає 30 мМ HEPES (N-(2-гідроксіетил)піперазин-N’-(2етансульфонова кислота), рН 7,4, 150 мМ NaCl, 50 мМ КСl, 10 мМ MgCl2, 0,4 мМ EGTA (етиленглікольтетраоцтова кислота), 0,5% Nonidet P40 (октилфенолполі(етиленгліколевий простий ефір)), 0,1% CHAPS (гідрат 3-[(3холамідопропіл)диметиламоніо]-1пропансульфонату) та 10% сахарози, який забезпечує лізис вирощених клітин та надання проник 11 97400 ності продуктам лізису, та субстрат каспази 3/7, ZDEVD (Z-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-Asp(OMe)), приєднаний до флуоресцентного родаміну 110. При доданні суміші буфера із субстратом до досліджуваної проби внаслідок відщеплення та подальшого видалення пептидів DEVD під впливом каспази 3/7 виникає інтенсивна флуоресценція відщеплюваної групи родаміну 110, яка виявляється при збудженні на довжині хвилі 499 нм. Кількість флуоресцентного продукту пропорціональна розщеплювальній активності каспази 3/7 у пробі. Для вимірювання апоптичного ефекту досліджуваних сполук клітини пухлин висівають в кіль4 кості 1х10 клітин на лунку в 96-лункові планшети та інкубують протягом ночі при 37°С в атмосфері з 5% СО2. Обробляють пухлинні клітини досліджуваною сполукою у бажаних концентраціях, виконуючи три паралельні досліди, включаючи контрольні лунки з необробленими пробами як негативним контролем. Лунки з пробами повторно 12 інкубують протягом 48 год. Наприкінці періоду інкубування у кожну лунку з пробою додають суміш випробувального буфера із субстратом. Вимірюють флуоресценцію у кожній лунці при довжині хвилі збудження 485±20 нм при довжині хвилі випромінювання 530±25 нм. Обчислюють підвищення активності каспаз в оброблених лунках у відсотках відносно необроблених контрольних проб. Клітини НСТ-116 та соіо-205 є клітинами карцином ободової та прямої кишки, А2780 та SKOV3 - клітинами карцином яєчників, А549, Calu-6 та NCI Н-460 — клітинами недрібноклітинних карцином легенів, та AGS, КАТО III та MKN 45 — клітинами карцином шлунка. У поданих нижче таблицях термін "Сполука І" або "Cmpd І" означає 7-(2,5дигідро-4-імідазо[1,2-а]піридин-3-іл-2,5-діоксо-1Hпірол-3-іл)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагідро-2-(1піперидинілкарбоніл)піроло[3,2,1-jk] [1,4]бензодіазепін. Хіміотерапевтичні засоби випробовувалися у таких концентраціях: Лінія клітин НСТ-116 Соlо-205 А2780 А549 NCI-H460 Calu-6 Цисплатин 5 мкМ 5 мкМ 5 мкМ 1 мкМ 1 мкМ Карбоплатин 10 мкМ 10мкМ СРТ-11 20 нМ 20 нМ 20 нМ Пеметрексед 60 нМ 60 нМ 60 нМ Дані у Таблицях 1-12 виражені у відсотках підвищення активності каспази відносно необроблених контрольних проб, якщо не зазначено інше. Таблиця 1 . Цисплатин у комбінації зі Сполукою І Лінія клітин НСТ-116 Соlо-205 А2780 А549 NCI-H460 Середовище культури 0 0 0 0 0 Сполука І* 16 12 0 80 99 Цисплатин 36 8 1,5 4 47 Кратність підвиСполука І* + цисщення відносно платин цисплатину 180 5 85 10,6 93 62 183 46 379 8 *Концентрація Сполуки І змінювалася залежно від лінії клітин: НСТ-116 (300 нМ); Colo-205 (110 нМ); А2780 (60 нМ); А549 (300 нМ); NCI-H460 (300 нМ) Таблиця 2. Карбоплатин у комбінації зі Сполукою І Лінія клітин А549 NCI-H460 Середовище культури 0 0 Сполука І* 52 122 Карбоплатин 14 16 Сполука І* + карбоплатин 282 299 Кратність підвищення відносно карбоплатину 20,1 18,7 * Концентрація Сполуки І змінювалася залежно від лінії клітин: А549 (300 нМ); NCI-H460 (100 нМ) 13 97400 14 Таблиця 3 Середовище культури 4 0 1 Лінія клітин НСТ-116 Colo-205 А2780 СРТ-11 у комбінації зі Сполукою I Сполука І* + Сполука І* СРТ-11 СРТ-11 53 50 263 45 38 254 1 153 450 Кратність підвищення відносно СРТ-11 5,3 6,7 2,9 * Концентрація Сполуки І змінювалася залежно від лінії клітин: НСТ-116 (330 нМ); Colo-205 (33 нМ); А2780 (330 нМ) . Таблиця 4. Пеметрексед у комбінації зі Сполукою І Середовище культури НСТ-116 Calu-6 А2780 Сполука І* Пеметрексед Сполука І* + пеметрексед 0 0 0 Лінія клітин 0 139 10 23 24 0 125 319 35 Кратність підвищення відносно пеметрекседу 5,4 13,3 -** *Концентрація Сполуки І становила 30 нМ для всіх ліній клітин **Обчислення неможливе внаслідок відсутності вимірюваного ефекту для пеметрекседу без Сполуки І Таблиця 5. НСТ-116 Назва лікарського засобу Концентрація Сполуки І 5-FU Гемцитабін 12 нМ 60 нМ 5 мкМ 30нМ 47 0 Лікарський засіб Сполука І + лікарський засіб 55 324 Концентрація Сполука І лікарського засобу 305 595 Кратність підвищення відносно лікарського засобу 5,5 1,8 Таблиця 6. А2780 Назва лікарського засобу Концентрація Сполуки І Концентрація лікарського засобу Сполука І Лікарський засіб Карбоплатин* 300 нМ 5 мкМ 55 78 Кратність Сполука І + підвищення лікарський відносно засіб лікарського засобу 237 3 *Планшети інкубувалися протягом 72 год Таблиця 7. SKOV3 Назва лікарського засобу Доксорубіцин Концентрація Сполуки І 300 нМ Концентрація лікарського засо- Сполука І бу 1 мкМ 0 Лікарський засіб 184 Кратність Сполука І + підвищення лікарський відносно засіб лікарського засобу 270 1,5 15 97400 16 Таблиця 8. Calu 6 Назва лікарського засобу Концентрація Сполуки І Концентрація лікарського засобу Цисплатин 33 нМ Сполука І Лікарський засіб Сполука І + лікарський засіб 2 мкМ 154 97 471 Кратність підвищення відносно лікарського засобу 4,8 Таблиця 9. NCI H-460 Назва лікарського засобу Концентрація Сполуки І Концентрація лікарського засобу Пеметрексед Гемцитабін Етопозид 300 нМ 300 нМ 300 нМ 500 нМ 50 нМ 1 мкМ Сполука І Лікарський засіб 38 186 222 Кратність Сполука І + підвищення лікарський відносно засіб лікарського засобу 872 4,7 1996 1,7 935 3,7 185 1187 251 Таблиця 10. AGS Назва лікарського засобу Концентрація Сполуки І Концентрація лікарського засобу Цисплатин* 5-FU 900 нМ 900 нМ Сполука І Лікарський засіб Сполука І + лікарський засіб 5 мкМ 3 мкМ 0 0 147 133 208 235 Кратність підвищення відносно лікарського засобу 1,4 1,7 *Планшети інкубувалися протягом 72 год. Таблиця 11. KATO III Концентрація Назва лікарського Концентрація лікарського Сполука І засобу сполуки І засобу Цисплатин 600 нМ 10 мкМ Лікарський засіб Сполука І+лікарський засіб Кратність підвищення відносно лікарського засобу 389 631 1,6 48 Таблиця 12. MKN 45 Назва лікарського засобу Концентрація Сполуки І. Концентрація лікарського засобу Цисплатин 5-FU* 600 нМ 300 нМ ЮмкМ 5 мкМ * Планшети інкубувалися протягом 72 год. Сполука І Лікарський засіб Сполука І + лікарський засіб 162 105 359 415 868 777 Кратність підвищення відносно лікарського засобу 2,4 1,9 17 97400 Дані з кратності посилення у Таблицях 1-12 відображають посилення ефективності апоптозу, індукованого хіміотерапевтичними засобами у клітинах при їх застосуванні у комплексі зі Сполукою І відносно апоптичного ефекту хіміотерапевтичного засобу, застосованого окремо. Експерименти з визначення ефективності in vivo Культивовані клітини імплантують підшкірно у задню бічну частину тіла самок мишей лінії CD-1 nu/nu, попередньо акліматизованих протягом тижня у віварії після одержання від постачальника. Мишей розподіляють за випадковою схемою по групах (7-8 тварин у кожній), і починають лікування, коли середній об'єм пухлини досягає при3 близно 100 мм . Сполуку І вводять внутрішньовенно, а хіміотерапевтичний засіб — внутрішньоочеревинно. При застосуванні засобів у комплексі хіміотерапевтичний засіб вводять за Застосовуваний засіб Каптизол (носій) Сольовий розчин (носій) Сполука І (5 мг/кг) Цисплатин (5 мг/кг) Сполука І + цисплатин* 18 60 хв до Сполуки І. Пухлини вимірюють двічі на тиждень електронним штангенциркулем, і будують криві росту. Характеристикою затримки росту пухлин є збільшення середнього часу досягнення 3 об'єму пухлини 1000 мм у порівнянні з контрольною групою. Контролюються також коливання маси тіла тварин та виживаність. Таблиця 13. Цисплатин у комбінації зі Сполукою І у ксенотрансплантатах людської карциноми яєчників А2780 5 мг/кг цисплатину застосовують внутрішньоочеревинно окремо або у комбінації із 5 мг/кг Сполуки І, яку застосовують внутрішньовенно. Сполуку І у дозі 5 мг/кг (внутрішньовенно) застосовують також окремо для тварин контрольної групи. Тварини одержують 3 послідовні цикли цисплатину та Сполуки І, проміжки між циклами становлять 7 діб. Затримка росту пухлини (діб) Середня ± стандартна похибка 0±1,2 0,5±1,4 -0,3±1,4 5±1,6 23,9±3,9 р**